運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)應(yīng)用論文

1、運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)應(yīng)用論文 【論文關(guān)鍵詞】組織病理學(xué)技術(shù)運(yùn)動(dòng)人體科學(xué) 【論文摘要】近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)以及其它高、新技術(shù)在病理領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，同樣作為體育界的基礎(chǔ)研究學(xué)科運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)的發(fā)展已經(jīng)不能滿(mǎn)足簡(jiǎn)單的宏觀(guān)的研究，越來(lái)越多的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)以及病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)在運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)廣泛應(yīng)用，尤其是組織病理學(xué)技術(shù)中定位技術(shù)，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學(xué)常用的定位技術(shù)的方法進(jìn)行綜述。 1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 隨著免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的廣泛應(yīng)用，病理學(xué)研究產(chǎn)生了劃時(shí)代的飛躍。免疫組織化學(xué)是病理學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的方法，是在蛋白質(zhì)水平用各種特異性抗體檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)各種抗原物質(zhì)。根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫組織化學(xué)技

2、術(shù)可分為免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫金-銀細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫電子顯微鏡技術(shù)等。 1.1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟免疫組化技術(shù)是在組織化學(xué)的方法上結(jié)合免疫學(xué)的理論和技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一門(mén)新技術(shù)。其原理是利用免疫學(xué)的核心抗原體特異性結(jié)合的原理，用標(biāo)記抗體追蹤抗原，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對(duì)其顏色進(jìn)行觀(guān)察，以達(dá)到檢測(cè)抗原物的目的1。 1.2免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，免疫組化中抗體與組織細(xì)胞中的抗原的結(jié)合是特異的。如白細(xì)胞共同抗原（LCA）

3、顯示淋巴細(xì)胞成分。敏感性高，而今，由于抗生物素生物素（ABC）法和鏈酶素過(guò)氧化物酶連接（SP）法的出現(xiàn)，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達(dá)到了上千、上萬(wàn)，甚至上億倍，使免疫組化技術(shù)更加可靠。定位準(zhǔn)確，由于抗原抗體的結(jié)合是特異的，因而免疫組化技術(shù)可在組織和細(xì)胞內(nèi)準(zhǔn)確定位，對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀(guān)察，將形態(tài)與功能相結(jié)合，對(duì)疾病進(jìn)行深入的研究。 2原位雜交實(shí)驗(yàn)技術(shù) 原位雜交是將組織化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合來(lái)檢測(cè)合定位核酸的技術(shù)。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)是否存在欲檢測(cè)物質(zhì)的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個(gè)層次的檢驗(yàn)方法。根據(jù)所選探針和待測(cè)靶序列的不同，核酸原位

4、雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。 2.1原位雜交技術(shù)的應(yīng)用原位雜交由于不需要從待測(cè)組織中提取核酸，可完好的保存組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)與基因功能活動(dòng)的變化相結(jié)合進(jìn)行多層面的研究。主要應(yīng)用：細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位可用于基因圖譜、基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；感染組織病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位；癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的監(jiān)測(cè)；基因在染色體上的定位；檢測(cè)染色體的變化；間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究。 2.2原位雜交技術(shù)與免疫組化的比較 2.2.1兩者的區(qū)別原位雜交與免疫組化染色技術(shù)相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測(cè)的功能，

5、且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測(cè)對(duì)象是抗原，機(jī)制是抗原-抗體的特異性結(jié)合，是蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測(cè)；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則與待測(cè)靶序列結(jié)合，是DNA或mRNA水平的檢測(cè)。從實(shí)驗(yàn)方法來(lái)看，免疫組化染色操作相對(duì)簡(jiǎn)單，成本相對(duì)較低，受外界因素的影響相對(duì)小；原位雜交技術(shù)無(wú)論從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，還是從實(shí)際操作上均較免疫組化染色復(fù)雜，成本的高低與試劑的種類(lèi)和來(lái)源密切相關(guān)。一般而言，直接選用商品化的標(biāo)記探測(cè)和檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)成本較高；熒光標(biāo)記探針較非熒光標(biāo)記探針的成本高，對(duì)樣本及實(shí)驗(yàn)條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。 2.2.2免疫組化與原位雜交

6、雙標(biāo)技術(shù)雙標(biāo)技術(shù)是在同一張組織切片上標(biāo)記兩種不同的抗體或同時(shí)應(yīng)用兩種不同的檢測(cè)手段，如免疫組化和原位雜交技術(shù)，在不同層次來(lái)檢測(cè)同一細(xì)胞上某些物質(zhì)的表達(dá)是否有相關(guān)性的一種實(shí)驗(yàn)方法。與傳統(tǒng)的單項(xiàng)檢測(cè)相比，雙標(biāo)記具有無(wú)可比擬的優(yōu)越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時(shí)間或空間的樣本誤差。實(shí)驗(yàn)方法上先進(jìn)行原位雜交會(huì)減少免疫組化過(guò)程中對(duì)待測(cè)DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進(jìn)行原位雜交后進(jìn)行免疫組化標(biāo)記2，3。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問(wèn)題就是：所用的實(shí)驗(yàn)設(shè)備必須經(jīng)DEPC水浸泡或200烤箱過(guò)夜，操作時(shí)須帶口罩及手套；當(dāng)雜交步驟完成后，切片必須認(rèn)真浸泡及長(zhǎng)時(shí)間洗滌至少超過(guò)30min。作免疫組化的各步驟時(shí)間均須適當(dāng)延長(zhǎng)，以增加抗原抗體間的結(jié)合，楊青春等人研究發(fā)現(xiàn)每個(gè)步驟均延長(zhǎng)23倍時(shí)間。免疫組化顯色后不需要用蘇木精復(fù)染，以免遮蓋核信號(hào)。 參考文獻(xiàn) 1紀(jì)小龍，施作霖.診斷免疫組織化學(xué).北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997.5. 2許良中.實(shí)用腫瘤病理方法學(xué)M.上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997:222-223 3王伯紜，李玉松，黃高升，等.病