藥分04幻燈片

1、 R COOH 羧酸羧酸 COOH 芳酸芳酸 第三章第三章 定量分析樣品定量分析樣品 的前處理方法的前處理方法 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析樣品定量分析樣品 的前處理方法的前處理方法 一、含鹵素有機藥物的分析一、含鹵素有機藥物的分析 含鹵素有機藥物系指藥物分子含鹵素有機藥物系指藥物分子 結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪 鏈相連者，而不包括某些有機藥物鏈相連者，而不包括某些有機藥物 的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽 結(jié)構(gòu)特點：結(jié)構(gòu)特點：CX （一）鹵原子的活潑性（一）鹵原子的活潑性 1. 1. 鹵原子與碳原子直接相鹵原子與碳原子直接相 連，鹵原子的活潑性和它直連，鹵原子

2、的活潑性和它直 接相連的烴基的結(jié)構(gòu)有很大接相連的烴基的結(jié)構(gòu)有很大 關(guān)系關(guān)系 （1）乙烯型鹵和芳鹵）乙烯型鹵和芳鹵 不活潑不活潑 CH2CH XX （2）烯丙型鹵和芐鹵）烯丙型鹵和芐鹵 活潑活潑 CH2XCH2CH CH2X （3）鹵代烷型）鹵代烷型 介于兩者之間介于兩者之間 CH2CH (CH2)nX n2 2. 分子中所含鹵原子的個數(shù)分子中所含鹵原子的個數(shù) 分子中所含鹵原子的個數(shù)越分子中所含鹵原子的個數(shù)越 多，活潑性越強，特別是同一碳多，活潑性越強，特別是同一碳 上含多個鹵原子或一個苯環(huán)上含上含多個鹵原子或一個苯環(huán)上含 多個鹵原子時，活潑性增強更加多個鹵原子時，活潑性增強更加 明顯明顯 3.

3、 鹵素的種類鹵素的種類 IBrClF 常見的含鹵素有機藥物：常見的含鹵素有機藥物： CCH3 OH CH3 CCl3 CCl3Cl3C 三氯叔丁醇三氯叔丁醇 六氯對二甲苯六氯對二甲苯 COOH II I NHCOCH3CH3CONH 泛影酸泛影酸 COOH II I NH C(CH2)4 O C NH O COOH I I I 膽影酸膽影酸 COOH II I CONHCH3CH3CONH 碘他拉酸碘他拉酸 I H2N I I CH2CHCOOH C2H5 碘番酸碘番酸 碘苯酯碘苯酯 CH CH3 (CH2)8COOCH2CH3 I 鹽酸胺碘酮鹽酸胺碘酮 O CH2CH2CH2CH3 COOC

4、H2CH2N(C2H5)2 I I HCl HN N F N C2H5 O COOH 諾氟沙星諾氟沙星 O F F CH3H HO H CH3 C CH2OCOCH3 O O O C CH3 CH3 醋酸氟輕松醋酸氟輕松 Br BrBr Br C C O O HO SO3NaSO3Na OH 磺溴酞鈉磺溴酞鈉 （二）含鹵素有機藥物的分析（二）含鹵素有機藥物的分析 XXC 適當(dāng)?shù)奶幚?直接回流后測定法直接回流后測定法 堿性或酸性還原后測定法堿性或酸性還原后測定法 氧瓶燃燒分解后測定法氧瓶燃燒分解后測定法 1. 直接回流后測定法直接回流后測定法 本法是將含鹵素有機藥物溶于適當(dāng)本法是將含鹵素有機藥物

5、溶于適當(dāng) 溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶 液（或定量過量的硝酸銀滴定液）后，液（或定量過量的硝酸銀滴定液）后， 加熱回流使其水解，將有機結(jié)合的鹵加熱回流使其水解，將有機結(jié)合的鹵 素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后采用素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后采用 銀量法（銀量法（Volhard法）測定。法）測定。 本法適用于含鹵素有機藥本法適用于含鹵素有機藥 物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固 的藥物。的藥物。 原理原理 三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中 加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯 化鈉，然后用剩余滴定法

6、，即于水解化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解 液中加硝酸酸化，再加入定量過量的液中加硝酸酸化，再加入定量過量的 硝酸銀滴定液，使硝酸銀滴定液，使Cl-生成生成AgCl沉淀，沉淀， 過量的硝酸銀，以過量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用為指示劑，用 硫氰酸銨液回滴定。硫氰酸銨液回滴定。 例三氯叔丁醇的測定例三氯叔丁醇的測定 Ch.P（2005） CCl3 C(CH3)2 OH + 4NaOH 回流回流 (CH3)2 CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2O NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3 （淡棕紅色）（淡棕紅色

7、） (Ksp=1.561010 ) (Ksp=1.010 12 ) Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 測定方法測定方法 取本品約取本品約0.1g，精密稱定，精密稱定，加加 乙醇乙醇5ml，溶解后，加，溶解后，加20%氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液 5ml，加熱回流，加熱回流 15分鐘，分鐘，放冷，加水放冷，加水20ml 與硝酸與硝酸5ml，精密加硝酸銀滴定液，精密加硝酸銀滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加，再加鄰苯二甲酸二丁酯鄰苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，密塞， 強力振搖后，加硫酸鐵胺指示液強力振搖后，加硫酸鐵胺指示液2ml，用硫，用硫 氰酸胺滴定液氰酸胺滴定液(0.1mol/L

8、)滴定，并將滴定的滴定，并將滴定的 結(jié)果用空白試驗校正。每結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液 (0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于6.216mg的的 C4H7Cl3O1/2H2O。 mlmg6.216Lg6.216 3 molg186.47Lmol0.1 n CM T 滴定度，每1 ml滴定液相當(dāng)于被測 組分的mg數(shù)，mg/ml 滴定液濃度，滴定液濃度，mol/L 被測物的摩爾質(zhì)量，被測物的摩爾質(zhì)量，g/mol 1 mol樣品消耗滴定液的摩爾數(shù)，樣品消耗滴定液的摩爾數(shù)， 常體現(xiàn)為反應(yīng)摩爾比，即常體現(xiàn)為反應(yīng)摩爾比，即1 n。 反應(yīng)摩爾比為1 3 2. 堿性或酸性還原后測定法堿性或酸

9、性還原后測定法 本法是將含鹵素有機藥物在堿性或本法是將含鹵素有機藥物在堿性或 酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回 流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應(yīng)，使有機流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應(yīng)，使有機 結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子， 然后采用銀量法（然后采用銀量法（Fajans法）測定。法）測定。 本法適用于測定結(jié)構(gòu)中碘本法適用于測定結(jié)構(gòu)中碘 與苯環(huán)直接相連，且一個苯環(huán)與苯環(huán)直接相連，且一個苯環(huán) 上含多個碘原子的含鹵素有機上含多個碘原子的含鹵素有機 藥物。藥物。 （1） 堿性還原后測定法堿性還原后測定法 例例 泛影酸的測定泛影酸的測定 Ch.P （20

10、05） 取本品約取本品約0.4g，精密稱定，精密稱定，加氫氧加氫氧 化鈉溶液化鈉溶液30ml與鋅粉與鋅粉1.0g，加熱回流，加熱回流30 分鐘，分鐘，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾 過，燒瓶與濾器用水洗滌過，燒瓶與濾器用水洗滌3次，每次次，每次 15ml，洗液與濾液合并，加冰醋酸，洗液與濾液合并，加冰醋酸5ml 與曙紅鈉指示液與曙紅鈉指示液5滴，用硝酸銀滴定液滴，用硝酸銀滴定液 (0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液 (0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于20.46mg的的 C11H9 I 3N2O4。 COOH I NHCOCH3 I I H3

11、COCHN + 11NaOH + Zn 回流回流 COONa N H2 H2N + 3NaI + 2CH3COONa + 2Na2ZnO2 + H2O USP（28）、）、BP（2004） Ch.P（2005）收載的膽影）收載的膽影 酸、碘番酸、膽影葡胺、泛影酸、碘番酸、膽影葡胺、泛影 葡胺、碘他拉酸等均采用同法葡胺、碘他拉酸等均采用同法 測定。測定。 （2）酸性還原后測定法酸性還原后測定法 例例 碘番酸的測定碘番酸的測定 JP (14) 取本品的干燥品約取本品的干燥品約0.4g，精密稱定，精密稱定， 加鋅粉加鋅粉1g及冰醋酸及冰醋酸10ml，加熱回流，加熱回流 30min，放冷，冷凝管用水放

12、冷，冷凝管用水30ml洗滌，洗滌， 用脫脂棉過濾，燒瓶與脫脂棉用水洗滌用脫脂棉過濾，燒瓶與脫脂棉用水洗滌2 次，每次次，每次20ml，洗液與濾液合并，加四，洗液與濾液合并，加四 溴酚酞乙酯指示液溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸銀滴定，用硝酸銀滴定 液液(0.1mol/L)滴定。終點時黃色沉淀變?yōu)榈味?。終點時黃色沉淀變?yōu)?綠色。每綠色。每1ml硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相相 當(dāng)于當(dāng)于19.031mg的的C11H12 I 3NO2。 3. 氧瓶燃燒分解后測定法氧瓶燃燒分解后測定法 （1）原理）原理 氧瓶燃燒法：氧瓶燃燒法：本法是將分子中本法是將分子中 含有鹵素或硫等元素含有鹵素或

13、硫等元素的有機藥物在的有機藥物在 充滿氧氣充滿氧氣的的密閉密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒瓶中進(jìn)行燃燒燃燒， 并將燃燒產(chǎn)物并將燃燒產(chǎn)物吸收吸收于適當(dāng)?shù)奈找河谶m當(dāng)?shù)奈找?中，再采用適宜的分析方法來檢查中，再采用適宜的分析方法來檢查 或測定或測定鹵素或硫等元素的鹵素或硫等元素的含量含量 NaCl HClOClC NaOH 2 溶液 點燃 適用于含鹵素、硫、氮、適用于含鹵素、硫、氮、 硒等有機藥物的分析硒等有機藥物的分析 本法特點是簡便、快速、破本法特點是簡便、快速、破 壞完全，尤其適用于微量樣品壞完全，尤其適用于微量樣品 的分析的分析 （ 2） 儀器與材料儀器與材料 儀器裝置儀器裝置 燃燒瓶為燃燒瓶為50

14、0、1000或或 2000ml無色、磨口、厚壁、無色、磨口、厚壁、 硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞空空 心，底部熔封鉑絲一根，心，底部熔封鉑絲一根， 下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀 稱樣用材料及稱樣稱樣用材料及稱樣 A. 固體樣品固體樣品 無灰濾紙無灰濾紙 B. 液體樣品液體樣品 紙袋紙袋 C. 軟膏類樣品：將適量樣品置軟膏類樣品：將適量樣品置 不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密， 外層再用無灰濾紙包裹外層再用無灰濾紙包裹 吸收液吸收液 A. 作用：吸收液的作用是將樣作用：吸收液的作用是將樣 品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)的品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)

15、的 鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收 并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價態(tài)并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價態(tài) 氧氣氧氣 B. 吸收液的選擇吸收液的選擇 氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液 溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液 碘碘 NaOH硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液 硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液 （3）操作方法）操作方法 燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備 用洗液洗凈后，按各藥品項下用洗液洗凈后，按各藥品項下 的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕 潤，小心急速地通入氧氣潤，小心急速地通入氧氣1min，

16、立即用表面皿覆蓋瓶口。立即用表面皿覆蓋瓶口。 樣品的準(zhǔn)備樣品的準(zhǔn)備 取樣品適量，精密稱定后按規(guī)取樣品適量，精密稱定后按規(guī) 定方法包裹，固定于鉑絲下端的定方法包裹，固定于鉑絲下端的 網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。 樣品的燃燒樣品的燃燒 點燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放點燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放 入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶 口，俟燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分口，俟燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分 振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中， 放置放置15min15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，

17、合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。 然后按各藥品項下規(guī)定的方法進(jìn)行檢查或然后按各藥品項下規(guī)定的方法進(jìn)行檢查或 測定。測定。 待分解樣品量待分解樣品量 燃燒瓶的體積燃燒瓶的體積 2030mg（半微量分析）（半微量分析）500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多或更多 2000ml或特殊結(jié)或特殊結(jié) 構(gòu)的燃燒瓶構(gòu)的燃燒瓶 例例 磺溴酞鈉的含量測定磺溴酞鈉的含量測定 Ch.P (2005) Br BrBr Br C C O O HO SO3NaSO3Na OH Br BrBr Br O S OH HO S O NaO O ONa OO O 燃燒分

18、解燃燒分解 O2 HBr + S2- + SO4 + HBr + S2- NaBr + Na2SO4 + H2O NaOH, H2O2 溴溴 取本品約取本品約0.2g，照氧瓶燃燒法（附錄，照氧瓶燃燒法（附錄 C）進(jìn)行有機破壞，選用）進(jìn)行有機破壞，選用1000ml燃燒瓶，以燃燒瓶，以 0.4%氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液10ml、濃過氧化氫溶液、濃過氧化氫溶液 0.5ml與水與水10ml作為吸收液，俟生成的煙霧完作為吸收液，俟生成的煙霧完 全吸入吸收液后，用水稀釋至全吸入吸收液后，用水稀釋至100ml，煮沸，煮沸5 分鐘，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝分鐘，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝 酸銀滴

19、定液（酸銀滴定液（0.1mol/L）20ml，搖勻，再加，搖勻，再加 硫酸鐵胺指示液硫酸鐵胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液，用硫氰酸胺滴定液 (0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗 校正。每校正。每1ml硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于 7.990mg的溴的溴(Br)。 例例 碘苯酯的含量測定碘苯酯的含量測定 Ch.P（2005） 碘苯酯碘苯酯 CH CH3 (CH2)8COOCH2CH3 I 原理原理 碘苯酯系有機碘化物，用氧瓶碘苯酯系有機碘化物，用氧瓶 燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣铮^而氧化燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣?，繼而氧化 為游離

20、的碘，并被定量地吸收于吸收為游離的碘，并被定量地吸收于吸收 液中，和氫氧化鈉反應(yīng)，生成碘化物液中，和氫氧化鈉反應(yīng)，生成碘化物 與碘酸鹽，加入溴與碘酸鹽，加入溴- -醋酸溶液，使全部醋酸溶液，使全部 轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸及通轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸及通 空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽 反應(yīng)析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴反應(yīng)析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴 定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍(lán)色消失即定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍(lán)色消失即 為終點為終點 取本品約取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法，精密稱定，照氧瓶燃燒法 進(jìn)行有機破壞，用氫氧化鈉試液進(jìn)行有機破壞，用氫氧化

21、鈉試液2ml與水與水l0ml為為 吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸鉀取醋酸鉀 10g，加冰醋酸適量使溶解，加溴，加冰醋酸適量使溶解，加溴0.4ml，再加冰，再加冰 醋酸使成醋酸使成100ml)l0ml，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘， 加甲酸約加甲酸約lml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約 35min以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀2g，密，密 塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02 mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定，至近終點時，加淀粉

22、指示液，繼續(xù) 滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校 正。每正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液的硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于 1.388mg的的C19H29IO2。 滴定度的計算滴定度的計算 放大反應(yīng)放大反應(yīng) 2mol碘苯酯碘苯酯1molI2 1molI21molNaIO+1molNaI 1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaI 3 2 1molNaI+Br2 3 2 1 molNaIO3 即即2mol碘苯酯碘苯酯2molNaIO3 2mol NaIO3+10I 6molI2 即即2mol碘苯酯碘苯酯1molI2

23、 6molI212molNa2S2O3 反應(yīng)摩爾比為反應(yīng)摩爾比為1 6 mlmg n CM T/388. 1 6 34.41602. 0 二、含金屬有機藥物的分析二、含金屬有機藥物的分析 含金屬的有機藥物：含金屬的有機藥物：金屬原子金屬原子 不與碳原子直接相連，通常為有不與碳原子直接相連，通常為有 機酸及酚的金屬鹽或配位化合物機酸及酚的金屬鹽或配位化合物 如如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻 鈉、富馬酸亞鐵鈉、富馬酸亞鐵 有機金屬藥物有機金屬藥物：金屬原子直接與：金屬原子直接與 碳原子以共價鍵相連，結(jié)合比較牢碳原子以共價鍵相連，結(jié)合比較牢 固固 如如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、

24、醋酸苯汞、汞撒利 CCHOCH OOO C O O Sb Sb O O C OOO CHOCHC 2K+ 3H2O 酒石酸銻鉀酒石酸銻鉀 C CH C C O O OFe O Mg(C17H35COO)2 硬脂酸鎂硬脂酸鎂 富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵 CH2OH CHOH CHO CHO CHO COO- Sb OH OSb O- OCH CH CH C CH O O CH2 -OO HO HO Na39H 2O 葡萄糖酸銻鈉葡萄糖酸銻鈉 NHCONH2 As O OHHO 卡巴胂卡巴胂 HgOCOCH3 醋酸苯汞醋酸苯汞 OCH2COONa CONHCH2CHCH2HgOH OCH3 汞撒利汞撒利

25、 含金屬有機藥物定量分析前的含金屬有機藥物定量分析前的 處理方法處理方法 不經(jīng)有機破壞的分析方法不經(jīng)有機破壞的分析方法 直接測定法直接測定法; ;經(jīng)水解后測定法經(jīng)水解后測定法; ; 經(jīng)還原經(jīng)還原- -汞齊化后測定法汞齊化后測定法 經(jīng)有機破壞的分析方法經(jīng)有機破壞的分析方法 濕法破壞濕法破壞( (硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法; ;硝硝 酸酸- -硫酸法硫酸法; ;硫酸硫酸- -硫酸鹽法等硫酸鹽法等););干干 法破壞法破壞 （一）不經(jīng)有機破壞的分析方法（一）不經(jīng)有機破壞的分析方法 1. 直接測定法直接測定法 適用于金屬原子不直接與碳適用于金屬原子不直接與碳 原子相連的含金屬有機藥物或原子相連的含

26、金屬有機藥物或 某些某些CM鍵結(jié)合不牢固的有機鍵結(jié)合不牢固的有機 金屬藥物。金屬藥物。 富馬酸亞鐵的含量測定富馬酸亞鐵的含量測定 Ch.P（2005） 取本品約取本品約0.3g，精密稱定，精密稱定，加稀硫酸加稀硫酸 15ml，加熱溶解后，加熱溶解后，放冷，加新沸過的放冷，加新沸過的 冷水冷水50ml與鄰二氮菲指示液與鄰二氮菲指示液2 滴，立即用滴，立即用 硫酸鈰滴定液硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定滴定，并將滴定 的結(jié)果用空白試驗校正。每的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硫酸鈰滴硫酸鈰滴 定液定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于 16.99mg C4H2FeO4 原理原理 Fe2+

27、+ Ce4+ Ce3+ + Fe2+ NN 3 Fe2+ + e NN 3 Fe3+ 紅色紅色淺藍(lán)色淺藍(lán)色 O CCH OFe HCC O OO O CCH O HCC O +Fe2+ 例例 葡萄糖酸銻鈉葡萄糖酸銻鈉的的測定測定 Ch.P（2005） 取本品約取本品約0.3g，精密稱定，置具塞錐，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，加水形瓶中，加水100ml、鹽酸、鹽酸15ml與碘化鉀與碘化鉀 試液試液10ml，密塞、振搖后，在暗處靜置，密塞、振搖后，在暗處靜置 10min，用硫代硫酸鈉滴定液，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴滴 定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定，至近終點時，加淀粉指示液

28、，繼續(xù)滴 定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試 驗校正。每驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液的硫代硫酸鈉滴定液 (0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于6.088mg的的Sb。 K2ISbKI2Sb 2 3H5 6423222 OSNaNaI2OSNa2I 如枸櫞酸鐵銨如枸櫞酸鐵銨的的測定測定 Ch.P（2000） 取本品約取本品約0.5g，精密稱定，置具塞，精密稱定，置具塞錐形瓶中。錐形瓶中。 加水加水15ml溶解后，加硫酸溶解后，加硫酸lml，加熱至溶液由暗，加熱至溶液由暗 棕色變成淡黃色，放冷至約棕色變成淡黃色，放冷至約15，滴加高錳酸，滴加高錳酸 鉀試液至溶

29、液顯粉紅色并持續(xù)鉀試液至溶液顯粉紅色并持續(xù)5s，加鹽酸，加鹽酸15ml 與碘化鉀試液與碘化鉀試液15ml，密塞，靜置，密塞，靜置3min，加水，加水 50ml稀釋后，用硫代硫酸鈉滴定液稀釋后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴滴 定至近終點時，加淀粉指示液定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至，繼續(xù)滴定至 藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。 每每lml的硫代硫酸鈉滴定液的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于 5.585mg的的Fe。 2. 用硫酸水解后測定法用硫酸水解后測定法 例例 硬脂酸鎂的測定硬脂酸鎂的測定 Ch.P（2

30、005） 取本品約取本品約0.1g，精密稱定，精密加硫酸，精密稱定，精密加硫酸 滴定液滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油層澄清，煮沸至油層澄清， 繼續(xù)加熱繼續(xù)加熱10min，放冷，加甲基橙指示液，放冷，加甲基橙指示液 12滴，用氫氧化鈉滴定液滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。滴定。 每每1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于 2.016mg的的MgO。 原理：原理： Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH 2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 某些含汞有機藥物，由于某些含汞有機

31、藥物，由于C Hg鍵不牢固，在水溶液（冰?。╂I不牢固，在水溶液（冰?。?中滴加硫酸使其水解，將有機汞中滴加硫酸使其水解，將有機汞 定量轉(zhuǎn)化成硫酸汞，再用硫氰酸定量轉(zhuǎn)化成硫酸汞，再用硫氰酸 銨滴定液滴定。銨滴定液滴定。 例例 汞撒利的測定汞撒利的測定 取本品約取本品約0.5g，精密稱定，加蒸餾水，精密稱定，加蒸餾水 10ml，置冰浴中，滴加硫酸，置冰浴中，滴加硫酸10ml，隨滴隨，隨滴隨 攪拌，至產(chǎn)生的沉淀復(fù)溶解，再加蒸餾水?dāng)嚢?，至產(chǎn)生的沉淀復(fù)溶解，再加蒸餾水 50ml，硫酸鐵銨指示液，硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨，用硫氰酸銨 滴定液滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硫氰酸銨滴

32、硫氰酸銨滴 定液定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于25.29mg的汞撒利的汞撒利。 3. 經(jīng)還原經(jīng)還原-汞齊化后測定法汞齊化后測定法 本法系在酸性或堿性溶液中，加本法系在酸性或堿性溶液中，加 鋅粉、加熱回流，將藥物中有機結(jié)鋅粉、加熱回流，將藥物中有機結(jié) 合的汞還原析出金屬汞，并與過量合的汞還原析出金屬汞，并與過量 的鋅生成鋅汞齊。將鋅汞齊溶于硝的鋅生成鋅汞齊。將鋅汞齊溶于硝 酸后，選用適當(dāng)?shù)姆椒y定汞的含酸后，選用適當(dāng)?shù)姆椒y定汞的含 量，并換算成含汞有機藥物的含量。量，并換算成含汞有機藥物的含量。 如醋酸苯汞的含量測定如醋酸苯汞的含量測定 取本品約取本品約0.5g，精密稱定，置，精密稱定，

33、置100ml燒瓶中，燒瓶中， 加水加水15ml，甲酸，甲酸5ml與鋅粉與鋅粉1g，附回流冷凝器，附回流冷凝器， 煮沸煮沸30min。放冷，濾過，濾紙和鋅汞齊用蒸。放冷，濾過，濾紙和鋅汞齊用蒸 餾水洗滌至洗液對石蕊試紙不顯酸性反應(yīng)。將餾水洗滌至洗液對石蕊試紙不顯酸性反應(yīng)。將 鋅汞齊溶解在稀硝酸鋅汞齊溶解在稀硝酸(1 2)40ml中，置蒸氣浴中，置蒸氣浴 上加熱上加熱3min，加尿素，加尿素0.5g和足夠的高錳酸鉀試和足夠的高錳酸鉀試 液至顯桃紅色。冷卻后，加過氧化氫溶液脫色，液至顯桃紅色。冷卻后，加過氧化氫溶液脫色， 加硫酸鐵銨指示劑加硫酸鐵銨指示劑lml，用硫氰酸銨滴定液，用硫氰酸銨滴定液 (

34、0.1mol/L)滴定，即得。每滴定，即得。每1ml硫氰酸銨液硫氰酸銨液 (0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于16.84mg的的C8H8O2Hg。 （二）經(jīng)有機破壞的分析方法（二）經(jīng)有機破壞的分析方法 適用于金屬原子與碳原子結(jié)合適用于金屬原子與碳原子結(jié)合 牢固的有機金屬藥物。牢固的有機金屬藥物。 1. 濕法破壞濕法破壞 （1 1） 硝酸硝酸- -高氯酸法高氯酸法 本法適用于血、尿、組織等生本法適用于血、尿、組織等生 物樣品的破壞，有機金屬藥物經(jīng)破物樣品的破壞，有機金屬藥物經(jīng)破 壞后，得到的無機金屬離子一般呈壞后，得到的無機金屬離子一般呈 高價態(tài)。高價態(tài)。 本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的本法不能用于含氮

35、雜環(huán)藥物的 破壞破壞 （2） 硝酸硝酸- -硫酸法硫酸法 本法適用于大多數(shù)有機物質(zhì)本法適用于大多數(shù)有機物質(zhì) 的破壞，破壞得到的無機金屬離的破壞，破壞得到的無機金屬離 子均為高價態(tài)。子均為高價態(tài)。 本法不能用于含堿土金屬有本法不能用于含堿土金屬有 機藥物的破壞機藥物的破壞 （3） 硫酸硫酸- -硫酸鹽法硫酸鹽法 本法是往樣品中加入濃硫酸作本法是往樣品中加入濃硫酸作 氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸 點，增強硫酸的氧化破壞能力，且點，增強硫酸的氧化破壞能力，且 防止硫酸的分解損失。防止硫酸的分解損失。 本法常用于含砷或銻有機藥本法常用于含砷或銻有機藥 物的破壞，破壞得到

36、的無機金屬物的破壞，破壞得到的無機金屬 離子多為低價態(tài)。離子多為低價態(tài)。 （4） 其它濕法其它濕法 硝酸硝酸硫酸硫酸高氯酸法高氯酸法 硫酸硫酸氧化劑法（過氧化氫氧化劑法（過氧化氫 法、高錳酸鉀）法、高錳酸鉀） 破壞后，金屬呈高價態(tài)破壞后，金屬呈高價態(tài) 2. 干法破壞干法破壞 適用于濕法不易破壞完全適用于濕法不易破壞完全 的有機物以及某些不能用硫的有機物以及某些不能用硫 酸進(jìn)行破壞的有機藥物。不酸進(jìn)行破壞的有機藥物。不 適用于含易揮發(fā)性金屬（如適用于含易揮發(fā)性金屬（如 汞、砷等）有機藥物的破壞汞、砷等）有機藥物的破壞 注意事項：注意事項： （1）加熱或灼燒時，應(yīng)控制溫度）加熱或灼燒時，應(yīng)控制溫度

37、 在在420以下以下 （2）一定要灰化完全）一定要灰化完全 （3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往 往不易溶解，但不要輕易棄去往不易溶解，但不要輕易棄去 第二節(jié) 定量分析方法特點 常用的常用的 含量測含量測 定方法定方法 化學(xué)分析法化學(xué)分析法 儀器分析法儀器分析法 生物學(xué)方法生物學(xué)方法 酶化學(xué)方法酶化學(xué)方法 容容 量量 分分 析析 法法 經(jīng)典化學(xué)分析經(jīng)典化學(xué)分析 重重 量量 分分 析析 法法 現(xiàn)代儀器分析技術(shù)現(xiàn)代儀器分析技術(shù) 光光 譜譜 分分 析析 法法 色色 譜譜 分分 析析 法法 電電 化化 學(xué)學(xué) 分分 析析 法法 容量分析法容量分析法 （滴定分析法）（滴定分析法） 酸堿

38、滴定法酸堿滴定法 氧化還原滴定法氧化還原滴定法 配位滴定法配位滴定法 沉淀滴定法沉淀滴定法 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 一、容量分析法一、容量分析法 容量法用于常量組分測定。雖專 屬性不高，但由于其具有準(zhǔn)確度較高 （一般相對誤差可達(dá)0.2%以下）、精 密度好、儀器設(shè)備簡單、試驗成本低 及操作簡便、快速等優(yōu)點，廣泛用于 原料藥的含量測定。化學(xué)原料藥含量 測定首選。 （一）容量分析法的特點（一）容量分析法的特點 （二）容量分析法的計算（二）容量分析法的計算 1. 滴定度滴定度 2. 百分含量的計算百分含量的計算 原料藥原料藥 （1）原料藥，直接滴定法含量測定結(jié)原料藥，直接滴定法含量測定結(jié) 果的計

39、算：果的計算： %100% W TVF 含量 滴定時，供試品消耗滴定時，供試品消耗 滴定液的體積，滴定液的體積，ml 濃度校正因子濃度校正因子 標(biāo)準(zhǔn) 實測 C C F 供試品的質(zhì)量，供試品的質(zhì)量，g。 （2）原料藥，直接滴定法，有空）原料藥，直接滴定法，有空 白校正的計算：白校正的計算： %100% 0 W FVVT）（ 含量 滴定時，空白消耗滴定時，空白消耗 滴定液的體積，滴定液的體積，ml （3）原料藥，剩余滴定法，有）原料藥，剩余滴定法，有 空白試驗，含量測定結(jié)果的計空白試驗，含量測定結(jié)果的計 算：算： %100% 0 W FVVT）（ 含量 （4）原料藥，剩余滴定法，無）原料藥，剩余滴

40、定法，無 空白試驗，含量測定結(jié)果的計空白試驗，含量測定結(jié)果的計 算：算： %100% BBAA W FVFVT）（ 含量 光譜分析法光譜分析法 紫外紫外可見分光光可見分光光 度法度法 UVVis 原子吸收分光光原子吸收分光光 度法度法 AAS 熒光分析法熒光分析法 二、光譜分析法二、光譜分析法 （一）紫外可見分光光度法 根據(jù)物質(zhì)對波長為根據(jù)物質(zhì)對波長為200 760 nm這一范圍的光吸收特性這一范圍的光吸收特性 建立起來的一種定性、定量和建立起來的一種定性、定量和 結(jié)構(gòu)分析的方法。結(jié)構(gòu)分析的方法。 1. 基本原理基本原理 物質(zhì)對物質(zhì)對單色光單色光吸收強弱與吸光吸收強弱與吸光 物質(zhì)物質(zhì)濃度、液層

41、厚度濃度、液層厚度關(guān)系定律關(guān)系定律 ECL I I TA 0 lglg （1） Lambert -Beer定律定律 （2） 吸收系數(shù)吸收系數(shù) C以以“g/100ml”為單位的吸收系數(shù)為單位的吸收系數(shù)。 其物理意義為：當(dāng)吸光物質(zhì)其物理意義為：當(dāng)吸光物質(zhì) 溶液濃度為溶液濃度為1%（1g/100ml），液），液 層厚度為層厚度為1cm時的吸光度。時的吸光度。 %1 1cm E百分吸收系數(shù)百分吸收系數(shù) 摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù) C以以“mol/L”為單位的吸收系數(shù)。為單位的吸收系數(shù)。 （1）定期全面檢定）定期全面檢定 （2）測定前對波長進(jìn)行校正）測定前對波長進(jìn)行校正 汞燈、氘燈、鈥玻璃汞燈、氘燈、鈥玻

42、璃 2. 儀器的校正和檢定儀器的校正和檢定 （3）吸光度準(zhǔn)確度的檢定）吸光度準(zhǔn)確度的檢定 重鉻酸鉀的硫酸溶液重鉻酸鉀的硫酸溶液 （4）雜散光）雜散光 碘化鈉和亞硝酸碘化鈉和亞硝酸 鈉鈉 3. 吸光度的測定方法吸光度的測定方法 （1）對溶劑的要求）對溶劑的要求 （2）測定波長的確證）測定波長的確證 紫外紫外可見分光光度法測定時，除可見分光光度法測定時，除 另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同 批溶劑為空白對照，采用批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸的石英吸 收池，在規(guī)定的吸收峰波長收池，在規(guī)定的吸收峰波長2nm以內(nèi)以內(nèi) 測試幾個點的吸光度，或由儀器在規(guī)定測試幾個

43、點的吸光度，或由儀器在規(guī)定 波長附近自動掃描測定，以核對供試品波長附近自動掃描測定，以核對供試品 的吸收峰波長位置是否正確。除另有規(guī)的吸收峰波長位置是否正確。除另有規(guī) 定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定 的波長的波長2nm以內(nèi)，并以吸光度最大的以內(nèi)，并以吸光度最大的 波長作為測定波長。波長作為測定波長。 （3）供試品溶液濃度應(yīng)使測）供試品溶液濃度應(yīng)使測 得的吸光度在得的吸光度在0.30.7之間。之間。 100 g/ml g/100ml %1 1 %1 1 %1 1 LE A C LE A C CLEA cm cm cm ）（ ）（ 4. 在含量測定中的應(yīng)用在含

44、量測定中的應(yīng)用 （1）吸收系數(shù)法（絕對法）吸收系數(shù)法（絕對法） 吸光度吸光度 百分吸收系數(shù)百分吸收系數(shù) 液層厚度，液層厚度， cm，如無，如無 特別注明，特別注明， L=1cm 可在手冊或文獻(xiàn)中查到可在手冊或文獻(xiàn)中查到 （2）對照法）對照法 R X RX R X R X A A CC C C A A LCE LCE A A R X R X %1 cm1 %1 cm1 供試品溶液的吸光度供試品溶液的吸光度 對照品溶液的吸光度對照品溶液的吸光度 供試品溶液的濃度供試品溶液的濃度 對照品溶液的濃度對照品溶液的濃度 LCEA LCEA RcmR XcmX %1 1 %1 1 條件：條件： A. 待測物

45、與對照品在相同待測物與對照品在相同 條件下測定條件下測定 B. 待測物與對照品濃度相近待測物與對照品濃度相近 （3）計算分光光度法）計算分光光度法 5. 百分含量的計算百分含量的計算 原料藥原料藥 （1）吸收系數(shù)法）吸收系數(shù)法 %100 100 % %1 1 W VD LE A cm 含量 溶液體積 ml 稀釋倍數(shù) %100% W VD A A C R X R 含量 （2）對照法）對照法 6. 特點特點 UVVis 靈敏度高，操作簡便、靈敏度高，操作簡便、 快速、儀器價格較低廉，因此應(yīng)用快速、儀器價格較低廉，因此應(yīng)用 廣泛。但由于儀器和操作的原因，廣泛。但由于儀器和操作的原因， 誤差較容量分析

46、法大，除甾體激素誤差較容量分析法大，除甾體激素 類藥物和某些抗生素外，原料藥盡類藥物和某些抗生素外，原料藥盡 可能避免使用?？赡鼙苊馐褂?。 （二）熒光分析法（二）熒光分析法 物質(zhì)受光照射時，在吸收某種波長光物質(zhì)受光照射時，在吸收某種波長光 的同時又發(fā)射出比原來波長的同時又發(fā)射出比原來波長更長的光更長的光，激，激 發(fā)光停止照射，光線隨之消失，這種光稱發(fā)光停止照射，光線隨之消失，這種光稱 為熒光。熒光為發(fā)射光。利用熒光的物理為熒光。熒光為發(fā)射光。利用熒光的物理 特性進(jìn)行定性與定量測定的方法稱為熒光特性進(jìn)行定性與定量測定的方法稱為熒光 分析法。分析法。 1. 熒光及熒光分析法熒光及熒光分析法 2.

47、熒光激發(fā)光譜與熒光發(fā)射光譜熒光激發(fā)光譜與熒光發(fā)射光譜 以熒光發(fā)射光波長為橫坐以熒光發(fā)射光波長為橫坐 標(biāo)，發(fā)射光強度（熒光強度）標(biāo)，發(fā)射光強度（熒光強度） 為縱坐標(biāo)為縱坐標(biāo) 熒光發(fā)射光譜熒光發(fā)射光譜（熒光光譜）（熒光光譜） 熒光激發(fā)光譜熒光激發(fā)光譜（激發(fā)光譜）（激發(fā)光譜） 激發(fā)光波長為橫坐標(biāo)，發(fā)激發(fā)光波長為橫坐標(biāo)，發(fā) 射光強度（熒光強度）為縱坐射光強度（熒光強度）為縱坐 標(biāo)標(biāo) 3. 熒光光度計熒光光度計 （1）激發(fā)光源）激發(fā)光源 汞燈、氙燈汞燈、氙燈 （2）單色器）單色器 兩個單色器兩個單色器 （3）樣品池）樣品池 低熒光玻璃或石英池低熒光玻璃或石英池 （4）檢測器）檢測器 光電倍增管，在與光電

48、倍增管，在與 激發(fā)光源成直角的方向檢測熒光激發(fā)光源成直角的方向檢測熒光 4. 在在含量測定中的含量測定中的應(yīng)用應(yīng)用 當(dāng)激發(fā)光強度、波長、所當(dāng)激發(fā)光強度、波長、所 用溶劑及溫度等條件一定時，用溶劑及溫度等條件一定時， 在在較稀濃度范較稀濃度范圍內(nèi)藥物的熒光圍內(nèi)藥物的熒光 強度與溶液中該物質(zhì)的濃度成強度與溶液中該物質(zhì)的濃度成 正比。正比。 對照品比較法對照品比較法RC rbr XbX rX r X rbr XbX RR RR CC C C RR RR 供試品溶液試劑空白的熒光強度供試品溶液試劑空白的熒光強度 片劑含量測定結(jié)果的計算片劑含量測定結(jié)果的計算 %100 / / %100% 片）標(biāo)示量（

49、片）平均片重（ ）供試品重（ ）測得量（ 標(biāo)示量 每片實測含量 標(biāo)示量 g g g g 100% % 標(biāo)示量 標(biāo)示量 W W VD RR RR C rbr XbX r 片劑，熒光法片劑，熒光法 平均片重，平均片重，g/片片 5. 特點特點 熒光法最主要的優(yōu)點是測熒光法最主要的優(yōu)點是測 定靈敏度高，選擇性好。定靈敏度高，選擇性好。 利用物質(zhì)在流動相與固定相利用物質(zhì)在流動相與固定相 兩相中分配系數(shù)差異而得以分離，兩相中分配系數(shù)差異而得以分離， 并在檢測中能檢出其信號，從而并在檢測中能檢出其信號，從而 達(dá)到達(dá)到分離、分析分離、分析的一類分析方法。的一類分析方法。 （一）色譜法（一）色譜法 三、色譜法

50、 色譜法是一種物理或物理色譜法是一種物理或物理 化學(xué)分離分析方法。具有高靈化學(xué)分離分析方法。具有高靈 敏度、高選擇性、高效能、分敏度、高選擇性、高效能、分 析速度快及應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。析速度快及應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。 （二）常用的色譜法（二）常用的色譜法 色譜色譜 分析法分析法 高效液相色譜法高效液相色譜法 HPLC 氣相色譜法氣相色譜法 GC 1. GC 常用氣常用氣液分配色譜，硅藻液分配色譜，硅藻 土為載體，涂高沸點固定液或土為載體，涂高沸點固定液或 化學(xué)鍵和相，常用化學(xué)鍵和相，常用N2作流動相。作流動相。 2. HPLC （1）液）液固吸附色譜法固吸附色譜法 固定固定 相為硅膠等吸附劑、流動

51、相是相為硅膠等吸附劑、流動相是 烷烴作底劑加入適量極性調(diào)整烷烴作底劑加入適量極性調(diào)整 劑劑 （2）液）液液分配色譜法液分配色譜法 固定固定 相幾乎全是化學(xué)鍵合相相幾乎全是化學(xué)鍵合相 流動相極性小于固定相極性。流動相極性小于固定相極性。 固定相為氰基或氨基健合硅膠，流固定相為氰基或氨基健合硅膠，流 動相是烷烴作底劑加入適量極性調(diào)動相是烷烴作底劑加入適量極性調(diào) 整劑，用于分離溶于有機溶劑的極整劑，用于分離溶于有機溶劑的極 性及中等極性的分子型物質(zhì)性及中等極性的分子型物質(zhì) 正相色譜法正相色譜法 流動相極性大于固定相極性。流動相極性大于固定相極性。 固定相為十八烷基硅烷健合硅膠固定相為十八烷基硅烷健合

52、硅膠 （ODS或或C18柱）或辛烷基硅烷健柱）或辛烷基硅烷健 合硅膠（合硅膠（C8柱），流動相是甲醇柱），流動相是甲醇 水或乙腈水或乙腈水，主要用于分離非極水，主要用于分離非極 性至中等極性的各類分子型化合物性至中等極性的各類分子型化合物 反相色譜法反相色譜法 調(diào)整流動相調(diào)整流動相pH值抑制組分解值抑制組分解 離，用于分離有機弱酸、弱堿離，用于分離有機弱酸、弱堿 反相離子對色譜法反相離子對色譜法 流動相中加入離子對試劑，流動相中加入離子對試劑， 用于分離有機酸、堿、鹽用于分離有機酸、堿、鹽 離子抑制色譜法離子抑制色譜法 （三）高效液相色譜法（三）高效液相色譜法 1. 對儀器的一般要求對儀器的一

53、般要求 指用規(guī)定的對照品對色譜系指用規(guī)定的對照品對色譜系 統(tǒng)進(jìn)行試驗，應(yīng)符合要求。包括統(tǒng)進(jìn)行試驗，應(yīng)符合要求。包括 理論板數(shù)（理論板數(shù)（n）、分離度（）、分離度（R）、）、 重復(fù)性和拖尾因子（重復(fù)性和拖尾因子（T）等四個）等四個 指標(biāo)。指標(biāo)。 2. 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗 2 2 54. 5 h R W t n （1）理論板數(shù)）理論板數(shù) 色譜柱的理論板數(shù)越多，色譜柱的理論板數(shù)越多， 柱效越高。柱效越高。 （2）分離度）分離度 藥典要求藥典要求 R 應(yīng)應(yīng)1.5 21 WW 2 R 12 RR tt 用對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣用對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，次， 峰面積峰面積RSD應(yīng)應(yīng)2.0%；或配制相

54、當(dāng)；或配制相當(dāng) 于于80%、100%、120%的對照液，的對照液， 加入規(guī)定的內(nèi)標(biāo)，分別進(jìn)樣加入規(guī)定的內(nèi)標(biāo)，分別進(jìn)樣3次，次， 計算平均校正因子，計算平均校正因子，RSD亦應(yīng)亦應(yīng) 2.0%。 （3）重復(fù)性）重復(fù)性 （4）拖尾因子）拖尾因子 1 05. 0 2d W T h 峰高法定量時峰高法定量時T應(yīng)在應(yīng)在0.95 1.05之間之間 （1）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供 試品中主成分含量試品中主成分含量 方法 內(nèi)標(biāo)物+對照品對照溶液， 進(jìn)樣，測定，計算校正因子 3. 在含量測定中的應(yīng)用在含量測定中的應(yīng)用 RR ss CA CA f ）校正因子（ 供試品+內(nèi)標(biāo)供試品溶液， 進(jìn)樣，

55、測定供試品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì) 的峰面積或峰高，計算含量 %100% W VDC X 含量 sS X X CA A fC ）含量（ （2）外標(biāo)法測定供試品主成分含 量 供試品供試品溶液 對照品對照品溶液 進(jìn)樣，測定，計算含量 R X RX A A CC）含量（ %100 %100% W VD A A C W VDC R X R X 含量 缺點：不易準(zhǔn)確控制進(jìn)樣量， 宜用定量環(huán)進(jìn)樣 HPLC 主要用于抗生素、主要用于抗生素、 生化藥品及含雜質(zhì)干擾測定的生化藥品及含雜質(zhì)干擾測定的 化學(xué)藥品。廣泛用于藥物制劑化學(xué)藥品。廣泛用于藥物制劑 及多組分抗生素的含量測定。及多組分抗生素的含量測定。 在藥典中收載率呈大幅

56、度上升在藥典中收載率呈大幅度上升 趨勢。趨勢。 （四）氣相色譜法（四）氣相色譜法 GC 用于樣品本身具揮發(fā)性，用于樣品本身具揮發(fā)性， 含有雜質(zhì)等干擾的品種，如維生含有雜質(zhì)等干擾的品種，如維生 素素E。 第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 分析方法驗證 一、目的 證明所采用的分析方法適合證明所采用的分析方法適合 于相應(yīng)的檢測要求，方法驗證于相應(yīng)的檢測要求，方法驗證 理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在 藥品標(biāo)準(zhǔn)起草或修訂說明中。藥品標(biāo)準(zhǔn)起草或修訂說明中。 二、用途 （一）建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，分析（一）建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，分析 方法需經(jīng)驗證。方法需經(jīng)驗證。 （二）藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的（二）藥

57、品生產(chǎn)工藝變更、制劑的 組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時，組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時， 分析方法需經(jīng)驗證。分析方法需經(jīng)驗證。 三、需驗證的分析項目 1. 鑒別試驗； 2. 雜質(zhì)定量檢查或限度檢查； 3. 原料藥或制劑中有效成分含量 測定； 4. 制劑中其它成分（如防腐劑 等）的測定； 5. 溶出度、釋放度等檢查中的 溶出量等的測試方法。 驗證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密驗證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密 度（重復(fù)性、中間精密度和重度（重復(fù)性、中間精密度和重 現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定 量限、線性、范圍和耐用性。量限、線性、范圍和耐用性。 四、驗證內(nèi)容 （一）（一） 準(zhǔn)確度（準(zhǔn)確度（a

58、ccuracy） 準(zhǔn)確度是指用該方法測定的準(zhǔn)確度是指用該方法測定的 結(jié)果與真實值或參考值接近的結(jié)果與真實值或參考值接近的 程度，用回收率（程度，用回收率（%）表示。）表示。 測定回收率R（recovery） 的具體方法可采用“回收試驗 法”和“加樣回收試驗法”。 回收試驗 空白+已知量A的對 照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定 值為M %100 A M R 加樣回收試驗 已準(zhǔn)確測定藥物含 量P的真實樣品+已知量A的對照品 （或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M %100 A PM R 數(shù)據(jù)要求數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，規(guī)定的范圍內(nèi)， 至少用至少用9個測定結(jié)果評價。例如，個測定結(jié)果評價。例如， 設(shè)計設(shè)計3個不同濃度

59、，每個濃度分個不同濃度，每個濃度分 別制備別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測份供試品溶液，進(jìn)行測 定。定。 1. 含量測定方法的準(zhǔn)確度含量測定方法的準(zhǔn)確度 原料藥可原料藥可用已知純度的對照用已知純度的對照 品或供試品進(jìn)行測定，或用本品或供試品進(jìn)行測定，或用本 法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另 一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。 制劑制劑可用含己知量被測物的各可用含己知量被測物的各 組分混合物進(jìn)行測定，即采用在空組分混合物進(jìn)行測定，即采用在空 白輔料中加入原料藥對照品的方法。白輔料中加入原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，如不能得到制劑的全部組分， 可

60、向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn) 行測定，或與已知準(zhǔn)確度的另一方行測定，或與已知準(zhǔn)確度的另一方 法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。 中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加 樣回收試驗衡量。中藥回收率樣回收試驗衡量。中藥回收率 一般要求在一般要求在95105%范圍內(nèi)，范圍內(nèi)， 有些方法操作步驟繁多時，可有些方法操作步驟繁多時，可 要求在要求在90110%范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。RSD 一般在一般在3%以內(nèi)。以內(nèi)。 2雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度 可向原料藥或制劑中加入已可向原料藥或制劑中加入已 知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如不能得知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如不能得