血紅蛋白醋酸纖維薄膜電泳

1、1 1、掌握血紅蛋白醋酸纖維素薄膜電泳的操作。、掌握血紅蛋白醋酸纖維素薄膜電泳的操作。 2 2、了解醋酸纖維素薄膜電泳的原理和應(yīng)用，、了解醋酸纖維素薄膜電泳的原理和應(yīng)用， 血紅蛋白的組成和分類。血紅蛋白的組成和分類。 Hb的組成：的組成： Hb的種類：的種類： HbA（2 2）：）：95-98%95-98% HbA2 （ 2 2 ）：）：2-3%2-3% HbF （ 2 2 ）：）：1%1%；（胎兒、新生兒：；（胎兒、新生兒：70-80%70-80%） 4 4條多肽鏈構(gòu)成的珠蛋白（條多肽鏈構(gòu)成的珠蛋白（ ） 血紅素輔基血紅素輔基 電泳分離電泳分離Hb 1、支持物：醋酸纖維薄膜（、支持物：醋酸纖

2、維薄膜（CAM） 2、緩沖液：、緩沖液：pH8.6硼酸硼酸-氫氧化鈉，氫氧化鈉，TEB液液 各種各種Hb的結(jié)構(gòu)差異的結(jié)構(gòu)差異 遷移速率不同遷移速率不同分離分離 電荷，分子量不同電荷，分子量不同 2、制備、制備Hb溶液溶液 反復(fù)洗滌反復(fù)洗滌 三次三次 皂素皂素1滴滴 Hb溶液（樣品）溶液（樣品） 1、取血、取血: 本人指血本人指血 1015l 2000r/min5min 丟棄上清液丟棄上清液 血（血（10l） 0.9% NaCl （3 ml） 3、電泳、電泳 1）醋酸纖維薄膜準(zhǔn)備：）醋酸纖維薄膜準(zhǔn)備： (已完成）已完成） 2）點(diǎn)樣：點(diǎn)樣線上點(diǎn)樣（毛面）點(diǎn)樣：點(diǎn)樣線上點(diǎn)樣（毛面） 3）電泳：平衡）

3、電泳：平衡510min； 電泳條件：電泳條件： 10V/cm（長），（長），30-40 min 電泳結(jié)束：電泳結(jié)束：Hb區(qū)帶分離后結(jié)束電泳。區(qū)帶分離后結(jié)束電泳。 8 cm 2 cm 4）染色：麗春紅染色）染色：麗春紅染色 8-10min 5）洗脫）洗脫 ：背景發(fā)白，能辨清條帶：背景發(fā)白，能辨清條帶 6）觀察分析結(jié)果）觀察分析結(jié)果 碳酸酐酶碳酸酐酶HbA HbA2點(diǎn)樣線點(diǎn)樣線 地中海貧血地中海貧血 HbH 地中海貧血地中海貧血 7）定量：）定量： 空白管空白管HbAHbAHbA2HbA2 膜條膜條空白背景空白背景HbAHbA蛋白區(qū)帶蛋白區(qū)帶HbAHbA2 2蛋白區(qū)帶蛋白區(qū)帶 NaOHNaOH3ml3ml6ml6ml3ml3ml 10min10min后后 醋酸醋酸0.3ml0.3ml0.6ml0.6ml0.3ml0.3ml 混勻后，混勻后，520nm測定吸光度值（空白管調(diào)零）測定吸光度值（空白管調(diào)零） HbAHbA% = % = A AHbA HbA* *2/( 2/(A AHbA HbA* *2 + A 2 + AHbA2 HbA2) )* * 100 100 HbAHbA2 2% = A% = AHbA2 HbA2/( /(A