原發(fā)性膽囊癌中核因子E2P45相關(guān)因子與血紅素加氧酶-1的表達(dá)及其與臨床病理的相關(guān)性(一)

1、原發(fā)性膽囊癌中核因子 E2P45相關(guān)因子與血紅素加氧酶 -1 的表達(dá)及其 與臨床病理的相關(guān)性 (一 ) 作者：張明鑫，周蘇娜，王健生，葉爾買克，蔡惠，段小藝，石景森 【摘要】目的檢測(cè)核因子 E2p45 相關(guān)因子 2(Nrf2) 與血紅素加氧酶 -1(HO-1)在原發(fā)性膽囊癌組織中的表達(dá)，探討其與膽囊癌發(fā)生、發(fā)展的 關(guān)系。方法采用免疫組化 SP法檢測(cè) 59例原發(fā)性膽囊癌患者 Nrf2和 HO-1 的表達(dá)水平。結(jié)果原發(fā)膽囊癌組織中 Nrf2 和 HO-1 表達(dá)的強(qiáng)陽性率分 別為 76.3%、80.7%。隨著轉(zhuǎn)移程度、 Nevin 分級(jí)以及病理分級(jí)的增加， Nrf2 和 HO-1 的強(qiáng)陽性表達(dá)率增加

2、，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P0.05)。兩者的 強(qiáng)陽性表達(dá)與年齡、性別等臨床特征無相關(guān)性 ;Nrf2 和 HO-1 表達(dá)之間 具有相關(guān)性 (r=0.376，P0.05)。結(jié)論 Nrf2 和 HO-1 在原發(fā)性膽囊癌組織 中存在高表達(dá)，對(duì)膽囊癌的發(fā)生、發(fā)展起一定作用?！娟P(guān)鍵詞】核因子 E2p45 相關(guān)因子 2;血紅素加氧酶 -1;原發(fā)性膽囊癌 ;免 疫組織化學(xué)ABSTRACT:ObjectiveTodetecttheexpressionofnuclearfactor-erythroid2p45- relatedfactor2(Nrf2)andhemeoxygenase(HO-1),andinvest

3、igateitscorrelatio nwiththegenesisanddevelopmentofprimarygallbladdercarcinoma.Methods Immunohistochemistry(SPassay)wasusedtodetecttheexpressionofNrf2and HO-1proteinin59patientswithprimarygallbladdercarcinoma.ResultsHighlyp ositiveexpressionrateofNrf2andHO-1was76.3%and80.7%,respectively,inpri marygal

4、lbladder.TheexpressionofNrf2andHO-1hadasignificantcorrelationwithmetastasis,Nevinstaging,anddifferentiation(P0.05),butshowednosignificantassociationwithsexorage.TheexpressionofNrf2hadapositivecorrelationwit hthatofHO-1(r=0.376,P0.05).ConclusionBothNrf2andHO-1areoverexpresse dinprimarygallbladdercarc

5、inomaandmayplayacertainroleinthegenesisandd evelopmentofprimarygallbladdercarcinoma.KEYWORDS:nuclearfactor-erythroid2p45-relatedfactor2(Nrf2);hemeoxyge nase1(HO-1);primarygallbladdercarcinoma;immunohistochemistry 核 因 子 E2p45 相 關(guān) 因 子 2(nuclearfactor-erythroid2p45-relatedfactor2,Nrf2) 是氧化應(yīng)激中的關(guān)鍵 轉(zhuǎn)錄因子，通

6、過上調(diào)抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)清除代謝毒物、致癌物等 以維持機(jī)體的氧化還原穩(wěn)態(tài)。因此，激活 Nrf2 途徑對(duì)預(yù)防腫瘤具有重 要意義 1。近來的研究發(fā)現(xiàn)， Nrf2 及其下游基因在許多腫瘤細(xì)胞株及 組織中過度表達(dá)，促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)，而且 Nrf2 在耐藥細(xì)胞中表達(dá)上 調(diào) ， 可 能 和 腫 瘤 的 獲 得 性 耐 藥 相 關(guān) 2 。 血 紅 素 加 氧 酶 -1(hemeoxygenase-1,HO-1是) Nrf2 眾多下游基因之一，可氧化血紅素生 成膽綠素、一氧化碳和二價(jià)鐵離子。 HO-1 通過減輕氧化損傷和減輕炎 癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡、 調(diào)節(jié)細(xì)胞分化來維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài) 3。研究發(fā)現(xiàn)， HO-1在腫

7、瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)且與腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移以及耐藥相關(guān) 4。目 前，國(guó)內(nèi)外有關(guān) Nrf2 和 HO-1 表達(dá)與膽囊癌關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。 本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè) Nrf2 和 HO-1 在原發(fā)性膽囊癌中的表 達(dá)情況，探討 Nrf2 和 HO-1 在膽囊癌發(fā)生、發(fā)展中的臨床意義。1 材料與方法1.1 材料收集西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 20002006 年間膽囊 癌患者的組織標(biāo)本，共 59 例，其中男 17 例，女 42 例，年齡 36 83 歲，中位年齡 60.8 歲;所有病例經(jīng) HE染色證實(shí)為原發(fā)性膽囊癌，病理 類型：腺癌 54 例，鱗癌 5 例。所取標(biāo)本用甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋， 制備

8、 4m切片，行免疫組化檢測(cè)。1.2Nrf2 和 HO-1的免疫組化染色 Nrf2 兔抗人多克隆抗體為美國(guó) Santa 公司產(chǎn)品 (貨號(hào)： sc-722)，按 1200 稀釋后作為一抗 ;HO-1兔抗人多克 隆抗體為美國(guó) Abcam公司產(chǎn)品(貨號(hào)： ab52947)，按 1500 稀釋后作 為一抗 ;通用型 SP 系列工作液試劑盒 (SP-9000)及 DAB 顯色試劑盒 (ZLI-9032)購自中山金橋生物公司。采用免疫組化 SP法，染色步驟嚴(yán)格 按照說明書進(jìn)行。以已知陽性反應(yīng)片作為陽性對(duì)照，以PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照。1.3 免疫組化染色結(jié)果的判定由 2位高年資的病理科醫(yī)生獨(dú)立評(píng)定， 當(dāng)

9、 出現(xiàn)分歧時(shí)共同評(píng)定。蛋白表達(dá)均以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆 粒為陽性，具體方法如下：每張切片隨機(jī)觀察 5 個(gè)高倍視野，每個(gè)視 野計(jì)數(shù) 1000 個(gè)細(xì)胞，用各視野中陽性細(xì)胞數(shù)的平均百分?jǐn)?shù)進(jìn)行計(jì)分： 0%24%為 1分，25%49%為2分，50%74%為 3分，75%為4分。 染色強(qiáng)度以多數(shù)陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色特征為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分：細(xì)胞未著色為 或呈淡黃色為 0分，棕黃色為 1 分，棕褐色為 2分。為進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析， 以超過 25%細(xì)胞呈棕褐色為強(qiáng)陽性，余為弱陽性。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)數(shù)資料的組間比較采用卡方檢驗(yàn)， 應(yīng)用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì) 軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為 =0.0。52 結(jié)果2.1Nrf2與 HO-1在原發(fā)性膽囊癌中的表達(dá)情況 Nrf2與 HO-1呈散在分布 的淡黃色或棕褐色顆粒，主要定位于細(xì)胞核中，散見于細(xì)胞質(zhì)中。陽 性細(xì)胞呈片狀分布的棕褐色顆粒， 陰性對(duì)照片中未見棕黃色顆粒 (圖 1)。 Nrf2 與 HO-1 的強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為 76.3%和 80.7%。隨著轉(zhuǎn)移程度、 Nevin 分級(jí)以及病理分級(jí)的增加，兩者的強(qiáng)陽性表達(dá)率增加，且具有統(tǒng) 計(jì)學(xué)差異 (P0.05)。而不同年齡、性別的原發(fā)性膽囊癌患者的 Nrf2與 HO-1 強(qiáng)弱表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (表 1)。圖 1Nrf2與 HO-1在原發(fā)性膽