11發(fā)酵操作規(guī)程

1、單體車間發(fā)酵崗工藝操作規(guī)程 sljh-c-23 第一版 第2次修改 發(fā)酵崗位工藝操作規(guī)程1. 目的及適用范圍1.1 本規(guī)定的目的是嚴(yán)格工藝操作，提高工作質(zhì)量，保證安全文明生產(chǎn)。1.2本規(guī)定適用于發(fā)酵工序消毒、接種、移種、溫度控制、壓力通氣量控制、冷凍、取樣、加熱放罐、輸送的過程控制。2. 相關(guān)文件:無3. 發(fā)酵崗位使用專業(yè)術(shù)語3.1 延滯期：培養(yǎng)基接種以后，細(xì)胞并不立即生長繁殖，其細(xì)胞數(shù)在一定時(shí)期內(nèi)無明顯增加，這一階段稱為延滯期。延滯期是細(xì)胞在環(huán)境改變后表現(xiàn)出來的一個(gè)適應(yīng)階段，這是一個(gè)靜態(tài)到動(dòng)態(tài)的過程，須緩慢控制，即用低轉(zhuǎn)速來控制好溶氧。3.2 對(duì)數(shù)生長期：細(xì)胞經(jīng)過延滯期后適應(yīng)了新環(huán)境，生理狀

2、態(tài)也較為活躍，細(xì)胞開始迅速繁殖，由于細(xì)胞以分裂方式繁殖，細(xì)胞數(shù)目呈幾何級(jí)數(shù)增加，故稱對(duì)數(shù)生長期。進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期可提高轉(zhuǎn)速滿足菌種對(duì)氧的高呼吸要求。3.3 穩(wěn)定期：隨著細(xì)胞的生長繁殖，培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)漸趨耗盡，而代謝產(chǎn)物的逐漸增多，以及菌生長引起周圍環(huán)境條件（如ph值、溫度等）的變化，使的細(xì)胞的繁殖速度逐漸降低，當(dāng)細(xì)胞的繁殖速率與死亡速率相等時(shí)，細(xì)胞生長進(jìn)入穩(wěn)定期，細(xì)胞濃度達(dá)到最大。3.4 衰亡期：培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分耗盡，代謝產(chǎn)物大量堆積，這時(shí)能夠繼續(xù)繁殖的細(xì)胞數(shù)越來越少直至為零，而死亡的細(xì)胞則越來越多，即活細(xì)胞數(shù)顯著下降，故此時(shí)期稱為衰亡期。3.5 球狀菌：球狀菌又可細(xì)分為單球菌、雙球菌、四連球

3、菌、八疊球菌、鏈球菌、葡萄球菌。3.6 桿狀菌：3.6.1 按菌的長短細(xì)分為長桿菌和短桿菌。3.6.2 按菌的粗細(xì)細(xì)分為粗桿菌和細(xì)桿菌。3.6.3 按菌的相連個(gè)數(shù)細(xì)分為單桿菌、雙桿菌、鏈桿菌。3.7 螺旋狀菌：螺旋狀菌又可細(xì)分為弧菌和螺旋菌。注：芽孢菌（又稱內(nèi)生孢子）不具有分類學(xué)上的意義，其只是細(xì)菌（一般為桿菌，球菌也有）在生長過程中細(xì)胞內(nèi)部產(chǎn)生了一些圓狀或橢圓狀的空心，以抵抗不良環(huán)境對(duì)其的影響。4. 職責(zé)：4.1 認(rèn)真執(zhí)行本公司各項(xiàng)管理規(guī)定和規(guī)章制度。4.2 嚴(yán)格按單體操作規(guī)程和設(shè)備操作規(guī)程操作，嚴(yán)禁超溫、超壓，違章操作。4.3 對(duì)本崗所有設(shè)備安全負(fù)責(zé)，定期對(duì)設(shè)備進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，冬季做好管線、

4、設(shè)備的防凍凝工作。4.4 控制好發(fā)酵的溫度、壓力、轉(zhuǎn)速，發(fā)酵的染菌率。按時(shí)做好取樣、鏡檢等工作。4.5 提供足量的發(fā)酵液，保證公司生產(chǎn)正常進(jìn)行。4.6 做好本崗運(yùn)行記錄、日志，認(rèn)真詳細(xì)交接班，做好班前班中巡回檢查并掛牌，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)處理、匯報(bào)。4.7 對(duì)停水、電、汽、風(fēng)等事故及時(shí)處理。4.8 正確使用消防設(shè)施，定期對(duì)消防設(shè)施進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)。4.9保持值班室及衛(wèi)生區(qū)干凈整潔、無雜物。4.10 領(lǐng)導(dǎo)交辦的其他工作。5. 發(fā)酵操作工藝流程冷凍水進(jìn)冷凍水進(jìn)蒸汽進(jìn)蒸汽一級(jí)冷確器二級(jí)冷卻器冷凍水出冷凍水出蒸汽排凝來自動(dòng)力空氣排空氮?dú)庹羝羝羝羝?排污蒸汽取樣口20進(jìn)水28進(jìn)水排污20進(jìn)水去發(fā)酵液儲(chǔ)罐20

5、進(jìn)水32進(jìn)水32進(jìn)水28進(jìn)水絲網(wǎng)分離器二級(jí)儲(chǔ)罐一級(jí)儲(chǔ)罐三級(jí)儲(chǔ)罐旋分總過濾器發(fā)酵工段工藝流程圖5.1種子罐的操作流程5.1.1種子罐的空消5.1.1.1 打開加料口，用自來水將種子罐沖洗干凈，封閉加料口。打開種子罐排污閥，打開種子罐進(jìn)氣閥門，將沖洗水全部壓出。5.1.1.2 檢查各閥門開關(guān)情況，關(guān)閉其它所有閥門，打開夾套排污閥。5.1.1.3 首先通三路蒸汽，打開空氣進(jìn)氣一側(cè)蒸汽一次閥、二次閥，隨后打開相應(yīng)的抗生素閥放掉冷凝水后關(guān)閉小抗生素閥。接著打開空氣進(jìn)氣二次閥以及移種管一側(cè)的蒸汽一次閥、二次閥。打開相應(yīng)的排污閥放掉冷凝水后關(guān)小抗生素閥，打開移種出料一次閥；打開取樣口一側(cè)蒸汽一次閥、二次閥，

6、打開相應(yīng)的排污閥，放掉冷凝水后關(guān)閉排污閥，打開取樣閥。5.1.1.4 罐內(nèi)蒸汽壓力升至0.05mpa后，旋開接種口外蓋，插上針頭，隨后調(diào)整放空閥，使其有適量的蒸汽排出，罐內(nèi)壓力穩(wěn)定在0.150.25mpa之間，消毒半小時(shí)以上。5.1.1.5 種子罐消完后取下針頭，旋上接種口外蓋，關(guān)閉三路蒸汽及放空閥。打開移種出料一次閥和種子罐排污閥，將罐內(nèi)液體壓空后關(guān)閉移種出料一次閥和種子罐排污閥。5.1.1.6 微開放空閥，打開空氣進(jìn)氣一次閥、二次閥對(duì)罐體進(jìn)行保壓操作。（種子罐長久不用或染芽孢菌時(shí)，要加入適量的甲醛悶罐。）5.1.2 種子罐實(shí)消種子罐經(jīng)空消后，根據(jù)生產(chǎn)需求，可以上罐實(shí)消。5.1.2.1 加水

7、：打開加料口，加入自來水110升，依據(jù)所給定的標(biāo)準(zhǔn)加入各種無機(jī)鹽、尿素、酵母膏等培養(yǎng)基，加料完成后關(guān)閉加料口。5.1.2.3更換接種口橡皮塞。5.1.2.4打開夾套排污閥，檢查其他所有閥門是否處于關(guān)閉狀態(tài)，打開夾套蒸汽一次閥和二次閥。對(duì)罐體進(jìn)行預(yù)熱，待溫度升至90后關(guān)閉夾套蒸汽一次閥和二次閥。5.1.2.5 打開放空閥，將種子罐內(nèi)壓力排掉，關(guān)閉放空閥。通三路蒸汽，壓力上升到0.09mpa后開始調(diào)整放空閥，使其有微量的排汽，調(diào)整三路蒸汽進(jìn)汽閥，使罐內(nèi)壓力穩(wěn)定在0.080.11mpa之間，溫度上升至118后開始計(jì)時(shí)，消毒20分鐘后，關(guān)閉三路蒸汽閥。開空氣進(jìn)氣一次閥、二次閥，通氣量盡可能小，調(diào)整放空

8、閥，使罐內(nèi)壓力在0.1mpa左右，關(guān)閉底部排污閥。5.1.2.6 打開冷卻循環(huán)水回水閥，打開冷卻循環(huán)水進(jìn)水閥，對(duì)罐體進(jìn)行降溫。罐溫降至28后，關(guān)閉冷卻循環(huán)水進(jìn)水閥。關(guān)冷卻循環(huán)水回水閥，等待接種。5.1.3 種子罐的接種本操作由菌種室操作人員負(fù)責(zé)，本崗人員配合操作。5.1.4種子罐的培養(yǎng)5.1.4.1 溫度控制：2815.1.4.2 由于隨著微生物的增殖和發(fā)酵會(huì)發(fā)熱、攪拌產(chǎn)熱等，為使罐內(nèi)溫度始終保持最佳，需對(duì)罐內(nèi)進(jìn)行溫度控制。5.1.4.3打開種子罐28度水回水閥，打開28度進(jìn)水閥，檢查種子罐排污閥是否關(guān)閉，檢查種子罐20度水閥門是否關(guān)閉，檢查夾套蒸汽閥是否關(guān)閉。打開28度水泵入口閥門，檢查28

9、度水泵出口閥門是否關(guān)閉，開啟28度水泵，打開28度水泵出口閥門，使正在培養(yǎng)的種子罐溫度控制在281，關(guān)閉種子罐28度水進(jìn)水閥和回水閥。5.1.4.4 種子罐降溫：關(guān)閉種子罐28度水進(jìn)水閥和回水閥，打開種子罐20度水回水閥；打開20度水進(jìn)水閥，進(jìn)行降溫，溫度降到29-30度，降溫操作完畢。關(guān)閉種子罐20度水回水閥；關(guān)閉20度水進(jìn)水閥。打開種子罐28度水回水閥和進(jìn)水閥。5.1.4.5種子罐加熱：關(guān)閉種子罐28度水進(jìn)水閥和回水閥，打開排污閥，依次打開夾套蒸汽一次閥、緩慢打開夾套蒸汽二次閥，對(duì)罐體進(jìn)行加熱。根據(jù)蒸汽壓力控制每次加熱時(shí)間，每次加熱時(shí)間不應(yīng)超過20秒，關(guān)閉蒸汽二次閥，關(guān)閉蒸汽一次閥。溫度恢

10、復(fù)至正常范圍后（時(shí)間為加熱后510分鐘左右），關(guān)閉夾套排污閥，打開種子罐28度水回水閥和進(jìn)水閥。 28度水罐加熱：打開28度水罐盤管的排污閥，待盤管內(nèi)無水流出后緩慢打開盤管上蒸汽閥門。待溫度上升至25-26度時(shí)關(guān)閉盤管上蒸汽閥門，關(guān)閉盤管的排污閥。28度水罐降溫：打開28度水罐盤管循環(huán)水的回流閥，打開循環(huán)水的進(jìn)水閥。待溫度降至28度左右，關(guān)閉循環(huán)水的進(jìn)水閥，關(guān)閉循環(huán)水的回流閥。5.1.4.6 培養(yǎng)罐通氣的目的無菌空氣的通入是為細(xì)菌的生長提供足夠的氧氣。攪拌的目的除了使氧氣溶解的更充分外，可使培養(yǎng)液中微生物均勻地分散在發(fā)酵罐內(nèi)，促進(jìn)傳熱和傳質(zhì)。5.1.4.7通氣量、壓力控制種子罐正常培養(yǎng)狀態(tài)通氣

11、: 通空氣時(shí)空氣進(jìn)氣一次閥全開，通過控制空氣進(jìn)氣二次閥和大排氣閥、小排氣閥，控制通氣量大小。通氣量控制在58m3/h，壓力控制在0.050.01mpa。5.1.4.8 種子罐冷凍狀態(tài)、空消保壓狀態(tài)通氣一般情況下，將大排氣閥和小排氣閥全部關(guān)死后，再將小排氣閥開1/61/3絲（圈），全開空氣進(jìn)氣一次閥，然后通過空氣進(jìn)氣二次閥控制通氣量大小使壓力低于0.2mpa。冷凍、空消保壓狀態(tài)的通氣量要盡可能的小。5.1.4.9 攪拌控制5.1.4.9.1 攪拌電機(jī)的開啟順序5.1.4.9.2 依次檢查攪拌電機(jī)、勵(lì)磁電機(jī)開關(guān)、控制器是否關(guān)閉，勵(lì)磁電機(jī)的變頻是否歸零。5.1.4.9.3開啟順序，依次打開攪拌電機(jī)開

12、關(guān)、勵(lì)磁電機(jī)的開關(guān)，調(diào)整勵(lì)磁電機(jī)變頻旋鈕至所需轉(zhuǎn)速。種子罐正常培養(yǎng)前24小時(shí)轉(zhuǎn)速為零，正常培養(yǎng)24小時(shí)后調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至100 r/min，冷凍狀態(tài)下攪拌維持100 r/min。5.1.5 種子罐取樣種子罐正常培養(yǎng)24小時(shí)后，進(jìn)行取樣鏡檢。取樣時(shí)先開大取樣蒸汽一次閥、打開取樣蒸汽二次閥，使蒸汽均勻、充足地排出，對(duì)取樣口進(jìn)行充分消毒，消毒時(shí)間為10分鐘，確認(rèn)無冷凝水流出。消毒完畢后關(guān)閉取樣蒸汽二次閥，打開取樣閥門，待流出發(fā)酵液溫度正常后取樣4050ml，取樣完畢后關(guān)閉取樣閥門。打開取樣蒸汽二次閥對(duì)取樣口進(jìn)行消毒，消毒10分鐘后關(guān)閉取樣蒸汽二次閥，微開蒸汽一次閥做為蒸汽保護(hù)。5.1.6 種子罐冷凍當(dāng)種子

13、罐培養(yǎng)合格，而不能及時(shí)進(jìn)行移種操作時(shí)，為了抑制菌種的繁殖和生長，避免菌種在無培養(yǎng)基的情況下衰老、死亡，通過降低溫度使菌種處于休眠狀態(tài)，停止生長、繁殖延長保存時(shí)間。關(guān)閉28度水進(jìn)水閥、回水閥，打開20度水回水閥、進(jìn)水閥（20度水泵開啟操作：打開20度水罐的出水閥，打開20度水泵進(jìn)水閥，確保20度水泵出水閥處于關(guān)閉狀態(tài)，開啟20度水泵，打開20度水泵出水閥。20度水罐溫度大于15度時(shí)，需要進(jìn)行降溫處理，打開螺旋板換熱器冷凍水出口閥門，微開螺旋板換熱器冷凍水進(jìn)口閥門，直至20度水罐溫度降至0-15度，關(guān)閉螺旋板換熱器冷凍水進(jìn)口閥門，關(guān)閉螺旋板換熱器冷凍水出口閥門。）對(duì)罐體進(jìn)行降溫，罐內(nèi)冷凍溫度保持1

14、5 。5.1.7 種子罐的培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn) 種子罐培養(yǎng)合格的標(biāo)準(zhǔn)：生物量35，鏡檢無雜菌，繁殖罐實(shí)消完畢后，降溫到28。5.2 繁殖罐的操作流程5.1.1繁殖罐的空消5.1.1.1 打開人孔，用自來水將繁殖罐沖洗干凈，封閉人孔。打開繁殖罐排污閥，開種子罐進(jìn)氣閥門，將沖洗水全部壓出。5.1.1.2檢查各閥門開關(guān)情況，關(guān)閉其它所有閥門，打開夾套排污閥。首先打開空氣進(jìn)氣側(cè)蒸汽一次閥、二次閥，隨后打開相應(yīng)的抗生素閥放掉冷凝水后關(guān)閉小抗生素閥。接著打開空氣進(jìn)氣二次閥以及移種管側(cè)的蒸汽一次閥、二次閥。打開相應(yīng)的排污閥放掉冷凝水后關(guān)小抗生素閥，打開移種出料一次閥；打開取樣口側(cè)蒸汽一次閥、二次閥，打開相應(yīng)的排污閥，放

15、掉冷凝水后關(guān)閉排污閥，打開取樣閥。此過程稱為通三路蒸汽。5.1.1.3當(dāng)罐內(nèi)蒸汽壓力升至0.05mpa后，旋開接種口外蓋，插上針頭。隨后調(diào)整放空閥，使其有適量的蒸汽排出。罐內(nèi)壓力穩(wěn)定在0.150.25mpa之間，消毒半小時(shí)以上。5.1.1.4 種子罐消完后取下針頭，旋上接種口外蓋，關(guān)閉三路蒸汽及放空閥。打開移種出料一次閥和種子罐排污閥，將罐內(nèi)液體壓空后關(guān)閉移種出料一次閥和種子罐排污閥。5.1.1.5 微開放空閥，打開空氣進(jìn)氣一次閥、二次閥對(duì)罐體進(jìn)行保壓操作。（種子罐長久不用或染芽孢菌時(shí)，要加入適量的甲醛悶罐。）5.1.2 繁殖罐實(shí)消繁殖罐經(jīng)空消后，根據(jù)生產(chǎn)需求，可以上罐實(shí)消。5.1.2.1 加

16、水：打開加料口，加入自來水，依據(jù)所給定的標(biāo)準(zhǔn)加入各種無機(jī)鹽、尿素、酵母膏等培養(yǎng)基。加料完成后關(guān)閉加料口。5.1.2.2更換接種口橡皮塞。5.1.2.3打開夾套排污閥，檢查其他所有閥門是否處于關(guān)閉狀態(tài)，打開夾套蒸汽一次閥和二次閥。對(duì)罐體進(jìn)行預(yù)熱，待溫度升至90后關(guān)閉夾套蒸汽一次閥和二次閥。5.1.2.4 打開放空閥，將繁殖罐內(nèi)壓力排掉，關(guān)閉放空閥。通三路蒸汽。壓力上升到0.09mpa后開始調(diào)整放空閥，使其有微量的排汽。調(diào)整三路蒸汽進(jìn)汽閥，使罐內(nèi)壓力穩(wěn)定在0.080.11mpa之間，溫度上升至118后開始計(jì)時(shí)，消毒20分鐘后，關(guān)閉三路蒸汽閥。開空氣進(jìn)氣一次閥、二次閥，通氣量盡可能小，調(diào)整放空閥，使

17、罐內(nèi)壓力在0.1mpa左右，關(guān)閉底部排污閥。5.1.2.5 打開冷卻循環(huán)水回水閥，打開冷卻循環(huán)水進(jìn)水閥，對(duì)罐體進(jìn)行降溫。罐溫降至28后，關(guān)閉冷卻循環(huán)水進(jìn)水閥。關(guān)冷卻循環(huán)水回水閥，等待接種。5.1.3 繁殖罐的接種操作5.1.3.1打開4個(gè)種子罐移種蒸汽一次閥，打開一次閥的小辮子，排凈蒸汽冷凝水，關(guān)閉一次閥小辮子。打開4個(gè)種子罐移種蒸汽二次閥（移種的種子罐蒸汽閥需要開大），微開4個(gè)種子罐移種排污閥，打開移種一次閥小辮子，打開4個(gè)種子罐移種二次閥，打開移種站所有閥門及小辮子（對(duì)應(yīng)的種子罐和繁殖罐全開，其余微開），微開移種站的排污閥，打開3個(gè)繁殖罐移種一次閥，打開移種二次閥的小辮子。消毒2030分鐘

18、。消毒完畢后關(guān)閉關(guān)閉4個(gè)種子罐移種排污閥，關(guān)閉移種站的排污閥。關(guān)閉繁殖罐移種二次閥小辮子，關(guān)閉移種站所有閥門的小辮子，4個(gè)種子罐移種一次閥小辮子。關(guān)閉不需移種的2個(gè)繁殖罐移種一次閥，關(guān)閉移種站的移種不使用的所有閥門，關(guān)閉不需移種的3個(gè)種子罐移種二次閥，關(guān)閉4個(gè)種子罐移種蒸汽二次閥，關(guān)閉4個(gè)種子罐移種蒸汽一次閥。 5.1.3.2停止種子罐攪拌電機(jī)，調(diào)節(jié)空氣進(jìn)氣二次閥升高種子罐罐壓至0.20.3mpa，調(diào)節(jié)空氣進(jìn)氣二次閥降低繁殖罐罐壓至0.04mpa，打開種子罐移種出料一次閥及繁殖罐移種進(jìn)料二次閥進(jìn)行移種。移種完畢后關(guān)閉移種出料一次閥和移種進(jìn)料二次閥，重復(fù)前一操作進(jìn)行消毒，然后關(guān)閉所有與移種有關(guān)的

19、閥門。5.1.4繁殖罐的培養(yǎng)5.1.4.1 隨著微生物的增殖和發(fā)酵會(huì)發(fā)熱、攪拌產(chǎn)熱等，為使罐內(nèi)溫度始終保持最佳，需對(duì)罐內(nèi)進(jìn)行溫度控制：5.1.4.2打開繁殖罐28度水回水閥，打開28度進(jìn)水閥，檢查繁殖罐排污閥是否關(guān)閉，檢查繁殖罐20度水閥門和循環(huán)水閥門是否關(guān)閉，檢查夾套蒸汽閥是否關(guān)閉。打開28度水泵入口閥門，檢查28度水泵出口閥門是否關(guān)閉，開啟28度水泵，打開28度水泵出口閥門。將繁殖罐溫度控制在281，關(guān)閉繁殖罐28度水進(jìn)水閥和回水閥。5.1.4.3 繁殖罐降溫：關(guān)閉繁殖罐28度水進(jìn)水閥和回水閥，打開繁殖罐20度水回水閥；打開20度水進(jìn)水閥，進(jìn)行降溫，溫度降到29-30度，降溫操作完畢。關(guān)閉

20、繁殖罐20度水回水閥，關(guān)閉20度水進(jìn)水閥。打開繁殖罐28度水回水閥和進(jìn)水閥。5.1.4.4繁殖罐加熱：關(guān)閉繁殖罐28度水進(jìn)水閥和回水閥，打開排污閥，依次打開夾套蒸汽一次閥、緩慢打開夾套蒸汽二次閥，對(duì)罐體進(jìn)行加熱。視蒸汽壓力狀況控制每次加熱時(shí)間，每次加熱時(shí)間不應(yīng)超過20秒，關(guān)閉蒸汽二次閥，關(guān)閉蒸汽一次閥。溫度恢復(fù)至正常范圍后（時(shí)間大約需要加熱后510分鐘左右），關(guān)閉夾套排污閥，打開繁殖罐28度水回水閥和進(jìn)水閥。 5.1.4.5通氣量、壓力控制：繁殖罐正常培養(yǎng)狀態(tài)通氣: 通空氣時(shí)空氣進(jìn)氣一次閥全開，通過控制空氣進(jìn)氣二次閥和大排氣閥、小排氣閥，控制通氣量大小。通氣量控制在20-50m3/h，壓力控制

21、在0.050.01mpa。5.1.4.6 繁殖罐冷凍狀態(tài)、空消保壓狀態(tài)通氣：一般情況下，將大排氣閥和小排氣閥全部關(guān)死后，再將小排氣閥開1/61/3絲（圈），全開空氣進(jìn)氣一次閥，然后通過空氣進(jìn)氣二次閥控制通氣量大小使壓力低于0.2mpa。冷凍、空消保壓狀態(tài)的通氣量要盡可能的小。5.1.4.7 攪拌控制5.1.4.7.1 攪拌電機(jī)的開啟順序5.1.4.7.2檢查立磁電機(jī)的變頻是否歸零。5.1.4.7.3開啟順序：開始培養(yǎng)后依次打開攪拌電機(jī)開關(guān)、立磁電機(jī)的開關(guān)，調(diào)整立磁電機(jī)變頻旋鈕至所需轉(zhuǎn)速。調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至100 r/min，冷凍狀態(tài)下攪拌維持100 r/min。5.1.5 取樣繁殖罐正常培養(yǎng)8小時(shí)后，

22、進(jìn)行取樣鏡檢。取樣時(shí)先開大取樣蒸汽一次閥、打開取樣蒸汽二次閥，使蒸汽均勻、充足地排出，對(duì)取樣口進(jìn)行充分消毒，消毒時(shí)間為10分鐘，確認(rèn)無冷凝水流出。消毒完畢后關(guān)閉取樣蒸汽二次閥，打開取樣閥門，待流出發(fā)酵液溫度正常后取樣4050ml，取樣完畢后關(guān)閉取樣閥門。打開取樣蒸汽二次閥對(duì)取樣口進(jìn)行消毒，消毒10分鐘后關(guān)閉取樣蒸汽二次閥，微開蒸汽一次閥做為蒸汽保護(hù)。5.1.6 冷凍繁殖罐培養(yǎng)合格，而不能及時(shí)進(jìn)行移種操作，為了抑制菌種的繁殖和生長，避免菌種在無培養(yǎng)基的情況下衰老、死亡，通過降低溫度使菌種處于休眠狀態(tài)，停止生長、繁殖延長保存時(shí)間。操作步驟：關(guān)閉28度水進(jìn)水閥、回水閥，打開20度水回水閥、進(jìn)水閥（2

23、0度水泵開啟操作：打開20度水罐的出水閥，打開20度水泵進(jìn)水閥，確保20度水泵出水閥處于關(guān)閉狀態(tài)，開啟20度水泵，打開20度水泵出水閥。20度水罐溫度大于15度時(shí)，需要進(jìn)行降溫處理，打開螺旋板換熱器冷凍水出口閥門，微開螺旋板換熱器冷凍水進(jìn)口閥門，直至20度水罐溫度降至0-15度，關(guān)閉螺旋板換熱器冷凍水進(jìn)口閥門，關(guān)閉螺旋板換熱器冷凍水出口閥門。）對(duì)罐體進(jìn)行降溫，罐內(nèi)冷凍溫度保持15 。種子罐、繁殖罐、發(fā)酵罐在正常培養(yǎng)過程中壓力控制在0.050.01 mpa，溫度控制在281，菌種在生長過程中所能利用的氧是溶解于培養(yǎng)基中的溶解氧，溶氧值主要通過轉(zhuǎn)速來控制，而通氣量在菌種培養(yǎng)過程中一般保持不變，種子

24、罐為7.0 m3/h，繁殖罐為40 m3/h，發(fā)酵罐例外（初期為350 m3/h，等糖降至1.0-1.3%時(shí)通氣量降為150 m3/h）。5.2 發(fā)酵罐的操作步驟5.2.1 消毒部分5.2.1.1發(fā)酵罐的空消5.2.1.1.1打開人孔，將發(fā)酵罐沖洗干凈，封閉人孔。打開發(fā)酵罐排污閥，打開空氣進(jìn)氣一次閥和二次閥，將沖洗水壓出。關(guān)閉空氣進(jìn)氣一二次閥，關(guān)閉發(fā)酵罐排污閥。5.2.1.1.2檢查各閥門是否關(guān)閉，打開夾套排污閥，關(guān)閉其它所有閥門。 打開空氣進(jìn)氣側(cè)的蒸汽一次閥、二次閥，打開相應(yīng)抗生素閥，放掉冷凝水，關(guān)閉小抗生素閥，打開空氣進(jìn)氣二次閥；打開打料管側(cè)蒸汽一次閥、二次閥，開相應(yīng)排污閥放掉冷凝水后關(guān)閉

25、排污閥，打開打料一次閥；打開取樣口側(cè)蒸汽一次閥、二次閥，打開排污閥放掉冷凝水，關(guān)閉排污閥，打開取樣閥。本操作統(tǒng)稱為通三路蒸汽。5.2.1.1.3 罐內(nèi)蒸汽壓力升至0.05mpa后，打開移種二次閥及其小辮子。5.2.1.1.4 調(diào)整大放空閥和小放空閥，使其有適量的蒸汽排出，罐內(nèi)壓力穩(wěn)定在0.10.2mpa之間，消毒半小時(shí)以上。5.2.1.1.5 關(guān)閉移種二次閥及其小辮子，關(guān)閉三路蒸汽及大放空閥和小放空閥；打開空氣進(jìn)氣二次閥及其排污閥將罐內(nèi)液體壓空后，及時(shí)關(guān)閉空氣進(jìn)氣二次閥及排污閥。5.2.1.1.6 微開大放空閥和小放空閥，打開空氣進(jìn)氣一次閥、二次閥對(duì)罐體進(jìn)行保壓。5.2.1.2 發(fā)酵罐實(shí)消5.

26、2.1.2.1空消完成后，在發(fā)酵罐中加入自來水8m3，然后加入各種無機(jī)鹽、尿素、酵母膏等培養(yǎng)基，并調(diào)整ph值在7.27.5之間，加完料后將人孔蓋緊固。5.2.1.2.3 開攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速在3090rpm之間。5.2.1.2.4打開夾套排污閥，關(guān)閉其它所有閥門。打開夾套蒸汽一二次閥，對(duì)罐體進(jìn)行預(yù)熱，待溫度升至90時(shí)關(guān)閉夾套蒸汽一二次閥。5.2.1.2.5 打開大放空閥，將罐內(nèi)壓力排掉，關(guān)閉大放空閥。通三路蒸汽。壓力上升到0.07mpa后微開大放空閥和小放空閥，并使其有適量的蒸汽排出。調(diào)整三路蒸汽，在確保各路均有蒸汽流過的前提下，罐內(nèi)壓力穩(wěn)定在0.100.11mpa之間。溫度上升至118后開始計(jì)時(shí)

27、，溫度控制在118121之間，消毒20分鐘。關(guān)閉三路蒸汽及大放空閥和小放空閥。開空氣進(jìn)氣一次閥、二次閥，使罐內(nèi)壓力升高至0.2mpa左右。關(guān)閉空氣進(jìn)氣二次閥。5.2.1.2.6 關(guān)閉夾套排污閥。提高攪拌轉(zhuǎn)速至80100rpm左右，打開冷卻循環(huán)水回水閥，打開冷卻循環(huán)水進(jìn)水閥，對(duì)罐體進(jìn)行降溫。 5.2.1.2.7當(dāng)罐內(nèi)壓力降至0.09mpa后，開空氣進(jìn)氣二次閥將壓力提高至0.2mpa，關(guān)閉進(jìn)氣二次閥。重復(fù)這一步驟直至罐溫降至60左右。5.2.1.2.8 打開空氣進(jìn)氣二次閥，通氣量盡量小，調(diào)整大放空閥和小放空閥使罐壓穩(wěn)定在0.1mpa左右。5.2.1.2.9 罐溫降至28后關(guān)閉冷卻循環(huán)水進(jìn)水閥，關(guān)閉

28、冷卻循環(huán)水回水閥。5.2.2 繁殖罐的移種操作 5.2.2.1繁殖罐培養(yǎng)合格的標(biāo)準(zhǔn)：生物量35，鏡檢無雜菌，發(fā)酵罐實(shí)消完畢后，降溫到28。5.2.2.2繁殖罐移種具體操作步驟5.2.2.2.1打開3個(gè)繁殖罐移種蒸汽一次閥，打開一次閥的小辮子，排凈蒸汽冷凝水，關(guān)閉一次閥小辮子。打開3個(gè)繁殖罐移種蒸汽二次閥（移種的種子罐蒸汽閥需要開大），微開3個(gè)繁殖罐移種排污閥，打開移種一次閥小辮子，打開4個(gè)繁殖罐移種二次閥，打開移種站所有閥門及小辮子（對(duì)應(yīng)的繁殖罐和發(fā)酵罐全開，其余微開），微開移種站的排污閥，打開4個(gè)發(fā)酵罐移種二次閥，打開移種一次閥的小辮子。消毒2030分鐘。消毒完畢后關(guān)閉關(guān)閉3個(gè)繁殖罐移種排污

29、閥，關(guān)閉移種站的排污閥。關(guān)閉發(fā)酵罐移種一次閥小辮子，關(guān)閉移種站所有閥門的小辮子，3個(gè)繁殖罐移種一次閥小辮子。關(guān)閉不需移種的3個(gè)發(fā)酵罐移種一次閥，關(guān)閉移種站的移種不使用的所有閥門，關(guān)閉不需移種的2個(gè)繁殖罐移種二次閥，關(guān)閉3個(gè)繁殖罐移種蒸汽二次閥，關(guān)閉3個(gè)繁殖罐移種蒸汽一次閥。5.2.2.2.2 停止繁殖罐攪拌電機(jī)，調(diào)節(jié)空氣進(jìn)氣二次閥升高繁殖罐罐壓至0.20.3mpa，調(diào)節(jié)空氣進(jìn)氣二次閥降低發(fā)酵罐罐壓至0.04mpa，打開繁殖罐移種出料一次閥及發(fā)酵罐移種進(jìn)料二次閥進(jìn)行移種。移種完畢后關(guān)閉移種出料一次閥和移種進(jìn)料二次閥，重復(fù)前一操作進(jìn)行消毒，然后關(guān)閉所有與移種有關(guān)的閥門。5.2.3 發(fā)酵罐的培養(yǎng)5.

30、2.3.1發(fā)酵罐的溫度控制5.2.3.1.1加熱：檢查發(fā)酵罐循環(huán)水進(jìn)水閥門和回水閥們是否關(guān)閉，打開夾套放空閥，依次打開相應(yīng)的加熱蒸汽一次閥、緩慢開啟二次閥，對(duì)罐體進(jìn)行加熱。視蒸汽壓力狀況控制每次加熱時(shí)間，每次加熱時(shí)間不應(yīng)超過20秒。溫度恢復(fù)至正常范圍后（時(shí)間大約需要加熱后510分鐘左右）。加熱完成后關(guān)閉蒸汽二次閥，關(guān)閉蒸汽一次閥，關(guān)閉夾套排污閥。5.2.3.1.2 降溫：降溫前關(guān)閉發(fā)酵罐夾套放空閥，關(guān)閉發(fā)酵罐進(jìn)水排污閥。打開發(fā)酵罐循環(huán)水的回水閥門，打開循環(huán)水的進(jìn)水閥門（開度在1/31/2圈），進(jìn)行降溫，溫度降到29-30度，降溫操作完畢。關(guān)閉循環(huán)水進(jìn)水閥，關(guān)閉循環(huán)水回水閥。5.2.3.1.3

31、采用上述步驟進(jìn)行溫度控制，將發(fā)酵罐溫度控制在281。5.2.3.2 通氣量、壓力控制5.2.3.2.1 發(fā)酵罐正常培養(yǎng)狀態(tài)通氣: 通空氣時(shí)空氣進(jìn)氣一次閥全開，然后通過空氣進(jìn)氣二次閥控制通氣量大小。通氣量控制在300-350m3/h，壓力控制在0.050.01mpa。生物量達(dá)到6個(gè)后逐漸降低通氣量至150m3/h。5.2.3.2.2 發(fā)酵罐冷凍狀態(tài)、空消后保壓狀態(tài)通氣: 一般情況下，將大排氣閥和小排氣閥全部關(guān)閉后，再將小排氣閥開1/61/3絲（圈），全開空氣進(jìn)氣一次閥，然后通過空氣進(jìn)氣二次閥控制通氣量大小，使壓力低于0.15mpa。冷凍、空消保壓狀態(tài)的通氣量要盡可能的小。5.2.3.3 攪拌控制

32、:5.2.3.3.1 攪拌電機(jī)的開啟順序：開始培養(yǎng)后檢查立磁電機(jī)的變頻是否歸零。依次打開攪拌電機(jī)開關(guān)、立磁電機(jī)的開關(guān)，調(diào)整立磁電機(jī)變頻旋鈕至100 r/min。5.2.3.3.2 發(fā)酵罐攪拌轉(zhuǎn)速：正常培養(yǎng)下的發(fā)酵罐控制在100r/min，生物量升至5后逐漸降低至60r/min,冷凍狀態(tài)下攪拌維持在60r/min。5.2.3.4冷凍5.2.3.4.1 冷凍條件：發(fā)酵罐培養(yǎng)各項(xiàng)參數(shù)合格，在短時(shí)間內(nèi)不能輸送到催化工段，為了抑制菌種的繁殖和生長，避免菌種的衰老、死亡和酶活的降低，通過降低溫度使菌體處于休眠狀態(tài)，停止生長繁殖，延長保存時(shí)間。5.2.3.4.2 操作步驟：檢查發(fā)酵罐夾套排污閥和發(fā)酵罐進(jìn)水排

33、污閥是否關(guān)閉，打開20度水的回水閥，打開20度水的進(jìn)水閥，對(duì)罐體進(jìn)行降溫，將罐溫降至低于15。5.2.3.4.3 發(fā)酵罐取樣操作流程發(fā)酵罐消后及2:00、8:00、14:00、20:00定時(shí)取樣化驗(yàn)。取樣時(shí)先開大取樣蒸汽一次閥、打開取樣蒸汽二次閥，使蒸汽均勻、充足地排出，對(duì)取樣口進(jìn)行充分消毒，消毒時(shí)間為10分鐘，確認(rèn)無冷凝水流出。消毒完畢后關(guān)閉取樣蒸汽二次閥，打開取樣閥門，待流出發(fā)酵液溫度正常后取樣4050ml，取樣完畢后關(guān)閉取樣閥門。打開取樣蒸汽二次閥對(duì)取樣口進(jìn)行消毒，消毒10分鐘后關(guān)閉取樣蒸汽二次閥，微開蒸汽一次閥做為蒸汽保護(hù)。5.2.4發(fā)酵液輸送操作步驟5.2.4.1發(fā)酵罐發(fā)酵液達(dá)到質(zhì)量

34、要求后，可以向催化工段輸送，輸送前通知催化反應(yīng)崗。5.2.4.2 停止發(fā)酵罐的攪拌電機(jī)，關(guān)閉大排氣閥和小排氣閥，調(diào)節(jié)空氣進(jìn)氣二次閥將發(fā)酵罐內(nèi)壓力提高至0.25mpa，打開打料一次閥、二次閥向發(fā)酵液儲(chǔ)罐打料。當(dāng)壓力降至0.11mpa后，重復(fù)這一操作，直至將發(fā)酵液全部打到催化工段。5.2.4.3打料完畢后關(guān)閉打料一次閥，微開打料線上排污閥，打開打料線上蒸汽一次閥、蒸汽二次閥對(duì)打料管進(jìn)行沖洗，沖洗時(shí)間為5分鐘。關(guān)閉打料線上蒸汽二次閥、蒸汽一次閥，關(guān)閉打料線上的排污閥。5.2.4.4用純水沖洗發(fā)酵罐，備用。5.3 種子罐、發(fā)酵罐的加熱放罐操作步驟:當(dāng)種子罐（發(fā)酵罐）染菌或培養(yǎng)達(dá)不到生產(chǎn)要求時(shí)，需要對(duì)罐

35、內(nèi)發(fā)酵液加熱放罐。加熱是為了殺死罐內(nèi)培養(yǎng)的細(xì)菌，加熱溫度要求達(dá)到80以上。避免細(xì)菌排放到外界環(huán)境后，產(chǎn)生噬菌體影響發(fā)酵的生產(chǎn)。5.3.1種子罐加熱放罐: 關(guān)閉空氣進(jìn)氣二次閥，打開大排氣閥和小排氣閥將罐內(nèi)壓力降為零以后關(guān)閉大排氣閥和小排氣閥；確保冷卻循環(huán)水回水閥關(guān)閉，打開底部排污閥，打開空氣進(jìn)氣側(cè)蒸汽一次閥和預(yù)熱閥對(duì)罐體進(jìn)行加熱，加熱一次閥和預(yù)熱閥開度要小，控制蒸汽用量，并注意避免夾套內(nèi)壓力高于0.15mpa，待溫度升至80后關(guān)閉加熱一次閥和預(yù)熱閥；調(diào)節(jié)空氣進(jìn)氣二次閥和大排氣閥、小排氣閥，調(diào)整罐內(nèi)壓力達(dá)到0.10.15mpa。隨后關(guān)閉空氣進(jìn)氣二次閥和大小排氣閥，打開移種出料一次閥和移種側(cè)蒸汽排污

36、閥將罐內(nèi)液體放凈；沖洗罐內(nèi)殘余發(fā)酵液后將罐內(nèi)所有液體排凈。5.3.2發(fā)酵罐加熱放罐：關(guān)閉空氣進(jìn)氣二次閥，打開大小排氣閥將罐內(nèi)壓力降為零，關(guān)閉大小排氣閥；關(guān)閉冷卻循環(huán)水回水閥，關(guān)閉夾套放空閥，打開底部排污閥，關(guān)閉冷卻循環(huán)水進(jìn)水閥；打開空氣進(jìn)氣側(cè)蒸汽一次閥和預(yù)熱閥對(duì)罐體進(jìn)行加熱，加熱一次閥和預(yù)熱閥開度要小，控制蒸汽用量，并注意避免夾套內(nèi)壓力高于0.15mpa。待溫度升至80后關(guān)閉加熱一次閥和預(yù)熱閥；通過空氣進(jìn)氣二次閥和大小排氣閥調(diào)整罐內(nèi)壓力在0.10.15mpa之間，隨后關(guān)閉空氣進(jìn)氣二次閥和大小排氣閥，打開打料一次閥和打料管側(cè)排污閥將罐內(nèi)液體放凈；沖洗罐內(nèi)殘余發(fā)酵液后將罐內(nèi)所有液體排凈。5.4鏡檢

37、和生物量的測(cè)定:為確定菌種生長狀況，正確安排生產(chǎn)，種子罐在移種前須進(jìn)行鏡檢確定培養(yǎng)狀況。各罐染菌后應(yīng)取樣鏡檢確定染菌性質(zhì)，并分析染菌原因。5.4.1 取樣完畢后，取離心試管兩支，一支加入10ml發(fā)酵液，另一支加入清水并在天平上配平后放入離心機(jī)，離心轉(zhuǎn)速在3500rpm,離心1520分鐘后讀取生物量。5.4.2 離心過程中準(zhǔn)備好酒精燈、干凈的載玻片、香柏油、二甲苯、結(jié)晶紫。5.4.3 點(diǎn)燃酒精燈，對(duì)接種環(huán)進(jìn)行充分消毒后蘸取適量發(fā)酵液并均勻涂布在載玻片中央，將載玻片晾干（可適當(dāng)將載玻片經(jīng)過酒精燈外焰，以加快晾干速度，但不允許放在火焰上烤）。5.4.4 在涂有發(fā)酵液的部分滴上一滴結(jié)晶紫，染色30秒左

38、右（根據(jù)培養(yǎng)時(shí)間的長短確定染色時(shí)間），用純水沖洗，直到無結(jié)晶紫沿載玻片流下，將載玻片晾干（可適當(dāng)將載玻片經(jīng)過酒精燈外焰，以加快晾干速度，但不允許放在火焰上烤）。5.4.5 選取染色較好的部位滴上一滴香柏油，放在顯微鏡下觀察。5.4.6整理儀器、藥品，將操作臺(tái)恢復(fù)正常。5.5發(fā)酵工段注意事項(xiàng)5.5.1冷凍、空消保壓狀態(tài)的通氣量要盡可能的小，壓力低于在0.2mpa。5.5.2冷凍降溫時(shí)的溫度要求：不高于15，不得低于4。5.5.3加熱放罐注意事項(xiàng)：最終加熱溫度必須達(dá)到80以上。加熱一次閥和預(yù)熱閥開度要小，控制蒸汽用量，并注意避免夾套內(nèi)壓力高于0.15mpa。5.5.4發(fā)酵罐取樣化驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意取樣時(shí)保

39、持發(fā)酵液溫度正常。5.5.5不同類型的菌，形態(tài)上的差異很大，但也有一些很接近，觀察要仔細(xì)，多選取幾個(gè)視野進(jìn)行觀察。5.5.6蒸汽溫度控制：調(diào)整空氣加熱器蒸汽進(jìn)汽旁通閥門，根據(jù)現(xiàn)有空氣用量及天氣狀況控制閥門開度。對(duì)進(jìn)入總過濾器前的空氣需進(jìn)行加熱處理，使其溫度控制在6080之間，空氣溫度嚴(yán)禁超過100，種子罐和發(fā)酵罐的空氣進(jìn)口溫度要求低于40。5.5.7放水：打開空氣儲(chǔ)罐底部排污閥進(jìn)行冷凝液體的排放、開啟閥門時(shí)不要開啟太長，迅速開啟后約15秒左右，再迅速關(guān)閉，避免放水時(shí)間長，造成空氣儲(chǔ)罐壓力降低，影響空氣系統(tǒng)正常運(yùn)行。放水完畢后及時(shí)關(guān)閉各排污閥。放水時(shí)間間隔為一小時(shí)。陰雨天氣或空氣濕度大時(shí)應(yīng)縮短放

40、水間隔時(shí)間30分鐘左右放水一次。5.6總過濾器的消毒5.6.1消毒前先把蒸汽冷凝水放干凈，關(guān)閉空氣進(jìn)氣閥和空氣出氣閥，打開總過濾器消毒蒸汽一次、二次閥，打開總過濾器放空閥和底閥。5.6.2調(diào)節(jié)蒸汽進(jìn)口閥，控制消毒壓力在0.150.2mpa，消毒時(shí)間在2小時(shí)左右。5.6.3打開空氣進(jìn)氣閥開始進(jìn)行吹干，吹干壓力前10小時(shí)控制在0.1 mpa左右，吹干一星期左右。（注意剛開始吹干時(shí)，通氣量和壓力不能過高，防止吹著里面的棉花）5.6.4 總過濾器在生產(chǎn)過程中需要每小時(shí)巡檢一次，每次巡檢必須排凈各空氣儲(chǔ)罐內(nèi)的積水，避免因各罐積水導(dǎo)致空氣潮濕引起發(fā)酵各罐的染菌。5.7發(fā)酵液培養(yǎng)的質(zhì)量指標(biāo)：酶活600萬單位

41、； ph值4 .48；氨基氮50；糖含量0.4；生物量6-12;鏡檢無雜菌。6.工藝事故預(yù)案事故現(xiàn)象事故原因解決措施注意事項(xiàng)培養(yǎng)罐內(nèi)空氣壓力急速下降或波動(dòng)1) 停電2) 動(dòng)力車間空壓機(jī)系統(tǒng)故障3) 壓縮空氣管線改造4) 壓縮空氣管線上的減壓閥壞或其他設(shè)備維修需?？諝?) 聚合車間卸料操作導(dǎo)致空氣壓力波動(dòng)1) 依次迅速關(guān)閉所有運(yùn)行罐體的大小排氣閥；2) 視各罐壓力上升情況，當(dāng)罐內(nèi)壓力升高到0.1mpa時(shí)關(guān)閉相應(yīng)罐的空氣進(jìn)氣二次閥、一次閥；3) 所有運(yùn)行罐體的保壓完畢后，關(guān)閉所有超濾空氣進(jìn)氣閥和出氣閥；（操作目的在于在最短的時(shí)間內(nèi)使各罐達(dá)到保壓要求，以上三步視各罐具體情況可合理調(diào)整操作順序）4) 關(guān)閉所有總過濾器出氣二次閥、一次閥，關(guān)閉其上部排空閥及底部排污閥，關(guān)閉所有總過濾器進(jìn)氣閥；5) 所有電器控制設(shè)備如調(diào)速控制器指針歸零并使控制開關(guān)處于關(guān)閉狀態(tài)。所有總過濾器均要保壓。來電空氣、蒸汽恢復(fù)正常供應(yīng)后，恢復(fù)停電前生產(chǎn)狀態(tài)；并必須檢查保證在前一級(jí)向后一級(jí)供氣時(shí)前一級(jí)內(nèi)壓力高于后一級(jí)內(nèi)壓力，禁止在閥前壓力低于閥后壓力的情況下開啟閥門（如在向發(fā)酵罐內(nèi)通氣時(shí)必須保證空氣進(jìn)氣二次閥閥前壓力高于閥后壓力即罐內(nèi)壓力）。種子罐或發(fā)酵罐液位過高1） 實(shí)消時(shí)蒸汽含水量過高2）