單克隆抗體與基因工程抗體的制備

1、單克隆抗體與基因工程抗體的制備單克隆抗體與基因工程抗體的制備 抗體種類：抗體種類： 第一代抗體第一代抗體 多克隆抗體多克隆抗體（polyclonal antibody) 第二代抗體第二代抗體 單克隆抗體（單克隆抗體（monoclonal antibody) 第三代抗體第三代抗體 基因工程抗體（基因工程抗體（genetic engineering antibody) 雜交瘤技術(shù)的基本原理雜交瘤技術(shù)的基本原理 單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備 一、單克隆抗體的產(chǎn)生一、單克隆抗體的產(chǎn)生 二、單克隆抗體的純化二、單克隆抗體的純化 三、單克隆抗體的性質(zhì)鑒定三、單克隆抗體的性質(zhì)鑒定 四、單克隆抗體的特性四

2、、單克隆抗體的特性 基因工程抗體制備基因工程抗體制備 一、一、基因工程抗體種類基因工程抗體種類 二、原理二、原理 三、重組抗原制備過(guò)程三、重組抗原制備過(guò)程 抗原決定簇（抗原表位）抗原決定簇（抗原表位） 細(xì)胞克隆細(xì)胞克隆 多克隆抗體多克隆抗體 單克隆抗體單克隆抗體 是指抗原分子中是指抗原分子中 決定抗原特異性決定抗原特異性 的特殊化學(xué)基團(tuán)，的特殊化學(xué)基團(tuán)， 又稱表位又稱表位 (epitope). 由一個(gè)由一個(gè)B 淋巴細(xì)淋巴細(xì) 胞增殖胞增殖 而成的而成的 細(xì)胞集細(xì)胞集 團(tuán)團(tuán) 針對(duì)多種抗原決針對(duì)多種抗原決 定簇的混合抗體定簇的混合抗體 由單個(gè)由單個(gè)B細(xì)胞克細(xì)胞克 隆產(chǎn)生的針對(duì)單隆產(chǎn)生的針對(duì)單 一抗原

3、決定簇的一抗原決定簇的 同源抗體同源抗體 雜交瘤技術(shù)的理論基礎(chǔ)雜交瘤技術(shù)的理論基礎(chǔ) 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的克隆選擇學(xué)說(shuō)，即一種克 隆只產(chǎn)生一種抗體 細(xì)胞融合技術(shù)產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞可以保持雙方 親代細(xì)胞的特性 利用代謝缺陷補(bǔ)救機(jī)理篩選雜交瘤細(xì)胞，并克 隆化，制備McAb 當(dāng)兩個(gè)細(xì)胞緊密接觸時(shí)，細(xì)胞膜可能融合在一 起。融合細(xì)胞含有兩個(gè)不同的細(xì)胞核，稱為異核 體，產(chǎn)生具有原來(lái)兩個(gè)細(xì)胞基因信息的單個(gè)核細(xì) 胞，稱為雜交細(xì)胞（hybrid cell）。 雜交瘤技術(shù)的基本原理雜交瘤技術(shù)的基本原理 雜交瘤技術(shù)原理：雜交瘤技術(shù)原理： 聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）：）：細(xì)胞融合劑，使免疫的小鼠脾細(xì)細(xì)胞融合劑，使免

4、疫的小鼠脾細(xì) 胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合 HATHAT培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)：培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)：反復(fù)的免疫學(xué)檢測(cè)篩選克隆化反復(fù)的免疫學(xué)檢測(cè)篩選克隆化 增殖的雜交瘤增殖的雜交瘤細(xì)胞系細(xì)胞系 單克隆抗體生成：?jiǎn)慰寺】贵w生成：接種雜交瘤接種雜交瘤細(xì)胞于小鼠腹腔，腹水細(xì)胞于小鼠腹腔，腹水 中即可得到高效價(jià)的單克隆抗體中即可得到高效價(jià)的單克隆抗體 流流 程程 雜交瘤技術(shù)雜交瘤技術(shù) 不產(chǎn)生不產(chǎn)生IgIg的重鏈和輕鏈的重鏈和輕鏈 HGPRT-;TK- 與提供淋巴細(xì)胞的動(dòng)物品系相同與提供淋巴細(xì)胞的動(dòng)物品系相同 （一）小鼠骨髓瘤細(xì)胞（一）小鼠骨髓瘤細(xì)胞 動(dòng)動(dòng) 物：物： BALB/BALB/c c小鼠

5、小鼠 7 71212周齡周齡 20g20g25g25g體重體重 （二）免疫脾細(xì)胞（二）免疫脾細(xì)胞 細(xì)胞性抗原：細(xì)胞性抗原： （1 12 2）10107 7/ /只，不加佐劑，只，不加佐劑，2 23 3周重復(fù)一次周重復(fù)一次 可溶性抗原：可溶性抗原： 首次，完全福氏佐劑首次，完全福氏佐劑+100+100微克抗原，微克抗原，3 36 6周周 100100200200微克抗原，融合前微克抗原，融合前3 3天，加強(qiáng)免疫天，加強(qiáng)免疫 免疫小鼠免疫小鼠 細(xì)胞融合劑：細(xì)胞融合劑： PEG:分子量分子量4000 的的PEG是最常用的細(xì)胞融合劑是最常用的細(xì)胞融合劑 作用機(jī)理：作用機(jī)理：誘導(dǎo)細(xì)胞膜上脂類物質(zhì)結(jié)構(gòu)重排

6、，使細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞膜上脂類物質(zhì)結(jié)構(gòu)重排，使細(xì)胞 膜易打開而有助于細(xì)胞融合膜易打開而有助于細(xì)胞融合 作用特點(diǎn)：作用特點(diǎn)：隨機(jī)發(fā)生的，不同廠商、批號(hào)、分子量的隨機(jī)發(fā)生的，不同廠商、批號(hào)、分子量的 PEGPEG，其純度與毒性有所不同，其純度與毒性有所不同 骨髓瘤細(xì)胞與淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞與淋巴細(xì)胞(1:3-10)(1:3-10) 50% PEG 1min50% PEG 1min內(nèi)加完內(nèi)加完; ; 10ml10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)液終止反應(yīng)終止反應(yīng) 融合方法融合方法 SP2/0SP2/0細(xì)胞與脾細(xì)胞的比例為細(xì)胞與脾細(xì)胞的比例為1 1：2 25 5 1ml 50%1ml 50%的的PEGPEG（無(wú)菌，預(yù)溫（無(wú)菌，

7、預(yù)溫3737）在）在1 1分鐘內(nèi)滴完分鐘內(nèi)滴完, ,靜置靜置4545秒秒, , 時(shí)間一到時(shí)間一到, ,將事先準(zhǔn)備的培養(yǎng)液一滴一滴加入將事先準(zhǔn)備的培養(yǎng)液一滴一滴加入, ,停止停止PEGPEG作用作用 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入HATHAT培養(yǎng)基，使之分加到培養(yǎng)基，使之分加到9696孔板中時(shí)每孔孔板中時(shí)每孔 細(xì)胞數(shù)為（細(xì)胞數(shù)為（0.50.51.51.5）10105 5個(gè)。融合后個(gè)。融合后7-147-14天，換用天，換用HTHT培培 養(yǎng)液養(yǎng)液 細(xì)胞融合細(xì)胞融合 7 72020天出現(xiàn)克隆天出現(xiàn)克隆 HATHAT篩選篩選 挑克隆挑克隆 融合細(xì)胞的早期培養(yǎng)融合細(xì)胞的早期培養(yǎng) HATHAT培養(yǎng)基：培養(yǎng)

8、基： H（Hypoxanthine）:次黃嘌呤次黃嘌呤 A（Aminopterin）：）：氨基喋呤；葉酸拮抗物，氨基喋呤；葉酸拮抗物， 阻斷阻斷DNA合成主要途徑合成主要途徑 T(Thymidine)：胸胸腺嘧啶核苷；腺嘧啶核苷；“核苷酸前核苷酸前 體體”，供細(xì)胞通過(guò)替代途徑合成，供細(xì)胞通過(guò)替代途徑合成DNADNA 雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng) HATHAT選擇作用：選擇作用： 淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，不能生長(zhǎng)，5 57 7天死亡；天死亡；DNADNA合成的合成的 主要途徑被主要途徑被A A阻斷阻斷 骨髓瘤細(xì)胞：骨髓瘤細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，不能生長(zhǎng)，5 57 7天死亡；天死亡；

9、HGPRTHGPRT缺缺 乏，乏，DNADNA合成的替代途徑受阻合成的替代途徑受阻 雜交瘤細(xì)胞：雜交瘤細(xì)胞： 長(zhǎng)期生長(zhǎng)繁殖長(zhǎng)期生長(zhǎng)繁殖 利用淋巴細(xì)胞的利用淋巴細(xì)胞的HGPRT，將，將H合成為嘌呤合成為嘌呤 堿并最終與堿并最終與T一起合成一起合成DNA 從淋巴細(xì)胞獲得產(chǎn)生某種抗體的遺傳信息從淋巴細(xì)胞獲得產(chǎn)生某種抗體的遺傳信息 從骨髓瘤細(xì)胞獲得不斷繁殖的能力從骨髓瘤細(xì)胞獲得不斷繁殖的能力 有限稀釋法有限稀釋法 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 不需任何特殊設(shè)備不需任何特殊設(shè)備 克隆出現(xiàn)效率高克隆出現(xiàn)效率高 實(shí)驗(yàn)室常用方法實(shí)驗(yàn)室常用方法 方法：方法： 細(xì)胞懸液通過(guò)系列稀釋細(xì)胞懸液通過(guò)系列稀釋 每個(gè)培養(yǎng)孔含每個(gè)培養(yǎng)孔含0

10、.50.51 1個(gè)細(xì)胞個(gè)細(xì)胞 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)與凍存陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)與凍存 單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備 經(jīng)過(guò)反復(fù)克隆化獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤經(jīng)過(guò)反復(fù)克隆化獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤 細(xì)胞株應(yīng)立即擴(kuò)大培養(yǎng)（除及時(shí)凍存的細(xì)胞細(xì)胞株應(yīng)立即擴(kuò)大培養(yǎng)（除及時(shí)凍存的細(xì)胞 外）。因多次傳代易引起染色體逐漸丟失而外）。因多次傳代易引起染色體逐漸丟失而 使細(xì)胞產(chǎn)生抗體能力逐漸減弱甚至消失，還使細(xì)胞產(chǎn)生抗體能力逐漸減弱甚至消失，還 應(yīng)盡早使用獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株制應(yīng)盡早使用獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株制 備單克隆抗體。備單克隆抗體。 一、單克隆抗體的產(chǎn)生一、單克隆抗體的產(chǎn)生 動(dòng)物體內(nèi)誘生方法

11、：動(dòng)物體內(nèi)誘生方法： 每次用每次用BALB/cBALB/c或或F1F1代小鼠，（代小鼠，（5 51010）10105 5/ /只只 體外培養(yǎng)法：體外培養(yǎng)法： 中空纖維培養(yǎng)系統(tǒng)中空纖維培養(yǎng)系統(tǒng) 單抗含量不高，牛血清單抗含量不高，牛血清AbAb難以去除難以去除 腹腔注射法腹腔注射法 鹽析沉淀鹽析沉淀 親和層析親和層析 離子交換層析離子交換層析 二、二、McAbMcAb的純化的純化 IgIg類型、亞類測(cè)定：類型、亞類測(cè)定：雙擴(kuò)法或雙擴(kuò)法或ELISAELISA法法 特異性測(cè)定：特異性測(cè)定：抗原類似物的交叉反應(yīng)抗原類似物的交叉反應(yīng) 效價(jià)測(cè)定：效價(jià)測(cè)定：用腹水或培養(yǎng)液的稀釋度表示用腹水或培養(yǎng)液的稀釋度表示

12、 表位測(cè)定：表位測(cè)定：幾株單抗是否為不同表位特異的幾株單抗是否為不同表位特異的, ,用競(jìng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制爭(zhēng)抑制 法，相加指數(shù)法及微機(jī)集群分析法，相加指數(shù)法及微機(jī)集群分析 親和性測(cè)定：親和性測(cè)定：測(cè)定親和常數(shù)測(cè)定親和常數(shù)K K 雜交瘤細(xì)胞染色體：雜交瘤細(xì)胞染色體：秋水仙素裂解法，小鼠秋水仙素裂解法，小鼠B B細(xì)胞染色體細(xì)胞染色體 4040條，條，SP2/0SP2/0細(xì)胞細(xì)胞6868條，雜交瘤細(xì)胞一般條，雜交瘤細(xì)胞一般100100多條多條 McAbMcAb靶抗原分子量：靶抗原分子量：常用常用western blotwestern blot 三、三、 單克隆抗體的性質(zhì)鑒定單克隆抗體的性質(zhì)鑒定 四、單克隆抗

13、體的特性四、單克隆抗體的特性 高度特異性高度特異性 高度的均一性和可重復(fù)性高度的均一性和可重復(fù)性 弱凝集反應(yīng)和不呈現(xiàn)沉淀反應(yīng)弱凝集反應(yīng)和不呈現(xiàn)沉淀反應(yīng) 對(duì)環(huán)境敏感性對(duì)環(huán)境敏感性 （一）單克隆抗體的特性（一）單克隆抗體的特性 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) ： 在體外在體外“永久永久”地存活并傳代地存活并傳代 用相對(duì)不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗用相對(duì)不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗 體。適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法體。適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法 可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療 單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與局限性單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與局限性 局限

14、性局限性 ： 固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍 反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體 制備技術(shù)復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)工、價(jià)格較高制備技術(shù)復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)工、價(jià)格較高 McAbMcAb Pc PcAbAb 抗原要求抗原要求 可以不純可以不純 純度高純度高 得量得量 高高 低低 特異性特異性 高高 低低 穩(wěn)定穩(wěn)定 低低 高高 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 無(wú)無(wú) 有有 成本成本 高高 低低 McAbMcAb與與PcPcAbAb的比較的比較 McAb and PcAb 基因工程抗體制備基因工程抗體制備 基因工程抗體基因工程抗體(Genetic engineer

15、ing antibody) 根據(jù)研究者的意圖，采用基因工程方法，在根據(jù)研究者的意圖，采用基因工程方法，在 基因水平，對(duì)免疫球蛋白基因進(jìn)行切割、拼接或基因水平，對(duì)免疫球蛋白基因進(jìn)行切割、拼接或 修飾后導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，產(chǎn)生新型抗體。修飾后導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，產(chǎn)生新型抗體。 主要包括嵌合抗體、單鏈抗體、人源化抗體、雙主要包括嵌合抗體、單鏈抗體、人源化抗體、雙 價(jià)抗體和雙特異性抗體。價(jià)抗體和雙特異性抗體。 將小鼠將小鼠IgIg基因敲除，轉(zhuǎn)染人基因敲除，轉(zhuǎn)染人IgIg基因，在基因，在 小鼠體內(nèi)產(chǎn)生人小鼠體內(nèi)產(chǎn)生人AbAb，再經(jīng)雜交瘤技術(shù)，產(chǎn)生，再經(jīng)雜交瘤技術(shù)，產(chǎn)生 大量完全人源化抗體大量完全人源

16、化抗體 一、人源化抗體一、人源化抗體 FabFab：抗原結(jié)合片斷抗原結(jié)合片斷 FvFv：可變區(qū)片段可變區(qū)片段 ScFvScFv：?jiǎn)捂溈勺儏^(qū)片段單鏈可變區(qū)片段 SdAbSdAb：?jiǎn)螀^(qū)抗體單區(qū)抗體 二、小分子抗體二、小分子抗體 其它生物活性蛋白融合其它生物活性蛋白融合 三、抗體融合蛋白三、抗體融合蛋白 許多抗原抗體反應(yīng)要求雙價(jià)的抗原結(jié)合位點(diǎn)，使抗原許多抗原抗體反應(yīng)要求雙價(jià)的抗原結(jié)合位點(diǎn)，使抗原 分子上的兩個(gè)表位交聯(lián)或使兩個(gè)抗原分子連接。將識(shí)別腫分子上的兩個(gè)表位交聯(lián)或使兩個(gè)抗原分子連接。將識(shí)別腫 瘤抗原的抗體和識(shí)別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞表面分子的抗瘤抗原的抗體和識(shí)別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞表面分子的抗 體

17、連結(jié)在一起，可使效應(yīng)細(xì)胞更容易與腫瘤細(xì)胞結(jié)合識(shí)別，體連結(jié)在一起，可使效應(yīng)細(xì)胞更容易與腫瘤細(xì)胞結(jié)合識(shí)別， 取得殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。取得殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。 四、雙特異性抗體四、雙特異性抗體 定義：定義：將體外克隆的抗體基因片段插入噬菌體載體，將體外克隆的抗體基因片段插入噬菌體載體， 轉(zhuǎn)染工程細(xì)菌進(jìn)行表達(dá)，然后用抗原篩選即可獲得轉(zhuǎn)染工程細(xì)菌進(jìn)行表達(dá)，然后用抗原篩選即可獲得 特異的單克隆噬菌體抗體。利用這一技術(shù)可以得到特異的單克隆噬菌體抗體。利用這一技術(shù)可以得到 完全人源性的抗體，在完全人源性的抗體，在HIVHIV等病毒感染和腫瘤的診斷等病毒感染和腫瘤的診斷 與治療方面有其獨(dú)特的優(yōu)越性與治療方面有其

18、獨(dú)特的優(yōu)越性 五、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)五、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù) 基因工程亦稱遺傳工程，即利用基因工程亦稱遺傳工程，即利用DNA重組技術(shù)的重組技術(shù)的 方法，把方法，把DNA作為組件，在細(xì)胞外將一種外源作為組件，在細(xì)胞外將一種外源 DNA（目的基因）和載體（目的基因）和載體DNA重新組合連接（重重新組合連接（重 組），最后將重組體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，使外源基因組），最后將重組體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，使外源基因 DNA在宿主細(xì)胞中，隨細(xì)胞的繁殖而增殖在宿主細(xì)胞中，隨細(xì)胞的繁殖而增殖 （cloning，克?。?，或最后得到表達(dá)，最終獲得，克?。?，或最后得到表達(dá)，最終獲得 基因表達(dá)產(chǎn)物或改變生物原有的遺傳性狀。基因表達(dá)產(chǎn)物或改

19、變生物原有的遺傳性狀。 Foreign DNA to be insertedPlansmid vector Joining Recombinant DNA molecule Introduction into host cells by transformation of viral infection Host chromateme Slection for cells coteining a recombinant DNA molecule Cloning + 1、體外基因重組、體外基因重組 目的基因的制備目的基因的制備 載體的構(gòu)建：質(zhì)粒或載體的構(gòu)建：質(zhì)?；?噬菌體噬菌體 目的基因與載體重

20、組目的基因與載體重組 2、重組體重組體DNA的轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn) 化增殖和表達(dá)化增殖和表達(dá) 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 篩選篩選 增殖和基因表達(dá)增殖和基因表達(dá) 靶序列靶序列 變性和引變性和引 物復(fù)姓物復(fù)姓 循環(huán)循環(huán)1 循環(huán)循環(huán)2 循環(huán)循環(huán)3 變性和引變性和引 物復(fù)姓物復(fù)姓 鏈延伸鏈延伸 Tag酶酶 鏈延伸鏈延伸 抗原的原核表達(dá)抗原的原核表達(dá) 以脂肪酸結(jié)合蛋白（以脂肪酸結(jié)合蛋白（FABPFABP）為例：）為例： 首先要合成或購(gòu)買表達(dá)首先要合成或購(gòu)買表達(dá)FABPFABP的基因序列并設(shè)計(jì)合的基因序列并設(shè)計(jì)合 成引物成引物 ATGGTGGACGCTTTCCTGGGCACCTGGAAGCTAGTGGACAGCAA GAATTTCGA

21、TGACTACATGAAGTCACTCGGTGTGGGTTTTGCTAC CAGGCAGGTGGCCAGCATGACCAAGCCTACCACAATCATCGAAA AGAATGGGGACATTCTCACCCTAAAAACACACAGCACCTTCAAG AACACAGAGATCAGCTTTAAGTTGGGGGTGGAGTTCGATGAGAC AACAGCAGATGACAGGAAGGTCAAGTCCATTGTGACACTGGATG GAGGGAAACTTGTTCACCTGCAGAAATGGGACGGGCAAGAGACC ACACTTGTGCGGGAGCTAATTGATGGAAAACTCATCCT

22、GACACTC ACCCACGGCACTGCAGTTTGCACTCGCACTTATGAGAAAGAGGC ATGA 上游引物：上游引物：HF15 CGGAATTCATGGTGGACGCTTTCCTGGGC 3 下游引物：下游引物：HF25 GCCTCGAGTCATGCCTCTTTCTCATAAGT 3 基因序列基因序列 酶切位酶切位 點(diǎn)點(diǎn) NdeIXbaI CATATG GTATAC TCTAGA AGATCT TATG AC T AGATC CA GTAT CTAGA T 通過(guò)擴(kuò)增獲取足夠的聯(lián)結(jié)片段 PCR PCR擴(kuò)增擴(kuò)增 。 PCR產(chǎn)物產(chǎn)物 T載體載體 連接緩沖液連接緩沖液 連接酶連接酶

23、連接連接 CATATG GTATAC TCTAGA AGATCT 表達(dá)載體表達(dá)載體 目的片段目的片段 Solution I 重組子的鑒定重組子的鑒定 誘導(dǎo)表達(dá)誘導(dǎo)表達(dá) 表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PageSDS-Page鑒定鑒定 表達(dá)產(chǎn)物的分離純化表達(dá)產(chǎn)物的分離純化 分離純化目的產(chǎn)物主要依賴于色譜分離技術(shù)。色譜技分離純化目的產(chǎn)物主要依賴于色譜分離技術(shù)。色譜技 術(shù)分為術(shù)分為： Ion exchange chromatography (IEC) Reversed phase chromatography (RPC) Hydrophobic interaction chromatography (HIC) Affinity chromatography (AC) 小結(jié)小結(jié) 雜交瘤單克隆抗體制備技術(shù)的原理是利用聚乙二雜交瘤單克隆抗體制備技術(shù)的原理是利用聚乙二 醇作為細(xì)胞融合劑，使免疫