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1、蛋白質(zhì)的分析蛋白質(zhì)的分析蛋白質(zhì)的分析蛋白質(zhì)的分析一電轉(zhuǎn)移一電轉(zhuǎn)移 1將蛋白質(zhì)樣品進行將蛋白質(zhì)樣品進行SDS-PAGE，待溴酚藍跑出膠后停待溴酚藍跑出膠后停止電泳。止電泳。2載手套切載手套切24張定性濾紙和一張張定性濾紙和一張PVDF膜，它們的大膜，它們的大小應與凝膠的大小相同。在膜的一（左）角作一記號小應與凝膠的大小相同。在膜的一（左）角作一記號（或剪角），依次序浸入（或剪角），依次序浸入100甲醇甲醇10秒，去離子水秒，去離子水5分鐘，然后與濾紙和海綿（纖維）墊浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖分鐘，然后與濾紙和海綿（纖維）墊浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中。液中。3剝膠，并將凝膠裁成合適大小，切角以做記號。剝膠，并將凝膠裁

2、成合適大小，切角以做記號。蛋白質(zhì)的分析4. 次序：次序：負極（黑孔板）負極（黑孔板） 纖維墊纖維墊-12張濾紙張濾紙-凝膠凝膠-PVDF膜膜-1-2張濾紙張濾紙-纖維墊纖維墊-正極板（白孔板）正極板（白孔板） 扣上吊扣扣上吊扣 插進轉(zhuǎn)膜槽中。插進轉(zhuǎn)膜槽中。 蛋白質(zhì)的分析 + _ PVDF膜膜凝膠凝膠濾紙濾紙纖維墊纖維墊蛋白質(zhì)的分析蛋白質(zhì)的分析6. 將膜放入塑料盒中，加入將膜放入塑料盒中，加入20mL封閉液，置脫封閉液，置脫色搖床中緩慢搖動，室溫色搖床中緩慢搖動，室溫1小時或小時或4（層析冷（層析冷柜）封閉過夜。柜）封閉過夜。三靶蛋白與第一抗體結(jié)合三靶蛋白與第一抗體結(jié)合7棄去封閉液，用棄去封閉液，用TTBS稀釋試劑稀釋試劑B（1：1000），），取取510mL加入盒中，室溫平緩搖動溫育加入盒中，室溫平緩搖動溫育1小小時。然后盡量回收抗體溶液，時。然后盡量回收抗體溶液，- 20 保存，可保存，可重復使用。重復使用。 用用T TBST室溫洗膜室溫洗膜3次，每次次，每

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