標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 檢驗(yàn)?zāi)康膶?duì)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行合理的保存，并規(guī)范合理的使用流程，保證菌株的性能穩(wěn)定可靠。2 范圍微生物實(shí)驗(yàn)室保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。3 職責(zé)微生物組工作人員正確執(zhí)行本操作規(guī)程。4 術(shù)語(yǔ)和定義4.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株其特征進(jìn)行了分類和描述，有明確的來(lái)源。ATCC( AmericanTypeCultureCollection)美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌株收藏中心。4.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過(guò)一代轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。4.3 工作菌株標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳代后得到的同種菌株。4.4 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱。4.5 質(zhì)控菌株ATCC最佳，但當(dāng)無(wú)法獲得時(shí)可以使用 ATCC演化的菌株或我

2、國(guó)國(guó)家菌種庫(kù)儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。特殊情 況，例如定性試驗(yàn)可用已知的菌種作為質(zhì)控菌株。室間質(zhì)評(píng)的菌株即可。5 保存程序5.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株用 1ml 無(wú)菌的小牛血清或營(yíng)養(yǎng)肉湯溶解。 根據(jù)菌種的生長(zhǎng)特點(diǎn)， 接種到新鮮培養(yǎng)基上選擇適宜的培養(yǎng)條 件培養(yǎng) 18-24h 。酵母菌要求 3 天，形成孢子的微生物宜保存孢子。5.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化鈉、甘油、純化木。相當(dāng)于20%的甘油。挑取 5 環(huán)菌落加入到 1ml 甘油肉湯中混勻?？琉B(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。 -80 保存。除鏈球菌和嗜血桿菌以外細(xì)菌均可使用。保存 期限 1-5 年。成分為脫纖維羊血。 挑取 5環(huán)菌落加入到 1ml 甘油肉湯中混

3、勻。 苛養(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。 -80 保存。 主要用于保存鏈球菌、嗜血桿菌及厭氧菌。保存期限 1-5 年。5.3 工作標(biāo)準(zhǔn)菌株由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳代得到的菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株對(duì)多向下傳三代。過(guò)多的傳種會(huì)增加變異的機(jī)會(huì)。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株根據(jù)菌種特點(diǎn)選擇適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng) 18-24h 即工作標(biāo)準(zhǔn)菌株。儲(chǔ)存在2-8 ，可放四周。個(gè)別營(yíng)養(yǎng)要求高的為2 周，例如肺炎鏈球菌和嗜血桿菌。使用時(shí)應(yīng)編號(hào)并登記。5.4 編號(hào)方法每個(gè)菌的保存管都要有唯一的編號(hào)，簽字筆標(biāo)注，便于查找和管理。來(lái)源數(shù)字意義購(gòu)買的標(biāo)準(zhǔn)菌株1501ATCC2592215 年第 1 株 ATCC25922儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)菌株1501ATCC25

4、922-3由 1501ATCC25922傳代而來(lái)的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株5.5 記錄管理5.5.1 菌種應(yīng)有嚴(yán)格的登記。每個(gè)編號(hào)都要有詳細(xì)的記錄包括來(lái)源、傳代、保存方法、使用記錄、使用 原因、高壓滅菌記錄等。附表標(biāo)準(zhǔn)菌株記錄表 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株記錄表5.5.2 菌種保管應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，保存于專用冰箱中，雙人雙鎖，確保菌種安全。保管人員變動(dòng)時(shí)，必須 嚴(yán)格交接手續(xù)。5.5.3 各種菌種應(yīng)按規(guī)定時(shí)間接種，注意菌種有無(wú)污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時(shí)，應(yīng)及時(shí)更換6 使用流程標(biāo)準(zhǔn)菌株購(gòu)買的標(biāo)準(zhǔn)菌株， 編號(hào)， -80保存用完第二天高壓滅菌復(fù)蘇接種合適的培養(yǎng)基，孵育出菌落 性能驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株挑取典型的菌落到合適的穩(wěn)定劑中

5、，編號(hào)，-80保存，準(zhǔn)備 n 支0代1代2代日質(zhì)控每周取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ) 備菌株傳種合適的培 養(yǎng)基，適宜條件孵育出 傳代培養(yǎng)物可以作為第菌株 使用。4保 菌天6株每天天用使都。用用。傳4保 一個(gè)新的傳代培養(yǎng)物周質(zhì)控月質(zhì)控7菌天株后，傳作代為培工養(yǎng)作物菌作株使 廢用，。進(jìn)工行作高菌壓株滅使菌用后第 重二新天高取壓一直滅菌標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備 菌株傳種，進(jìn)入下一輪 周期，程序如上面幾個(gè) 步驟儲(chǔ)備菌株管用完第二天每周取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳種合適的培 養(yǎng)基，適宜條件孵育出每月取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳種合適的培 ，適宜條件孵育出 作為工作菌株使用，第二天菌高落壓滅菌養(yǎng)基也高壓可以滅菌用最后一天的的工作菌株作為傳代 培養(yǎng)物

6、繼續(xù)使用一周。購(gòu)買的標(biāo)準(zhǔn)菌株（可追溯來(lái)源，衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)菌株可作為質(zhì)控菌 株使用，按照標(biāo)準(zhǔn)菌株管理）接種傳代培養(yǎng)一次，并進(jìn)行純度和生化鑒定作為“ 儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)菌株 ”進(jìn)行進(jìn)行純度檢查 和生化鑒定。 作為 傳代物 或7 質(zhì)量者控第制一支“ 工作菌株 ”特定察的菌儲(chǔ)落存的條典件型和形態(tài)是否符合菌種。有沒(méi)有雜菌生長(zhǎng)。氧推化薦酶儲(chǔ)、存觸時(shí)酶間、上機(jī)等生化試驗(yàn)，鑒定菌種有沒(méi)有變化。推薦的儲(chǔ)存時(shí)間每天傳代平板作為第二天的行室內(nèi)質(zhì)控，用完立刻高件壓儲(chǔ)室內(nèi)質(zhì)控可以再重復(fù)一周， 規(guī)則同上。 但一般來(lái)說(shuō)工作菌株不能超 過(guò) 3 代7.17.27.3如果有污染或懷疑有問(wèn)題時(shí)，應(yīng)準(zhǔn)備新的首次傳代物或者獲取新的標(biāo)準(zhǔn)菌株。8 參考文獻(xiàn)序號(hào)唯一性編號(hào)文獻(xiàn)名稱9.1ISBN978-7-117-19862-2/R 19863全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第四版9.2ISBN978-7-5478-1226-6/R 395臨床微