FACSDiva操作說明資料講解

1、精品文檔FACSDiva 操作說明書首先熟悉一下 Diva 的操作界面1Browser通過點擊菜單欄的相應(yīng)的按鈕，可以隱藏或展開相應(yīng)的模塊2通過 Browser ，可以對數(shù)據(jù)庫進行管理，Browser 列出了文件夾、實驗、及實驗所包含的樣本和管子。精品文檔精品文檔Acquisition control 對獲取和記錄數(shù)據(jù)進行操作Instrument 儀器設(shè)置這個框顯儀器框顯示了儀器連接狀態(tài)， 當(dāng)打開一個實驗， 試管指向定位于一個試管時， 示的是當(dāng)前試管的儀器設(shè)置。5 瀏覽框瀏覽框顯示了 worksheet 或者 Browser 中選中的部件的屬性，可進行修改。worksheet精品文檔精品文檔W

2、orksheet 框，可進行畫圖、設(shè)門、設(shè)邏輯關(guān)系，進行統(tǒng)計等。7獲取狀態(tài)顯示了獲取或記錄數(shù)據(jù)時的狀態(tài)。必須先新在基本熟悉 Diva 的界面后，下面就進行一個實驗。 在 Diva 軟件上進行操作， 建一個實驗（實驗必須建立在文件夾中） 。下面描述的是如何使用這些命令：Creating a Folder and an Experiment 這部分描述了如何創(chuàng)建一個 Practice 文件夾和包含有基礎(chǔ)分析的實驗。1、在瀏覽框的菜單欄中單擊 2、重命名為 Practice，如下圖3、選擇 Practice 文件夾，點擊瀏覽框菜單欄的在文件夾下就創(chuàng)建了一個新的實驗，這個實驗包含了默認(rèn)的儀器設(shè)置和一個

3、空白的global worksheet 。4、點及增加Specimen 快捷鍵可加一個樣本和試管。精品文檔精品文檔5、瀏覽框中點擊左邊的樣本指向，指向tube-001。樣本指向變成綠色，說明當(dāng)前 Expriment 和 Acquizition control 中顯示該 tube 的屬性。6、在 Browser 中選擇每一項，看看 Inspector 框的變化。當(dāng) tube-001 被選擇時，在 Inspector 中可以看到有四個標(biāo)簽，分別點擊看看變化。 在這版軟件中，一些儀器設(shè)置不能在 Inspector 中修改。當(dāng)與流式細(xì)胞儀相連接時，可 以在 Instrument 框中改變電壓、域值和補

4、償。7、選擇 Expriment Expriment Layout ，對每個參數(shù)進行定義，如下圖。 當(dāng)你的實驗包含有很多試管時，你可以用 Expriment Layout 來一次標(biāo)記所有試管。8、在 Expriment Layout 對話框中，點擊 Acquisition 標(biāo)簽，選擇 Tube-001 ，改變計數(shù)粒子為 10000，點擊 OK 。當(dāng)你在瀏覽框中選擇 Tube 001 時，在 Inspector 中的 Labels 和 Acqui 中的選項也隨著改變。9、在 Global worksheet 中創(chuàng)建一個FSC vs SSC 點圖在 worksheet 菜單欄中點擊，再在 work

5、sheet 中點擊一下， 就創(chuàng)建了一個默認(rèn)大小點圖。10、在 FSC vs SSC 點圖中邊上創(chuàng)建一個 PE 直方圖在 worksheet 菜單欄中點擊直方圖工具，再點擊 worksheet ，一個默認(rèn)大小的直方圖 就建立好了。精品文檔精品文檔點擊 X 軸標(biāo)簽，在下拉菜單中選擇 PE-A ，可改變圖的參數(shù)。注意參數(shù)的名字是你先前 設(shè)定的參數(shù)名。11 在 FSC vs SSC點圖下面創(chuàng)建一個 FITC vs PerCP-Cy5.5 的點圖 按住 Ctrl 鍵，點擊 FSC vs SSC 圖的邊緣，往下拖。當(dāng)你拖的時候，就創(chuàng)建了一個復(fù)制 的點圖。把點圖放在合適的位置，松開鼠標(biāo)，這個方法可以復(fù)制任何

6、的點圖。點擊坐標(biāo)軸， 選擇合適的參數(shù)。12創(chuàng)建一個 Population Hierarchy Population Hierarchy 是用來列出定義的亞群。右擊任何點圖，選擇 Show PopulationHierarchy ，把結(jié)果圖拖到 FITC vs PerCP-Cy5.5 點圖的右側(cè)。 Worksheet應(yīng)該看起來類似于下圖：Exporting an Experiment as a Template 現(xiàn)在已經(jīng)創(chuàng)建好一個實驗了，可以導(dǎo)出成為一個模板。實驗?zāi)０灏藰颖尽⒃嚬?、關(guān) 鍵詞、儀器設(shè)置、標(biāo)簽、 worksheet 上的圖以及 worksheets（包括所有設(shè)置，如分頁） ，但不

7、 包含有數(shù)據(jù)。 一個實驗可以保存為一個模板，為了簡化瀏覽框，模板不通過瀏覽框選擇。1、在瀏覽框中選擇 Expriment-001 ，再選擇 File Export Expriment Template 。 確定選擇的是 Expriment Template 命令，而不是 Expriment 命令。Export Experiment Template Wizard 出現(xiàn)，對話框上的黑體字告訴你每個框的作用2在模板類型中輸入 Practice，模板名字中輸入 Simple Analysis 。 模板類型用來對類似的模板進行分組， 以便于查找。 當(dāng)你在創(chuàng)建一個模板時， 至少要輸 入類型和名字，后面的

8、選項是可選項。精品文檔精品文檔3點擊 Next ，可查看后面的選項，點擊 Finish 。Creating an Experiment from a Template 現(xiàn)在可以用原來保存的模板來創(chuàng)建一個實驗。 記住當(dāng)你想在一個文件夾中創(chuàng)建一個實驗 時，首先要選擇文件夾。1、選擇 Practice文件夾，選擇 Experiment New Experiment 。 當(dāng)你想用原來保存的 Exprement 模板時，使用菜單欄而不是快捷鍵，你也可以按Ctrl-E 。Experiment Templates 對話框出現(xiàn)2、在對話框中，點擊Practice 標(biāo)簽，選擇 Simple Analysis t

9、emplate ，點擊鍵。ExperimentLayout 對話框出現(xiàn)，顯示試管標(biāo)記、關(guān)鍵詞、模板的設(shè)置等。3點擊 Experiment Layout 對話框中的各種標(biāo)簽，查看設(shè)置，然后點擊Cancle。這些設(shè)置是你建立模板時設(shè)定的，注意：這些數(shù)據(jù)是只讀的，不能修改。4點擊 OK建立一個新的實驗 注意原先的實驗已經(jīng)關(guān)閉， 一個新的實驗 Simple Analysis 在瀏覽框中。 當(dāng)你在做實驗時， 一次只能打開一個實驗。注意global worksheet中包含有點圖和 Population Hierarchy ，在點圖中沒有數(shù)據(jù)。Importing an Experiment 接下來，你將在

10、 Practice文件夾中導(dǎo)入一個實驗。導(dǎo)入實驗與導(dǎo)入模板的不同之處在于 它們包含有記錄的數(shù)據(jù)。精品文檔精品文檔1、選擇 Practice文件夾，選擇 File Import Expriments 默認(rèn)情況下， 當(dāng)導(dǎo)入一個實驗時， D:BDExportExperiment folder 將會出現(xiàn)， 除非你以前 改變路徑導(dǎo)向到另一個文件夾。2、選擇命名為 Manual Comp的文件夾，點擊 Import 。Expriment導(dǎo)入的實驗都是以文件夾形式出現(xiàn)，文件夾在導(dǎo)入后在瀏覽框中將會以實驗 出現(xiàn)。注意原先的實驗沒有關(guān)閉，新的實驗加在Simple Analysis Experiment 后面有三

11、種方法在瀏覽框中增加實驗：1、用瀏覽框工具欄中的快捷鍵來新建一個空的實驗(默認(rèn)條件設(shè)置) 。2、Expriment New Expriment 命令新建一個新的實驗，實驗來自于一個原來保存的模板， 模版包含下列部分：點圖、門、統(tǒng)計圖和儀器設(shè)置。3、File import Expriment 命令，可新建一個實驗，通過這個方法獲得的實驗包括原來保 存的實驗條件等和數(shù)據(jù)。Working with Experiments in the Browser 現(xiàn)在在瀏覽框中有三個實驗，一個關(guān)閉的實驗 (Experiment_001), 一個打開的實驗?zāi)０?Simple Analysis) 和一個關(guān)閉的導(dǎo)入的

12、實驗 (Manual Comp) 。 接下來的練習(xí)來證明關(guān)閉和打開的實驗之間的不同，以及如何來比較儀器設(shè)置。1、點擊 Manual Comp Experiment 前面的( + )，展開實驗。盡管在 browser 框中顯示出實驗組分，但點圖依舊是空白的，你必須打開一個實驗來獲 得它的數(shù)據(jù)。注意：展開一個實驗和雙擊打開一個實驗是不同的精品文檔精品文檔2、雙擊 Manual Comp Experiment 來打開Simple Analysis Experiment 關(guān)閉， 在worksheet中顯示 Manual Comp Experiment 中的分析目標(biāo)。3、點擊其中一個實驗樣本Manual

13、 Comp Experiment 中，在每個樣本下面含有多個試管， 注意每個試管都是綠色的， 說明每個試管都包含有數(shù)據(jù)。4、點擊試管指示到任何一個試管。在global worksheet 中包含有點圖、 試管中含有數(shù)據(jù)， 數(shù)據(jù)就顯示在 worksheet中，可用試 管指示來定位試管，則將顯示所選擇試管的數(shù)據(jù)。5、在 browser 中選擇其它試管注意：數(shù)據(jù)并沒有改變， 必須依靠試管指示， 才能在 global worksheet 中顯示其他試管的數(shù)據(jù)。 嘗試把試管指示指向另一個試管，注意數(shù)據(jù)的變化。6、展開 Simple Analysis Experiment ，選擇 Instr Settin

14、gs 。注意 Inspector上的儀器設(shè)置是所選 Instru settings 的設(shè)置，盡管實驗已經(jīng)關(guān)閉。7點擊 Instrumengt 框中的各個參數(shù)Instrment 框顯示了試管指示所對應(yīng)的試管的儀器設(shè)置(Manual Comp Experiment 中的tube)。Inspector顯示的是試管的設(shè)置或者是所選擇的 Instr Settings 的設(shè)置。在這個例子里， Inspector 顯示的是 Simple Analysis Experiment 實驗的儀器設(shè)置，你可以用 Instrument框和 Inspector來比 較瀏覽器中的任何兩個儀器設(shè)置。精品文檔精品文檔顯示的是M

15、anualComp_001 中 PE 試管 的儀器設(shè)置顯示的是simpleAnalysis_001 的Settings 的儀器設(shè)置instruUsing Gating Features在BD FACSDiva 軟件中：可以創(chuàng)建四種類型的門： polygon 、rectangle、quadrant和 interval 。 自動圈門工具 Automatic 和Snap-To門工具可用來設(shè)置 polygon和interval 門。 在這一節(jié)中，你需要先前所建立的 Simple Analysis 和 Manual Comp 實驗。Creating Gates 這部分說明了在 Manual Comp E

16、xperiment 中怎么用 worksheet中的菜單欄來設(shè)不同的門：1、打開 Manual Comp Experiment2、把試管指向?qū)?zhǔn) Calibrite 樣本下的 Pre Sort試管，如下圖：3、在 FSC vs SSC點圖上建一個 Autopolygon 門選中 worksheet菜單欄的( Autopolygon )工具。 在點圖中點擊粒子，一個門將會自動4、試管指示指向下一個試管，可以看到一些粒子在門外。5、選擇 FSC vs SSC圖的 Autopolygon 門， Delete按 Delete 鍵而不是 Backspace鍵，如果 Delete 鍵不工作的話，右擊門，選

17、擇 delete。這將會 激活 Delete鍵，下次就可以使用。精品文檔精品文檔6、在 FSC vs SSC點圖上創(chuàng)建 Snap-To polygonSnap-To polygon 和autopolygon 門不同，Snap-To polygon 門自動重新計算。 可看見 Snap-To polygon 門的邊框比較粗。7、把試管指示回到 Pre Sort 試管，注意門的變化。8、（可選） 用其它設(shè)門工具進行練習(xí)，在點圖上去除Snap-To門，創(chuàng)建一個 Rectangle門和一個 Polygon 門（Editing Gates 這部分描述怎樣移動和改變門的大小1、選中 FSC vs SSC點圖

18、上的門，在每個頂點上會出現(xiàn)一個把手。2、移動選中的門 移動門的時候，選擇門的邊，而不是頂點，可看到門的標(biāo)簽隨著門一起移動3、拖動其中的一個把手來改變門的大小在你移動或者改變 Snap-To門時，門將不會自動調(diào)準(zhǔn)。你可以通過右擊門的邊，選擇下 拉菜單中的重新計算。4、通過拖動門內(nèi)的標(biāo)簽，可把標(biāo)簽拖到門外5、在門外點擊，釋放門6、關(guān)閉 Manual Comp Experiment.Subsetting PopulationsSimple Analysis Expriment 包括三個點圖和一個 Population Hierarchy 。 Population Hierarchy 主要是用來查看各

19、個門內(nèi)群體關(guān)系。精品文檔精品文檔在這里，你需要原來創(chuàng)建的 Simple Analysis Experiment ，在軟件安裝時，樣本文件存在 于BDExportFCS 文件中。導(dǎo)入數(shù)據(jù) 在你進行分群前，需要含有數(shù)據(jù)的點圖：1、通過雙擊來打開 Simple Analysis Expriment ，只有把實驗打開時，你才能導(dǎo)入數(shù)據(jù)。2、選擇 File Import FCSfiles 通常， D:BDExportFCS 文件出現(xiàn)，除非你原來改變過路徑3、雙擊 4色文件，在雙擊 Calibrite beads 文件夾來打開。4、選擇文件中所有的 FCS文件，點擊 Import當(dāng)導(dǎo)入 FCS文件時，需要

20、選擇文件，而不是文件夾，可以通過Shift 和Ctrl鍵來選擇多個甚至全部。Tube-001這樣就增加了一個新的樣本 Calibrite Beads ，含有四個帶數(shù)據(jù)的試管。5、在 Calibrite beads 樣本中，把試管指向6、在瀏覽框中選擇 Tube-001 ，勾選 Inspector 中熒光參數(shù)前的 Log Checkbox 。精品文檔精品文檔7、對 Calibrite Specimen 實驗的其它試管做相同的操作Defining and Subsetting Populations1、 Tube-001的FSC vs SSC點圖上，建立一個 Autopolygon 門。新的 P1

21、群就在 Population Hierarchy 上出現(xiàn)。2、把標(biāo)簽 P1拖出 Autopolygon gate （點中 P1標(biāo)簽，拖出門外）。3、建立一個只顯示 P1群的 PE直方圖 右擊直方圖， 選擇 show population P1 。在直方圖上只顯示 P1群體， 注意到直方圖上所有 的點都是紅色的，是 P1的顏色。4、PE直方圖上，在 PE陰性峰上創(chuàng)建一個 Autointerval 門 精品文檔精品文檔Population Hierarchy 圖上 P2群顯示在 P1群下面。當(dāng)你在一個群下創(chuàng)建一個門，新的群體 是原來群體的一個亞群。注意到 P2旁邊的顏色框是一個十字叉，說明子群的顏

22、色仍舊是其母群的顏色。默認(rèn)情 況下， Interval 和Quadrant門定義的群體一般不會被授予顏色。5、點擊 FITC vs PerCP-Cy5.5 點圖，顯示 P2群體 在點圖上右擊，選擇 show population P2 點圖是空白的，因為 P2群體沒有顏色，下面是給 P2群體設(shè)置一個顏色：1）雙擊 Population Hierarchy 前的顏色框2）選擇一個顏色6、在 FITC vs PerCP-Cy5.5 點圖上建一個 FITC 陽性的 Rectangle門。 擴展門的邊越過 X 軸，可以包含有軸的粒子。因為點圖顯示的是 P2的群體，新的 P3群體是 P2群體的一個子集。

23、下面的步驟顯示另一種建群體的方法。7、設(shè)置 FITC vs PerCP-Cy5-5 點圖顯示全部的粒子Tip 你也可以用 Inspector 來顯示一個點圖的群體層次結(jié)構(gòu)。8、Population Hierarchy 中選擇 P2群體，在 PerCP-Cy5.5陽性群體上畫一個 Autopolygon 門。結(jié) 果如下，可以看出新創(chuàng)建的 P4群體是 P2群體的一個子集。精品文檔精品文檔在進行分群時為了避免錯誤，保持 Population Hierarchy 可視。在你改變?nèi)后w的名字或者 顏色時，你還是可以選擇群體。interval 和 quadrant門的特Gating Multicolor E

24、xperiments 下面的教程說明了在用人外周血進行淋巴細(xì)胞亞群分析時， 性。在這個實驗中，細(xì)胞用 CD3 FITC, CD16+CD56 PE, CD45 PerCP-Cy5.5, CD4 PE-Cy7, CD19 APC, 和CD8 APC-Cy7 進行染色 進行這一步學(xué)習(xí)，您需要 6-color Experiment ( BDExportExperiment folder )。1、在 Practice folder. 中，導(dǎo)入 6-Color gating選擇文件夾，選擇 File Import Experiments ，在 BDExportExperiment folder 中定位6

25、-color gating 。選擇文件，點擊導(dǎo)入。2、雙擊實驗，打開實驗3/16+56/45/4/19/8 試管，如下圖。3、展開 lymphocytes 樣本，試管指向定位在在worksheet點圖中就會顯示數(shù)據(jù)4、在 CD45 vs SSC 點圖上，單核細(xì)胞和粒細(xì)胞上畫一個Rectangle門。Tip ：把門延伸過點圖的軸，這樣就包含在軸上的點。5、在 Population Hierarchy 中把門命名為 MNEs ( monocytes、 neutrophils 、eosinophils )，選 擇P1，輸入 MNEs ，enter。精品文檔精品文檔6、在 Population Hie

26、rarchy 圖中右擊 MNEs ，選擇 Invert Gate 。 在Population Hierarchy 圖上就增加了一個新的群體（不包含單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和嗜曙紅 細(xì)胞）。7、右擊 FSC vs SSC點圖，選擇顯示 population NoT （ MNEs ），結(jié)果如下圖。8、在淋巴細(xì)胞上畫一個Autopolygon gate (），在 Population Hierarchy 上把這個群體命名為lymphocyte ，結(jié)果如下圖，淋巴細(xì)胞是 NOT MNEs 的一個子集。Identifying Lymphocyte Subsets下面就把淋巴細(xì)胞分為 T、B和 NK細(xì)胞。1、右擊

27、 FSC vs SSC點圖上的淋巴細(xì)胞門，選擇Drill down 。一個新的 FSC vs SSC圖出現(xiàn)，只顯示淋巴細(xì)胞。在一張點圖上定義了一個門后，通過 Drill down 就可以創(chuàng)建一個只顯示門內(nèi)群體的點圖。2、在新的點圖上，把 FSC換成 CD3 。3、在CD3+細(xì)胞上畫一個 Interval gate（一般應(yīng)用在直方圖上，在點圖上也適用），命名新的 群體叫做 T細(xì)胞。精品文檔精品文檔4、用類似的方法可以得到 B、NK 亞群5、按住 ctrl鍵，在Population Hierarchy 中選擇 T 、B和NK ，右擊，選擇 Join Gates，在Population Hierar

28、chy圖上就出現(xiàn)一個新的群體，是 T、 B、NK 細(xì)胞的總合。Calculating Compensation Using Instrument SetupBD FACSDiva 軟件可以自動的計算光譜的重疊值，在進行補償時，更加節(jié)約時間，更 加精確。下面介紹如何使用 Instrument Setup feature 。Setting Up Compensation Controls1、打開 Experiment_0012、編輯參數(shù)如果計算機與儀器相連， 打開 Specimen-001，把試管指針指向 Tube-001，在Instrument框中編 輯參數(shù)。如果脫機操作，選擇 Exprimen

29、t 下的 instrument setting ，在 Inspector 中編輯參數(shù)。3選擇 Instrument-Instrument setup-Create compensation controls 。 下面的對話框?qū)⒊霈F(xiàn)4增加或者刪除對照，定義標(biāo)記特異性對照，或者可以改變補償控制的順序。5點擊 OK精品文檔精品文檔6展開 Compensation Control specimen 來查看補償對照。Creating an Instrument Configuration在Instrument Setup 中，下一步就是記錄數(shù)據(jù)。 為了計算補償， 首先要把 instrument conf

30、iguration 設(shè)置成符合記錄數(shù)據(jù)的格式。1選擇 Instrument-Instrument Configuration2在 Instrument Configuration 對話框中，選擇 Add Configuration3在 Instrument Configuration 對話框中，輸入 2 laser, 4 color ，點擊 OK注意： 確認(rèn)你輸入的名字完全與圖上的相符， 如果字符的空格或者大小寫與例子不符， 在計 算補償時，就會有一個錯誤信息。4在instrument configurations 列表中，選擇 2 laser，4 color ，點擊 Add Paramete

31、r鍵6次 instrument configuration 圖應(yīng)該如下所示：5命名 laser和 detector，輸入每個參數(shù)的名字首先應(yīng)該確定一個 Detector，再改變參數(shù)的名字。 可以通過查看其他的 configuration 來找到每 個參數(shù)合適的 laser和 detector。通過相應(yīng) column的下拉菜單來選擇所對應(yīng)的設(shè)置， 把參數(shù)的名字改為 FSC、SSC、FITC 、PE、PerCP和APC 。精品文檔精品文檔6 點擊 okImporting Data and Calculating Compensation 現(xiàn)在已經(jīng)設(shè)置好與我們試驗相符的 confuguration

32、，接下來就是導(dǎo)入數(shù)據(jù)?？梢杂迷瓉碛涗浀?數(shù)據(jù)( Sample expriment )來計算補償1選擇 Practice folder ，從 BDExportexperiment folder 里導(dǎo)入 AutoComp Expriment 。 選擇 File- Import- Experiment ，找到 AutoComp Expriment 文件夾，點擊 Import 。 2雙擊 AutoComp Experiment 打開實驗這個實驗包含有一個 Compesation Specimen 和四個熒光參數(shù)的試管3雙擊 Unstained Control Tube ，打開對應(yīng)的 worksheet

33、4 在 FSC vs SSC點圖上，移動 P1門包含所有的陰性粒子5右擊門的邊框，選擇 Apply to All Compensation Control 。6 雙擊第一個 Stained Control Tube ( FITC Stained Control )，在 worksheet 打開相應(yīng)的點圖。 7確定 P2門包含了所有的陽性顆粒。P2門是一個 Snap-To Interval 門，已經(jīng)包含了所有的陽性顆粒。如果一些顆粒在門外，右擊 門，選擇 recalculate。8雙擊下一個 Stained control tube ，打開相應(yīng)的 worksheet。9對下面的試管，重復(fù) 7和

34、8，當(dāng)所有的門設(shè)定好后，你可以進行補償計算了。 10選擇 Instrument-Instrument setup-Calculate Compesation 。將會出現(xiàn)一個對話框，可以進行命名。11 對于新的補償進行命名，點擊 ok。精品文檔精品文檔一個新的設(shè)定， 包括了參數(shù)和標(biāo)記信息，閾值和電壓，計算好的補償。 新的儀器設(shè)置儲存在Setup catalog下。Calculating Compensation Manually在進行下面實驗時，需要導(dǎo)入 Manual Comp Experiment ，進行手動補償時不需要鏈接儀器。 Adjusting FITC Compensation這部分描

35、述了怎樣計算 FITC 熒光的溢出，其他熒光也是類似的。2 在 FSC vs SSC點圖上創(chuàng)建一個 Snap-To gate ，如下圖1選中 Compensation Controls Specimen 樣本下的 FITC Stained Control 管。3在worksheet上選擇 FSC vs SSC點圖，右擊點圖，選擇 Show Populations P1 。4在FITC-A vs PE-A 點圖上，畫一個 FITC陽性的 Interval gate 。在Population Hierarchy view 圖 上，進行重命名為 FITC Positive 。5在 Populatio

36、n Hierarchy view 圖上右擊 FITC Positive ，選擇 Invert Gate ，重命名為 NOT (FITC Positive) population Negative ，如下圖精品文檔精品文檔6 在 Inspector 框中顯示補償管，確定 Enable Compensation checkbox 已經(jīng)被選擇。7調(diào)節(jié)PE-%FITC 熒光補償，直到， FITC陽性群體的熒光平均值與陰性對照的相同，如下圖。8用同樣的方法調(diào)節(jié) PerCP-CY5-5-%FITC 、 APC %FITC 的熒光補償，結(jié)果如下圖。精品文檔精品文檔其他熒光通道可用相同的方法進行調(diào)節(jié)。Manu

37、ally Constructing a Compensation Matrix 進行補償完畢后，可以拷貝這些設(shè)置來進行實驗。1放大 Inspetor 框，這樣就可以看到整個補償網(wǎng)絡(luò)。2在Browser框中，右擊 FITC Stained Control 管，選擇 Copy Spectral Overlap 。3展開 Calibrite Specimen ，可以看到五個試管。4選擇 Calibrite Specimen 下的 5個管子，右擊試管，選擇 Paste Spectral Overlap。 在數(shù)據(jù)拷貝后，在瀏覽器中選擇其中一個Calibrite Tube 。在 Inspector框中，可

38、以看到 FITC 的補償網(wǎng)絡(luò)。如下圖5輪流拷貝其它的 Spectral Overlap settings ，粘貼到這五個試管。當(dāng)完成后，結(jié)果應(yīng)該如下圖精品文檔精品文檔在進行補償之后，就可以用相應(yīng)的條件進行樣本檢測Expriment 、 Template、 Panel Template、 Analysis Template 、Tip：可以進行導(dǎo)出和導(dǎo)入的模版：Settings、 FCS Files。Exporting Experiments1 在瀏覽框中選擇 experiments2 選擇 File Export Experiments.3 在 Export Experiments 對話框中，進

39、行合適的選擇，點擊 OK 。Importing Experiments1 選擇 File Import Experiments.2 在對話框中選擇實驗文件夾或者 Zip 文件夾。3 選擇需要的文件，點擊 Import 。精品文檔精品文檔Exporting Experiments as Templates1右擊experiment， choose Export Experiment Template ， Export Wizard dialog 出現(xiàn)。 2輸入 template type 和模板名字（模版名字是進行區(qū)別的唯一標(biāo)志），點擊next3下面是一些可選項進行選擇后，點擊Finish 。I

40、mport a Template 根據(jù)已經(jīng)儲存的模板來建立一個實驗（不能用快捷鍵） choose Experiment New Experiment or press Ctrl-E.出現(xiàn) Experiment Templates dialog ，進行選擇你所需的模板， 最多可建立 50個拷貝（實驗拷貝）Exporting a Specimen as a Panel Template1Right-click the specimen 、 choose Export Panel Template ， Export Wizard dialog 出現(xiàn)。2選擇你 panel所需要的 global wor

41、ksheet ，點擊 next。 3選擇 template type ，輸入名字，點擊 next。 4下面是一些可選項，點擊 Finish。Importing a Panel Template選擇 Experiment New Specimen or press Ctrl-M ， Panel Templates dialog出現(xiàn)，選擇方式與導(dǎo) 入模板類似。進行選擇，最多 50 個拷貝（樣本拷貝）利用 Panel Template（包含有實驗的儀器設(shè)置，分析方式）可對其他樣本進行分析，但是樣 本中所包含的試管數(shù)必須同。右擊 specimen，選擇 Apply Panel Analysis ，出現(xiàn)

42、 Panel Template dialog對話框，進行選擇，點擊 OK 。Exporting a Analysis Template1 Right-click an Analysis icon （ ）, 或者含有的tube或者 global worksheet ， chooseExport Analysis template 。 Export Wizard dialog 出現(xiàn)。2選擇 template type ，確定名字，點擊 next。3下面是可選項，點擊 ok。Creating a Tube with a Predefined Analysis Template精品文檔精品文檔1Choose Experiment New Tube or press Ctrl-T 。2Analysis Templates dialog 出現(xiàn)，進行選擇，點擊 OK 。最多進行 50個拷貝( Tube數(shù))。Creating Specimen- or Tube-Specific Settings1 右擊瀏覽框 Cytometer Settings 圖標(biāo) ( ) ，選擇 Export to the Instrument folder 。2 輸入文件名稱，點擊 Export.3 默認(rèn)情況下文件會儲存在 D:BDExportInstrument 中。Import