優(yōu)質(zhì)農(nóng)學(xué)畢業(yè)論文開題報(bào)告

1、本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題 目： 姓 名： 學(xué) 院： 專 業(yè)： 班 級： 學(xué) 號(hào)： 指導(dǎo)教師:高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法的優(yōu)化萬海波農(nóng)學(xué)院農(nóng)學(xué)10 農(nóng)學(xué)（2）班1118100221李杰勤職稱： 講師2014年5月20日安徽科技學(xué)院教務(wù)處制安徽科技學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）選題申請表基本情況課題名稱高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法的優(yōu)化教師姓名李杰勤職稱|講師課題來源A.科研2 B.生產(chǎn)C.教學(xué)D.其它課題類型A.論文2 B.設(shè)計(jì)選 題 理 由咼粱（Sorghumbicolor ）是世界五大谷類作物之一，也是中國最早進(jìn)行栽培 的一種禾谷類作物，它具有較強(qiáng)的適應(yīng)性以及耐澇、耐鹽堿、抗旱的特性。在我 國，高粱的栽培多為粒用高粱

2、，同時(shí)含有飼用、糖用和工藝高粱的栽培。伴隨著高粱基因組測序工作的完成，高粱的育種工作迫切需要建立一種高效 的轉(zhuǎn)基因技術(shù)。與水稻、玉米和小麥等和谷類作物相比，高粱不易導(dǎo)入外源基因， 建立高粱的高效轉(zhuǎn)化和高頻再生體系較為困難，因此，研究高粱遺傳轉(zhuǎn)化的工作 進(jìn)展較慢。目前，在植物上發(fā)展了一系列的轉(zhuǎn)基因方法，如農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因 槍法、電擊法等。迄今為止，高粱轉(zhuǎn)基因技術(shù)多應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，但在高粱細(xì) 胞中存在大量的丹寧物質(zhì)，因此其愈傷組織在培養(yǎng)過程中容易出現(xiàn)褐化死亡的現(xiàn) 象。所以避開組織培養(yǎng)的過程，采用非組培的方式實(shí)現(xiàn)高粱的轉(zhuǎn)基因操作意義非 凡。簽字：萬海波2013年2月25日指 導(dǎo) 教 師意 見簽字

3、：年 月日審 題意見教學(xué)院（部）簽章：年 月日安徽科技學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開題報(bào)告書題 目高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法的優(yōu)化學(xué)生姓名萬海波指導(dǎo)教師李杰勤職稱講師研究目的意義及國內(nèi)外研究狀況和應(yīng)用前景（附參考文獻(xiàn)）：高粱（Sorghumbicolor ）是世界五大谷類作物之一，也是中國最早進(jìn)行栽培 的一種禾谷類作物，它具有較強(qiáng)的適應(yīng)性以及耐澇、耐鹽堿、抗旱的特性。在我 國，高粱的栽培多為粒用高粱，同時(shí)含有飼用、糖用和工藝高粱的栽培o伴隨著高粱基因組測序工作的完成，高粱的育種工作迫切需要建立一種高效 的轉(zhuǎn)基因技術(shù)。與水稻、玉米和小麥等和谷類作物相比，高粱不易導(dǎo)入外源基因， 建立高粱的高效轉(zhuǎn)化和高頻再生體

4、系較為困難，因此，研究高粱遺傳轉(zhuǎn)化的工作 進(jìn)展較慢2。目前，在植物上發(fā)展了一系列的轉(zhuǎn)基因方法，如農(nóng)桿菌介導(dǎo)法3、基因槍法、電擊法等。迄今為止，高粱轉(zhuǎn)基因技術(shù)多應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，但 在高粱細(xì)胞中存在大量的丹寧物質(zhì)，因此其愈傷組織在培養(yǎng)過程中容易出現(xiàn)褐化 死亡的現(xiàn)象。所以避開組織培養(yǎng)的過程，采用非組培的方式實(shí)現(xiàn)高粱的轉(zhuǎn)基因 操作意義非凡。目前，非組培的轉(zhuǎn)基因方法發(fā)展迅速，在多種作物中都有應(yīng)用。真空滲透 法是一種非組培的方法，1993年，Bechtold等利用該法在擬南芥的轉(zhuǎn)化中獲得了 成功。真空滲透法可以不經(jīng)過組織培養(yǎng)直接獲得轉(zhuǎn)化植株，并且易于重復(fù)，有 較高的可靠性。但是該法一般多用于擬南芥、油菜

5、、白菜等雙子葉植物的遺傳轉(zhuǎn) 化中8,9 o 2001年石太淵等采用花粉管通道法將 PYH15基因?qū)敫吡?，獲得了轉(zhuǎn) 基因植株，其轉(zhuǎn)化率達(dá)到6. 8%10。但花粉通道法多應(yīng)用于花器較大的作物中， 比如棉花，并且它的轉(zhuǎn)化率不高。另一種非組培方法，刺胚法，利用的是農(nóng)桿菌 較易侵染受傷的植物組織的特點(diǎn)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。2005年Liu等采用該法在菜豆上取得 成功11，該方法在小麥和水稻12上也取得了成功。參考文獻(xiàn)：1 于振文作物栽培學(xué)各論M.北京沖國農(nóng)業(yè)出版社,2003,185-185.2 ZhuH,Muthukrish nan S,Krish naveni S,et al.Biolistic tran sf

6、ormati on of sorghum u sing a rice chit in ase gen eJ.Ge net Breed,1998,52:243-252.3 Frame B R,Shou H,Chikw Amba R K,et al.Agrobacterium tumefaciens-mediated Tran sformatio n of maize embryos using a sta ndard binary vector systemJ.Pla nt Physiology,2002,129(1):13-22.4 Casas A M,Konono wicz A K,Zehr

7、 U R,et al.Tra nsge nic sorghum pla nts via microprojec tile bombardmentJ. Proc.Natl.Acad.Sci.,1993,90(23):11212-11216.5 Saw Ahel W A.Production of herbicide-resistant transgenic maize using electroporation of seed-derived seed-derived embryosJ. Pla nt Molecular Biology Reporter,2002,20(3) :303-304.

8、6 LiuG,Godwi nI D.Highlyefficie ntsorghumtran sformatio nJ.PIa ntCellRep.2012,31(6):999-1007.7 任海紅，任小俊，王英等.非組培遺傳轉(zhuǎn)化法在農(nóng)作物上的應(yīng)用J.山西農(nóng)業(yè)科 學(xué),2010,38(11):85- 888 鞏振輝,Milner J J何玉科擬南芥基因轉(zhuǎn)移新方法真空滲入法的研究J.西北植物學(xué)報(bào),1996, 16(3):277- 283.9 曹傳增，劉凡,趙泓等.影響不結(jié)球白菜真空滲入轉(zhuǎn)基因頻率的幾個(gè)因素J.華北農(nóng)學(xué)報(bào),2003,18(4):35- 38.10 石太淵P YH157廣譜抗病基因?qū)敫?/p>

9、 粱及轉(zhuǎn) 基因植株 的篩選 與研究J.雜糧作 物,2001,21( 1) : 12- 14.11 Liu Z,Park B, Kanno A,et al.The Novel Use of a Combination of Sonication and Vacuum Infiltration in Agrobacterium-mediated Transformation of Kidney Bean ( Phaseolus vulgaris )with lea Gen e.2005, 16(3) :189-197.12 Lin J,Zhou B,Ya ng Y,et al. Pierci ng

10、 and vacuum in filtrati on of the mature embryo:a simplified methodfor Agrobacterium-mediatedtran sformatio nofin dicariceJ.Pla ntCellRep.2009,28(7) :1065-1074.主要內(nèi)容、研究方法和思路:（一）主要內(nèi)容：（1）高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法的優(yōu)化本研究選用了 U68高粱品系種子為實(shí)驗(yàn)材料，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對影響轉(zhuǎn) 基因轉(zhuǎn)化效率的3個(gè)因素：侵染時(shí)間、AS濃度、煙草葉提取液濃度進(jìn)行試驗(yàn)，優(yōu) 化了原有的高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法。（2）高粱刺胚轉(zhuǎn)基因植株鑒定方法分別

11、用潮霉素涂抹葉片法、PCR法對高粱轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行鑒定，比較鑒定結(jié) 果，建立一種快速、高效的轉(zhuǎn)基因植株鑒定方法。（二）研究方法和思路：（1）高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法最佳體系建立：研究3個(gè)因素（農(nóng)桿菌侵染時(shí)間、不同的 AS濃度和煙草葉提取液濃度）對 轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)化效率的影響，每個(gè)因素設(shè) 3個(gè)水平，實(shí)驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)，通過實(shí)驗(yàn)獲 得最佳的處理組合，最終建立高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法的最佳體系，從而提高轉(zhuǎn)化效率。（2）高粱轉(zhuǎn)基因陽性植株鑒定方法的建立：選擇所有的轉(zhuǎn)化植株為研究對象，分別用潮霉素涂抹葉片法、PCF法來對轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行鑒定和比較分析，確定一種準(zhǔn)確、快速的轉(zhuǎn)化植株的鑒定方法。2013. 3-2013.42013.4-

12、2013.5查閱相關(guān)資料，進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，討論試驗(yàn)方法;2013.5-2013.7開始試驗(yàn)，優(yōu)化高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法方法和高粱轉(zhuǎn)基因植株的篩選方法。2013.7-2013.9從DNA水平對高粱轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行檢測。2013.10 至今撰寫論文。指導(dǎo)教師意見（研究的意義、創(chuàng)新點(diǎn)、前期基礎(chǔ)工作、存在的難點(diǎn)和困難、建議等）指導(dǎo)教師簽名:學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)組意見:簽名:總體安排和進(jìn)度（包括階段性工作內(nèi)容及完成日期）做好實(shí)驗(yàn)的前期準(zhǔn)備工作；附件4:安徽科技學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）指導(dǎo)過程記錄表題目高粱刺胚轉(zhuǎn)基因法的優(yōu)化學(xué)生姓名萬海波指導(dǎo)教師李杰勤指導(dǎo)內(nèi)容記錄一設(shè)計(jì)試驗(yàn)，講解操作中的注意事項(xiàng)。時(shí)間：2013年3月15日指導(dǎo)內(nèi)容記錄二教導(dǎo)我們刺胚操作要點(diǎn)及儀器使用，如分光光度計(jì)等。時(shí)間