2018屆高考生物一輪復(fù)習(xí)考點(diǎn)加強(qiáng)課7微生物的篩選、鑒定、分離與計(jì)數(shù)學(xué)案

1、學(xué)必求其心得，業(yè)必貴于專精考點(diǎn)加強(qiáng)課7 微生物的篩選、鑒定、分離與計(jì)數(shù)從近五年全國卷高考看，生物技術(shù)實(shí)踐專題的命題絕大多數(shù)立足于微生物培養(yǎng)、應(yīng)用、分離、計(jì)數(shù)等。答題過程中須明確所有操作都要圍繞著“目的進(jìn)行:（1）如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖欠蛛x某種特定的目標(biāo)微生物；關(guān)鍵點(diǎn)在于如何依據(jù)該微生物某方面特點(diǎn)制備特定選擇培養(yǎng)基；（2）如果是測定細(xì)菌的數(shù)量,則必須明確可能會(huì)引發(fā)數(shù)量變化誤差的操作（稀釋時(shí)的倍數(shù)、接種過程的無菌操作）備考時(shí)務(wù)必強(qiáng)化“選擇”與“鑒定”的界定及實(shí)驗(yàn)方案制定，同時(shí)必須熟練把握計(jì)數(shù)方法及公式套用等。【例證】 (2014全國卷)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}。（1)分解秸稈中纖

2、維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將分解成.（2）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(cr）時(shí)，cr可與纖維素形成色復(fù)合物。用含有cr的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的。（3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見下表)：酵母膏無機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂cr溶液水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙注：“表示有，“”表示無。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是;培養(yǎng)基乙（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_。解析（1)纖維素是一種由葡萄糖首尾

3、相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，如下圖：（2）剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,紅色復(fù)合物無法形成,出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過觀察是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。（3）分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，且需以纖維素為唯一碳源。答案(1）纖維二糖葡萄糖(2）紅透明圈(3)不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會(huì)形成cr纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌1.分離微生物的原理與措施（1)原理:自然環(huán)境中的微生物是混雜在一起的，因此分離獲得純培養(yǎng)物應(yīng)

4、首先采用的方法是將單個(gè)的細(xì)胞與其他細(xì)胞分離，再給細(xì)胞提供合適的營養(yǎng)和條件,使其生長成為可見的群體.（2)常用措施接種過程中盡量使細(xì)胞分散開來，如平板劃線法、稀釋涂布平板法.運(yùn)用選擇培養(yǎng)基的作用特點(diǎn),在培養(yǎng)基中添加某種特定的物質(zhì),抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需微生物的生長。2。選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或?qū)嵗旅媸呛Y選抗鏈霉素大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)步驟及相關(guān)圖解。實(shí)驗(yàn)步驟：把大量對鏈霉素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養(yǎng)基1的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。待其長出密集的小菌落后,用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基2上,隨即再影印到含有鏈霉素的培養(yǎng)基3上，進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)基3上出現(xiàn)了個(gè)別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出.

5、請回答:(1)配制培養(yǎng)基時(shí)除了滿足基本的營養(yǎng)條件外，還需滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)、的要求。（2）從功能上看,含有鏈霉素的培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。若在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán),則培養(yǎng)皿中長出的菌落顏色為。由圖可知，1號培養(yǎng)基接種的方法為_。（3）對2和3進(jìn)行比較，在2上找到與3上相應(yīng)的菌落，挑取其中一個(gè)菌落接種到（填“含鏈霉素”或“不含鏈霉素”）的培養(yǎng)基上,如果有較多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之（填“前”或“后”）.(4）3中的菌落比1、2中的菌落少很多,這說明了基因突變具有的特點(diǎn)。解析（1）配制培養(yǎng)基時(shí)在提供幾種基本營養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，還需滿足微生物生長對ph、特殊營養(yǎng)物質(zhì)

6、以及氧氣的要求.（2）鏈霉素是抗生素,對大腸桿菌具有選擇作用。在伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基上。大腸桿菌菌落顏色為黑色.由題圖可知，1號培養(yǎng)基接種的方法為稀釋涂布平板法.（3）培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基3上相同的菌落,是具有相同性狀的大腸桿菌形成的，將培養(yǎng)基2中一個(gè)相應(yīng)菌落接種到含鏈霉素的培養(yǎng)基上，若出現(xiàn)較多的菌落,則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之前.(4）抗鏈霉素性狀是大腸桿菌基因突變后獲得的性狀.3號培養(yǎng)皿中的菌落比1號、2號中的菌落少很多,這說明了基因突變頻率很低.答案(1）ph氧氣(2)選擇黑色稀釋涂布平板法（3）含鏈霉素前（4）頻率低/低頻性影印法接種的具體過程是：將待測的濃縮菌懸液涂在合適的平

7、板上，等其長好后作為母平板(每個(gè)平板上的菌落控制在30300個(gè)）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構(gòu)成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上,輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經(jīng)培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對應(yīng)，比較影印平板與母平板上菌落生長情況，即可從相應(yīng)位置的母平板上選出待測的突變型菌落。影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發(fā)的、與相應(yīng)的環(huán)境因素?zé)o關(guān)而設(shè)計(jì)的接種方法，目前已廣泛應(yīng)用于營養(yǎng)缺陷型微生物的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中.【例證】 （2014全國卷，39)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)

8、狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量,并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作.回答下列問題：（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細(xì)菌含量.在涂布接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間,這樣做的目的是_；然后，將1 ml水樣稀釋100倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 ml稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為。(2）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌，操作時(shí)，接種環(huán)通過滅菌。在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是_。（3）示意圖a和b中,表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果.（4）該

9、小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快.分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高的利用率。解析（1）在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間，檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；每升水樣中的活菌數(shù)為：（393837）/338,再除以0.1乘以100，得到1毫升中的菌數(shù)，再乘以1000就是1升中的菌數(shù)，故為3.8107.（2)用平板劃線法應(yīng)先將接種環(huán)灼燒滅菌再劃線。第二次及以后的劃線時(shí),總是從上一次劃線的末端開始劃線,達(dá)到稀釋的目的，使得最后能夠得到單個(gè)菌

10、落。（3）根據(jù)圖示可知，b為稀釋涂布平板法接種后培養(yǎng)得到的菌落。(4）振蕩的作用相當(dāng)于攪拌，可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。答案（1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8107（2）灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落（3）b(4）溶解氧營養(yǎng)物質(zhì)微生物計(jì)數(shù)的方法專項(xiàng)歸納1.間接計(jì)數(shù)法（也叫活菌計(jì)數(shù)法）常用的是稀釋涂布平板法。（1）原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌,通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少個(gè)活菌。（2）操作：設(shè)置重復(fù)組，

11、增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取0。1 ml接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布于整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計(jì)算菌落數(shù).為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度的樣液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)為30300個(gè)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。計(jì)算公式：每克樣品中的細(xì)菌數(shù)(c/v）m,其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),v代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml），m代表稀釋倍數(shù)。提醒此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的

12、實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（1）原理:利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量,但不能區(qū)分細(xì)菌的死活.計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片,上面有一個(gè)特定面積（1 mm2）和高(0。1 mm）的計(jì)數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個(gè)(或16個(gè)）中格,每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成16個(gè)(或25個(gè))小格，但計(jì)數(shù)室都是由400個(gè)小格組成的。（2）操作：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，稍等片刻，待細(xì)菌全部沉降到計(jì)數(shù)室底部再在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)45個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平

13、均數(shù),再按公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。（3)計(jì)算公式:每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)菌數(shù)40010 000稀釋倍數(shù)。 3.濾膜法以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例，將已知體積的水過濾后,將濾膜放于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上,大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色,可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量.(2017吉林松原模擬）研究人員用有機(jī)化合物x、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基成功地從土壤中篩選出能高效降解有機(jī)化合物x的細(xì)菌（目的菌）。下圖是從土壤中篩選出該細(xì)菌的過程示意圖，下表是分離純化的結(jié)果。請回答下列問題：記錄項(xiàng)目:透明圈直徑/菌落直徑菌落編號12348小時(shí)1。6

14、2.83.072小時(shí)2。21。25.096小時(shí)2。31。24.2（1）培養(yǎng)基中的有機(jī)化合物x主要為目的菌提供等營養(yǎng)要素。從土壤中富集能有效降解有機(jī)化合物x的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)選用（填“固體或“液體)培養(yǎng)基。(2）配制成10倍稀釋液時(shí)，用無菌移液管從富集液中吸取1 ml,移入盛有ml無菌水的試管中，并依次配制1021010的梯度稀釋液。(3)在分離、純化過程中，圖中過程接種的方法分別為、。在倒平板前，應(yīng)對玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌,滅菌方法是。（4）分析菌種的分離純化結(jié)果，應(yīng)選擇號菌落進(jìn)行擴(kuò)大生產(chǎn)，原因是_。解析（1）篩選微生物用選擇培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中的有機(jī)化合物x主要為目的菌提供碳源、氮源等營養(yǎng)要素，不能降解

15、有機(jī)化合物x的微生物不能生存。從土壤中富集能有效降解有機(jī)化合物x的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)選用液體培養(yǎng)基，有利于富集培養(yǎng)。(2）配制成10倍稀釋液時(shí)，用無菌移液管從富集液中吸取1 ml，移入盛有9 ml無菌水的試管中,并依次配制1021010的梯度稀釋液。（3）在分離、純化過程中,微生物接種方法常用稀釋涂布平板法、平板劃線法。在倒平板前,對玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法。（4）由于目的菌能有效降解有機(jī)化合物x產(chǎn)生透明圈，透明圈直徑/菌落直徑越大，說明降解有機(jī)化合物x的能力越強(qiáng)，因此應(yīng)選擇3號菌落進(jìn)行擴(kuò)大生產(chǎn)。答案(1)碳源（或碳源、氮源）液體（2）9(3)稀釋涂布平板法平板劃線法高壓蒸汽滅菌法（

16、4）3透明圈直徑/菌落直徑越大，降解有機(jī)化合物x的能力越強(qiáng)隨堂真題&預(yù)測1.(2014四川理綜,節(jié)選）有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過程如圖甲、乙所示。（1）微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、四類,該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_.(2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成保存?zhèn)溆谩＃?)為探究苯磺隆的降解機(jī)制,將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn).該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么

17、？。解析（1）微生物生長所需要的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括：碳源、氮源、水和無機(jī)鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因?yàn)樗窃试S特定的微生物生長和增殖，同時(shí)又能抑制或阻止其他微生物的生長和增殖的培養(yǎng)基,該實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生長和增殖。（2)植物組織培養(yǎng)常需要添加的植物激素有生長素和細(xì)胞分裂素，調(diào)整二者的比例可以誘導(dǎo)脫分化和再分化。ms培養(yǎng)基的成分一般先分別配制成母液備用。（3）題中實(shí)驗(yàn)為將該菌種的培養(yǎng)液過濾后離心，取上清液加入蛋白酶處理后，測得其對苯磺隆的降解率，意為假設(shè)目的菌種能產(chǎn)生降解苯磺隆的蛋白質(zhì),若用蛋白酶處理后，可使該蛋白質(zhì)分解，苯磺隆降解率下降,則假設(shè)成立。但由于缺乏空白對照，不

18、能比較蛋白酶處理是否降低苯磺隆降解率，該實(shí)驗(yàn)不能得出相應(yīng)結(jié)論.答案（1)氮源和無機(jī)鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長和繁殖（2）細(xì)胞分裂素母液（3）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理，缺少空白對照2.（2019高考預(yù)測)纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素?；卮鹣铝袉栴}：（1）在篩選纖維素分解菌的過程中,通常用染色法，這種方法能夠通過顏色反應(yīng)直接對纖維素分解菌進(jìn)行篩選。甲同學(xué)在實(shí)驗(yàn)時(shí)得到了如圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于。a. b。c。 d.（2)乙同學(xué)打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計(jì)數(shù)，與分離醋酸菌相比，進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)除了營養(yǎng)不同,最主要的實(shí)驗(yàn)條件差別是_.該同學(xué)采用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌

19、落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_.(3)丙同學(xué)在提取和分離纖維素酶的過程中，為了抵制外界酸和堿對酶活性的影響，采取的措施是向提取液和分離液中添加。若探究纖維素酶活性的最適溫度，如何設(shè)置對照？ _。解析（1）剛果紅與纖維素形成的紅色復(fù)合物在纖維素被分解后將不再形成，則在培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈.（2）牛胃是一個(gè)厭氧環(huán)境，所以其中的纖維素分解菌與需氧的醋酸菌相比培養(yǎng)條件有所不同.因是活菌計(jì)數(shù)法，所以當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)平板上只觀察到一個(gè)菌落，所以菌落數(shù)目比實(shí)際的少.（3）探究最適溫度可設(shè)置一系列的溫度梯度進(jìn)行相互對照，其他無關(guān)變量要保持相同且適宜.答案（1）剛果紅a（2）保證無

20、氧環(huán)境少（低）（3）緩沖溶液設(shè)置一系列的溫度梯度進(jìn)行相互對照（時(shí)間：30分鐘滿分：100分）1.（2017河南十所名校聯(lián)考，23）如圖表示研究者從土壤中篩選分解尿素的細(xì)菌并計(jì)數(shù)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，請據(jù)圖回答下列問題：（1）進(jìn)行過程和的目的分別是和；圖中弧線箭頭上“？”的具體操作是.(2）進(jìn)行培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí),滅菌與調(diào)節(jié)ph的先后順序是_.倒平板時(shí)，待平板冷卻凝固后,應(yīng)將平板倒過來放置，并用記號筆在皿底上標(biāo)明培養(yǎng)微生物名稱、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度、制作者姓名、培養(yǎng)日期及等信息。純化菌種時(shí)為了得到單一菌落，常采用的接種方法是和。（3）在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入。培養(yǎng)后,若出現(xiàn)色就可以鑒定其中含有能

21、夠分解尿素的細(xì)菌。（4)研究者可以通過觀察培養(yǎng)形成的菌落的、隆起程度等特征，來判斷培養(yǎng)基上是否感染了其他細(xì)菌.在實(shí)驗(yàn)中,研究者每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果,這樣可以防止_.解析（1）根據(jù)圖示過程可知,和的目的分別是選擇培養(yǎng)、增加分解尿素細(xì)菌的數(shù)量。圖中弧線箭頭上“？”的具體操作是挑出分解尿素細(xì)菌的菌落。（2)配制培養(yǎng)基和滅菌時(shí)，應(yīng)該是先調(diào)ph，再進(jìn)行滅菌.培養(yǎng)基的種類、培養(yǎng)日期、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度、培養(yǎng)微生物名稱及制作者姓名等信息要用記號筆在皿底上標(biāo)明。純化菌種時(shí)為了得到單一菌落,常采用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（3）分解尿素的細(xì)菌鑒定時(shí)應(yīng)

22、該加入酚紅指示劑,培養(yǎng)過程中ph升高，酚紅指示劑會(huì)變?yōu)榧t色,原因是細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),出現(xiàn)紅色說明含有能夠分解尿素的細(xì)菌.（4)可以根據(jù)菌落特征來判斷不同的細(xì)菌，菌落特征一般體現(xiàn)在形狀、大小、顏色和隆起程度.實(shí)驗(yàn)中，研究者每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目.答案（1)選擇培養(yǎng)增加分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量挑出菌落（2）先調(diào)節(jié)ph后滅菌培養(yǎng)基種類平板劃線法稀釋涂布平板法（后兩空位置可顛倒)（3）酚紅指示劑紅 （4)形狀、大小、顏色因培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目2。（2017河南十所名校聯(lián)考,37）微

23、生物的培養(yǎng)在生物科學(xué)史和現(xiàn)代生物工程中都是極其重要的基礎(chǔ)技術(shù).下圖1是某學(xué)生重復(fù)艾弗里證明dna是遺傳物質(zhì)實(shí)驗(yàn)的其中一組實(shí)驗(yàn)；下圖2是基因工程中運(yùn)用影印法將培養(yǎng)基a上的菌落按原來方向印在培養(yǎng)基b上,以檢測重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌的示意圖。請據(jù)圖回答下列相關(guān)問題：（1）圖1、圖2的培養(yǎng)結(jié)果顯示，兩實(shí)驗(yàn)中使用的都是（填物理狀態(tài)）培養(yǎng)基。(2）在配制圖2中的培養(yǎng)基時(shí)，除考慮營養(yǎng)、ph、滲透壓等條件外，還要考慮在培養(yǎng)基a和b中加入（填“相同”或“不同”）種類的抗生素。在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過程中，下列選項(xiàng)不需要的是（填序號)。酒精燈 接種環(huán) 高壓蒸汽滅菌鍋 培養(yǎng)皿（3）培養(yǎng)基滅菌是避免雜菌污染

24、的有效手段之一,適用于圖1、圖2所示培養(yǎng)基的滅菌方法是_；接種前還需檢測滅菌效果,方法是將置于恒溫箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(4）實(shí)驗(yàn)證明,上述兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中r型菌和大腸桿菌的轉(zhuǎn)化率都很低，為獲得圖1、圖2所示的培養(yǎng)結(jié)果，一是要設(shè)法提高圖1中s型菌的；二是要使用恰當(dāng)?shù)姆椒ń臃N.兩實(shí)驗(yàn)都不能用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種,而應(yīng)采用不加稀釋的涂布平板法接種r型菌和大腸桿菌，理由是_.接種培養(yǎng)4天后，可通過觀察的形態(tài)特征來識別r型菌和大腸桿菌。解析本題考查微生物的培養(yǎng)與分離的知識，旨在考查考生的理解能力和獲取信息的能力.（1）從圖1、圖2可以看出,兩實(shí)驗(yàn)中使用的都是固

25、體培養(yǎng)基。（2）要檢測重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌,檢測的依據(jù)一般是重組質(zhì)粒的抗性發(fā)生了改變，因此在培養(yǎng)基a和培養(yǎng)基b中應(yīng)加入不同種類的抗生素.在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過程中，不需要接種環(huán)。（3）對培養(yǎng)基滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法，接種前需要檢測滅菌效果，其方法是進(jìn)行空白對照，將未接種的培養(yǎng)基置于恒溫箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。（4）上述兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中r型菌和大腸桿菌的轉(zhuǎn)化率都很低，為獲得圖1、圖2所示的培養(yǎng)結(jié)果，一是要提高圖1中s型菌的dna純度；二是要使用恰當(dāng)?shù)姆椒ń臃N,不選用平板劃線法和稀釋涂布平板法,而采用不加稀釋的涂布平板法接種r型菌和大腸桿菌,是因?yàn)檫@

26、兩種方法都可能因稀釋后菌種數(shù)量極少而無法觀察到轉(zhuǎn)化成功的菌落。識別不同類型的細(xì)菌，一般可通過觀察菌落的特征來加以區(qū)分。答案（1）固體（2）不同（3)高壓蒸汽滅菌法未接種的培養(yǎng)基（4)dna純度平板劃線法和稀釋涂布平板法都可能因稀釋后菌種數(shù)量極少而無法觀察到轉(zhuǎn)化成功的菌落菌落3.（2017開封市三模，37）有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染.某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株。回答問題:（1）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講,這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。（2）制備培養(yǎng)基時(shí)需采取方法滅菌，目的是_。（3）純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，下面兩圖是兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解。獲得圖a效果的接種方法是_，獲得圖b效果的接種方法是_.現(xiàn)發(fā)現(xiàn)某一培養(yǎng)基上的菌