常用溶液配置方法[1]解析

1、.常用貯液與溶液1mol/L 亞精胺( Spermidine ): 溶解 2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體積為 10ml。分裝成小份貯存于-20 C。1mol/L 精胺( Spermine )：溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使終體積為 10ml 分裝成小份貯存于-20 C。10mol/L 乙酸胺( ammonium acetate )：將 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定 容至 1L 后，用 0.22um 孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學(xué)試 劑級(jí)，無(wú) DNA 酶)于 9.5ml 水中(為減少變性， 須將蛋白加入

2、水中，而不是將水加入蛋白)，蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清 蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20 C。1mol/L 二硫蘇糖醇( DTT) :在二硫蘇糖醇 5g 的原裝瓶中加 32.4ml 水，分成 小份貯存于-20 C?；蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫蘇糖醇溶液。8mol/L 乙酸鉀( potassium acetate ):溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中，加水 定容到 100ml 。1mol/L氯化鉀(KCl):溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到 100ml。3mol/L 乙

3、酸鈉( sodium acetate ):溶解 40.8g 的三水乙酸鈉于約 90ml 水中， 用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L )，混合后形 成EDTA的三鈉鹽。或稱(chēng)取186.1g的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH，并溶于 水中，定容至 1L。1mol/L HEPES:將 23.8gHEPES溶于約 90ml 的水中，用 NaOH 調(diào) pH (6.8-8.2 )， 然后用水定容至 100ml 。1mol/L HCl :加 8.6ml 的濃鹽酸至 91.4ml 的水中。25m

4、g/ml IPGT :溶解250mg的IPGT (異丙基硫代-伕D-半乳糖苷)于10ml水 中，分成小份貯存于 -20C。1mol/LMgCI2:溶解20.3g MgCI2 6H2O于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中, 定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20 C。20mg/ml蛋白酶K （proteinase K ）:將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中, 輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶 K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到 10ml，然后分 裝成小份貯存于-20 C。10mg/mlRna

5、se （無(wú) DNase） （DNase free RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min , 使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl調(diào)pH至7.5,于-20 C貯存。（配制過(guò) 程中要戴手套5mol/L氯化鈉（NaCl）:溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至 100ml。10N氫氧化鈉（NaOH）:溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力 攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L o10 % SDS （十二烷基硫酸鈉）：稱(chēng)取 中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解100g

6、SDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯 用水定容至1L o2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體 積為100ml。100 %三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪 拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5 % X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚伕半乳糖苷）：溶解25mg的X gal于1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20 C。100 XDenhardt 試劑(Denhardts regent )成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量2% 聚蔗糖（Ficoll，4

7、00 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA （組分 V）水2g2g2g加水至總體積為100ml依照上表稱(chēng)取各組分，溶于水中定容。過(guò)濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20 C貯存。10 X標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端連接）成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）0.5mg/ml BSA （組分 V）（可選） 水5ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L

8、貯液200ul 100 mmol/L 貯液50ul 1 mmol/L 貯液0.5ml 10 mg/mL 貯液 2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 C100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions )可以購(gòu)買(mǎi)到100mmol/L純dNTPs貯液，-80 C可貯存至少6個(gè)月。10mmol/L dNTP 混合液成分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 貯液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 貯液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 貯液10m

9、mol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 貯液水12ul20 % PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量質(zhì)量濃度為 20 %聚乙二 醇2.5mol/L 氯化鈉水20g50ml 5 mol/L 氯化鈉或14.6g 固體氯化鈉補(bǔ)足100ml加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶 解。20 XSSC成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水）3mol/L氯化鈉水88.2g175.3g 補(bǔ)足1L溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH 為7.

10、0，用水補(bǔ)足體積至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）處理水加100ul DEPC于100ml水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1 %。在37 C溫浴至 少12h，然后在15 psi條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC 會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用 DEPC處理Tris緩沖液。甲酰胺（deionized formamide ）直接購(gòu)買(mǎi)或加Dowex XG8混合樹(shù)脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中， 用磁力攪拌器 輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹(shù)脂后分 成小份，充氮?dú)庥?80 C貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate buffer ）按照下表所給

11、定的體積，混合1 mol/L的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L磷酸氫 二鈉（雙堿）貯液，獲得所需 pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L的磷酸二氫鈉（NaH2PO4 H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L磷酸 氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。1mol/L磷酸二氫鈉（ml）1mol/L 磷酸氫二鈉（ml）最終pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807

12、207.2TE （用于懸浮和貯存DNA）成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl ( pH7.4-8.0 , 25 C)200ul 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )98.8mlTris 緩沖液（Tris-HCI buffer ）將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH （25 C下）加一定量 的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。濃鹽酸的體積（ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37

13、.4767.2二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50 XTris-乙酸（TAE）緩沖液成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 堿 1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA 水242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L ) 200ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)補(bǔ)足1L5 XTris-硼酸（TBE）緩沖液成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 堿445 mmol/L 硼酸鹽10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 補(bǔ)足1L染料1

14、%溴酚藍(lán)（bromophenol blue ）加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF （xyle ne cyan ole FF溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙錠（ethidium bromide小心稱(chēng)取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到 完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于 4C貯存。凝膠上樣液（gel loading solutions ）6 x堿性凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氫氧化鈉6 mmol/L EDTA18 %聚蔗糖（400型

15、）0.15 %溴甲酚綠0.25 %二甲苯青FF 水300ul 10N 氫氧化鈉120ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0 )1.8g15mg25mg 補(bǔ)足到10ml6 x聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚藍(lán)0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15 %聚蔗糖（400型） 水1.5ml 1 %溴酚藍(lán)1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0 )1.5g 補(bǔ)足到10ml6 x溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.25 %溴酚藍(lán)2.5ml

16、1 %溴酚藍(lán)0.25 %二甲苯青FF2.5ml 1 %二甲苯青 FF15 %聚蔗糖（400型）1.5g水補(bǔ)足到10ml6 x甘油凝膠上樣液（4C貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚藍(lán)0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50 %甘油 水1.5ml 1 %溴酚藍(lán)1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0 )3ml3.9ml6 x蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚藍(lán)0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40 %聚蔗糖 水1.5ml 1 %溴酚藍(lán)1.5ml 1 %二

17、甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0 )4g補(bǔ)足到10ml10 x十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.2 %溴酚藍(lán)0.2 %二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1 % SDS50 %甘油 水20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 % SDS5ml補(bǔ)足到10ml三.常用培養(yǎng)基I D拉差甘LB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化鈉10g如果需要用1N NaOH （1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板 需添加瓊脂粉12g/L,

18、上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。SOB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化鈉0.5g1 mol/L氯化鉀2.5ml用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再 在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂。SOC培養(yǎng)基成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml 的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到 100ml，用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。TO拉差甘TB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵

19、母提取物24g甘油4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到 60C,再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液(2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在 足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌)。o vvt2入YI培養(yǎng)將下列組分溶解在0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化鈉4ml如果需要用1N NaOH (1ml)調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板 需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。YPD培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中:用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型 每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配 制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。四常用抗生素氨芐青霉素(ampicillin )(100mg/ml )溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20 C貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。羧芐青霉素(carbenicillin )( 50mg/ml溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20 C貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加