第八章-血清酶類測定

1、 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 2 酶（酶（enzymeenzyme）的本質(zhì)：）的本質(zhì)： 高度特異性、高度不穩(wěn)定性，高效性、可調(diào)節(jié)性高度特異性、高度不穩(wěn)定性，高效性、可調(diào)節(jié)性 酶的應(yīng)用：酶的應(yīng)用： 由活細胞產(chǎn)生的能高效催化特異生化反應(yīng)的蛋白質(zhì)，屬于生物催化劑由活細胞產(chǎn)生的能高效催化特異生化反應(yīng)的蛋白質(zhì)，屬于生物催化劑 酶的特點：酶的特點： 酶活性的檢測、代謝物的酶學(xué)分析和同工酶及亞型測定用于臨酶活性的檢測、代謝物的酶學(xué)分析和同工酶及亞型測定用于臨 床診斷和療效判斷床診斷和療效判斷 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 3 一、酶活性一、酶活性 n定義：酶活性（定義：酶活性（en

2、zyme activityenzyme activity）也稱為酶活力，指）也稱為酶活力，指 酶促反應(yīng)速率，即規(guī)定條件下在單位時間內(nèi)酶促反應(yīng)速率，即規(guī)定條件下在單位時間內(nèi)產(chǎn)物的生成產(chǎn)物的生成 量量或或底物的減少量底物的減少量。 n表示方法：表示方法： dt Pd v 或或 dt Sd v 式中式中v v：反應(yīng)速率，：反應(yīng)速率，P P ：產(chǎn)物濃度，：產(chǎn)物濃度，t t：時間，：時間，SS：底物濃度。：底物濃度。 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 4 二、酶活性單位與酶活性濃度二、酶活性單位與酶活性濃度 （一）酶活性單位（一）酶活性單位 u定義：表示酶的相對含量，定義：表示酶的相對含量，指在

3、一定條件下，單位時間內(nèi)指在一定條件下，單位時間內(nèi) 生成一定量的產(chǎn)物或消耗一定量的底物所催化的酶量生成一定量的產(chǎn)物或消耗一定量的底物所催化的酶量。 u表示方法：表示方法： 慣用單位（一定的反應(yīng)量慣用單位（一定的反應(yīng)量/ /一定的反應(yīng)時間）一定的反應(yīng)時間） 國際單位國際單位IUIU（mol/minmol/min） KatalKatal單位（單位（mol/smol/s） 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 5 1 1慣用單位：慣用單位： 2020世紀世紀6060年代以前根據(jù)酶活性測定方法建立者的姓氏命名的單位年代以前根據(jù)酶活性測定方法建立者的姓氏命名的單位 ALPALP的金氏單位（的金氏單位（

4、KingKing） 氨基移轉(zhuǎn)酶的卡門氏單位（氨基移轉(zhuǎn)酶的卡門氏單位（KarmenKarmen） 特點：各單位對溫度、時間、物質(zhì)量的定義不同，導(dǎo)致各測特點：各單位對溫度、時間、物質(zhì)量的定義不同，導(dǎo)致各測 定值、參考范圍相差很大，彼此間無法比較定值、參考范圍相差很大，彼此間無法比較, ,現(xiàn)在臨床應(yīng)用較現(xiàn)在臨床應(yīng)用較 少。少。 卡門氏單位：卡門氏單位：1.0ml1.0ml血清在血清在2525，340nm340nm，反應(yīng)體積，反應(yīng)體積3.0ml,3.0ml,光徑光徑1.0cm1.0cm 時每分鐘測定吸光度下降時每分鐘測定吸光度下降0.0010.001，即消耗，即消耗4.82 4.82 10 10-4m

5、ol NADH-4mol NADH為一為一 個卡門氏單位個卡門氏單位 舉例：舉例： 金氏單位：金氏單位：100ml100ml血清血清ALPALP在在3737與底物作用與底物作用15min15min，產(chǎn)生，產(chǎn)生1mg1mg酚。酚。 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 6 2.2.國際單位國際單位IUIU（mol/minmol/min） 定義：在規(guī)定條件下（定義：在規(guī)定條件下（2525及其他最適條件），每及其他最適條件），每minmin催化催化1 1molmol 底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物的酶量，為底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物的酶量，為1IU1IU或或1U1U，1IU=11IU=1mol/minmol/min。 IF

6、CC,2001IFCC,2001年年 3737 3 3KatalKatal單位單位 定義：定義：1Katal1Katal是在規(guī)定條件下，每秒鐘催化是在規(guī)定條件下，每秒鐘催化1mol1mol底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物的底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物的 酶量。酶量。1Katal1Katal1mol/s1mol/s。 IUIU與與KatalKatal單位的關(guān)系：單位的關(guān)系：1katal = 601katal = 6010106 6IUIU，1IU = 16.67nkatal 1IU = 16.67nkatal 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 7 （二）酶活性濃度（二）酶活性濃度 酶活性濃度指酶活性濃度指單位體積樣本中

7、的酶活性單位單位體積樣本中的酶活性單位。國際單位國際單位 用用IU/LIU/L或或U/LU/L表示表示。酶活性濃度才具有臨床可比性，但其多數(shù)。酶活性濃度才具有臨床可比性，但其多數(shù) 情況下都被不嚴格地稱為酶活性單位乃至酶活性情況下都被不嚴格地稱為酶活性單位乃至酶活性. . 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 8 三、酶促反應(yīng)進程三、酶促反應(yīng)進程 以以產(chǎn)物生成量（或反產(chǎn)物生成量（或反 應(yīng)物減少量）為縱坐標(biāo)、應(yīng)物減少量）為縱坐標(biāo)、 反應(yīng)時間為橫坐標(biāo)反應(yīng)時間為橫坐標(biāo)作圖所作圖所 得到的一條曲線，稱為反得到的一條曲線，稱為反 應(yīng)進程曲線（或反應(yīng)時間應(yīng)進程曲線（或反應(yīng)時間 曲線、速率曲線、時間曲曲線

8、、速率曲線、時間曲 線）線） t1 t2 時間t 圖5-1酶促反應(yīng)進程曲線 吸光度A 延滯期 線性期 非線性期 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 9 （一）延滯期（一）延滯期（lag phase、延遲期、延遲期 ） u特點：為反應(yīng)的初始階段，反應(yīng)速率一開始時較慢，通常為幾秒到幾分鐘特點：為反應(yīng)的初始階段，反應(yīng)速率一開始時較慢，通常為幾秒到幾分鐘 t1 t2 時間t 圖5-1酶促反應(yīng)進程曲線 吸光度A 線性期 非線性期 R1R2 延滯期 孵育期 延滯期 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 10 （二）線性期（二）線性期 此階段酶促反應(yīng)速率此階段酶促反應(yīng)速率基本保持恒定基本保持恒定；

9、 對底物而言，為反應(yīng)速率與底物濃度對底物而言，為反應(yīng)速率與底物濃度SS的零次方成正比的的零次方成正比的零級反零級反 應(yīng)應(yīng)，即不受底物濃度的影響，而只與酶活性濃度成正比，即不受底物濃度的影響，而只與酶活性濃度成正比 ； 此時底物的消耗量小于 此時底物的消耗量小于5%5%，反應(yīng)速率，反應(yīng)速率為反應(yīng)初速率為反應(yīng)初速率。 酶活性濃度越高，線性期就越短酶活性濃度越高，線性期就越短 線性度：判斷線性期的一個指標(biāo)，指吸光度（線性度：判斷線性期的一個指標(biāo)，指吸光度（A A）相對于時間（）相對于時間（minmin）變化的可以接受）變化的可以接受 的程度的程度 。 線性度線性度= =前半段前半段A/minA/mi

10、n后半段后半段A/minA/min/ /（前半段（前半段A/minA/min后半段后半段A/minA/min）/2/2100100 線性度值越小則線性越好。一般判斷標(biāo)準(zhǔn)：不大于線性度值越小則線性越好。一般判斷標(biāo)準(zhǔn)：不大于1515，否則判為非線性，否則判為非線性 u特點：可代表酶促反應(yīng)速度特點：可代表酶促反應(yīng)速度 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 11 （三）非線性期（三）非線性期（偏離線性期、平坦期偏離線性期、平坦期 ） u進入非線性期的原因：進入非線性期的原因： 反應(yīng)的不斷進行，反應(yīng)的不斷進行，底物消耗越來越多，酶變性失活增加、可逆反底物消耗越來越多，酶變性失活增加、可逆反 應(yīng)增強、

11、產(chǎn)物抑制增加應(yīng)增強、產(chǎn)物抑制增加等使得反應(yīng)速率明顯下降。等使得反應(yīng)速率明顯下降。 u特點：特點： 若為單底物的反應(yīng)，則此時反應(yīng)速率與單底物濃度若為單底物的反應(yīng)，則此時反應(yīng)速率與單底物濃度SS的一次方的一次方 成正比，為成正比，為一級反應(yīng)一級反應(yīng)。 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 12 （一）酶促反應(yīng)（一）酶促反應(yīng) u酶促反應(yīng)式酶促反應(yīng)式 u米氏方程：米氏方程： K4 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 13 （二）（二）Km的含義與意義的含義與意義 1 1K Km m的含義的含義: : 2 max V v 當(dāng)當(dāng)K Km m=S=S時，時， ，可見，可見K Km m值等于反應(yīng)速率

12、達到最大反應(yīng)速率值等于反應(yīng)速率達到最大反應(yīng)速率V Vmax max 一半時的底物濃度。一半時的底物濃度。 2 2KmKm的意義的意義 KmKm是酶的一個是酶的一個特征性常數(shù)特征性常數(shù)（其他如等電點），（其他如等電點），KmKm的大小只與酶的性質(zhì)有關(guān)的大小只與酶的性質(zhì)有關(guān) 反映反映酶對底物親和力酶對底物親和力的大小的大小 選擇酶的選擇酶的最適底物最適底物或天然底物或天然底物 計算不同底物濃度時的反應(yīng)程度計算不同底物濃度時的反應(yīng)程度 鑒別酶的種類鑒別酶的種類 判斷可逆反應(yīng)的速率判斷可逆反應(yīng)的速率 判斷酶偶聯(lián)反應(yīng)的限速反應(yīng)判斷酶偶聯(lián)反應(yīng)的限速反應(yīng) 計算工具酶的用量計算工具酶的用量 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知

13、識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 14 （三）（三）Vmax的含義的含義 u定義：定義：VmaxVmax表示在一定酶量時的最大反應(yīng)速率，即酶完全表示在一定酶量時的最大反應(yīng)速率，即酶完全 被底物所飽和時的反應(yīng)速率，與酶活性濃度呈正比。被底物所飽和時的反應(yīng)速率，與酶活性濃度呈正比。 u應(yīng)用：計算酶的轉(zhuǎn)換數(shù)（應(yīng)用：計算酶的轉(zhuǎn)換數(shù)（TN，催化常數(shù)，催化常數(shù)Kcat）單位時間內(nèi)每）單位時間內(nèi)每 個酶分子將底物分子轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物的最大值個酶分子將底物分子轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物的最大值 。 計算公式為：計算公式為： E V TN max ( (單位是單位是s s-1 -1) ) 計算時要保證酶的濃度單位與底物的濃度單位一致）計算時要

14、保證酶的濃度單位與底物的濃度單位一致） 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 15 第三節(jié)第三節(jié) 酶活性的測定酶活性的測定 n測定方法分類：測定方法分類： 按照儀器檢測方法分類按照儀器檢測方法分類：分光光度法、濁度法、熒光法、：分光光度法、濁度法、熒光法、 放射性核素法、電位滴定法、電極法、量氣法。放射性核素法、電位滴定法、電極法、量氣法。 按照反應(yīng)時間分類按照反應(yīng)時間分類；分為；分為定時法、連續(xù)監(jiān)測法定時法、連續(xù)監(jiān)測法和平衡法。和平衡法。 按照檢測對象分類按照檢測對象分類：分為直接法和間接法。：分為直接法和間接法。 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 16 一、按照反應(yīng)時間分類的酶

15、活性測定方法一、按照反應(yīng)時間分類的酶活性測定方法 （一）定時法（一）定時法 u原理原理： 定時法是固定時間法的簡稱，是指測定反應(yīng)開始后一段時間（定時法是固定時間法的簡稱，是指測定反應(yīng)開始后一段時間（t1t1 t2t2）產(chǎn)物的增加量或底物的減少量以測定酶活性的方法。）產(chǎn)物的增加量或底物的減少量以測定酶活性的方法。該方法一般需要該方法一般需要 在反應(yīng)進行到一定時間后用強酸、強堿、蛋白沉淀劑等終止反應(yīng)在反應(yīng)進行到一定時間后用強酸、強堿、蛋白沉淀劑等終止反應(yīng)。 u特點特點： 優(yōu)點優(yōu)點：簡單，因為最后測定時酶促反應(yīng)已被終止，故比色時不需要簡單，因為最后測定時酶促反應(yīng)已被終止，故比色時不需要 保溫設(shè)備，顯

16、色劑的選擇也可不考慮對酶活性的影響。保溫設(shè)備，顯色劑的選擇也可不考慮對酶活性的影響。 缺點缺點：如果不做預(yù)試驗則無法了解其酶促反應(yīng)進程（如果不做預(yù)試驗則無法了解其酶促反應(yīng)進程（t1-t2t1-t2）是否）是否 為零級反應(yīng)為零級反應(yīng)，故難以確保測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。，故難以確保測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 吸光度A t1 t2 時間t 圖5-6定時法的三種反應(yīng)進程 2 3 1 定時法與兩點法、終點法的區(qū)別定時法與兩點法、終點法的區(qū)別 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 17 （二）連續(xù)監(jiān)測法（二）連續(xù)監(jiān)測法 u原理原理： 連續(xù)監(jiān)測法是指在多個時間點連續(xù)測定產(chǎn)物（或底物）在線性連續(xù)監(jiān)測法是指在多個時間點連

17、續(xù)測定產(chǎn)物（或底物）在線性 期內(nèi)的生成量（或消耗量）即零級反應(yīng)速率以測定酶活性的方法，期內(nèi)的生成量（或消耗量）即零級反應(yīng)速率以測定酶活性的方法， 又稱速率法、零級反應(yīng)速率法、斜率法。又稱速率法、零級反應(yīng)速率法、斜率法。 該方法是在一定的反應(yīng)時間區(qū)段內(nèi)（至少該方法是在一定的反應(yīng)時間區(qū)段內(nèi)（至少9 9120s120s）每隔一定時間）每隔一定時間 （常為（常為2 230s30s）讀取一次吸光度值，連續(xù)測定多點（至少）讀取一次吸光度值，連續(xù)測定多點（至少4 4點），點），然然 后對吸光度數(shù)據(jù)作最小二乘法處理，再用線性期內(nèi)的數(shù)據(jù)計算單位時后對吸光度數(shù)據(jù)作最小二乘法處理，再用線性期內(nèi)的數(shù)據(jù)計算單位時 間內(nèi)

18、的反應(yīng)速率間內(nèi)的反應(yīng)速率A/minA/min，最后據(jù)式計算出酶活性。最后據(jù)式計算出酶活性。 u Tu u u V V lt A LU 6 10 / 復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)酶學(xué)分析基礎(chǔ)知識 18 血漿特異酶血漿特異酶 在血漿中發(fā)揮特定的催化作用的酶稱為血漿特異性酶，亦稱血漿在血漿中發(fā)揮特定的催化作用的酶稱為血漿特異性酶，亦稱血漿 功能性酶。多數(shù)由功能性酶。多數(shù)由肝臟肝臟合成并以酶原形式分泌入血，在一定條件下合成并以酶原形式分泌入血，在一定條件下 被激活起作用。被激活起作用。 與凝血有關(guān)的酶或酶原：與凝血有關(guān)的酶或酶原：ChEChE、銅藍蛋白及脂蛋白脂肪酶等。、銅藍蛋白及脂蛋白脂肪酶等。 外分泌

19、酶外分泌酶 由由外分泌腺外分泌腺合成并分泌進入血漿的酶稱外分泌酶合成并分泌進入血漿的酶稱外分泌酶, ,參與食物的消化參與食物的消化 過程，正常血液中含量很少。過程，正常血液中含量很少。 包括包括P-AMYP-AMY、胰脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等。、胰脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等。 細胞酶細胞酶 存在于存在于細胞內(nèi)細胞內(nèi)進行物質(zhì)代謝的酶。隨著細胞的不斷更新或破壞可進行物質(zhì)代謝的酶。隨著細胞的不斷更新或破壞可 少量釋入血液。少量釋入血液。 當(dāng)其大量出現(xiàn)于血清中時，提示酶的來源組織細胞受損，最常用于當(dāng)其大量出現(xiàn)于血清中時，提示酶的來源組織細胞受損，最常用于 臨床診斷。臨床診斷。 一、一、 二、酶活

20、性測定在臨床診斷中的應(yīng)用二、酶活性測定在臨床診斷中的應(yīng)用 由于酶廣泛分布于全身各器官、組織，所以酶活由于酶廣泛分布于全身各器官、組織，所以酶活 性的測定用于消化系統(tǒng)、心血管、骨骼、肌肉、性的測定用于消化系統(tǒng)、心血管、骨骼、肌肉、 腎等器官和組織的疾病與惡性腫瘤的診斷。腎等器官和組織的疾病與惡性腫瘤的診斷。 肝是機體新陳代謝最活躍的器官，這是由于肝細胞中含有 最豐富的酶類。 AST、ALT、GGT、ALP、TP、ALB、GLB、 TBILI、DBILI、IBILI、CHE 主要是用來判斷有無肝實質(zhì)細胞損傷、肝內(nèi)外膽汁淤積等肝膽 疾病。 ALT被認為是肝細胞損傷最敏感的指標(biāo)之一。 CHE在急性肝炎

21、、肝硬化、農(nóng)藥中毒時，可降至正常30%50%。 GGT、ALP等酶主要用于膽道疾病特別是膽道梗阻時的臨床診斷。 單胺氧化酶（MAO）是結(jié)締組織中的酶類，其活性測定可用于肝纖維化 程度的判斷。 （二）在診斷心肌梗死中的應(yīng)用（二）在診斷心肌梗死中的應(yīng)用 用于診斷心肌梗死的血清酶主要有AST、LDH、CK、CK-MB和 -HBD。 AST廣泛分布于機體各組織中，但在心肌中含量最多。 LDH是低度特異性酶，LDH1在心肌中含量最高， LDH2酶活性LDH1 當(dāng)心肌梗死時，LDH1LDH2 CK-MB在診斷心肌梗死最佳的血清酶指標(biāo)。 當(dāng)心肌梗死時，CK-MB可增高1025倍。 m-AST（線粒體型天門冬

22、氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）與心肌梗死并發(fā) 心力衰竭的發(fā)病率和死亡率有正比關(guān)系。 （三）在診斷胰腺疾病中的應(yīng)用（三）在診斷胰腺疾病中的應(yīng)用 用于急性胰腺炎的診斷和鑒別診斷的酶有AMY及其同工酶、 LPS(脂肪酶)等。 均來自胰腺泡的分泌。 AMY 在急性胰腺炎時，顯著升高。 注意：注意：伴有高血脂的急性胰腺炎和靜止性胰腺炎時，AMY 活性正常。 LPS 在診斷胰腺炎特異性較高，但尿液中檢測不到LPS。 （四）在診斷骨骼疾病中的應(yīng)用（四）在診斷骨骼疾病中的應(yīng)用 ALP 是各種骨骼疾病最重要的酶學(xué)診斷指標(biāo) 當(dāng)發(fā)生骨骼肌疾病時，特別是成骨肉瘤、畸形骨炎，可 分別增至正常的45倍與30倍。 （五）在診斷前列腺疾病

23、中的應(yīng)用（五）在診斷前列腺疾病中的應(yīng)用 ACP(堿性磷酸酶)用于診斷前列腺疾病，特別是診斷前列腺癌 的最重要指標(biāo)。 主要分布于前列腺、紅細胞、血小板等，成年男子血清中 1/31/2的ACP來自于前列腺。 （六）在診斷腫瘤中的應(yīng)用（六）在診斷腫瘤中的應(yīng)用 具有器官特異性的有ACP及其同工酶、ALP及其同工酶、-G T及其同工酶、AFU、AMY及其同工酶、LPS等；非器官特異性 的有ALT、CK同工酶、ALD同工酶、LD同工酶等。 在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及組織癌變過程中在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及組織癌變過程中，與細胞正常分化、增 殖功能有關(guān)的酶或同工酶活性下降，并出現(xiàn)腫瘤組織中的同 工酶升高。 1.1.性別性別

24、 少數(shù)酶如少數(shù)酶如CKCK、ALPALP及及GGTGGT等有性別差異，與血清酶的來源組織有等有性別差異，與血清酶的來源組織有 關(guān)。關(guān)。 2.2.年齡年齡 血清酶的活性隨年齡而變化，血清酶的活性隨年齡而變化，ALPALP和和GGTGGT到老年時可有輕度升高。到老年時可有輕度升高。 年齡差異也見于同工酶。年齡差異也見于同工酶。 3.3.進食進食 過量飲酒可使血清過量飲酒可使血清GGTGGT明顯升高。明顯升高。 4.4.運動運動 多種血清酶活性升高，如多種血清酶活性升高，如CKCK、LDLD、ASTAST、ALDALD和和ALTALT等，其升高等，其升高 的幅度與運動量、持續(xù)時間、運動頻率及骨骼肌所

25、含的酶量有關(guān)。的幅度與運動量、持續(xù)時間、運動頻率及骨骼肌所含的酶量有關(guān)。 5.5.妊娠妊娠 胎盤組織可分泌一些酶進入母體血液，如耐熱胎盤組織可分泌一些酶進入母體血液，如耐熱ALPALP、LDHLDH、LAPLAP 和和ALTALT（少數(shù)）等，引起血清中這些酶活性升高。（少數(shù)）等，引起血清中這些酶活性升高。 6.6.其他其他 一些酶活性與體重、身高的增長、體位改變、晝夜變化及家庭一些酶活性與體重、身高的增長、體位改變、晝夜變化及家庭 因素有關(guān)。因素有關(guān)。 血清酶符號來源 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 肌酸激酶 乳酸脫氫酶 堿性磷酸酶 酸性磷酸酶 -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶 5-核苷酸酶 單胺氧化酶

26、-淀粉酶 脂肪酶 谷氨酸脫氫酶 異檸檬酸脫氫酶 膽堿酯酶 山梨醇脫氫酶 鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶 卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶 ALT AST CK LDH ALP ACP -GT或GGT 5-NT MAO AMS或AMY LPS GLDH ICD CHE SDH OCT LCAT 肝、腎、心 心、肝、骨骼肌 骨骼肌、心、腦 心、腎、骨骼肌、肝、肺 小腸、胎盤、肝、腎 前列腺、紅細胞、血小板 肝、膽、腎、小腸 肝、膽道 肝、腎、腦 胰、唾液腺 胰 肝 肝、胎盤、心 肝 肝 肝 肝 標(biāo)本（血清或血漿） 臨床酶學(xué)測定酶之前，標(biāo)本還要經(jīng)過采集、分臨床酶學(xué)測定酶之前，標(biāo)本還要經(jīng)過采集、分 離和儲存等一系列處理過

27、程。而酶在血中處于一個離和儲存等一系列處理過程。而酶在血中處于一個 動態(tài)變化過程，血液離開機體后還會有一定變化。動態(tài)變化過程，血液離開機體后還會有一定變化。 因此在其中任何一個階段處理不當(dāng)，都有可能引起因此在其中任何一個階段處理不當(dāng)，都有可能引起 測定值的變化。測定值的變化。 顯升高。如紅細胞 內(nèi)的LD、AST和ALT活性分別較血清中高150、15和7倍左 右，故測定這些酶時，樣品應(yīng)避免溶血。 靜脈采血后，必須在1-2h內(nèi)及時離心，將血清與血細 胞、血凝塊分離，以免血細胞中的酶通過細胞膜進入 血清而引起誤差。 大多數(shù)抗凝劑都在一定程度上影響酶活性，大多數(shù)抗凝劑都在一定程度上影響酶活性，臨床上除

28、非測定臨床上除非測定 與凝血或纖溶有關(guān)的酶，與凝血或纖溶有關(guān)的酶，一般都應(yīng)以血清作為首選測定標(biāo)本一般都應(yīng)以血清作為首選測定標(biāo)本。 及時測定，如不能及時測定，應(yīng)放入冰箱保存（但有些標(biāo)及時測定，如不能及時測定，應(yīng)放入冰箱保存（但有些標(biāo) 本不能冷凍）本不能冷凍） 為防止酶蛋白變性 ，一般至少應(yīng)在血清分離后的當(dāng)天進行測定， 否則應(yīng)放冰箱冷藏 有些酶如LD及其同工酶(LD4和LD5)在低溫(特別是20冰凍)可引起不 可逆性失活，反而不如室溫穩(wěn)定（“冷變性”）。 氨基轉(zhuǎn)移酶又稱轉(zhuǎn)氨酶，在機體內(nèi)多達60余種，廣泛存在于肝臟、心肌、骨骼 肌、腎、腦、胰、肺、白細胞、紅細胞中。 其中以丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT或

29、GPT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST或GOT)兩種 最為重要，它們催化機體內(nèi)氨基酸的轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)： ALT L-丙氨酸丙氨酸 + -酮戊二酸酮戊二酸 丙酮酸丙酮酸 + L-谷氨酸谷氨酸 AST L-天門冬氨酸天門冬氨酸 + -酮戊二酸酮戊二酸 草酰乙酸草酰乙酸 + L-谷氨酸谷氨酸 A-NH2+B A+B-NH2 轉(zhuǎn)氨酶轉(zhuǎn)氨酶 1.賴氏賴氏比色法比色法 u選擇在選擇在500-520nm500-520nm處檢測，丙酮酸苯腙的顯色強度約為處檢測，丙酮酸苯腙的顯色強度約為- -酮戊二酸苯腙的酮戊二酸苯腙的3 3倍倍 底物底物-酮戊二酸酮戊二酸及及2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼的濃度的濃度ALT

30、ALT測定不是測定不是 在最佳條件下進行，反應(yīng)中丙酮酸生成量與在最佳條件下進行，反應(yīng)中丙酮酸生成量與ALTALT活性不能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系活性不能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系 ( (這是賴氏法的最大缺陷這是賴氏法的最大缺陷) )，其標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈直線而，其標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈直線而為拋物線。為拋物線。 2,4-2,4-二硝二硝 基苯肼基苯肼 丙酮酸苯腙丙酮酸苯腙 ( (在堿性條件下呈紅棕色在堿性條件下呈紅棕色) ) -酮戊二酸苯腙酮戊二酸苯腙 ( (在堿性條件下呈紅棕色在堿性條件下呈紅棕色) ) 丙氨酸丙氨酸 +-+-酮戊二酸酮戊二酸 丙酮酸丙酮酸 + + 谷氨酸谷氨酸 ALT 37pH7.4 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（

31、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALTALT）活性測定）活性測定 試劑與器材 1、0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液 2、0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液 3、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（PH7.4） 4、底物緩沖液 5、1.0mmol/L2，4-二硝基苯肼溶液 6、0.4mol/L氫氧化鈉溶液 7、2mmol/L丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液 8、器材 試管、恒溫水浴箱、刻度吸管、微量移液器、 分光光度計、坐標(biāo)紙。 實踐步驟實踐步驟 加入物（ml） 測定管 對照管 血清 0.1 0.1 底物緩沖液 0.5 - 混勻，在37恒溫水浴箱中保溫30min 2，4-二硝基苯肼溶液 0.5 0.5 底物緩沖液 - 0.5 混勻后，置37

32、水浴保溫20min，每管加入0.4mol/LNaOH5.0ml，混勻，室溫 放置5min，用分光光度計在波長505nm處，以蒸餾水調(diào)零，讀取各管吸光度。 n參考范圍：參考范圍：5-255-25卡門單位卡門單位 n注意事項注意事項 1.血清ALT在室溫（25 ）可以保存2d，在4 冰箱可保存2 周，在-20 可保存1個月。 2.嚴重脂血、黃疸、溶血血清可增加測定的吸光度。 3.糖尿病酮癥酸中毒病人血中因含有大量酮體，能與2，4-二硝 基苯肼溶液作用呈色，引起吸光度增加，因此，此類標(biāo)本應(yīng) 做對照管。 n方法評價方法評價 操作簡便，操作簡便，不需要紫外分光光度計，易于普及不需要紫外分光光度計，易于普

33、及，所用的酶，所用的酶 活性單位通過卡門氏分光光度速率法矯正活性單位通過卡門氏分光光度速率法矯正 故衛(wèi)生部臨檢故衛(wèi)生部臨檢 中心建議國內(nèi)無條件使用連續(xù)監(jiān)測法的單位使用賴氏法。中心建議國內(nèi)無條件使用連續(xù)監(jiān)測法的單位使用賴氏法。 底物底物-酮戊二酸酮戊二酸及及2，4- 二硝基苯肼二硝基苯肼的濃度，造成的濃度，造成ALT測定不是在最佳條件下進行，測定不是在最佳條件下進行， 反應(yīng)中丙酮酸生成量與反應(yīng)中丙酮酸生成量與ALT活性不能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，活性不能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系， 這是賴氏法的最大缺陷這是賴氏法的最大缺陷。 ( (二二) )速率法速率法 轉(zhuǎn)氨酶的測定多用比色法，以賴氏法最常用。目前，轉(zhuǎn)氨酶

34、的測定多用比色法，以賴氏法最常用。目前， 國內(nèi)外實驗室多采用連續(xù)監(jiān)測法進行測定。國內(nèi)外實驗室多采用連續(xù)監(jiān)測法進行測定。 ALTALT速率法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：速率法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為： ALT L- L-丙氨酸丙氨酸+-+-酮戊二酸酮戊二酸 L-L-谷氨酸谷氨酸 + L-+ L-丙酮酸丙酮酸 LDLD 丙酮酸丙酮酸 + NADH + H+ NADH + H+ + L- L-乳酸乳酸 + NAD+ NAD+ + 上述偶聯(lián)反應(yīng)中，上述偶聯(lián)反應(yīng)中，NADH的氧化速率與標(biāo)本中酶活性呈正比，可在的氧化速率與標(biāo)本中酶活性呈正比，可在340nm檢測吸檢測吸 光度下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速率光度

35、下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速率(-Amin)，計算出，計算出ALT的活性的活性 濃度。濃度。 參考區(qū)間參考區(qū)間 速率法：速率法： 男性：男性：5 540 U/L40 U/L 女性：女性：5 535 U/L35 U/L ALT ALT廣泛分布于全身各組織器官，尤以廣泛分布于全身各組織器官，尤以肝細胞肝細胞中含量最中含量最 多，其次是腎臟、心臟及骨骼肌，通常只有極少量釋放入多，其次是腎臟、心臟及骨骼肌，通常只有極少量釋放入 血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時，血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時， 細胞壞死或通透性增加，細胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清細胞壞死或通透性

36、增加，細胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清 中該酶活力顯著增高。中該酶活力顯著增高。 臨床意義臨床意義 (1)(1)肝膽疾病肝膽疾?。杭毙圆《拘愿窝?、慢性活動型肝炎、脂肪肝、肝癌、急性病毒性肝炎、慢性活動型肝炎、脂肪肝、肝癌、 肝硬變活動期、中毒性肝炎、膽結(jié)石、膽管炎和膽囊炎等。肝硬變活動期、中毒性肝炎、膽結(jié)石、膽管炎和膽囊炎等。 (2)(2)心血管疾病心血管疾?。杭毙孕募」Ｋ馈⒓毙孕募⊙?、急性心力衰竭、腦急性心肌梗死、急性心肌炎、急性心力衰竭、腦 出血等。出血等。 (3)(3)骨骼肌疾病骨骼肌疾病：多發(fā)性肌炎、進行性肌營養(yǎng)不良等。多發(fā)性肌炎、進行性肌營養(yǎng)不良等。 （4 4）一些藥物和毒物可引起一些藥

37、物和毒物可引起ALTALT活性升高活性升高：如氯丙嗪、異菸肼、如氯丙嗪、異菸肼、 苯巴比妥、奎寧、水楊酸制劑及酒精、鉛、汞、四氯化碳或有機磷等苯巴比妥、奎寧、水楊酸制劑及酒精、鉛、汞、四氯化碳或有機磷等 ALTALT在肝臟疾病中的應(yīng)用價值在肝臟疾病中的應(yīng)用價值 ALTALT急性明顯升高，常達急性明顯升高，常達200U200U以上，病情較重者可達以上，病情較重者可達400-600U400-600U以上，甚至以上，甚至 更高，個別重型病人甚至可超過更高，個別重型病人甚至可超過1000U1000U。ALTALT越高，肝臟細胞損害越嚴重。越高，肝臟細胞損害越嚴重。 慢性活動性肝炎：慢性活動性肝炎：AL

38、TALT持續(xù)輕度升高幾十或持續(xù)輕度升高幾十或100U100U以上（以上（100100200U200U） u慢性肝炎慢性肝炎 u 急性肝炎急性肝炎 u重型肝炎重型肝炎 由于肝細胞發(fā)生大量變性，壞死，使由于肝細胞發(fā)生大量變性，壞死，使ALTALT大量進入血液，因此，大量進入血液，因此，ALTALT迅迅 速升高，高達數(shù)百速升高，高達數(shù)百1000U1000U以上，如果以上，如果ALTALT含量越高，上升越快，說明含量越高，上升越快，說明 肝細胞壞死嚴重，病情進展也越快。肝細胞壞死嚴重，病情進展也越快。 當(dāng)病情發(fā)展到一定的嚴重程度，肝細胞大量壞死，肝臟生產(chǎn)當(dāng)病情發(fā)展到一定的嚴重程度，肝細胞大量壞死，肝臟

39、生產(chǎn)ALTALT的能力的能力 喪失，這時血液中的喪失，這時血液中的ALTALT降低，但是黃疸卻持續(xù)升高（膽紅素上升），這降低，但是黃疸卻持續(xù)升高（膽紅素上升），這 種現(xiàn)象即所謂種現(xiàn)象即所謂“酶膽分離酶膽分離”，往往提示病情正在惡化，常是肝壞死征兆。，往往提示病情正在惡化，常是肝壞死征兆。 ALTALT增高程度與肝硬化的活動度和肝組織炎癥改變及肝細胞損害程增高程度與肝硬化的活動度和肝組織炎癥改變及肝細胞損害程 度相一致。對度相一致。對ALTALT進行監(jiān)測有助于對肝硬化病情的判斷。若是靜止進行監(jiān)測有助于對肝硬化病情的判斷。若是靜止 性肝硬化，則性肝硬化，則ALTALT維持正常維持正常 ；肝硬化病人

40、的轉(zhuǎn)氨酶出現(xiàn)較大幅度；肝硬化病人的轉(zhuǎn)氨酶出現(xiàn)較大幅度 的升高，提示病情可能發(fā)展成活動性，須引起警惕。的升高，提示病情可能發(fā)展成活動性，須引起警惕。 u肝硬化肝硬化 u肝癌肝癌 80%80%90%90%肝細胞都是在肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)生的，因此，在早期，肝細胞都是在肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)生的，因此，在早期，ALTALT 是否增高主要決定于肝硬化的活動程度。若是靜止性肝硬化，則是否增高主要決定于肝硬化的活動程度。若是靜止性肝硬化，則 ALTALT維持正常，因為肝細胞發(fā)生癌變時，細胞并沒有壞死破壞，維持正常，因為肝細胞發(fā)生癌變時，細胞并沒有壞死破壞，ALTALT 沒有釋放出來，因此，沒有釋放出來，因此，ALTAL

41、T沒有升高，或沒有升高，或ALTALT有輕度或中度增高。有輕度或中度增高。 血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ASTAST）活性測定）活性測定 測定方法測定方法 一、速率法（連續(xù)監(jiān)測法一、速率法（連續(xù)監(jiān)測法 ） 草酰乙酸谷氨酸酮戊二酸門冬氨酸 LLL AST NADLHNADHL MD 蘋果酸草酰乙酸 NADH NADH在在340nm340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測NADHNADH消耗引起的消耗引起的 340nm340nm吸光度變化吸光度變化, ,根據(jù)根據(jù)340nm340nm處吸光度下降速率（處吸光度下降速率（A/minA/min） 計算計算ASTAST

42、活性活性 參考方法參考方法 ASTAST L-L-天門冬氨酸天門冬氨酸 + -+ -酮戊二酸酮戊二酸 草酰乙酸草酰乙酸 + L-+ L-谷氨酸谷氨酸 自發(fā)自發(fā)脫羧脫羧 丙酮酸丙酮酸 （二）賴氏比色法（二）賴氏比色法 參考區(qū)間參考區(qū)間 賴氏比色法：賴氏比色法： 8 82828卡門單位（反應(yīng)溫度為卡門單位（反應(yīng)溫度為3737） 速率法：速率法：8 840 U/L40 U/L（反應(yīng)溫度為（反應(yīng)溫度為3737，試劑不含，試劑不含P5PP5P） 臨床意義臨床意義 1.AST1.AST廣泛分布于全身各組織器官，廣泛分布于全身各組織器官，在心肌細胞內(nèi)含量最多在心肌細胞內(nèi)含量最多， 當(dāng)心肌梗死時，血清中當(dāng)心肌

43、梗死時，血清中ASTAST活力增高，在發(fā)病后活力增高，在發(fā)病后6 612h12h之內(nèi)顯之內(nèi)顯 著增高，在著增高，在48h48h達到高峰，約在達到高峰，約在3 35d5d恢復(fù)正常?；謴?fù)正常。 2.2.血清中的血清中的ASTAST也可來源于肝細胞，各種肝病可引起血清也可來源于肝細胞，各種肝病可引起血清 ASTAST的升高，有時可達的升高，有時可達12001200卡門單位，中毒性肝炎還可更高?？ㄩT單位，中毒性肝炎還可更高。 3.3.肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎等也可引起血清肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎等也可引起血清ASTAST的輕度增的輕度增 高。高。 AST/ALTAST/ALT比值大小有助于臨床判斷肝病

44、嚴重程度比值大小有助于臨床判斷肝病嚴重程度 急性肝炎的急性肝炎的AST/ALTAST/ALT均值為均值為0.56:10.56:1 肝硬化的肝硬化的AST/ALTAST/ALT均值為均值為1.131.13：1 1 肝癌組肝癌組AST/ALTAST/ALT均值為均值為2.412.41：1 1 急性肝壞死組急性肝壞死組AST/ALTAST/ALT均值為均值為3.613.61：1 1 肝細胞中的總含量：肝細胞中的總含量： ASTAST（主要存在于肝細胞線粒體內(nèi)）（主要存在于肝細胞線粒體內(nèi)）ALTALT（主要存在于肝細胞胞漿內(nèi)）（主要存在于肝細胞胞漿內(nèi)） 肝細胞輕度損傷時主要是胞漿酶釋放出來，血清中肝細

45、胞輕度損傷時主要是胞漿酶釋放出來，血清中ALTALTASTAST；而肝細；而肝細 胞重度損傷時胞漿酶、線粒體酶均釋放出來，血清中胞重度損傷時胞漿酶、線粒體酶均釋放出來，血清中ASTASTALTALT；隨著；隨著 肝病由輕變重，肝病由輕變重，AST/ALTAST/ALT的比值就由的比值就由1 1變?yōu)樽優(yōu)? 1 第三節(jié)第三節(jié) 血清血清r-r-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶測定谷氨?；D(zhuǎn)移酶測定 血清血清 - -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGTGGT）活性測定）活性測定 n GGTGGT是催化是催化 - -谷氨?；茡Q反應(yīng)的一種酶谷氨酰基移換反應(yīng)的一種酶 n GGTGGT分布于腎、胰、肺、肝、腸和前列腺等多種組織

46、中，其分布于腎、胰、肺、肝、腸和前列腺等多種組織中，其 中以腎臟含量最多。中以腎臟含量最多。 n GGTGGT在肝臟中廣泛分布于肝細胞的毛細膽管一側(cè)和整個膽在肝臟中廣泛分布于肝細胞的毛細膽管一側(cè)和整個膽 管系統(tǒng)，因此當(dāng)肝內(nèi)合成亢進或膽汁排出受阻時，血清中管系統(tǒng)，因此當(dāng)肝內(nèi)合成亢進或膽汁排出受阻時，血清中GGTGGT 增高。增高。 以以-谷氨酰谷氨酰-萘胺萘胺作為作為-谷氨?；墓w，雙谷氨酰基的供體，雙 甘肽作為受體，在甘肽作為受體，在GGTGGT作用下，產(chǎn)生作用下，產(chǎn)生-萘胺萘胺，后者與重，后者與重 氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生紅色紅色-萘胺萘胺- -對對- -偶氮苯磺酸偶氮苯磺酸，其色

47、，其色 澤的深淺與澤的深淺與GGTGGT活力成正比。活力成正比。 一、重氮反應(yīng)比色法一、重氮反應(yīng)比色法 n 原理原理 試劑與器材 1. 150mmol/L雙甘肽溶液 2. 1mol/L HCL 3. 底物緩沖液 4. 2g/L 對氨基苯磺酸醋酸溶液 5. 1.0g/L 亞硝酸鈉溶液 6. 顯色劑 7. 1.5mmol/L a-萘胺標(biāo)準(zhǔn)貯存液 8. 0.15mmol/L a-萘胺標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 9. 器材 試管、恒溫水浴箱、刻度吸管、微量移液器、 分光光度計、坐標(biāo)紙。 實踐步驟實踐步驟 加入物（ml） 測定管 對照管 血清 0.05 - 底物緩沖液 0.5 0.5 混勻，在37恒溫水浴箱中保溫15m

48、in 顯色劑 0.5 0.5 血清 - 0.05 混勻后，置37水浴保溫10min，用分光光度計在波長530nm處，以對照管調(diào) 零，讀取各管吸光度。 n參考范圍：參考范圍：成年男性成年男性 317317U/L 成年女性成年女性 213213U/L 測定方法測定方法 一、速率法一、速率法 以以L-L-谷氨酰谷氨酰-3-3-羧基羧基-4-4-硝基苯胺硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨為底物，雙甘肽為谷氨 ?；氖荏w，在?；氖荏w，在GGTGGT的催化下，谷氨酰基轉(zhuǎn)移到雙甘肽分子的催化下，谷氨酰基轉(zhuǎn)移到雙甘肽分子 上，同時釋放出上，同時釋放出黃色的黃色的2-2-硝基硝基-5-5-氨基苯甲酸氨基苯甲酸，根據(jù)

49、，根據(jù)405nm405nm 處吸光度增加的速率（處吸光度增加的速率（A/minA/min）推算出）推算出GGTGGT活性單位活性單位 n 原理原理 n參考范圍：參考范圍：成年男性成年男性 11501150U/L 成年女性成年女性 732732U/L 注意事項 溶血標(biāo)本，500mg/L以上可使活性減低，黃疸及脂血標(biāo) 本不干擾本法測定結(jié)果。 血清中GGT的活性，在室溫或4 可穩(wěn)定7天，在冷凍狀 態(tài)下可穩(wěn)定2個月。 生物化學(xué)特征生物化學(xué)特征 谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(-GT或GGT)又稱-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶， 是一種線粒體酶。組織分布以腎臟含量最多，其次為胰、肺、 肝等。 -GT是肝膽疾病檢出陽性率最高的酶。膽道疾病

50、如膽石癥、膽 道炎癥、肝外梗阻時，-GT不僅陽性率高，而且升高明顯。 -GT還可用于判斷惡性腫瘤有無肝轉(zhuǎn)移，腫瘤患者如有-GT的 升高，常說明有肝轉(zhuǎn)移。 -GT與乙醇的攝取量有關(guān)，飲酒時，由于乙醇對肝細胞線粒體的 誘導(dǎo)導(dǎo)致-GT活性升高，故對乙醇性中毒的判定有相當(dāng)?shù)膬r值。 長期接受巴比妥類藥物、含雌激素的避孕藥者常有-GT升高。 n 人和動物只含人和動物只含-AMY-AMY，此酶以，此酶以CaCa2+ 2+為必需因子（除肝素外， 為必需因子（除肝素外， 各種抗凝劑可通過螯合各種抗凝劑可通過螯合CaCa2+ 2+ 抑制 抑制AMSAMS活性，故活性，故標(biāo)本必須用血標(biāo)本必須用血 清或肝素抗凝血漿清

51、或肝素抗凝血漿）. . n 血清中的血清中的AMSAMS主要有胰型主要有胰型(P(P型型) )和唾液型和唾液型(S(S型型) )及其亞型同及其亞型同 工酶組成工酶組成 n 人體中胰腺含人體中胰腺含AMYAMY最多，唾液腺也分泌大量最多，唾液腺也分泌大量AMYAMY。 n AMYAMY分子量較小，易由腎臟排出，半壽期很短（約分子量較小，易由腎臟排出，半壽期很短（約2h2h），）， 所以病變時血清所以病變時血清AMYAMY增高持續(xù)時間很短。增高持續(xù)時間很短。 測定方法測定方法 天然淀粉底物方法：天然淀粉底物方法： （分子組成）確定底物方法：（分子組成）確定底物方法： 碘碘- -淀粉比色法淀粉比色法

52、 目前應(yīng)用最多的方法是以人工合成的目前應(yīng)用最多的方法是以人工合成的麥芽多糖麥芽多糖為底物的方法為底物的方法 二、碘二、碘- -淀粉比色法淀粉比色法 n 原理原理 -淀粉酶 淀粉 葡萄糖 + 麥芽糖 + 糊精 + 碘液蘭色復(fù)合物蘭色復(fù)合物 血清血清( (尿尿) )中中-淀粉酶催化淀粉分子中淀粉酶催化淀粉分子中-1-1，4-4-糖苷鍵，糖苷鍵，水解水解 產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖及含有產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖及含有-1-1，6-6-糖苷鍵支鏈的糊精。在底物充糖苷鍵支鏈的糊精。在底物充 分（已知濃度）的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)合，分（已知濃度）的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)合， 生成藍

53、色復(fù)合物，其藍色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管生成藍色復(fù)合物，其藍色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管( (此處亦此處亦 相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)管相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)管) )比較，從而推算出比較，從而推算出AMSAMS的活力單位。的活力單位。 試劑與器材 1. 0.4g/L 緩沖淀粉溶液 2. 0.1mol/L 碘貯存液 3. 0.01mol/L 碘應(yīng)用液 4. 器材 試管、恒溫水浴箱、刻度吸管、微量移液器、 定時鐘、分光光度計。 實踐步驟實踐步驟 先用生理鹽水將血清作10倍稀釋（尿液20倍稀釋） 加入物（ml） 測定管 對照管 緩沖淀粉溶液(37預(yù)溫5min) 1.0 1.0 稀釋血清(稀釋尿液） 0.2 - 混勻，在3

54、7恒溫水浴箱中保溫7.5min 碘應(yīng)用液 1.0 1.0 蒸餾水 6.0 6.2 混勻后，用分光光度計在波長660nm處，以蒸餾水調(diào)零，讀取各管吸光度。 成本低、檢測不需要昂貴儀器、試劑穩(wěn)定、操作簡便；但重成本低、檢測不需要昂貴儀器、試劑穩(wěn)定、操作簡便；但重 復(fù)性差、準(zhǔn)確率低復(fù)性差、準(zhǔn)確率低 n方法評價：方法評價： 參考區(qū)間參考區(qū)間 碘碘- -淀粉比色法：淀粉比色法： 臨床意義臨床意義 血清血清( (尿尿)AMS)AMS活性是診斷胰腺疾病的重要指標(biāo)。活性是診斷胰腺疾病的重要指標(biāo)。 升高升高 急性胰腺炎、流行性腮腺炎；急性胰腺炎、流行性腮腺炎； 急性膽囊炎、腸梗阻、胰腺癌、膽石癥、潰瘍病穿孔急性

55、膽囊炎、腸梗阻、胰腺癌、膽石癥、潰瘍病穿孔 及嗎啡注射后。及嗎啡注射后。 降低降低 肝炎、肝硬化、肝癌；肝炎、肝硬化、肝癌； 腎功能障礙。腎功能障礙。 急性胰腺炎時血、尿淀粉酶升高的不同表現(xiàn)急性胰腺炎時血、尿淀粉酶升高的不同表現(xiàn) 開始升高時間開始升高時間高峰時間高峰時間恢復(fù)時間恢復(fù)時間 血清血清8-12h8-12h12-24h12-24h2-5d2-5d 尿液尿液12-24h12-24h5-7d5-7d1-2w1-2w n ALPALP廣泛分布定位于細胞膜表面，其含量依次為肝、腎、廣泛分布定位于細胞膜表面，其含量依次為肝、腎、 胎盤、小腸、骨骼等。胎盤、小腸、骨骼等。 n 血清中的血清中的AL

56、PALP主要來自肝臟和骨骼，主要用于診斷肝膽和骨主要來自肝臟和骨骼，主要用于診斷肝膽和骨 骼疾病骼疾病 一一、比色法、比色法 n原理原理 在在pHl0pHl0的堿性條件下，的堿性條件下，ALPALP催化磷酸苯二鈉底物水解，生成催化磷酸苯二鈉底物水解，生成 游離的酚和磷酸氫二鈉。酚在堿性溶液中與游離的酚和磷酸氫二鈉。酚在堿性溶液中與4-4-氨基安替比林氨基安替比林 結(jié)合，并經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色的醌類衍生物，根據(jù)紅色結(jié)合，并經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色的醌類衍生物，根據(jù)紅色 深淺計算出深淺計算出ALPALP活力的大小?；盍Φ拇笮?。 試劑與器材 1. 0.1mol/L 碳酸鹽緩沖液 2. 20mmol/

57、L 磷酸苯二鈉溶液 3. 鐵氰化鉀溶液 4. 酚標(biāo)準(zhǔn)貯存液 5. 酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 6. 器材 試管、恒溫水浴箱、刻度吸管、微量移液器、 定時鐘、分光光度計。 實踐步驟實踐步驟 加入物（ml） 測定管 對照管 血清 0.1 - 碳酸鹽緩沖液 1.0 1.0 混勻，在37恒溫水浴箱中保溫5min 底物液（預(yù)溫至37 ） 1.0 1.0 混勻，在37恒溫水浴箱中保溫15min 鐵氰化鉀溶液顯色劑 3.0 3.0 血清 - 0.1 混勻后，用分光光度計在波長510nm處，讀取各管吸光度。 1. 血清標(biāo)本應(yīng)新鮮，置室溫(25)6h測定，ALP活性約增高1 ；置室溫14d，ALP活性增高36；若冰凍保存，

58、血清復(fù)溶后ALP活性升高可達30。 2一般用血清與肝素抗凝血漿測定ALP活性。抗凝劑如EDTA- Na2、草酸鹽、檸檬酸鹽等因能絡(luò)合Mg2+而抑制ALP活性， 故不能使用這類抗凝劑的血漿做于ALP活性測定。 3ALP測定受年齡與性別、飲食、運動和妊娠等因素的影響。 n注意事注意事 項項 測定方法測定方法 二二、速率法、速率法 n原理原理 以以對對- -硝基苯酚磷酸鈉硝基苯酚磷酸鈉（PNPPPNPP）為底物，為底物， 2-2-氨基氨基-2-2-甲基甲基- - 1-1-丙醇丙醇AMPAMP或二乙醇胺（或二乙醇胺（DEADEA）為磷酸?；氖荏w。在堿性條件）為磷酸?；氖荏w。在堿性條件 下，下，AL

59、PALP催化催化PNPPPNPP水解釋放出磷酸基團，生成游離水解釋放出磷酸基團，生成游離對對- -硝基酚硝基酚 （PNPPNP），），PNPPNP在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的。 根據(jù)根據(jù)405nm405nm處吸光度增加的速率（處吸光度增加的速率（A/minA/min）推算出血清）推算出血清ALPALP活性活性 單位。單位。 PiAMPPNPAMPPNPP ALP 參考區(qū)間參考區(qū)間 金氏比色法：金氏比色法： 成人：成人：3 313 13 金氏單位金氏單位 ，兒童：，兒童：5 52828金氏單位金氏單位 速率法：速率法： 女性：女性：1 11212歲

60、歲 500U/L 1515歲歲 40 40 150U/L150U/L 男性：男性：1 11212歲歲 500U/L500U/L 12 121515歲歲 750U/L25 25歲歲 4040150U/L150U/L。 ALPALP檢測主要用于診斷肝膽和骨骼疾病檢測主要用于診斷肝膽和骨骼疾病 臨床意義臨床意義 (1)(1)肝膽系統(tǒng)疾?。焊文懴到y(tǒng)疾?。?各種肝內(nèi)、外膽管阻塞引起的膽汁淤積性疾?。焊鞣N肝內(nèi)、外膽管阻塞引起的膽汁淤積性疾?。篈LPALP明顯升高，且明顯升高，且 ALPALP升高與血清膽紅素升高相平行，升高與血清膽紅素升高相平行， 肝內(nèi)局限性膽道阻塞（如肝癌、肝膿腫）：肝內(nèi)局限性膽道阻塞（