Transwell細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì).doc

1、T ra n s w e ll細(xì) 胞 培 養(yǎng) 設(shè) 計(jì)實(shí)驗(yàn)一：探究共培養(yǎng)條件分泌組是否有變化即細(xì)胞A 和細(xì)胞 B 在共培養(yǎng)條件下其各自分泌組是否受到影響（暫且不討論誰(shuí)對(duì)誰(shuí)的影響）。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：1. 使用 Transwell 培養(yǎng)技術(shù)，上層培養(yǎng)細(xì)胞 A（細(xì)胞數(shù)設(shè)置為 1*105個(gè)）下層培養(yǎng)細(xì)胞 B（細(xì)胞數(shù)設(shè)置為 2*105 個(gè)）共培養(yǎng) h 小時(shí)，從培養(yǎng)液中提取分泌蛋白（記為蛋白） 。Transwell12. 相同培養(yǎng)條件（培養(yǎng)基含量，細(xì)胞數(shù)，培養(yǎng)時(shí)間，溫度等）設(shè)置兩個(gè) Transwell ：上層培養(yǎng)細(xì)胞 A（細(xì)胞數(shù)設(shè)置為 1*105 個(gè)）下層不放置細(xì)胞，上層不放置細(xì)胞，下層培養(yǎng)細(xì)胞 B（細(xì)胞數(shù)設(shè)置為

2、 2*105 個(gè)），培養(yǎng) h 小時(shí)，從培養(yǎng)液中提取分泌蛋白（記為蛋白）。Transwell2- Transwell2- 3. 質(zhì)譜分析蛋白和蛋白的差別， 初步分析共培養(yǎng)條件下分泌組是否影響。4. 置換細(xì)胞 A，細(xì)胞 B 培養(yǎng)的上下層條件，相同方法培養(yǎng)細(xì)胞，打質(zhì)譜分析蛋白，分析結(jié)果是否與實(shí)驗(yàn)一有差別，進(jìn)一步分析原因?？偨Y(jié)：該方法盡可能的同一了共培養(yǎng)和單獨(dú)培養(yǎng)的差異， 即排除了其他影響條件，只對(duì)比在共培養(yǎng)和單獨(dú)培養(yǎng)條件下分泌組的變化， 從而為得到可信數(shù)據(jù)提供了條件， 對(duì)照分析了在共培養(yǎng)條件下與單獨(dú)培養(yǎng)條件下分泌組的變化情況。缺點(diǎn)：由于細(xì)胞均未標(biāo)記，即便結(jié)果顯示共培養(yǎng)和單獨(dú)培養(yǎng)分泌組確實(shí)有變化，仍無(wú)法得出兩種細(xì)胞誰(shuí)影響誰(shuí)，由此，可利用標(biāo)記培養(yǎng)基的方法，繼續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)二：優(yōu)化設(shè)計(jì)，將單獨(dú)培養(yǎng)的細(xì)胞A 培養(yǎng)基用 Leud-d 3 標(biāo)記，細(xì)胞 B 用 Lys-C13 標(biāo)記，而對(duì)共同培養(yǎng)的 Transwell 不做任何標(biāo)記。如圖所示：Transwell1Transwell2- Transwell2- 同實(shí)驗(yàn)一，經(jīng)過(guò)相同條件的培養(yǎng)，提取分泌組，質(zhì)譜分析（另做AB細(xì)胞上下層交換的實(shí)驗(yàn)） ，對(duì)比單獨(dú)培養(yǎng)并分別標(biāo)記與共培養(yǎng)但不標(biāo)記條件下分泌組的變化， 從而得到兩種細(xì)胞在共