梯度洗脫法同時測定雙黃連口服液中綠原酸和黃芩苷含量HPLC.

1、安徽醫(yī)藥 AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal 20050ct;9（10）? 749?梯度洗脫HPLC法同時測定雙黃連口服液中綠原酸和黃苓苷含量 陳長水，楊志芬,桑旭峰22（1.浙江省寧波市中心血站，浙江寧波 315040;2浙江省寧波市藥品檢驗所，浙江寧 波 315040）摘要：目的 建立梯度洗脫HPLC法同時測定雙黃連口服液（金銀花,黃苓）中綠原酸和黃苓苷含量的方法。方法采用LUNAC18（2）色譜柱，乙腈20.4%磷酸溶液為流動相（梯度洗脫）,流速為 0.9ml? min-1，檢測波長為318nm。結果 綠原酸線性范圍為0.86.4g? L-1,平均回

2、收率為 99.3%,RSD=1.3%;黃苓苷線性范圍為 9.1673.33g? L-1，平均回收率為99.6%,RSD=1.5%。結論 該方法簡便、可靠、準確，可用于該制劑 的質(zhì)量控制。關鍵詞:雙黃連口服液；綠原酸;黃苓苷;HPLC雙黃連口服液由金銀花、黃苓、連翹提取物制備而成，具有抗菌、抗病毒、退熱的功效。中國藥典2000年版采用高效液相色譜法僅測定黃苓苷的含量1,為了 更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們借鑒其他制劑中測定綠原酸和黃苓苷含量的高效液相色 譜法2,摸索建立了對該產(chǎn)品同時測定綠原酸和黃苓苷含量的高效液相色譜法。1儀器與試藥HP1100高效液相色譜系統(tǒng)：在線脫氣機，四元泵，二極管陣列檢測器,

3、HP1100化學工 作站;乙腈為色譜純，水為二次重蒸水，其他試劑均為分析純；雙黃連口服液（批號 021011,021217,021229黑龍江慶安制藥股份有限公司 録原酸，黃苓苷的對照品均由 中國藥品生物檢定所提供。2方法與結果2.1色譜條件 色譜柱:LUNAC18（2）,4.6mmX 150mm,5卩m檢測波長為318nm;柱溫35C;流速0.9ml? min-1;進樣量:10訶梯度洗脫條件 見表1。表1流動相的梯度洗脫時間/min0.4%磷酸溶液乙腈0 98713910877513 25102075252021758725132.2線性關系考察精密稱取綠原酸對照品約4mg黃苓 苷對照品約4

4、6mg置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，作為貯備液。精密吸取貯備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml,分別置5ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶 液至刻度，搖勻，按上述色譜條件測定。以進樣濃度 X(g? L-1)2峰面積丫(mAU)進 行線性回歸，得標準曲線回歸方程：綠原酸:丫=16246.87X+172.63,r=0.9993(0.86.4g? L-1)；黃苓苷:Y=16134.01X+706.21,r=0.9994(9.16- 73.33g? L-1)。2.3供試品溶液和對照品溶液制備精密吸取雙黃連口服液1.0ml,置50ml棕色量瓶中，超聲震蕩20min后加50%甲醇

5、溶液稀釋至刻度，用0.45 yn濾膜過濾，作 為供試品溶液。精密吸取貯備液 2.0ml,置5ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度， 搖勻,即得對照品溶液。2.4干擾性考察按處方量分別取缺味黃苓和缺味金銀花的其它藥材，參照本品的制備工藝依法制成陰性對照品，按2.3項下供試品溶液制備 的方法制成缺黃苓的陰性對照品溶液和缺金銀花的陰性對照品溶液。分別取缺黃 苓的陰性對照品溶液和缺金銀花的陰性對照品溶液，按2.1項色譜條件進樣，結果分別在黃苓苷色譜峰和綠原酸色譜峰的相應位置上均無吸收峰出現(xiàn)。表明陰性對照 無干擾。2.5樣品測定 取供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，結果以外標法 計算見表2。表2雙

6、黃連口服液中綠原酸和黃苓苷含量(n=3)批號 綠原酸黃苓苷含量/mg? ml-1RSD/%含量 /mg? ml-1RSD/% 0210111.3790.915.2121.00212171.2611.312.8311.5021229 1.2851.212.7931.22.6精密度試驗精密稱取貯備液1.0ml,置5ml棕色量瓶中,加50%甲醇溶液至刻度，搖勻，連續(xù)進樣6次。綠原酸RSD=1.6%,黃苓苷 RSD=1.3%。2.7回收率試驗精密吸取已知含量的樣品1ml3份，置250ml棕色量瓶中，分別精密加入貯備液1.0、1.5、2.0ml,加50%甲醇溶液適量，超聲20min 后，加50%甲醇溶液

7、稀釋至刻度,用0.45 yn濾膜過濾，收集續(xù)濾液。照樣品測定項下測定,結果見表3。平均回收率：綠原酸=99.3%,RSD=1.3%黃苓苷 =99.6%,RSD=1.5%。2.8 穩(wěn)定性試驗對同一樣品，在1、2、3、4、5、6h進樣，測得綠原酸峰面積RSD=1.6%;黃苓苷峰面積RSD=1.5%。3討論 對照品 中綠原酸和黃苓苷色譜峰用二極管陣列檢測器對其進行紫外掃描，分析紫外吸收圖 譜見圖1,可知:綠原酸在318nm有較強吸收，黃苓苷在276、318nm處有較強吸 收。為便于檢測，選擇檢測波長為318nm。表3回收率試驗序號樣品量/卩g卩入量/卩測得值/卩g收率/%綠原酸黃苓苷綠原酸黃苓苷綠原

8、酸黃苓苷綠原酸黃苓苷232366.660.34686.3101.3102.34、/jKIM3iriil30144圖1黃苓苷(A)和綠原酸(B)色譜峰紫外掃描圖譜? 750?安徽醫(yī)藥AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal 20050ct;9(10)差示旋光法測定琥乙紅霉素片的含量胡德放，黃澤蘭,殷美蘭1(1.安徽省東至縣血防站?？漆t(yī)院，安徽東至 247230;2.安徽省池州市藥品檢驗所 安徽池州 247000)關鍵詞:差示旋光法；琥乙紅霉素；含量測定琥乙紅霉素(erythromycinethylsuccinate)為紅霉素衍生物，廣泛用于治療各種感 染性疾病。琥

9、乙紅霉素及其制劑的含量測定在中華人民共和國藥典中采用抗 生素生物檢定法，操作繁瑣，費時,且專屬性差，HPLC法1測定琥乙紅霉素的含量國 內(nèi)已有報道，尚未見有差示旋光法測定其片劑的報道。本文利用琥乙紅霉素分別在 乙醇和乙醇：鹽酸0.1-1mol? L(2 : 1)溶液中的旋光度發(fā)生變化的特征，采用差示旋光法，通過測定差示旋光 度差(咪直接測定琥乙紅霉素的含量。該法操作簡便、快速、準確、重現(xiàn)性好，并與微生物檢定法比較，結果滿意。1儀器與試藥WZZ-2型自動旋光儀(上海物理光學儀器廠);琥乙紅霉素對照品(安徽省合肥第六 制藥廠提供，每mg相當于770卩)琥乙紅霉素片(市售);乙醇、鹽酸均為分析純。2

10、 方法和結果2.1方法與標準曲線的建立精密稱取105C干燥至恒重的琥乙紅霉素標準品1.7230g置50.0ml量瓶中,加乙醇溶液并稀釋至刻度。精密量取上述溶液 1.0、2.0、2.5、3.0、4.0ml各2份,分別置25ml量瓶中，每組分別用乙醇和乙 醇：0.1-1mol? L鹽酸(2 : 1)溶液稀釋至刻度，搖勻。測定兩者的旋光度，計算，以效價濃度對 a作線性回歸，求得回歸方程:c( 0 ml-1)=19434 a+195.5,r=0.9994表明琥乙紅霉 素效價濃度在10614264 0? ml-1范圍內(nèi)與&的線性關系良好。2.2輔料干擾 試驗按琥乙紅霉素片處方，稱取相應的輔料置50.0m

11、l量瓶中,加乙醇稀釋至刻度, 搖勻,濾過。取續(xù)濾液1.0、2.0、2.5、3.0、4.0ml各2份,分別置25.0ml量瓶中,-1每組分別用乙醇和乙醇：0.1mol? L鹽酸(2 : 1)溶液稀釋至刻度，搖勻。測得兩者 旋光度，計算 a均為零。結果表明輔料對測定結果無干擾。2.3穩(wěn)定性試驗將標準曲線下琥乙紅霉素效價濃度為-12653 0 ml的測定溶液在室溫下放置2、4、6h后，測定 吉果表明,6h內(nèi)差示旋 光度穩(wěn)定。曾選擇乙腈20.4%磷酸溶液(20 : 80)的色譜條件，但黃苓苷保留時間過長，一次 檢測完成約需40多分鐘，經(jīng)摸索后采用梯度洗脫，極大地縮短了檢測時間，并且系統(tǒng) 分離及色譜穩(wěn)定

12、性均較好。比較其它高效液相色譜法對含綠原酸和黃苓苷制劑的 含量測定3,4,有的色譜條件僅能滿足測定黃苓苷含量，而有的雖能同時測定綠原 酸和黃苓苷含量，但仍不能完全排除金銀花和黃苓兩者成分相互干擾。采用本法，從供試品的HPLC圖譜上可以清楚的看到兩者成分完全分離，達到了滿意的測定條 件。中藥復方的成分復雜性，往往難以對多個成分進行分離及檢測，采用梯度洗脫進行 分離,運用高效液相法同時測定，不失為中藥多成分的分離并同時檢測的一種好途 徑。本法準2.4回收率試驗精密稱取琥乙紅霉素適量，按處方量加入淀粉,硬脂肪酸鎂賦形劑，研細，混勻。精密稱取適量，置5010ml量瓶中,加乙醇溶液, 稀釋至刻度,搖勻，

13、過濾。配成不同濃度的溶液4份，測定旋光度，計算 a弋入回歸 方程計算回收率，結果見表1。X為99.7%,RSD為0.6%。表1回收率試驗(n=4)編號123 樣品 / 卩 2247.2809.337-1.對照品 / 卩 2261.2790.33521.測得總量/屛4535.5561.6684.853905回收率 /%100.699.399.48770972.5樣品測定 取琥乙紅霉素片40片，研細，精密稱取片粉適 量(約相當于琥乙紅霉素100萬u),置50.0ml量瓶中，加乙醇溶液并稀釋至刻度，搖勻過濾。精密移取續(xù)濾液2份，每份3.0ml,各置25.0ml 量瓶中，分別用乙醇和乙醇：0.1ml-

14、1? L鹽酸(2 : 1)溶液稀釋至刻度，搖勻,按上述方法制三份樣品。同時測定兩者旋光 度，計算 a弋入回歸方程計算含量，同時與生物測定法比較，結果基本一致，見表2。 表2琥乙紅霉素片的含量樣品12差示分光度法平均含量/%96.397.5RSD/%0.81.3對照品平均含量/%96.797.13 討論采用差示旋光法測定琥乙紅霉素片的含量，可以完全排除輔料對測定結果的影響， 方法準確，可靠。采用差示旋光法測定琥乙紅霉素片的含量與生物檢測所得結果基 本一致，且操作簡便，快速,適合于對產(chǎn)品的快速分析。參考文獻：1 項競佐.HPLC法測定琥乙紅霉素口服混懸劑J.藥物分析雜志,1994,14(1):54.(收稿日期:2005-04-12)確、可靠、快捷，可應用于實際生產(chǎn)及檢驗中。參考文獻：1 國家藥典委員會.中