臨床微生物學檢驗：緒論、生物安全

1、2021-6-81 臨床微生物學檢驗 2021-6-82 緒緒 論論 學習目的和要求 1、了解教材內容、本學期學習的內容 2、復習并掌握微生物的概念與分類 3、熟悉臨床微生物學的概念與任務 4、了解臨床微生物學檢驗的現狀和發(fā)展 2021-6-83 實驗課 2021-6-84 一、微生物學、醫(yī)學微生物和臨床微生物學一、微生物學、醫(yī)學微生物和臨床微生物學 微生物（微生物（microorganismsmicroorganisms）是廣泛分布于自然界 中的一群肉眼看不見、形體微小、結構簡單肉眼看不見、形體微小、結構簡單的微 小生物，常以單細胞、細胞群體或非細胞狀態(tài)存 在。在提供營養(yǎng)物質和適宜環(huán)境的條件

2、下，一般 都能獨立生活，迅速生長繁殖。 微生物的測量單位：微生物的測量單位：m、 nm 微生物分類：？ 2021-6-85 根據分化、結構和組成微生物可分為三類： 1、 原核細胞型微生物（種類、特點？） （procaryotic microorganism) 2、 真核細胞型微生物（種類、特點？） (eucaryotic microorganism) 3、 非細胞型微生物（種類、特點？） （non-cell microorganism) 2021-6-86 原核細胞型微生物 種類：種類：細菌、衣原 體、支原體、立克 次體、螺旋體、放 線菌。 特點：特點：小、原始核、 細胞器不完整。 真核細胞型

3、微生物 種類：種類：真菌、藻類。 特點：特點：較大、典型 核、細胞器完整。 2021-6-87 微生物學（microbiology)： 是生命科學的一門重要學科，是研究 微生物的種類、生物學特性以及與人類、 動植物等相互關系的科學。 2021-6-88 醫(yī)學微生物學(medical microbiology)： 主要是研究與醫(yī)學有關的病原微生物 的生物學特性、致病性、免疫性以及特異 性診斷和預防治療措施的學科。 2021-6-89 二、臨床微生物學的概念和任務 臨床微生物學(clinical microbiology)概念： 為感染性疾病的診斷、治療和預防提供實 驗室科學依據的學科。 2021

4、-6-810 臨床微生物學的任務 1、研究感染性疾病的病原特征 感染？傳染？ 毒力、耐藥性 2、提供快速準確的病原學診斷 3、對合理使用抗菌藥物提出建議和指導 4、監(jiān)控醫(yī)院感染 2021-6-811 感染：感染：多指個體現象， 病原菌 個體 個體發(fā)病。 必備條件是：病原體、宿主 傳染：傳染：多指多指個體間現象，個體間現象， 病原菌 個體感染 下一個體感染 。 必備條件是：傳染源、傳播途徑、易感人群。 感染感染是個體內部發(fā)生的變化,傳染傳染既有個體內部 變化，又是個體之間的相互影響。 2021-6-812 中華人民共和國傳染病防治法（中華人民共和國傳染病防治法（20042004年修訂）年修訂）

5、本法規(guī)定的傳染病分為甲類、乙類和丙類。 甲類傳染病是指：甲類傳染病是指：鼠疫、霍亂。 乙類傳染病是指：乙類傳染病是指：傳染性非典型肺炎、艾滋病、 病毒性肝炎、脊髓灰質炎、人感染高致病性禽流感、 麻疹、流行性出血熱、流行性腦脊髓膜炎、流行性乙 型腦炎、狂犬病、登革熱、炭疽、細菌性和阿米巴性 痢疾、肺結核、傷寒和副傷寒、百日咳、白喉、新生 兒破傷風、猩紅熱、布魯氏菌病、淋病、梅毒、鉤端 螺旋體病、血吸蟲病、瘧疾。 丙類傳染病是指丙類傳染病是指：流行性感冒、流行性腮腺炎、 風疹、急性出血性結膜炎、麻風病、流行性和地方性 斑疹傷寒、黑熱病、包蟲病、絲蟲病，除霍亂、細菌 性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒以

6、外的感染性腹瀉 病。 2021-6-813 三、臨床微生物檢驗技術 課程目標 掌握微生物檢驗的基本技術、臨床常見病 原微生物的鑒定方法（生物學特性、致病 性、免疫性） 、檢驗程序、藥敏檢測。 熟悉臨床微生物實驗室的生物安全和全面 質量控制方法 了解臨床少見微生物的特性、檢測和藥敏。 2021-6-814 四、臨床微生物學檢驗的現狀與發(fā)展 規(guī)范化臨床微生物實驗室的建立 感染性疾病目前現狀的特點 易感人群增加、新病原體出現（已控制的病原體 再現）、非感染性疾病中感染因子起作用 細菌的耐藥現象日益嚴重 發(fā)展：病原微生物診斷快速化、自動化、智 能化，微生物樣本庫的建立等 免疫、分子生物學技術和計算機技

7、術的 發(fā)展推動了臨床微生物學的進步 2021-6-815 2021-6-816 2021-6-817 MALDI-TOF-MS（基質輔助激光解吸/電離 飛行時間質譜, 英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry） 組成： 基質輔助激光解吸電離離子源（MALDI） 和飛行時間質量分析器（TOF）。 2021-6-818 2021-6-819 2021-6-820 臨床微生物實驗室臨床微生物實驗室 安全防護安全防護 2021-6-821 學習目的和要求學習目的和要求 1、掌握微生物

8、危險度4個級別的概念，實驗室生 物安全防護水平的分級，、級生物安全 柜的特點及應用范圍等。 2、熟悉個人防護設備的內容、生物安全操作規(guī)范、 實驗室暴露的處理和感染性廢棄物的處理 2021-6-822 第一節(jié) 微生物實驗室安全防護 實驗室生物安全防護：采用合理的實驗 室建筑設施、安全的防護設備、規(guī)范的微 生物操作技術防止相關人員、環(huán)境暴露于 實驗室的感染性微生物和毒素。 2021-6-823 2021-6-824 2021-6-825 http:/ 2021-6-826 生物危害標識 2021-6-827 引起實驗室相關感染最常見引起實驗室相關感染最常見 的微生物的微生物 (1)細菌：傷寒沙門菌

9、、結核分枝桿菌、傷寒沙門菌、結核分枝桿菌、 布魯菌屬、布魯菌屬、Q熱立克次體、鸚鵡熱衣原體熱立克次體、鸚鵡熱衣原體 等。等。 (2)病毒：病毒：血液傳播病毒、委內瑞拉馬腦血液傳播病毒、委內瑞拉馬腦 炎病毒等。炎病毒等。 (3) 真菌：真菌：皮炎芽生菌、球孢子菌等。皮炎芽生菌、球孢子菌等。 2021-6-828 如何預防實驗室相關感染的發(fā)生 合理設計的實驗室建筑設施 配備適宜的安全設備 制定標準化操作規(guī)程 培訓合格的實驗室工作人員 完善實驗室管理 2021-6-829 當建設使用傳染性或有潛在傳染性材料的實驗室前，必須 進行微生物危害評估。應依據傳染性微生物致病能力的程度、 傳播途徑、穩(wěn)定性、感

10、染劑量、操作時的濃度和規(guī)模、實驗對 象的來源、是否有動物實驗數據、是否有有效的預防和治療方 法等諸因素進行微生物危害評估。 通過微生物危害評估確定對象微生物應在哪一級的生物安 全防護實驗室中進行操作 根據危害評估結果，制定相應的操作規(guī)程、實驗室管理制 度和緊急事故處理辦法，必須形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行必須形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行。 一、微生物危險度評估 2021-6-830 感染性微生物的危險度等級分類（WHO) 危險度危險度1 1 級級（無或極低的個體和群體危險） 不太可能引起人或動物致病的微生物。 危險度危險度2 2 級級（個體危險中等，群體危險低） 病原體能夠對人或動物致病，但對實驗

11、室工作人員、 社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導致嚴重危害。 實驗室暴露也許會引起較嚴重感染，但對感染有有 效的預防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。 危險度危險度3 3 級級（個體危險高，群體危險低） 病原體通常能引起人或動物的嚴重疾病，但一般不 會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有 有效的預防和治療措施。 危險度危險度4 4 級級（個體和群體的危險均高） 病原體通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容 易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒 有有效的預防和治療措施。 毒力 傳染性 預防治療能力 +- - 2021-6-831 微生物微生物生物安全水平生物安全水平危險等級危險等級 結核分枝

12、桿菌33（已有疫苗） 羊流產布氏桿菌33 鼻疽伯克霍爾德菌33 類鼻疽伯克霍爾德菌2/33 立克次體33 鼠疫耶爾森菌2（有疫苗）、3 細菌中危險度細菌中危險度3級的微生物級的微生物 2021-6-832 二、實驗室生物安全防護水平（WHO) 實驗室可以分為： 一級生物安全防護水平（biosafety level 1,BSL1) 二級生物安全防護水平(BSL2) 三級生物安全防護水平(BSL3) 四級生物安全防護水平(BSL4) 根據操作不同危險度等級微生物來決定實驗室的生 物安全防護水平（實驗室建筑設施、生物安全防 護設備、規(guī)范的微生物操作規(guī)程）。 2021-6-833 危險 度等 級 生物

13、安全水平實驗室類型實驗室操作規(guī)范安全設備 1級級基礎實驗室 一級生物安 全水平 基礎的教學、研 究 GMT（常規(guī)的微生 物操作技術規(guī)范） 不需要，開放實驗臺 2級級基礎實驗室 二級生物安 全水平 初級衛(wèi)生服務； 診斷、研究 GMT ，加防護服、 生物危害標志 開放實驗臺，此外需BSC 用于防護可能生成的氣溶氣溶 膠膠 3級級防護實驗室 三級生物安 全水平 特殊的診斷、研 究 在二級生物安全防 護水平上增加特殊 防護服、進入制度、 定向氣流 BSC 和或其他所有實驗 室工作所需要的基本設備 4級級最高防護實驗 室四級生 物安全水平 危險病原體研究在三級生物安全防 護水平上增加氣鎖 入口、出口淋浴

14、、 污染物品的特殊處 理 級BSC 或級BSC并穿 著正壓服、雙開門高壓滅 菌器（穿過墻體）、經過 濾的空氣 與微生物危險度等級相對應的相對應的安全防護水平、操作和設施(WHO) 2021-6-834 生物安全基本設備是確保實驗室工作人員不與 致病微生物及其毒素直接接觸的一級屏障。 包括：包括：生物安全柜、高壓滅菌器、緊急噴淋及 洗眼裝置和個人防護裝備 1. 生物安全柜（biosafety cabinet，BSC） 是處理危險性微生物時所用的箱型空氣凈化安 全裝置。 三、實驗室生物安全基本設備 2021-6-835 實驗室應按要求分別配備、級生物安全 柜。 所有可能使致病微生物及其毒素濺出或產

15、生氣溶 膠的操作，除實際上不可實施外，都必須在生物 安全柜內進行。不得用超凈工作臺代替生物安全 柜。 2021-6-836 氣溶膠 aerosol 懸浮于氣體介質中粒徑一般為懸浮于氣體介質中粒徑一般為 0.01m-100m0.01m-100m的固體、液體的固體、液體 微小粒子形成的膠溶狀態(tài)顆粒。微小粒子形成的膠溶狀態(tài)顆粒。 2021-6-837 生物安全柜（BSC）根據： 吸入空氣的速度 再循環(huán)空氣量和排出空氣量 排風系統(tǒng) 壓力設置 等不同分成三級 2021-6-838 I I級生物安全柜級生物安全柜 （class I biosafety cabinet） 工作狀態(tài)時保證 工作人員和環(huán)境 不受

16、侵害，但不 保證實驗對象不 受污染。（可用 于操作危險度1、 2、3級病原體） 2021-6-839 級生物安全柜級生物安全柜 （class biosafety class biosafety cabinetcabinet） 工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程時既保證工 作人員不受侵害，又保證實驗對象 不受污染?？捎糜诓僮魑ｋU度1、2、 3級的微生物。（最常用） 2021-6-840 二級生物安全柜 CLASS II 級生物安全柜根據結構以及氣流 分配不同（主要是外排氣流不同）分為： A型: A1和A2（30%氣流外排） B型: B1 （70%氣流接管道外排） B2 （100%氣流接管道外排） 2021-

17、6-841 2021-6-842 II級級B2型生物安全柜型生物安全柜 2021-6-843 III級生物安全柜 全封閉的、氣密結構的通風柜 通過與柜體聯結的橡膠手套進行操作； 柜內保持至少120Pa的負壓；送風通過HEPA抽 入內；外排的氣流經過雙層雙層HEPA過濾或經 HEPA后再經燃燒燃燒處理。 可處理危險度1、2、3、4級微生物 2021-6-844 IIIBSC A：用于連接等臂長手套的 艙孔；B：窗口；C：兩個 排風HEPA 過濾器；D：送 風HEPA 過濾器；E：雙開 門高壓滅菌器或傳遞箱；F： 化學浸泡槽。安全柜需要 有與獨立的建筑物排風系 統(tǒng)相連接的排風接口。 級生物安全柜（

18、手套箱）示意圖 2021-6-845 2021-6-846 2021-6-847 2. 個人防護裝備個人防護裝備 要求要求： 實驗室任何個人必須加強個人防護加強個人防護。裝備 應符合國家有關標準的要求標準的要求。在危害評估 的基礎上，按不同級別的防護要求選擇適 當的個人防護裝備。實驗室對個人防護裝 備的選擇、使用、維護應有明確的書面規(guī)應有明確的書面規(guī) 定、程序和使用指導。定、程序和使用指導。 2021-6-848 2021-6-849 2021-6-850 2021-6-852 四、標準操作規(guī)范（SOP) (Standard Oprating Procedure) （一）感染性或潛在感染性物質的操作： 標本采集、運送、接受和接