PCR實驗室管理制度

1、PCR實驗室管理制度1.0 目的建立PCR實驗室的工作規(guī)范，確保分子診斷室正常工作。2.0 范圍PCR實驗室，包括試劑準(zhǔn)備間、標(biāo)本制備間、擴增間的使用及管理。3.0 職責(zé)PCR實驗室的工作人員必須遵守本文件的規(guī)定。4.0 內(nèi)容4.1 在進入實驗室前，在隔離臺戴好頭套口罩，穿上鞋套與實驗服。4.2 試劑準(zhǔn)備間4.2.1 配電房先打開風(fēng)機（先開送風(fēng)機，再開排風(fēng)機），再把空調(diào)系統(tǒng)打開。關(guān)閉時的順序相反。4.2.2 其它室的用品不得帶入本室。4.2.3 從PCR實驗室1號入口門進入實驗室，到達試劑準(zhǔn)備間的緩沖間，脫下白色工作服，掛在緩沖 間的左側(cè)，在緩沖間的右側(cè)更換試劑準(zhǔn)備間的專用工作服（藍色），進入

2、試劑準(zhǔn)備間，實驗中 須戴一次性手套，手套常更換。4.2.4 打開已滅菌的超凈臺，通風(fēng)一段時間，排走臭氧。取出當(dāng)次實驗需配制和使用的試劑，其余試 劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。4.2.5 操作應(yīng)在冰上進行。Taq酶盡量在配液的最后一步加入。應(yīng)減少 dNTP反復(fù)凍融的次數(shù)。每次實 驗后將槍調(diào)至最大量程。加模板前打開廢液缸蓋，加完模板后務(wù)必蓋上廢液缸的蓋子。4.2.6 實驗作業(yè)完成時，應(yīng)及時清理工作臺，做好實驗登記，應(yīng)使用本室專用的記錄本和筆，打開超凈臺的紫外燈旋鈕到 20分鐘處。使用過的離心管、吸頭須置于3%的HCI溶液中浸泡、消毒后方可棄之。4.2.7 打開傳遞窗門，墊上一次性手套，將配好的試劑放到傳

3、遞窗里，關(guān)上傳遞窗門。4.2.8 在試劑緩沖間脫下工作服，穿上白色工作服。4.3 標(biāo)本制備間4.3.1 在標(biāo)本制備間的緩沖間，脫下白色工作服，換上標(biāo)本制備間專用的工作服（粉紅色），進入標(biāo) 本制備間。4.3.2 打開傳遞窗的門，取出配好的試劑，使用本區(qū)專用的加樣器和帶濾芯槍頭。4.3.3 實驗作業(yè)完成時，應(yīng)及時清理工作臺，使用過的離心管、帶濾芯槍頭須置于3%的HCI溶液中浸泡、消毒后方可棄之。4.3.4 做好實驗登記，應(yīng)使用本室專用的記錄本和筆，打開超凈臺的紫外燈旋鈕到20分鐘處。435 打開傳遞窗門，墊上一次性手套，將配好的試劑放到傳遞窗里，關(guān)上傳遞窗門。436 提取基因組模板，提取過程中丟棄

4、的槍頭、離心管和廢液請丟棄在此垃圾袋并于實驗結(jié)束后立 即將垃圾袋扎口丟棄。提取質(zhì)?？上忍崛∫吧唾|(zhì)粒再提取突變型質(zhì)粒。每次提取工作完成后 擦拭臺面。4.3.7在試劑緩沖間脫下工作服，穿上白色工作服。4.4 擴增間4.4.1 在擴增間的緩沖間，脫下白色工作服，換上擴增間專用工作服（綠色）。4.4.2 打開傳遞窗門，取出配好的試劑，關(guān)上傳遞窗門。4.4.3 打開PCR儀預(yù)熱20min。4.4.4 將反應(yīng)管放入PCR儀中，關(guān)好門。4.4.5 脫掉手套，設(shè)定程序，并命名。4.4.6 結(jié)束后需待儀器冷卻后方可取出PCR儀里的試劑，取出時用鑷子將試劑條夾出，注意勿要使管蓋打開，用三個 PE手套包好方可棄之

5、。機器上不允許存放PCR擴增產(chǎn)物，每次實驗后請自行及時清理PCR擴增產(chǎn)物。4.4.7 結(jié)束實驗后，到配電房先把空調(diào)系統(tǒng)關(guān)掉，再關(guān)掉排風(fēng)機，之后關(guān)掉送風(fēng)機。4.4.8 文件的處理：當(dāng)天所做的實驗結(jié)果，當(dāng)天拷到部門電腦上處理，復(fù)制一份將文件名改為記錄本上的命名?？蓪⒃囼灲Y(jié)果導(dǎo)到PPT上，并標(biāo)記。4.5 傳遞窗的使用4.5.1 傳遞窗每天早上滅菌 20分鐘一次。當(dāng)天使用可不用再次滅菌。將試劑放到傳遞窗時，在底下墊 上一層手套。4.6 壓力監(jiān)控4.6.1 每天早上空調(diào)運行半小時后，記錄各PCR實驗室的壓力差：試劑準(zhǔn)備間：510;標(biāo)本制備間:-5-10;擴增間：V -10。各緩沖間的壓力為+5.4.7

6、超凈臺的擺放4.8 實驗室衛(wèi)生管理4.8.1 禁止非工作人員進入實驗室；參觀實驗室等特殊情況須在實驗室管理員協(xié)助下進行。4.8.2 實驗室內(nèi)各工作人員應(yīng)有個人防護意識，進入實驗室時應(yīng)更換工作服和鞋子，穿著整潔，不留長 指甲，不佩戴首飾，長發(fā)應(yīng)束于腦后；禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食 物；禁止將個人物品帶入實驗室；實驗室內(nèi)應(yīng)避免手T口，手T眼，手T鼻接觸，以防止間接感 染。4.8.3 實驗結(jié)束后仍需保留使用的物質(zhì)，應(yīng)移入具塞的容器中，并做好標(biāo)識標(biāo)簽，并寫清楚名稱、濃度、 配制日期、儲存溫度、有效期和配制人，并放置于相應(yīng)保存條件下；勿置室溫過夜。4.8.4 每天配制使用濃度的消

7、毒液，放于固定地點，用于污染時消毒用，應(yīng)定期更換消毒液品種。4.8.5 每天上班 8點 45分先關(guān)實驗室紫外燈，然后開啟風(fēng)扇，打開實驗室走廊窗戶。每天9點前每間負責(zé)人填寫冰箱溫濕度記錄表。4.8.6 下午 4點 45分每間負責(zé)人填寫實驗室及冰箱溫濕度記錄表，清理實驗室衛(wèi)生，檢查實驗室垃圾 及廢液缸槍尖，生物垃圾放置于生物安全垃圾桶內(nèi)，通知專門的垃圾轉(zhuǎn)運車進行清除。在生物 安全垃圾桶周邊噴灑 84消毒液（按 1:9 或者 1:10比例配制）。4.8.7 每日衛(wèi)生打掃完后，在實驗室內(nèi)噴灑 84 消毒液，噴灑完，待 20 分鐘過后，對實驗室儀器表面及 實驗臺面要用干布擦拭一遍， 再用清水清洗一遍，

8、防止儀器被腐蝕。 MX3000P 儀器反應(yīng)孔用 75% 酒精棉球擦拭，擦拭完后用清水擦拭。4.8.8 關(guān)閉風(fēng)扇，開啟紫外燈，過夜。關(guān)閉實驗室走廊窗戶，噴灑84 消毒液。4.8.9 第一、二間實驗室的 3%鹽酸在實驗室內(nèi)配制，由當(dāng)周值日人員負責(zé)。4.8.10 實驗服的清洗時間為每月的1、2、3、15、16、17日， 1、15 日洗第一間實驗服，2、16 日洗第二間實驗服， 3、17日洗第三間實驗服，遇節(jié)假日順延。4.8.11 每周對回風(fēng)口過濾網(wǎng)進行清洗，由當(dāng)周值日人員負責(zé)。4.8.12 如遇加班，以上由加班人員負責(zé)；若有請假，請假人員需與其他人員協(xié)商調(diào)整，否則視為未執(zhí) 行。4.8.13 以上執(zhí)行情況每天都應(yīng)填寫記錄表，并由專人檢查確認(rèn)簽字。5.0 注意事項5.1.1 PCR 實驗室各室使用、進入及單一流向制度，請各位技術(shù)員不要貪方便，嚴(yán)格按照規(guī)程操作， 以免造成嚴(yán)重后果。5.1.2 dNTP