四蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)

1、實驗四 蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)、實驗?zāi)康氖煜ひ恍┏Ｒ姷鞍踪|(zhì)的顏色反應(yīng)。、實驗原理蛋白質(zhì)分子中的某些基團與顯色劑作用，可產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)， 不同蛋白質(zhì)所含氨基酸不完全相同，顏色反應(yīng)亦不同。顏色反應(yīng)不是蛋白質(zhì)的專一反應(yīng)，一些非蛋白物質(zhì)亦可產(chǎn)生相同顏色反應(yīng)，因此不能僅根據(jù)顏色反應(yīng)的結(jié)果決定被測物是否是蛋白質(zhì)。顏色反應(yīng)是些常用的蛋白質(zhì)定量測定的依據(jù)。重要的顏色反應(yīng)有：（一）雙縮脲反應(yīng)將尿素加熱到180C，則兩分子尿素縮合而成一分子雙縮脲，并放出一分子氨。雙縮脲在堿性溶液中能與硫酸銅反應(yīng)產(chǎn)生紅紫色絡(luò)合物,此反應(yīng)稱雙縮脲反應(yīng)。 蛋白質(zhì)分子中含有許多和雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能起雙縮脲反應(yīng)， 形成紅紫色絡(luò)合

2、物。 通?？捎么朔磻?yīng)來定性鑒定蛋白質(zhì)，也可根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)生的顏色在540nm處比色,定量測定蛋白質(zhì)。/NHC=O嚴2 c=o150DCzNH2c=oNHNII3NH2nh2c=onh2嚴2c=oCu2INH/C=OOH-/C=NHHNZNII円0H II一C” CuNHHN=GNH2紫紅厲化合物（二）蛋白質(zhì)的黃色反應(yīng)黃色反應(yīng)是含有芳香族氨基酸特別是含有酪氨酸和色氨酸的蛋白質(zhì)所特有的呈色反應(yīng)。蛋白質(zhì)溶液遇硝酸后， 先產(chǎn)生白色沉淀，加熱則白色沉淀變成黃色， 再加堿顏色加深呈橙黃例如皮膚、指甲色，這是因為硝酸將蛋白質(zhì)分子中的苯環(huán)硝化，產(chǎn)生了黃色硝基苯衍生物。和毛發(fā)等遇濃硝酸會變成黃色。0H亠 HNO3h

3、2oNO；（黃色）0H+ NaOHno2硝釀酸（橘黃色）（三）米倫氏反應(yīng)米倫試劑為硝酸汞、亞硝酸汞、硝酸和亞硝酸的混合物,蛋白質(zhì)溶液加入米倫試劑后即產(chǎn)生白色沉淀，加熱后沉淀變成紅色。酚類化合物有此反應(yīng),酪氨酸含有酚基，故酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白質(zhì)都有此反應(yīng)。HOHO+ OHN=OHOh2o0 （亞硝基）汞鹽紅色（四）茚三酮反應(yīng)蛋白質(zhì)與茚三酮共熱,則產(chǎn)生藍紫色的還原茚三酮、茚三酮和氨的縮合物。此反應(yīng)為切氨基酸及a -氨基酸所共有。含有氨基的其他物質(zhì)亦呈此反應(yīng)。cosh4 +/OH，、+ RCHO + NH +II還原許涮ONH3 + C9O3H6 還朕苗一一刪oII /C c=n-ck W HI

4、Io籃価軸仟物m2o+ RCHCOOHInh2三、實驗器材1. 儀器：試管和試管架、滴管、水浴鍋、酒精燈或電爐、量筒、濾紙片、烘箱、白明膠。2. 材料：蛋白質(zhì)。3. 試劑：卵清蛋白液、0.5%苯酚溶液、1%白明膠液、米倫（Millon）試劑、0.1%茚三酮溶液、濃硝酸、1%硫酸銅溶液、尿素、10%氫氧化鈉溶液。四、實驗步驟（一）雙縮脲反應(yīng)1. 取少許結(jié)晶尿素放在干燥試管中，微火加熱，尿素溶化并形成雙縮脲，釋出的氨可用紅色石蕊試紙試之。 至試管內(nèi)有白色固體出現(xiàn)，停止加熱，冷卻。 然后加10%NaOH溶液1mL 混勻，觀察有無紫色出現(xiàn)。2. 另取一試管，加蛋白質(zhì)溶液10滴，再加10% NaOH溶液

5、10滴及1%CuS溶液4滴，混勻，觀察是否出現(xiàn)紫玫瑰色。（二）蛋白質(zhì)的黃色反應(yīng)在一試管內(nèi)，加蛋白質(zhì)溶液10滴及濃硝酸34滴，加熱，冷卻后再加10%NaOH溶液5 滴，觀察顏色反應(yīng)。（三）米倫氏反應(yīng)1. 用苯酚做實驗：取0.5%苯酚溶液1mL于試管中，加米倫試劑約 0.5mL（米倫試劑含有硝酸，如加入量過多，能使蛋白質(zhì)呈黃色， 加入量不超過試液體積的1/51/4),小心加熱,溶液即出現(xiàn)玫瑰紅色。2. 用蛋白質(zhì)溶液做實驗：取 2mL 蛋白質(zhì)溶液，加 0.5mL 米倫試劑，此時出現(xiàn)蛋白質(zhì)的 沉淀(因試劑含汞鹽及硝酸之故 )，小心加熱，凝固之蛋白質(zhì)出現(xiàn)紅色。(四) 茚三酮反應(yīng)取 1mL 蛋白質(zhì)溶液置于試管中，加 2 滴茚三酮試劑，加熱至沸，即有藍紫色出現(xiàn)，此 反應(yīng)必須在 pH57 進行。五、注意事項1. 硫酸銅不能多加，否則將產(chǎn)生藍色的Cu(0H)2。此外在堿溶液中氨或銨鹽與銅鹽作用生成深藍色的絡(luò)離子 Cu(NH3) 42+，妨礙此顏色反應(yīng)的觀察。2. 蛋白質(zhì)溶液中如含有大量無機鹽， 可與汞產(chǎn)生沉淀從而喪失試劑的作用， 如此試劑不能測定尿中的蛋白質(zhì)。另外試液中還不能含有fQ、醇或堿，因它們能使試劑中的汞變成氧化汞