生化儀-姜敬學(xué)

1、 全自動(dòng)生化儀基本測定原理全自動(dòng)生化儀基本測定原理 深圳市龍崗區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)深圳市龍崗區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn) 科科 姜敬學(xué)姜敬學(xué) 講課內(nèi)容講課內(nèi)容 光譜分析原理光譜分析原理 酶學(xué)分析技術(shù)酶學(xué)分析技術(shù) 自動(dòng)生化分析技術(shù)自動(dòng)生化分析技術(shù) 全自動(dòng)生分析儀的維護(hù)全自動(dòng)生分析儀的維護(hù) 一、光譜分析技術(shù)一、光譜分析技術(shù) 紫外紫外- -可見光分光光度法：當(dāng)光線通過均勻、透可見光分光光度法：當(dāng)光線通過均勻、透 明的溶液時(shí)可出現(xiàn)三種情況：一部分光被散射，明的溶液時(shí)可出現(xiàn)三種情況：一部分光被散射， 一部分光被吸收，另一部分光透過溶液。設(shè)入一部分光被吸收，另一部分光透過溶液。設(shè)入 射光為射光為I I0 0 透射光為透射光為I

2、I，I/II/I0 0 為透光度，透光度的負(fù)為透光度，透光度的負(fù) 對數(shù)稱為吸光度（對數(shù)稱為吸光度（absorbance,Aabsorbance,A） A=-logA=-logI/II/I0 0 ( (注：有些生化儀是原始吸光度；有些生化儀是通注：有些生化儀是原始吸光度；有些生化儀是通 過光電倍增管放在過光電倍增管放在10104 4，日立生化儀采用后者。，日立生化儀采用后者。) ) Lamber-Beer定律 Lamber-Beer定律：是討論溶液吸光度同溶液濃度和溶液層厚 度之間關(guān)系的基本定律，該定律是分光分析的理論基礎(chǔ) A=KLC A為吸光度，K為比例常數(shù)即吸光系數(shù)；L為溶液層厚度，稱為光

3、徑；C為溶液濃度。 當(dāng)L=1cm, C=1mol/L在固定條件下（入射波長，溫度等 ）特定波長下K為摩爾吸光系數(shù)是物質(zhì)的特征性常數(shù)。 如NADN，NADPH在340nm下 為6220 酶學(xué)分析技術(shù) 酶活性的概念：酶活性即酶促應(yīng)速度，指在規(guī)定 的條件下單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生 成量。設(shè)底物濃度為S，產(chǎn)物濃度為 P， 時(shí)間為t,反應(yīng)速度為v, 則v=-dS/dt或v=-dP/dt 酶活性單位：有慣用單位，國際單位IU和Katal單 位;1IU=1/(60X106)=16.67n Katal 酶促反應(yīng)進(jìn)程酶促反應(yīng)進(jìn)程 米米- -曼氏方程曼氏方程：: : Km=（Vmax V）S/ V Km值

4、的應(yīng)用：值的應(yīng)用：1鑒定酶的種類，鑒定酶的種類，2反映酶與底物的親的力，反映酶與底物的親的力，3 選擇酶的最適底物，選擇酶的最適底物，4計(jì)算不同底物濃度時(shí)酶促反應(yīng)速度計(jì)算不同底物濃度時(shí)酶促反應(yīng)速度 相當(dāng)于最大反應(yīng)速度的比率，相當(dāng)于最大反應(yīng)速度的比率，5設(shè)計(jì)適宜的底物濃度（濃設(shè)計(jì)適宜的底物濃度（濃 度范圍設(shè)計(jì)在度范圍設(shè)計(jì)在10-20 Km，初速度可達(dá)最大速度的，初速度可達(dá)最大速度的90-95% 因只有初速度才能真正代表酶活性。因只有初速度才能真正代表酶活性。 Vmax的應(yīng)用及的應(yīng)用及Vmax，Km的測定的測定 酶活性測定方法及酶學(xué)分析的類型 1、固定時(shí)間法（即速率兩點(diǎn)法）如：TBA 2、連續(xù)監(jiān)測

5、法（即速率A和速率B）如ALT， AST，GGT，CK，LDH等。 3、工具酶和指示酶：如GOD-POD測GLU 試劑中的POD是工具酶；ALT、AST、LDH、 CK等試劑中的NADH是指示酶； 自動(dòng)化分析儀工作原理自動(dòng)化分析儀工作原理 自動(dòng)化分析儀的分類自動(dòng)化分析儀的分類 1 1、連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)化分析儀、連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)化分析儀 2 2、離心式生化分析儀、離心式生化分析儀 3 3、分立式生化析儀、分立式生化析儀 4 4、干化學(xué)式自動(dòng)化分析儀、干化學(xué)式自動(dòng)化分析儀 自動(dòng)化分析儀的基本結(jié)構(gòu)自動(dòng)化分析儀的基本結(jié)構(gòu) 1 1、樣品系統(tǒng)；包括樣品，校準(zhǔn)品，質(zhì)控品；樣品盤，傳送規(guī)道，、樣品系統(tǒng)；包括樣品，

6、校準(zhǔn)品，質(zhì)控品；樣品盤，傳送規(guī)道， 加樣器，試劑室等。加樣器，試劑室等。 2 2、反應(yīng)系統(tǒng)：比色杯，混合裝置，恒溫裝置，、反應(yīng)系統(tǒng)：比色杯，混合裝置，恒溫裝置， 3 3、給排水及清洗系統(tǒng)。、給排水及清洗系統(tǒng)。 4 4、光路檢測系統(tǒng)：光源燈（氙燈，鹵素?zé)?，鹵素石英燈；鹵素、光路檢測系統(tǒng)：光源燈（氙燈，鹵素?zé)?，鹵素石英燈；鹵素 燈的使用壽命較短，一般只有燈的使用壽命較短，一般只有1000-15001000-1500小時(shí)；氙燈使用壽命長，小時(shí)；氙燈使用壽命長， 2424小時(shí)可工作數(shù)年），分光裝置有干涉濾光片和光柵分光，干涉小時(shí)可工作數(shù)年），分光裝置有干涉濾光片和光柵分光，干涉 濾光片價(jià)格便宜，但易變

7、潮變霉，從而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。濾光片價(jià)格便宜，但易變潮變霉，從而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。 光柵分光可分為全息反射式光柵和蝕刻式凹面光柵；前者易被腐光柵分光可分為全息反射式光柵和蝕刻式凹面光柵；前者易被腐 蝕，后者有耐磨損，耐腐蝕，無相差，可以色散也可以聚光比較蝕，后者有耐磨損，耐腐蝕，無相差，可以色散也可以聚光比較 好。好。 5 5、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)：電腦主機(jī)，顯示器、系統(tǒng)及配套軟件等。、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)：電腦主機(jī)，顯示器、系統(tǒng)及配套軟件等。 自動(dòng)生化分析的基本原理自動(dòng)生化分析的基本原理 1 1、可見、紫外分光光度法：、可見、紫外分光光度法： Lamber- Beer定律。 2 2、免疫比濁測定

8、法：透射比濁法和散射、免疫比濁測定法：透射比濁法和散射 比濁，全自動(dòng)生化儀多采用前者。比濁，全自動(dòng)生化儀多采用前者。 3 3、均相酶免疫分析法、均相酶免疫分析法: :目前國內(nèi)臨床上全目前國內(nèi)臨床上全 自動(dòng)生化儀較少采用。自動(dòng)生化儀較少采用。 4 4、酶促反應(yīng)法。、酶促反應(yīng)法。 自動(dòng)生化分析儀的基本測定方法自動(dòng)生化分析儀的基本測定方法 1、終點(diǎn)法，一點(diǎn)終點(diǎn)法；以試劑和樣品混合之前的空氣空白、 水空白、或試劑空白的吸光度值為測定計(jì)算基點(diǎn)，以反應(yīng)終 點(diǎn)吸光度減去空白讀數(shù)為A；兩點(diǎn)終點(diǎn)法： A= A2 - A1 ; 反應(yīng)曲線見生化。 2、連續(xù)監(jiān)測法即速率法：零級反應(yīng)速法即速率A法；零級反 應(yīng)期內(nèi),每隔

9、一定時(shí)間(常為2-30S)讀取1次A值,至少取4點(diǎn)得到 3個(gè)A; 一般讀取6個(gè)點(diǎn);在用最小二乘法處理求出單位時(shí)間內(nèi) 的反應(yīng)速率A/min；線性度檢查前2/3斜率減后2/3斜率然后 除以總斜率;一般設(shè)為15%一些酶活性項(xiàng)目可以適當(dāng)放大但不 超過30%.反應(yīng)曲線見生化儀。 3、兩點(diǎn)速率法即所謂擬一級速率法：在反應(yīng)時(shí)間中選取兩點(diǎn) t1,t2,讀取吸光度A1，A2，通過 （ A2 - A1 ）/（t2-t1）計(jì)算A；它與連續(xù)監(jiān)測法比較缺點(diǎn)在 于人為確定t1，t2不定因素較多不能保證反應(yīng)在t1-t2期間呈線 性，影響結(jié)果準(zhǔn)確性；應(yīng)在常規(guī)測定前，先做預(yù)試驗(yàn)來確定 線性時(shí)間段。如TBA;反應(yīng)曲線見生化儀。

10、自動(dòng)生化分析的基本原理自動(dòng)生化分析的基本原理 l4 4、速率、速率B B法即在法即在1 1個(gè)通道內(nèi)個(gè)通道內(nèi)1 1次進(jìn)行次進(jìn)行2 2項(xiàng)反應(yīng)相關(guān)的速項(xiàng)反應(yīng)相關(guān)的速 率法測定。它既可以是率法測定。它既可以是2 2項(xiàng)試驗(yàn)測定，也可以用于干項(xiàng)試驗(yàn)測定，也可以用于干 擾反應(yīng)或作為樣品空白的自動(dòng)補(bǔ)嘗。擾反應(yīng)或作為樣品空白的自動(dòng)補(bǔ)嘗。 自動(dòng)生化儀的校準(zhǔn)方法自動(dòng)生化儀的校準(zhǔn)方法 C= AX Factor(或K)（注不同的方法學(xué) A的計(jì)算不一樣）C為樣品濃度； A 為測定求出的吸光度； Factor(或K)為校 準(zhǔn)因數(shù)。 空白校正：水空白；試劑空白；樣品空白 試劑及波長：單試劑單波長；單試劑雙波 長；標(biāo)本空白法；雙試劑單波長；雙試劑 二點(diǎn)法；雙試劑雙波長；雙試劑法等。 自動(dòng)生化儀的維護(hù)和保養(yǎng)自動(dòng)生化儀的維護(hù)和保養(yǎng) 電解質(zhì)分析系統(tǒng)（能斯特方程）管路及電極電解質(zhì)分析系統(tǒng)（能斯特方程）管路及電極 的保養(yǎng)。見日立生化儀保養(yǎng)維護(hù)程序的保養(yǎng)。見日立生化儀保養(yǎng)維