實(shí)驗(yàn)一_普通光學(xué)顯微鏡以及顯微標(biāo)本制作

1、普通光學(xué)顯微鏡以及顯微標(biāo)本制作普通光學(xué)顯微鏡以及顯微標(biāo)本制作 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?二 實(shí)驗(yàn)原理 三 實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑 四 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 五 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1.熟悉普通光學(xué)顯微鏡的主要結(jié)構(gòu)和基本性能。 2.掌握低倍鏡、高倍鏡和油鏡的正確使用方法。 3.初步了解光學(xué)顯微鏡的維護(hù)方法。 4.了解并掌握簡(jiǎn)單的顯微標(biāo)本制作技術(shù) 實(shí)驗(yàn)原理 普通光學(xué)顯微鏡是最通用的一種光學(xué)顯微鏡。 利用光線照明，標(biāo)本中各點(diǎn)依照其光吸收的不同而 在明亮的背景中成像。它由物鏡、目鏡、聚光鏡、 光源、載物臺(tái)和支架等部件組成。其中聚光鏡用于 調(diào)節(jié)顯微鏡的照明，物鏡和目鏡是放大微小物體成 像的主要部件。其基本成像原理是

2、：物鏡、目鏡、 聚光鏡各自相當(dāng)于一個(gè)凸透鏡，被檢標(biāo)本置于聚光 器與物鏡之間，物鏡可使標(biāo)本在物鏡上方形成一個(gè) 倒立的放大實(shí)像。目鏡將此倒像進(jìn)一步放大成像， 該虛像看起來(lái)好像在離眼睛250mm處。 實(shí)驗(yàn)原理 顯微標(biāo)本制作技術(shù)是組織學(xué)、胚胎學(xué)、生理學(xué)及細(xì)胞 學(xué)等學(xué)科研究觀察細(xì)胞、組織的生理、病理形態(tài)變化的一 種主要方法。大多數(shù)的生物材料，在自然狀態(tài)下是不適合 顯微觀察的，也無(wú)法看到其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。因?yàn)椴牧陷^厚，光 線不易透過(guò)，以致不易看清其結(jié)構(gòu)，另外細(xì)胞內(nèi)的各個(gè)結(jié) 構(gòu)，由于其折射率相差很小，即使光線可透過(guò)，也難以辨 明。但在經(jīng)過(guò)固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)后就可把材 料切成較薄的片，再用不同的染色方法就

3、可以顯示不同細(xì) 胞組織的形態(tài)及其中某些化學(xué)成份含量的變化，就可以在 顯微鏡下清楚地看到其中不同的區(qū)域組分狀態(tài)，切片也便 于保存，所以是教學(xué)和科研中常用的方法。 實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑 普通光學(xué)顯微鏡、擦鏡紙、吸水紙、蒸餾水、 載玻片、蓋玻片、香柏油、二甲苯、刀片等 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 (一)普通光學(xué)顯微鏡的主要結(jié)構(gòu) 1.機(jī)械部分：鏡座、鏡柱、鏡臂、鏡筒、轉(zhuǎn)換 器、載物臺(tái) 2.照明部分：反光鏡或者光源燈、聚光器、光 圈 3.光學(xué)部分：目鏡、物鏡(物鏡上的標(biāo)志：放大 倍數(shù)、數(shù)值孔徑、機(jī)械筒長(zhǎng)、蓋片厚度) 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 (二)普通光學(xué)顯微鏡的性能和質(zhì)量 1.數(shù)值孔徑 2.分辨力 3.放大率 4.焦點(diǎn)深度

4、 (三)普通光學(xué)顯微鏡的使用方法 1.用前的準(zhǔn)備工作 2.低倍鏡的使用 3.高倍鏡的使用 4.油鏡的使用方法 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 (四)本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用普通光學(xué)顯微鏡的主要注意事項(xiàng) 1.取顯微鏡時(shí)，請(qǐng)盡量小心，防止震動(dòng)損壞鏡頭 2.觀察帶有液體的臨時(shí)標(biāo)本時(shí)，請(qǐng)務(wù)必加蓋玻片，以免鏡頭 受污染 3.鏡頭污染時(shí)，請(qǐng)用專(zhuān)業(yè)擦鏡紙及時(shí)擦拭，注意單方向擦拭 4.非觀察時(shí)候，請(qǐng)將物鏡鏡頭偏離光軸，避免鏡頭受損 5.非教師授課需要及實(shí)驗(yàn)室管理員允許，請(qǐng)勿擅自拆卸零件 6.每位同學(xué)本學(xué)期固定使用一臺(tái)顯微鏡，并做好登記工作； 如有問(wèn)題請(qǐng)及時(shí)報(bào)告管理員老師 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 (五)顯微標(biāo)本制作 1.非切片法 (1)涂片法：

5、將材料均勻地涂布在載玻片上的一種制片方法； 常用的涂片材料有單細(xì)胞生物、小型藻類(lèi)、血液、細(xì)菌培養(yǎng)液、 動(dòng)植物的疏松組織、精巢、花藥等。 (2)鋪片法：主要用于動(dòng)、植物組織的表皮層觀察，可活體取 待觀察動(dòng)、植物組織，用尖鑷子撕去一層表皮，迅速平鋪在載 玻片上。 (3)壓片法：壓片法是將一些較幼嫩，柔軟的生物材料如植物 根尖、花粉粒等置于載玻片和蓋片之間，施加一定壓力，將組 織細(xì)胞壓散的一種制片方法。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 (4)磨片法：用于很堅(jiān)硬的組織，如骨和牙。 (5)離析法：利用化學(xué)試劑使組織的細(xì)胞間質(zhì)溶解，使細(xì)胞能 分散成單個(gè)個(gè)體；適用于肌肉、葉片、莖等部位。 (6)整裝片法等：裝片法是將生物材料采取整體封固制成玻片 標(biāo)本的方法，常用材料有：微小生物如衣藻、水綿、變形蟲(chóng)、 水螅，植物的葉表皮；昆蟲(chóng)的翅、足、口器，人的口腔上皮 細(xì)胞等。 2.切片法 包括徒手切片法、石蠟切片法、火棉膠切法、冰凍切片 法等類(lèi)型。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 3.常用固定劑 (1)包音氏固定液：由苦味酸飽和水溶液、甲醛、冰醋 酸配制。 (2)海利氏液：由重鉻酸鉀、氯化汞、蒸餾水100毫升、 甲醛液配制。 (3)卡諾固定液：由純酒精、冰醋酸配制。 (4)約翰森固定液：由福爾馬林、丙酸、50% 酒精配制。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 4.常用染劑 (1)代氏染液 (2)伊紅水溶液 (3)番紅-固綠對(duì)染 (4