【大學(xué)課件】儀器分析實(shí)驗(yàn)

1、儀器分析實(shí)驗(yàn) 分子熒光法測定水楊酸和乙酰水楊酸 Cary Eclipse分子熒光光譜儀 分子發(fā)光分析法分子發(fā)光分析法 熒光分析熒光分析fluorescence analysisfluorescence analysis 磷光分析磷光分析phosphorescence analysisphosphorescence analysis 化學(xué)發(fā)光分析化學(xué)發(fā)光分析chemiluminescence chemiluminescence analysisanalysis 該類分析方法與吸收分光光度法有密切關(guān)該類分析方法與吸收分光光度法有密切關(guān) 系。系。 熒光分析法的應(yīng)用熒光分析法的應(yīng)用 熒光分析可應(yīng)用于物

2、質(zhì)的定性檢測及定量分析。 熒光法主要應(yīng)用在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、生物醫(yī)學(xué)、藥物、環(huán)境監(jiān)測、食 品分析等方面，尤其對體內(nèi)活性物質(zhì)及藥物代謝物的測定更為 重要。 熒光分析法的特點(diǎn)熒光分析法的特點(diǎn) 1靈敏度高，檢出限為靈敏度高，檢出限為10-7-10-9g/ml， 比紫外可見分光光度法高比紫外可見分光光度法高101000倍。倍。 2熒光法的選擇性強(qiáng)，能吸收光的物質(zhì)熒光法的選擇性強(qiáng)，能吸收光的物質(zhì) 并不一定能產(chǎn)生熒光，且不同物質(zhì)由于結(jié)并不一定能產(chǎn)生熒光，且不同物質(zhì)由于結(jié) 構(gòu)不同，雖吸收同一波長，產(chǎn)生的熒光強(qiáng)構(gòu)不同，雖吸收同一波長，產(chǎn)生的熒光強(qiáng) 度也不同。度也不同。 3它還有用樣量少、操作簡便等的優(yōu)點(diǎn)。它還有用樣量

3、少、操作簡便等的優(yōu)點(diǎn)。 熒光法的缺點(diǎn)是，由于許多物質(zhì)不發(fā)射熒熒光法的缺點(diǎn)是，由于許多物質(zhì)不發(fā)射熒 光，因此使它的應(yīng)用范圍受到限制。光，因此使它的應(yīng)用范圍受到限制。 熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)熒光分光光度計的結(jié)構(gòu) 發(fā)光源：采用高壓氙燈。發(fā)光源：采用高壓氙燈。 試樣池：熒光分析用的試樣池需用低熒光材料，試樣池：熒光分析用的試樣池需用低熒光材料， 常用石英池，常用石英池， 形狀為四面透光的方形。形狀為四面透光的方形。 檢測器：熒光的強(qiáng)度比較弱，因此要求檢測器檢測器：熒光的強(qiáng)度比較弱，因此要求檢測器 有較高的靈敏度，常用光電倍增管。有較高的靈敏度，常用光電倍增管。 單色器：采用光柵作為單色器。單色器：采用光

4、柵作為單色器。 激發(fā)光譜和熒光光譜 任何發(fā)射熒光的物質(zhì)都具有兩個特征光譜，即 激發(fā)光譜excitation spectrum和熒光光譜 (fluorescence spectrum)。它們是熒光分析中定性和 定量的根底。 熒光物質(zhì)的最大激發(fā)波長ex和最大熒光 波長em是鑒別物質(zhì)的根據(jù)，也是定量測定 時的最靈敏的條件。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、學(xué)習(xí)熒光分析法的根本原理和儀器的操作。、學(xué)習(xí)熒光分析法的根本原理和儀器的操作。 2、學(xué)習(xí)熒光分析法進(jìn)行多組分含量分析的原、學(xué)習(xí)熒光分析法進(jìn)行多組分含量分析的原 理及方法。理及方法。 二、根本原理二、根本原理 在稀溶液中，熒光強(qiáng)度在稀溶液中，熒光強(qiáng)度I

5、F與入射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度I0、 熒光量子效率熒光量子效率F以及熒光物質(zhì)的濃度以及熒光物質(zhì)的濃度c等等 有關(guān)，可表示為：有關(guān)，可表示為： IF= K F I0 bc 式中：式中：K為比例常數(shù)，與儀器性能有關(guān)；為比例常數(shù)，與儀器性能有關(guān)； 為摩爾吸光系數(shù)；為摩爾吸光系數(shù)；b為液層厚度。為液層厚度。 當(dāng)儀器參數(shù)固定后，以最大激發(fā)波長的當(dāng)儀器參數(shù)固定后，以最大激發(fā)波長的 光為入射光，測定最大發(fā)射波長時的熒光光為入射光，測定最大發(fā)射波長時的熒光 強(qiáng)度強(qiáng)度IF與熒光物質(zhì)的濃度與熒光物質(zhì)的濃度c成正比。成正比。 乙酰水楊酸ASA，即阿司匹林水解能 生成水楊酸SA，而在乙酰水楊酸中，或 多或少都存在著水楊酸

6、。由于兩者都有苯環(huán)， 也有一定的熒光效率，因而在以三氯甲烷為溶 劑的條件下可用熒光法進(jìn)行測定。從乙酰水楊 酸和水楊酸的激發(fā)光譜和熒光光譜圖中可以發(fā) 現(xiàn)：乙酰水楊酸和水楊酸的激發(fā)波長和發(fā)射波 長均不同，利用此性質(zhì)，可在各自的激發(fā)波長 和發(fā)射波長下分別測定。 三、儀器與試劑 儀器： Cary Eclipse熒光光度計，容量瓶，移液管 試劑：乙酰水楊酸、水楊酸、三氯甲烷、乙酸均 為級，阿司 匹林藥片 四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 1乙酰水楊酸和水楊酸使用液的配制乙酰水楊酸和水楊酸使用液的配制 2激發(fā)光譜和熒光光譜的繪制激發(fā)光譜和熒光光譜的繪制 3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 4樣品的分析樣品的分析 五、

7、結(jié)果與討論五、結(jié)果與討論 1、從繪制的水楊酸和乙酰水楊酸激發(fā)光譜和發(fā)射、從繪制的水楊酸和乙酰水楊酸激發(fā)光譜和發(fā)射 光譜圖上，確定它們的最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波光譜圖上，確定它們的最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波 長。長。 水楊酸：最大激發(fā)波長水楊酸：最大激發(fā)波長 nm；最大發(fā)射波長；最大發(fā)射波長 nm 乙酰水楊酸：最大激發(fā)波長乙酰水楊酸：最大激發(fā)波長 nm；最大發(fā)射；最大發(fā)射 波長波長 nm 2、分別繪制水楊酸和乙酰水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，并、分別繪制水楊酸和乙酰水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，并 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定試樣溶液中水楊酸和乙酰水楊酸從標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定試樣溶液中水楊酸和乙酰水楊酸 的濃度，并計算每片阿司匹林藥片中它們的

8、含量的濃度，并計算每片阿司匹林藥片中它們的含量 mg。 六、本卷須知六、本卷須知 1、比色皿使用之前應(yīng)清洗干凈。假設(shè)比色皿很、比色皿使用之前應(yīng)清洗干凈。假設(shè)比色皿很 臟，清洗方法為：先將比色皿置于鉻酸洗液中浸臟，清洗方法為：先將比色皿置于鉻酸洗液中浸 泡半小時左右，再用蒸餾水洗凈，涼干留用。泡半小時左右，再用蒸餾水洗凈，涼干留用。 2、比色皿用完之后，應(yīng)先用無水乙醇清洗，后、比色皿用完之后，應(yīng)先用無水乙醇清洗，后 再用蒸餾水洗凈，涼干后收于比色皿盒中。再用蒸餾水洗凈，涼干后收于比色皿盒中。 3、定期清理儀器的比色局部，以保持儀器內(nèi)部、定期清理儀器的比色局部，以保持儀器內(nèi)部 的整潔和潔凈。的整潔和潔凈。 七、思考題七、思考題 1、在熒光測定中，為什