微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室沙門菌屬標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室沙門菌屬標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 概述 沙門菌屬是一大群寄生于人和動(dòng)物腸道中的形態(tài)、培養(yǎng) 特性、生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造相似的革蘭陰性桿菌，其血清型 別繁多、抗原復(fù)雜的腸道病原菌，分為 6個(gè)亞屬、 2200 種以 上的血清型。傷寒沙門菌屬亞屬 I ，多價(jià) O 抗血清 D 群，是 臨床上最為重要的沙門菌。2. 標(biāo)本類型糞便、血液等額標(biāo)本。3. 鑒定3.1 形態(tài)與染色：革蘭陰性桿菌，菌體細(xì)長(zhǎng)，大小為（0.71.5um） x （25um）。有周鞭毛，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。3.2 培養(yǎng)特性： 在麥康凱瓊脂平板上形成無(wú)色、 透明的 菌落；SS瓊脂平板上呈無(wú)色、 透明，但大部分菌落中央呈黑 色（產(chǎn)H2S）；在

2、XLD瓊脂平板上也產(chǎn)生中央黑色的菌落 （產(chǎn) H2S）； HE 瓊脂平板上菌落呈藍(lán)綠色。 CHROMagar 顯色培 養(yǎng)基上呈紫色菌落。 半固體瓊脂中均勻混濁生長(zhǎng)， 無(wú)穿刺線。3.3 生化反應(yīng)：氧化酶試驗(yàn)陰性， TSI 為 K/A ；發(fā)酵葡 萄糖，不發(fā)酵乳糖； IMViC-+- 或-+-+ ， H2S 試驗(yàn)陽(yáng)性或陰性， 動(dòng)力、賴氨酸脫羧酶和硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性， 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶、 尿素酶試驗(yàn)陰性，氰化鉀（ KCN ）培養(yǎng)基不生長(zhǎng)。3.4 鑒別要點(diǎn)：3.4.1 本菌特征：鑒別平板上無(wú)色透膽或半透明的菌落，TSI為KA , H2S陽(yáng)性或陰性，有動(dòng)力，IMVQ-+-或-+-+ , 尿素酶試驗(yàn)陰性。符合上述

3、特性者，可通過(guò)血清凝集試驗(yàn)） 作出診斷。3.4.2 與志賀菌屬的鑒別：少數(shù)傷寒沙門菌在 TSI 上 H2S 陰性，動(dòng)力不明顯，易與志賀菌屬混淆，可用血清凝集 反應(yīng)相鑒別。3.5 操作步驟3.5.1 觀察菌落特征，挑取可疑菌落，做 TSI 試驗(yàn)。參 見(jiàn) 細(xì)菌鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作構(gòu)規(guī)程 。3.5.2 血清學(xué)鑒定 參見(jiàn) 沙門菌血清學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作 規(guī)程 。3.5.3 鑒定 從 SS 瓊脂平板上挑取可疑菌落，用微生 物鑒定儀或傳統(tǒng)生化法進(jìn)行細(xì)菌鑒定。4. 藥敏參見(jiàn) 藥物敏感性試驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 及 CLSI M100-S20 最新版本文件。5. 質(zhì)量控制參見(jiàn) 質(zhì)量管理程序 。6. 檢驗(yàn)結(jié)果解釋與分析 沙門菌的鑒

4、定依賴于傳統(tǒng)或商品化系統(tǒng)生化反應(yīng)和血 清學(xué)兩種方法。若生化反應(yīng)符合沙門菌，但 A-F 多價(jià)血清不凝集，首先考慮是否存在表面抗原（Vi抗原），若有應(yīng)將細(xì)菌制成菌懸疑，放入沸水中加熱15-30分鐘，冷卻后再次做凝集試驗(yàn)。若去除 Vi抗原后仍不凝集，應(yīng)考慮是否為 A-F 以外的菌群，應(yīng)送專業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行鑒定。7臨床意義主要通過(guò)污染食品和水源經(jīng)口感染，引起人類和動(dòng)物的沙門菌病，主要有3種類型。（1）胃腸炎：此型最為常見(jiàn)， 引起輕型和暴發(fā)型腹瀉，伴有發(fā)熱、惡心和嘔吐。（2）菌血癥和敗血癥：多發(fā)生于兒童和免疫力低下的老年人，可經(jīng)血 流到達(dá)組織，導(dǎo)致腦膜炎、心內(nèi)膜炎、膽囊炎、骨髓炎等。往往出現(xiàn)血培養(yǎng)陽(yáng)性而糞便陰性。（3）腸熱癥：表現(xiàn)為發(fā)熱，血培養(yǎng)或肥達(dá)氏反應(yīng)陽(yáng)性。8鑒定流程沙門菌屬參 考 文 獻(xiàn)1 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL23