常用緩沖液配置

1、實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案1)1 m tris-hcl (ph7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：1 m tris-hcl配制量：1 l配制方法：1 .稱量121.1 g tris 置于1 l燒杯中。2 .加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的 ph值。ph值濃hcl7.4約 70ml7.6約 60ml8.0約 42ml4.將溶液定容至1 l。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 ph值，因?yàn)閠ris溶液的ph值隨溫度的變化差異很大, 溫度每升高1 c ,溶液的ph值大約降低0.03個(gè)單位。2)10 xte buffer (ph

2、7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：100 mm tris-hcl, 10 mm edta配制量：1 l配制方法：1.量取下列溶液，置于1 l燒杯中。1mtris hcl buffer (ph7.4, 7.6 , 8.0 )100ml500mm edta(ph8.0)20ml2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。3 .將溶液定容至1 l后，高溫高壓滅菌4 .室溫保存。3)1.5 m tris-hcl (ph8.8)組份濃度：1.5 m tris-hcl配制量：1 l配制方法：1.稱量181.7 g tris 置于1 l燒杯中2.加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?. 用

3、濃鹽酸調(diào)節(jié)ph值至8.8。4. 將溶液定容至1 l 。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 ph值，因?yàn)閠ris溶液的ph值隨溫度的變化差異很大, 溫度每升高1 c ,溶液的ph值大約降低0.03個(gè)單位。4)3 m 醋酸鈉 (ph5.2)組份濃度： 3m 醋酸鈉配制量： 100ml配制方法：1 .稱量40.8g naac - 3h2os于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙? .加入冰醋酸調(diào)節(jié)ph值至5.23 . 加去離子水將溶液定容至100ml4 高溫高壓滅菌后，室溫保存。5)pbs buffer組份濃度： 137 mm nacl, 2.7

4、mm kcl, 10 mm na2hpo4, 2 mm kh2po4配制量： 1 l配制方法:1 .稱量下列試劑，置于1 l燒杯中nacl8gkcl0.2gna2hpo41.42gkh2po40.27g2 .向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? .滴加濃鹽酸將ph值調(diào)節(jié)至7.4 ,然后加入去離子水將溶液定容至 1 l。4 .高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述pbs buffer中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mm cacl2和0.5 mmmgcl2。6)10 m醋酸俊組份濃度：10 m醋酸俊配制量：100 ml配制方法：1 .稱量77.1 g醋酸俊置于100200

5、 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙? . 加去離子水將溶液定容至100 ml 。3 .使用0.22 mm濾膜過濾除菌。4 . 密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7)苯酚 /氯仿 /異戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/ 氯仿 / 異戊醇( 25 : 24 : 1) 。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配制方法：將tris-hcl 平衡苯酚與等體積的氯仿/ 異戊醇( 24 : 1)混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中 4保存。8) 10 (w/

6、v) sds組份濃度： 10 (w/v)sds配制量： 100ml配制方法：1 .稱量10g高純度的sdss于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68c加入溶解2 .滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)ph值至7.23 . 將溶液定容至100ml 后，室溫保存。9） 2 n naoh組份濃度： 2 n naoh配制量：100 ml配制方法：1 .量取80 ml去離子水置于100200 ml塑料燒杯中（naoh容解過程中大量放熱，有可 能使玻璃燒杯炸裂） 。2 .稱取8 g naoh小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3 .待naohl全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。4 . 將溶液轉(zhuǎn)

7、移至塑料容器中后，室溫保存。10） 2.5 n hcl組份濃度： 2.5 n hcl配制量： 100 ml配制方法：1. 在 78.4 ml 的去離子水中加入 21.6 ml 的濃鹽酸（ 11.6 n） ，均勻混合。2. 室溫保存。11） 5 m nacl組份濃度： 5 m nacl配制量： 1 l配制方法：1. 稱取 292.2 g nacl 置于 1 l 燒杯中，加入約 800 ml 的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1 l 后，適量分成小份。3. 高溫高壓滅菌后，4保存。11) 20 (w/v) glucose組份濃度： 20 (w/v) glucose配制量： 100

8、ml配制方法：1 .稱取20 g glucose置于100200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解2 . 加去離子水將溶液定容至100 ml3 .高溫高壓滅菌后，4c保存。12) solution 1( 質(zhì)粒提取用)組份濃度：25 mm tris-hcl (ph8.0), 10 mm edta, 50 mm glucose配制量：1 l配制方法：1.量取下列溶液，置于1 l燒杯中。1m tris-hcl (ph8.0)25ml0.5m edta (ph8.0)20ml20%glucose (1.11m)45mldh2o910ml2.高溫高壓滅菌后，4c保存。3.使用前每 50

9、 ml 的 solution i 中加入 2 ml 的 rnase a (20 mg/ml)。13) solution ii(質(zhì)粒提取用)組份濃度：200mm naqh1 % (w/v)sds配制量：500ml配制方法:1 .量取下列溶液，置于500ml燒杯中10% sds 50ml2n naoh 50ml2 .加滅菌水定容至500ml,充分混勻3 .室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過一個(gè)月注意：sds易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?4） solution iii（ 質(zhì)粒提取用）組份濃度：3 m koac, 5 m ch3cooh配制量：500 ml配制方法：1.稱量下列試劑，置于500 ml燒杯

10、中。koac?1?47g?ch3cooh57.5ml2.加入300 ml去離子水后攪拌溶解3 .加去離子水將溶液定容至500 ml4 .高溫高壓滅菌后，4c保存15) 0.5 m edta(ph8.0)組份濃度： 0.5 m edta配制量： 1 l配制方法：稱取186.1 g na2edta2h20置于1 l燒杯中2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用 naohm節(jié) ph值至 8.0 (約 20 g naoh)。注意：ph值至8.0時(shí)，edtat能完全溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1 l 。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。16) 1 m dtt組份

11、濃度： 1 m dtt配制量： 20 ml配制方法：1. 稱取 3.09 g dtt ，加入到 50 ml 塑料離心管內(nèi)。2.加20 ml的0.01 m naoac (ph5.2),溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌3. 適量分成小份后，-20 保存。17) 10 mm atp組份濃度： 10 mm atp配制量： 20 ml配制方法：1. 稱取121 mg na2atp3h2q加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加 20 ml 的 25 mm tris-hcl (ph8.0) ，攪拌溶解。3. 適量分成小份后，-20 保存。一 . 常用貯液與溶液1mol/l亞精胺(spermidine):

12、溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為 10ml。分裝成小份貯存于 -20 。1mol/l精胺(spermine)：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為 10ml。分裝成小份貯存于 -20 。10mol/l 乙酸胺( ammonium acetate) ：將 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至1l 后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(bsa):力口 100mg的牛血清蛋白(組分 v或分子生物學(xué)試劑級，無 dna酶)于 9.5ml 水中(為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白） ，蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合

13、。加水定容到 10ml,然后分裝成小份貯存于-20 c。1mol/l 二硫蘇糖醇（ dtt） ： 在二硫蘇糖醇5g 的原裝瓶中加 32.4ml 水， 分成小份貯存于 -20 。或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加0.65ml 的水配制成1mol/l 二硫蘇糖醇溶液。8mol/l 乙酸鉀 （potassium acetate ） ： 溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中， 加水定容到 100ml。1mol/l 氯化鉀（kcl） ：溶解7.46g 氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/l乙酸鈉（sodium acetate ）:溶解40.8g的三水乙酸鈉于約 90ml水中，用

14、冰乙酸調(diào) 溶液的ph至5.2,再加水定容到100ml。0.5mol/l edta配制等摩爾的na2edt網(wǎng)naoh液（0.5mol/l ）,混合后形成 edta勺三鈉 鹽?；蚍Q取186.1g的na2edta 2h25口 20g的naoh并溶于水中,定容至 1l。1mol/l hepes:將 23.8ghepes容于約 90ml 的水中，用 naohm ph （6.8-8.2 ）,然后用水定容至100ml。1mol/l hcl ：加 8.6ml 的濃鹽酸至91.4ml 的水中。25mg/ml ipgt:溶解250mg的ipgt （異內(nèi)基硫代-b-d-半乳糖甘）于10ml水中，分成小 份貯存于 -

15、20 。1mol/lmgcl2:溶解 20.3g mgcl2 - 6h2ot足量的水中,定容至u 100ml。100mmol/l pmsf溶解174mg的pmsf（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20 c 020mg/ml蛋白酶k （proteinase k ）：將200mg的蛋白酶l加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶k完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到 10ml,然后分裝成小份貯存于-20 c。10mg/mlrnase （無 dnase （dnase- free rnase）：溶解 10mg 的胰蛋白 rna 酶于 1ml 的

16、10mmol/l的乙酸鈉水溶液中（ph 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min,使dna酶失活。用 1mol/l的tris hcl調(diào)ph至7.5,于-20 c貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/l氯化鈉（nacl）:溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至 100ml。10n氫氧化鈉（naoh：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9l水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌）， 氫氧化鈉完全溶解后用水定容至 1l。10%sds（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gsds慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9l的水的燒杯中，用磁力攪 拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至 1l。2mol/l山梨（糖）醇（sorbitol ）:溶解36.4g

17、山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。100%三氯乙酸（tca :在裝有500gtca勺試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至 完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5% x gal （5-澳-4-氯-3-呷咪一0 -半乳糖甘）：溶解25mg的x gal于1ml的二甲基 甲酰胺（dmf，用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20 c o100x denhardt 試齊1j （ denhardts regent ）成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量2 % 聚蔗糖（ficoll , 400 型）2g2%聚乙烯叱咯烷酮（pvp-40）2g2%bsa（組分 v2g水加水至總體積為100ml依

18、照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于成分及終濃度0.5mol/l tris-hcl100mmol/l mgcl2100mmol/l dtt2mmol/l atp5mmol/l鹽酸亞精胺（可選）0.5mg/ml bsa （組分 v）（可選）水-20 c貯存。10x標(biāo)準(zhǔn) dna接酶緩沖液（standard dna ligase buffer）（粘端、平端連接）配制10ml溶液各成分的用量5ml 1mol/l 貯液1ml 1mol/l 貯液1ml 1mol/l 貯液200ul 100 mmol/l 貯液50ul 1 mmol/l 貯液0.5ml 10 mg/ml 貯液2.25

19、ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 c100 mmol/l dntp 溶液(dntp solutions )可以購買到100mmol/l純dntps貯液,-80 c可貯存至少6個(gè)月。10mmol/l dntp 混合液加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解成分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/l datp2ul 100 mmol/l datp k：液10mmol/l dctp2ul 100 mmol/l dctp k：液10mmol/l dgtp2ul 100 mmol/l dgtp k：液10mmol/l dttp2ul 100

20、mmol/l dttp k：液水12ul20% peg 8000/2.5m nacl成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量質(zhì)量濃度為20%聚乙二醇2.5mol/l氯化鈉水20g50ml 5 mol/l 氯化鈉 或14.6g 固體氯化鈉補(bǔ)足100ml20xssc成分及終濃度配制1l溶液各成分的用量300mmol/l檸檬酸三鈉（二水）88.2g3mol/l氯化鈉175.3g水補(bǔ)足1l溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約 0.9l水中，加幾滴10n nao昭液調(diào)ph為7.0 ,用 水補(bǔ)足體積至1l。depc（焦碳酸二乙酯）處理水加100ul depc于100ml水中，使depc勺體積分?jǐn)?shù)為0.1 %

21、。在37c溫浴至少12h,然后在15 psi條件下高壓滅菌20min,以使殘余的depcfe,s。deps與胺起反應(yīng)，不可用depc 處理tris緩沖液。甲酰胺（deionized formamide ）直接購買或加dowexxg8混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h, 可去除甲酰胺中的離子。經(jīng) whatman1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?-80 c貯 存（防止氧化）。磷酸緩沖液(phosphate buffer )按照下表所給定的體積，混合 1 mol/l的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/l磷酸氫二鈉（雙 堿）貯液，獲得所需 ph的磷酸緩沖液。配制1 mol/

22、l的磷酸二氫鈉（nah2po4 h2。貯 液：溶解138g于足量水中，使終體積為1l;1mol/l磷酸氫二鈉（na2hpo4貯液：溶解142g 于足量水中使終體積為1l。1mol/l磷酸二氫鈉（ml）1mol/l磷酸氫二鈉（ml）最終ph值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2te （用于懸7?和貯存dna成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/l tris hcl1ml 1mol/l

23、 tris-hcl (ph7.4-8.0 , 25 c)1mmol/l edta200ul 0.5 mol/l edta (ph 8.0 )水98.8mltris 緩沖液（tris-hcl buffer ）將121g的tris堿溶解于約0.9l水中，再根據(jù)所要求的ph （25c下）加一定量的濃鹽酸（11.6n）,用水調(diào)整終體積至1l。濃鹽酸的體積（ml）ph8.6142128.5389.08.88.68.48.2468.0567.8667.671.37.4767.2.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50xtris -乙酸（tab緩沖液成分及終濃度配制1l溶液各成分的用量2mol/l tr

24、is 堿242g1mol/l乙酸57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/l )100 mmol/l edta200ml 的 0.5 mol/l edta (ph 8.0 )水補(bǔ)足1l5x tris -硼酸(tbe5緩沖液成分及終濃度配制1l溶液各成分的用量445 mmol/l tris 堿54g445 mmol/l硼酸鹽27.5g硼酸10 mmol/l edta20 ml 的 0.5 mol/l edta (ph 8.0 )水補(bǔ)足1l染料1%澳酚藍(lán)(bromophenol blue )加1g水溶性鈉型澳酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 ff (xylene

25、cyanole ff )溶解1g二甲苯青ff于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的澳化乙錠(ethidium bromide )小心稱取1g澳化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解 用鋁箔包裹裝液管，于4c貯存。凝膠上樣液(gel loading solutions )6x堿性凝膠上樣液(室溫貯存)成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.3 n氫氧化鈉6 mmol/l edta300ul 10n氫氧化鈉120ul 0.5mol/l edta (ph8.0)18%聚蔗糖（400型）1.8g0.15 %澳甲酚綠15mg0.25 %二甲不青ff25mg水補(bǔ)足

26、到10ml6x聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15 %澳酚藍(lán)0.15 %二甲不青ff5 mmol/l edta15%聚蔗糖(400型)k1.5ml 1 %澳酚藍(lán)1.5ml 1 %二甲不青 ff100ul 0.5mol/l edta (ph8.0)1.5g補(bǔ)足到10ml6x澳酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.25 %澳酚藍(lán)0.25 %二甲不青ff15%聚蔗糖（400型）2.5ml 1 %澳酚藍(lán)2.5ml 1 %二甲不青 ff1.5g水補(bǔ)足到10ml6x甘油凝膠上樣液（4c貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各

27、成分用量0.15 %澳酚藍(lán)1.5ml 1 %澳酚藍(lán)0.15 %二甲不青ff1.5ml 1 %二甲不青 ff5 mmol/l edta100ul 0.5mol/l edta (ph8.0)50 %甘油3ml水3.9ml6x蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15 %澳酚藍(lán)1.5ml 1 %澳酚藍(lán)0.15 %二甲不青ff1.5ml 1 %二甲不青 ff5 mmol/l edta100ul 0.5mol/l edta (ph8.0)40 %聚蔗糖4g水補(bǔ)足到10ml10x十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.2 %澳酚藍(lán)2

28、0mg0.2 %二甲不青ff20mg200 mmol/l edta4ml 0.5mol/l edta(ph8.0)0.1 %sds100ul 10 % sds50 %甘油5ml水補(bǔ)足到10ml三.常用培養(yǎng)基1) lb培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9l水中:蛋白陳10g驛母提取物5g氯化鈉10g如果需要用1n naoh(1ml)調(diào)整ph至7.0 ,再補(bǔ)足水至1l。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/l,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/l。soe養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9l水中:蛋白陳20g驛母提取物5g氯化鈉0.5g1 mol/l氯化鉀2.5ml用水補(bǔ)足體積到1l。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻

29、到室溫后，再在每 100ml 的小份中加1ml滅過菌的1mol/l氯化鎂。2) socw養(yǎng)基成分、方法同sobw養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每 100ml的小份中 加1ml滅過菌的1mol/l氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/l葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠 水中，再用水補(bǔ)足到100ml,用0.22um的濾膜過濾除菌）。3) tb培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9l水中：蛋白陳12g驛母提取物24g甘油4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到 60c,再加100ml滅菌的170mmol/l kh2po4/0.72 mol/lk2hpo4勺溶液（2.31g的kh2po4口 12.54gk2hpo4容在足量的水中,使終體積為 100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌)4) 2xyt培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9l水中：蛋白陳16g驛母提取物10g氯化鈉4ml如果需要用1n naoh(1ml)調(diào)整ph至7.0 ,再補(bǔ)足水至1l。注：瓊脂平板需添加瓊脂 粉12g/l,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/l。5) ypd培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9l水中:蛋白陳20g驛母提取物10g