微生物思考題及參考答案

1、微生物思考題及參考答案微生物思考題及參考答案1.用油鏡觀察時應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油?起什么作用？答：應(yīng)該先用擦鏡紙將鏡頭擦干凈,以防上次實驗的污染.操作時,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了顯微鏡的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同時與波長成正比.2.什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？答：在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進行觀察時，物像將保持基本準(zhǔn)焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細(xì)

2、調(diào)節(jié)器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。3.影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？答：物鏡的NA值（物鏡的數(shù)值孔徑）與照明光源的波長.4.美藍染色液作用時間的不同,對酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響,試分析原因答：會造成更多的死細(xì)胞，在顯微鏡下觀察，活的是透明無色，衰老的是淡藍色，死亡的是藍色，如果美藍染色液作用時間過長，會造成細(xì)胞脫水死亡并滲透染液，影響實驗結(jié)果。5.鏡檢時如何區(qū)分放線菌基內(nèi)菌絲，氣生菌絲以及孢子絲一般氣生菌絲顏色較深，直生或分枝絲狀，比基內(nèi)菌絲粗；而基內(nèi)菌絲色淺、發(fā)亮，可看到橫隔膜，繼而斷裂成球狀或桿狀小體。6.在進行細(xì)菌涂片時應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)1、

3、載玻片應(yīng)該冷卻后再涂片。 2、如果是涂布液體，可以用毛細(xì)管或接種環(huán)滴一小滴，然后輕輕抹開，一圈足夠。 3、如果是涂布菌落或菌苔，應(yīng)該在載玻片上先滴一滴水，再將菌落或菌苔涂布上去，接種環(huán)的尖蘸一點點即可。 4、為了節(jié)省時間，可以將干燥和熱固定合并成一步。但是應(yīng)該避免高溫，因為溫度一高，細(xì)菌會變形。 5、染色時間視染色液種類而定。如結(jié)晶紫只需幾十秒，亞甲基藍則需一到兩分鐘。 6、沖洗時，水流不能太大，而且盡量避免水流直接沖在涂片上。 7、沖洗后干燥，可以用酒精燈加熱以節(jié)省時間，同樣的，應(yīng)該避免高溫，因為溫度一高，細(xì)菌會變形。7.進行細(xì)菌制片時為什么要進行加熱固定?在加熱固定時應(yīng)注意什么?固定的目的

4、有三個：1）殺死微生物，固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標(biāo)本被水沖洗掉。3）改變?nèi)玖蠈?xì)胞的通透性，因為死的原生質(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。固定時應(yīng)注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火過3次（手指觸摸玻片反面，不燙手為宜），固定時應(yīng)盡可能維持細(xì)胞原有形態(tài)，防止細(xì)胞膨脹或收縮。8.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察1.因為用油鏡觀察時,鏡頭離玻片會很近.如果未完全干燥,載玻片上的液體會污染油鏡鏡頭.鏡頭非常精密,被污染后不利于下次觀察.2、若未完全干燥，水滴會影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。9.哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭色染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？答：涂片環(huán)節(jié)

5、、加熱固定環(huán)節(jié)、脫色環(huán)節(jié)；其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是脫色環(huán)節(jié)。10.進行革蘭氏染色時，為什么特別強調(diào)菌齡不能太老，用老齡細(xì)菌染色會出現(xiàn)什么問題?答：菌齡太老，細(xì)胞壁通透性改變。著色不均，染色效果不好。陰性陽性不明顯分不太清楚,問題是：不便于顯微鏡下觀察是陽性菌還是陰性菌。11.革蘭氏染色中那一步是關(guān)鍵?為什么？你是如何操作的？革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟是：乙醇脫色（是脫色時間）。如果脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而被誤認(rèn)為是革蘭氏陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也可被脫色而被誤認(rèn)為是革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片的厚薄，脫色是玻片晃動的快慢及乙醇用量的多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定（脫色是應(yīng)當(dāng)控

6、制速度，脫色時間一般為2030s）。12.革蘭氏染色中,哪個步驟可以省略?在什么情況下采用媒染目的是在所有的細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物。 脫色后使革蘭氏陰性菌變?yōu)闊o色。 復(fù)染使革蘭氏陰性菌染成紅色。 所以鑒別細(xì)菌的革蘭氏陰陽性只須媒染，復(fù)染的目的是為了看清革蘭氏陰性菌。13.你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來區(qū)分四種不同的霉菌 曲霉:具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗，頂端膨大成球狀頂囊，表面輻射出一層或兩層小梗，小梗上著生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足細(xì)胞上，并通過足細(xì)胞與營養(yǎng)菌絲相連。根霉:菌絲無隔、多核、分枝狀，有匍匐菌絲和假根。在假根的上方直立地生長出一至數(shù)

7、根孢囊梗，其頂端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中間有球形或半球形囊軸。毛霉:菌絲無隔、多核、分枝狀，無假根或匍匐菌絲。菌絲體上直接生出單生、總狀分枝或假軸狀分枝的孢囊梗。各分枝頂端著生球形孢子囊，無囊托。青霉:菌絲有橫隔，分生孢子梗亦有橫隔，光滑或粗糙。基部無足細(xì)胞，頂端不形成膨大的頂囊，其分生孢子梗經(jīng)過多次分枝，產(chǎn)生幾輪對稱或不對稱的小梗，形如掃帚，稱為帚狀體。孢子顏色：黑曲霉是黑色，青霉是青色，根霉是白菌絲黑孢子，毛霉則是淡黃色。以上為實驗室觀察1）菌絲特征：青菌與曲霉菌絲與膈；毛霉與根霉則無；2）菌絲的特化結(jié)構(gòu)：曲霉有足細(xì)胞，其它霉菌無；根霉有假根與匍匐枝，其它霉菌無；3）孢子頭特征

8、：青霉的孢子頭為掃帚狀；根霉與毛霉的孢子頭為囊狀；曲霉為菊花狀孢子頭。14.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正?目鏡測微尺中每小格代表的實際長度是不固定的，它是隨所使用目鏡和物鏡的放大率的不同而改變的，故在測量前必須先用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正，以得出在顯微鏡的特定放大倍率下，目鏡測微尺每小格所代表的相對長度。15.在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細(xì)菌的大小時，其測定結(jié)果是否相同？為什么？答:相同;目鏡測微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確等分的刻度，有把 毫米刻成為50 等分或把10 毫米長度刻成100 等分。測

9、量時，將其放在接目鏡中的隔板上來測量經(jīng)顯微 鏡放大后的細(xì)胞物象。由于在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定 同一細(xì)菌的大小時，物象的放大倍數(shù)與每小格目鏡測微尺所代表的長度在變化比例上是同步的，故而測定結(jié)果相同。16.哪些因素會造成血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)誤差，應(yīng)如何避免?操作時沒有先蓋蓋玻片再滴加懸液，導(dǎo)致體積不準(zhǔn)確。避免：先蓋蓋玻片再滴加懸液。細(xì)胞密度太高。避免：稀釋溶液。 溶液不均勻。避免：滴加溶液前混勻懸液。1、儀器誤差：所用器材均應(yīng)清潔干凈，并且計數(shù)板計數(shù)區(qū)不應(yīng)該有擦痕。2、計數(shù)室內(nèi)可能有氣泡。因為酵母細(xì)胞并沒有染色，看起來是透明的，有氣泡很容易被計入，使數(shù)值偏高；并且，氣

10、泡會影響菌懸液的隨機分布。改進：若產(chǎn)生氣泡，則用吸水紙吸出。3、菌體在計數(shù)板上分布不均，當(dāng)用選取5格計數(shù)時，會造成很大誤差。改進：應(yīng)使菌液自然流入并混勻，進行觀察時盡可能多數(shù)幾個格子。4、配制稀釋液時吸取的濃度過高或過低，導(dǎo)致稀釋液濃度和原液不成正確比例，計算時產(chǎn)生誤差。應(yīng)將原液搖晃均勻后取中部的液體進行稀釋。5、由于數(shù)菌體數(shù)目時視覺疲勞而導(dǎo)致的視覺誤差。應(yīng)多人觀察，取記錄平均數(shù)。6、計數(shù)時可能將格四周的菌都計算在內(nèi)了，使數(shù)值偏高。改進：謹(jǐn)遵一個規(guī)則，計上不計下，計左不計右，不可以重復(fù)計數(shù)。7、可能出現(xiàn)有出芽的酵母菌，將出芽的酵母菌按兩個計數(shù)了，使數(shù)值偏高。改進：計數(shù)時，只有當(dāng)芽體于母細(xì)胞一樣

11、大的時候，才能計為兩個。17.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是否無菌？為什么要倒置培養(yǎng)？答：由于配制培養(yǎng)基的各類營養(yǎng)物質(zhì)和容器等含有各種微生物，因此，已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，如果來不及滅菌，應(yīng)暫存冰箱內(nèi)，以防止其中的微生物生長系列而消耗養(yǎng)分和改變培養(yǎng)基的酸堿度所帶來的不利影響。將滅菌的培養(yǎng)基放入37溫箱中培養(yǎng)2448h，無菌生長即可證明滅菌后的培養(yǎng)基無菌。倒置培養(yǎng)的主要目的：1）由于重力的作用使培養(yǎng)基表面及次層能富集微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，利于微生物生長；2）防止空氣中微生物的污染培養(yǎng)基及培養(yǎng)物：倒置時平板內(nèi)的空氣是不流動的,雜菌不會沉降到培養(yǎng)基表面,如果不倒

12、置,很快平板周邊會長起雜菌。3）倒置培養(yǎng)使瓊脂里水分不易蒸發(fā)出去，而充分的保持瓊脂的彈性與細(xì)菌容易繁殖和生存的環(huán)境。如果不倒置，大概3天左右培養(yǎng)基就會出現(xiàn)龜裂等水分散失的情況。而一些落菌等試驗，需驗證培養(yǎng)基無菌，就要先倒置培養(yǎng)48小時才可作為模板做落菌，水分散失是很重要的。19.在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意些什么問題？為什么？答：一般而言，培養(yǎng)基的配置要注意如下幾點原則：1）營養(yǎng)成分的配比：碳源和氮源的比例（C/N）要適當(dāng)；2）適宜的酸堿度（pH值）：配制培養(yǎng)基時pH的調(diào)節(jié)；3）滲透壓：營養(yǎng)物質(zhì)要有適合的濃度；4）培養(yǎng)基不能反復(fù)高溫滅菌。5) 稱不溶性固形物時，應(yīng)單獨稱，若量少的可以與無機鹽

13、一起稱，但一定要混勻再分裝；6）一般情況下培養(yǎng)基用自來水配制。操作細(xì)節(jié)上則要注意：1）稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應(yīng)及時蓋緊瓶蓋2）調(diào)pH值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度3）分裝時注意不要污染棉塞、試管口，以免染菌。4）及時滅菌，以免培養(yǎng)基及容器里的微生物生長繁殖消耗養(yǎng)分、改變酸堿度。1、當(dāng)然是注意濃度配比不要搞錯2、很多培養(yǎng)基的加料順序有講究,否則會有沉淀產(chǎn)生3、有些培養(yǎng)基會有不溶物質(zhì),分裝前應(yīng)搖勻4、不要忘了調(diào)節(jié)pH值（一般細(xì)菌都需要,酵母可能自然pH就行,不過不一定）5、加熱溶解時盡量不要煮沸,會損失營養(yǎng)物質(zhì)20.高壓蒸氣滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌

14、完畢后，為什么待壓力降低“0”時才能打開排氣閥，開蓋取物。答：1）在使用高壓蒸汽滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當(dāng)水蒸氣中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。2）壓力未降至“0”便開蓋取物的可能后果：壓力鍋內(nèi)壓力驟然降低，引起容器中的溶液噴出容器口導(dǎo)致污染或?qū)е氯藛T的燙傷。21.干熱滅菌操作過程中應(yīng)注意哪些問題為什么1、物品不要擺放太擠,以免妨礙空氣流通2、滅菌物品不要接觸干燥箱內(nèi)壁的鐵板,以防包裝紙烤焦起火3、滅菌時人不能離開4、滅菌結(jié)束后不能忘記關(guān)掉電源5、待溫度降到70度以下再打開,否則冷熱空氣交替,玻璃器

15、皿容易炸裂或發(fā)生燙傷事故22.為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需溫度高時間長？在濕熱條件下，有水蒸汽的作用：a高溫水蒸汽導(dǎo)熱比干空氣要快；b高溫水蒸汽冷凝變水時有放熱過程；c高溫水蒸汽能穿透細(xì)菌的細(xì)胞膜，直接進入細(xì)胞內(nèi)破壞細(xì)胞；d高溫水蒸汽能水解一部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)，加速導(dǎo)熱。（濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；濕熱的穿透力比干熱大；濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出226kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。）23.設(shè)計實驗方案，比較干熱滅菌和濕熱滅菌的效果。以下試驗方案有關(guān)操作均遵循無菌操作

16、條件和等量原則。（一）實驗材料試管鑷子酒精燈嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7053菌片紙片（與菌片同大小同材料）溴甲酚紫蛋白凍水培養(yǎng)基（已滅菌）等實驗材料（材料有余）。（二）對照組取9支潔凈試管，分為A1B1C1三組（每3支一組），將A1組中放入菌片，B1組中放入紙片，C1組中什么也不加；不經(jīng)滅菌，直接加入溴甲酚紫蛋白凍水培養(yǎng)基（等量）。（三）恒為培養(yǎng)將上述所有試管按分組在56恒溫條件下培養(yǎng)48小時。24.如何確定平板上某單個菌落是否為純培養(yǎng)請寫出實驗的主要步驟純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測個體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過一系列分離與純化過程和多種特征鑒定才能得到

17、。25.配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，有哪些操作步驟？那幾步易出錯，如何防止？稱取藥品加熱溶化分裝加棉塞包扎滅菌擱置斜面易出錯的步驟有：a稱取藥品稱取時鑰匙專用，瓶蓋不要錯蓋，易吸水的藥品要快速稱?。籦加熱溶化加入藥品后要用玻璃棒不停攪拌，以免糊底（在瓊脂熔化過程中，應(yīng)控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器，同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。）；c分裝分裝時培養(yǎng)基不能粘在三角瓶（或試管）口，以免接種時染菌；d擱置斜面斜面長度約試管長度一半為宜。26.平板菌落計數(shù)法的原理是什么?它適用于那些微生物的計數(shù)？平板菌落計數(shù)法是將等測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板

18、上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細(xì)胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細(xì)胞。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。（但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細(xì)胞，所以，長成的一個單菌落也可能來自樣品中的23或更多個細(xì)胞。因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低?，F(xiàn)在常使用菌落形成單位）。平板計數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個微生物繁殖而形成的現(xiàn)象進行的，也就是一個菌落可代表一種微生物（并不絕對)。通常用來測定樣品中所含細(xì)菌、孢子、酵母菌等單細(xì)胞微生物的數(shù)量。8、微量移液器的最小量程太大，在加樣時，容易加多，使蓋玻片鼓起，血球計數(shù)板所技

19、術(shù)的體積變大，最終結(jié)果偏大。改進：用量程的小的微量移液器并少加一些。27.如果一項科學(xué)研究內(nèi)容需從自然界中篩選到能產(chǎn)生高溫蛋白酶的菌株，你將如何完成？寫出實驗方案（產(chǎn)蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透明圈）。 以下試驗方案有關(guān)操作均遵循無菌操作條件 一 材料準(zhǔn)備 1 土壤【有機質(zhì)（特別是蛋白質(zhì)）含量豐富的土壤】 2 滅菌生理鹽水（0.85%NaCl） 3 滅菌移液管 4 添加酪素的B4（牛肉膏蛋白胨完全培養(yǎng)基）經(jīng)滅菌 5 B4斜面（經(jīng)滅菌） 6 其他材料：接種環(huán) 酒精燈等 二 操作方法 1在盛有10ml滅菌生理鹽水的燒杯中添加1g土壤，配成懸浮液； 2 稍靜止后，用滅菌移液管移取部分上清液

20、，將其制成104106倍的稀釋液； 3 用滅菌移液管吸取各稀釋液用稀釋倒平板法（或涂布平板法）將其接入添加酪素的B4平板上； 4 在5565下培養(yǎng)12天； 5 挑取形成降解酪素透明圈的菌落（透明圈直徑D與菌落直徑d之比較大者），轉(zhuǎn)接入B4斜面上培養(yǎng)；（若無特定菌落形成，則需另取土樣從開始重復(fù)試驗） 6 將B4斜面上的菌落再用平板純培養(yǎng)，依次重復(fù)23次后即可得到純培養(yǎng)（鏡檢）； 7 純培養(yǎng)細(xì)菌中蛋白酶的提取及活性鑒定【搖瓶培養(yǎng)（若提取蛋白酶及其活性正常，則純培養(yǎng)成功，否則，重取土樣重復(fù)以上實驗）】。28.為什么熔化后的培養(yǎng)基要冷卻至45左右才能倒平板？低于這個溫度瓊脂會凝固，溫度過高，如果是做傾

21、倒瓊脂做菌落計數(shù)，會殺死一部分細(xì)菌，如果只是只是制備瓊脂平板，那么溫度太高就進行傾倒會導(dǎo)致瓊脂凝固后偏軟，水汽過多。29.要使平板菌落計數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵？為什么？1 無菌操作 2 稀釋良好，不會太濃或太稀。 3 菌落生長時間控制好，不會長的太大不便區(qū)分，也不至于太小影響計數(shù)。30.當(dāng)你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認(rèn)為問題出在哪里？1.太濃 2.沒涂勻31.用傾注法和涂布法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同？為什么要培養(yǎng)較長時間（48h）后觀察結(jié)果？傾注法是在培養(yǎng)皿中接種好樣品之后，傾注瓊脂并培養(yǎng)；而涂布法則是在瓊脂表面接種并使用L型棒涂布。因此，傾注法的菌落將出現(xiàn)在瓊脂的各個部位，包括底層和中層，但涂布法培養(yǎng)后形成的菌落只出現(xiàn)在瓊脂表面。32.你如何解釋淀粉酶是胞外酶而非胞內(nèi)酶？答：淀粉是大分子物質(zhì)，進入細(xì)胞十分困難，甚至需要高耗能的胞吞作用。因而通過胞外酶的作用，將淀粉水解為葡萄糖后運入細(xì)胞，較方便高效。試驗中出現(xiàn)透明圈，說明培養(yǎng)基內(nèi)淀粉被水解，可推測是細(xì)菌產(chǎn)生的胞外的淀粉酶起的作用。33.不利用碘液，你能否證明淀粉水解