臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨床應(yīng)用課件

1、臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 1 腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨床應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨床應(yīng)用 宿州市醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心 張長禮 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 2 前 言 v腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的高發(fā)病率和高死 亡率性疾病,大量研究和防治資料證實(shí),早期診 斷和早期治療是防治腫瘤與降低死亡率的最有 效辦法 因此,腫瘤標(biāo)志物的出現(xiàn)使人們對腫瘤 的早期診斷寄予了極大的希望 由于腫瘤早期 不伴轉(zhuǎn)移,容易切除,可為患者贏得較多的生存 機(jī)會,因此,早期發(fā)現(xiàn) 早期治療可降低癌癥死 亡率,改善預(yù)后,提高生活質(zhì)量 腫瘤標(biāo)志物的 檢測對腫瘤輔助診斷及判斷腫瘤預(yù)后 轉(zhuǎn)歸 評價(jià)療效,都具有重要的意義 隨著腫瘤基礎(chǔ)

2、研 究的深入和臨床治療實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的積累,腫瘤標(biāo)志 物的檢測得到了從事腫瘤基礎(chǔ)和臨床工作者的 重視,已成為臨床檢測的重要項(xiàng)目之一 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 3 Other Diseases 其它疾病其它疾病 36.6% Cardiopathy 心臟病心臟病 17.74% Several Tumors 多種腫瘤多種腫瘤 24.9% Cerebrovascular Diseases 腦血管疾病腦血管疾病 21.28% 惡性腫瘤、惡性腫瘤、腦血管疾病、心臟腦血管疾病、心臟 病病 = =高死亡率！高死亡率！ 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 4 腫瘤早期診斷早期根治的重要性腫瘤早期診斷早期

3、根治的重要性 v腫瘤是人體組織細(xì)胞由于內(nèi)在和外界致病因素腫瘤是人體組織細(xì)胞由于內(nèi)在和外界致病因素 長時(shí)間的作用長時(shí)間的作用, , 使細(xì)胞遺傳物質(zhì)使細(xì)胞遺傳物質(zhì)DNADNA產(chǎn)生突變產(chǎn)生突變, , 細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞發(fā)生異常增生異常增生和和功能失調(diào)功能失調(diào)造成的一種疾病。造成的一種疾病。 v世界衛(wèi)生組織指出世界衛(wèi)生組織指出: :若能早期診斷并及時(shí)治若能早期診斷并及時(shí)治 療療,90-95%,90-95%的腫瘤是可以治愈。的腫瘤是可以治愈。 v如胃癌早期行根治術(shù)，如胃癌早期行根治術(shù)，5 5年生存率達(dá)年生存率達(dá)90%90%，如侵，如侵 及肌層則下降為及肌層則下降為50-70%50-70%，如侵入漿膜則僅為，如

4、侵入漿膜則僅為8-8- 17%17%。 v腫瘤的早期診斷雖有可能腫瘤的早期診斷雖有可能(因?yàn)槟[瘤潛伏期可因?yàn)槟[瘤潛伏期可 長達(dá)數(shù)月至數(shù)年長達(dá)數(shù)月至數(shù)年)，但實(shí)際上十分困難，因?yàn)?，但?shí)際上十分困難，因?yàn)?目前大多數(shù)的診斷技術(shù)都不適合腫瘤的早期診目前大多數(shù)的診斷技術(shù)都不適合腫瘤的早期診 斷斷 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 5 所以人們對腫瘤標(biāo)志物的檢測寄予了所以人們對腫瘤標(biāo)志物的檢測寄予了 極大的希望。那么腫瘤標(biāo)志物測定能否達(dá)到極大的希望。那么腫瘤標(biāo)志物測定能否達(dá)到 早期診斷的目的？能否對一般人群進(jìn)行篩查早期診斷的目的？能否對一般人群進(jìn)行篩查 ？其臨床意義到底有多大？評價(jià)有多高？引？其臨床

5、意義到底有多大？評價(jià)有多高？引 起了醫(yī)學(xué)界的爭議。起了醫(yī)學(xué)界的爭議。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 6 目前臨床應(yīng)用中常見的問題目前臨床應(yīng)用中常見的問題 1. 1. 對腫瘤標(biāo)志物在腫瘤診斷中的作用認(rèn)識和對腫瘤標(biāo)志物在腫瘤診斷中的作用認(rèn)識和 評價(jià)不一致，甚至錯(cuò)誤。評價(jià)不一致，甚至錯(cuò)誤。 2. 2. 糾正糾正“不用不用”和和“濫用濫用”兩個(gè)極端。兩個(gè)極端。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 7 本次會議交流內(nèi)容 v一、腫瘤標(biāo)志物（TM）的定義與分類 v二、TM的實(shí)驗(yàn)室檢測方法 v三、 TM的實(shí)驗(yàn)室檢測基本原則 v四、 TM實(shí)驗(yàn)室檢測的影響因素 v五、 TM的臨床應(yīng)用 v六、 TM的聯(lián)合

6、應(yīng)用 v七、 TM測定的合理應(yīng)用及注意事項(xiàng) v八、 TM的臨床價(jià)值評價(jià)(備） v九、常用TM的臨床意義(備） 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 8 一、腫瘤標(biāo)志物的定義 v腫瘤標(biāo)志物（TM）是指在惡性腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫 瘤細(xì)胞的基因表達(dá)而合成分泌的或是由機(jī)體對腫瘤反應(yīng)而異常 產(chǎn)生和/或升高的反映腫瘤存在和生長的一類物質(zhì)，它包括蛋白 質(zhì)、激素、酶（同工酶）、多胺及癌基因產(chǎn)物等。 vTM存在于腫瘤患者的血液、體液、細(xì)胞或組織中，可用生物 化學(xué)、免疫學(xué)及分子生物學(xué)等方法測定，且對腫瘤的輔助診斷、 鑒別診斷、觀察療效、監(jiān)測復(fù)發(fā)以及預(yù)后評價(jià)具有一定的價(jià)值。 v 19781978年年Herbe

7、rmanHerberman在在NCINCI人類腫瘤免疫診斷大會上提出人類腫瘤免疫診斷大會上提出 v19791979年英國第七屆腫瘤發(fā)生生物學(xué)和醫(yī)學(xué)會議上被確認(rèn)使用年英國第七屆腫瘤發(fā)生生物學(xué)和醫(yī)學(xué)會議上被確認(rèn)使用 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 9 細(xì)胞細(xì)胞TMTM 位于細(xì)胞中的與腫瘤相關(guān)的物質(zhì)或抗原，如激位于細(xì)胞中的與腫瘤相關(guān)的物質(zhì)或抗原，如激 素受體、生長因子受體、白血病表型、分子基因等。素受體、生長因子受體、白血病表型、分子基因等。 體液體液TMTM 腫瘤細(xì)胞分泌或脫落于血液、尿液或其他體液腫瘤細(xì)胞分泌或脫落于血液、尿液或其他體液 中、或是宿主對體內(nèi)新生物反應(yīng)而產(chǎn)生并進(jìn)入體液中、或是

8、宿主對體內(nèi)新生物反應(yīng)而產(chǎn)生并進(jìn)入體液 的物質(zhì)。的物質(zhì)。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 10 （二）、（二）、TMTM的分類的分類 TMTM主要分為兩類：腫瘤組織產(chǎn)生的和腫瘤與宿主相互主要分為兩類：腫瘤組織產(chǎn)生的和腫瘤與宿主相互 作用而產(chǎn)生的。作用而產(chǎn)生的。 v1)1)腫瘤組織產(chǎn)生腫瘤組織產(chǎn)生 v包括：分化抗原；胚胎抗原(AFP,CEA)；同工酶(NSE)；激素 (HCG)組織特異性抗原(PSA,free PSA)；粘蛋白、糖蛋白、糖 脂(CA125)癌基因及其產(chǎn)物；多胺類 等 v2)2)腫瘤與宿主相互作用后產(chǎn)生腫瘤與宿主相互作用后產(chǎn)生 v包括：血清鐵蛋白；免疫復(fù)合物；急性時(shí)相蛋白同工酶

9、； 白細(xì)胞介素受體；腫瘤壞死因子 等 v 3）不進(jìn)入體液的標(biāo)志物不進(jìn)入體液的標(biāo)志物 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 11 （三）、（三）、理想的腫瘤標(biāo)志物理想的腫瘤標(biāo)志物 u 靈敏度高靈敏度高 能早期檢測出腫瘤患者；能早期檢測出腫瘤患者； u 特異性強(qiáng)特異性強(qiáng) 能準(zhǔn)確鑒別腫瘤能準(zhǔn)確鑒別腫瘤/非腫瘤患者；非腫瘤患者； u 器官特異性器官特異性 方便對腫瘤的定位；方便對腫瘤的定位； u 與腫瘤的大小或分期有關(guān)與腫瘤的大小或分期有關(guān) 血清中水平與腫瘤體積大小血清中水平與腫瘤體積大小 、臨床分期相關(guān)，、臨床分期相關(guān)， u 與預(yù)后有關(guān)與預(yù)后有關(guān) 血清中水平血清中水平 用以判斷預(yù)后；用以判斷預(yù)后；

10、u 監(jiān)測腫瘤的復(fù)發(fā)監(jiān)測腫瘤的復(fù)發(fā) 半衰期短，可反映腫瘤的動(dòng)態(tài)變化，半衰期短，可反映腫瘤的動(dòng)態(tài)變化， 監(jiān)測治療效果、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移監(jiān)測治療效果、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移 u 測定方法簡便、經(jīng)濟(jì)測定方法簡便、經(jīng)濟(jì),取樣方便取樣方便 然而目前所應(yīng)用的腫瘤標(biāo)志物均未達(dá)到上述然而目前所應(yīng)用的腫瘤標(biāo)志物均未達(dá)到上述 要求，但如正確合理使用，仍有很大臨床價(jià)值，要求，但如正確合理使用，仍有很大臨床價(jià)值， 關(guān)鍵是要正確評價(jià)腫瘤標(biāo)志物檢測的臨床意義。關(guān)鍵是要正確評價(jià)腫瘤標(biāo)志物檢測的臨床意義。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 12 二、臨床上診斷腫瘤的方法和實(shí)驗(yàn)室二、臨床上診斷腫瘤的方法和實(shí)驗(yàn)室 檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法: : 物理學(xué)

11、檢查物理學(xué)檢查 用生物物理方法，如用生物物理方法，如X線，線，CT和超聲等檢查，只有當(dāng)腫瘤大和超聲等檢查，只有當(dāng)腫瘤大 小至少到小至少到12cm時(shí)才能發(fā)現(xiàn)，而此時(shí)腫瘤細(xì)胞數(shù)已達(dá)時(shí)才能發(fā)現(xiàn)，而此時(shí)腫瘤細(xì)胞數(shù)已達(dá)109以上。以上。 組織細(xì)胞學(xué)檢查組織細(xì)胞學(xué)檢查 需做病理切片檢測，一般在出現(xiàn)臨床癥狀或高度可疑時(shí)需做病理切片檢測，一般在出現(xiàn)臨床癥狀或高度可疑時(shí) 適用，或在手術(shù)后發(fā)現(xiàn)。適用，或在手術(shù)后發(fā)現(xiàn)。 生物化學(xué)檢查生物化學(xué)檢查 ALPALP、GGTGGT、ALT ALT 、AFUAFU等等 標(biāo)記免疫學(xué)分析標(biāo)記免疫學(xué)分析 靈敏度和特異性均較高，廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室檢測，已被靈敏度和特異性均較高，廣泛應(yīng)用

12、于實(shí)驗(yàn)室檢測，已被 廣泛應(yīng)用的檢測方法主要有：放射免疫分析（廣泛應(yīng)用的檢測方法主要有：放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（）、酶免疫分析（EIA）、）、 時(shí)間分辨熒光免疫分析（時(shí)間分辨熒光免疫分析（TFIA）和化學(xué)發(fā)光免疫分析（）和化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA） 時(shí)間分辨熒光、基因芯片、時(shí)間分辨熒光、基因芯片、表面增強(qiáng)的激光解析/ 電離化飛行 時(shí)間質(zhì)譜 等。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 13 1、 放射免疫分析 v 放射免疫分析自20世紀(jì)60年代問世以來，在生物醫(yī)學(xué)各個(gè) 領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。20世紀(jì)90年代，RIA技術(shù)研究的主 要進(jìn)展是試管固相法。有學(xué)者將試管固相法稱之為第四代 RI

13、A。固相RIA和免疫放射測量法（IRMA）的靈敏度、特異 性、穩(wěn)定性及測量范圍均優(yōu)于液相競爭法；尤其是不需要使 用離心機(jī)進(jìn)行分離，簡化了操作步驟，提高了檢測的精密度。 活化試管RIA和IRMA技術(shù)系共價(jià)鍵結(jié)合，包被均一，穩(wěn)定性 好，實(shí)現(xiàn)了分析技術(shù)一步法，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析。 v該技術(shù)反應(yīng)條件要求一般 ,但所用試 劑具有放射性 , 對人體有一定的危害 ,實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)加強(qiáng)防護(hù) 。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 14 2、酶免疫分析 v由于RIA和IRMA有著自身固有的、難以克服的缺陷， Engvall和Vanweemen各自領(lǐng)導(dǎo)的研究小組分別以酶代 替同位素，于1971年創(chuàng)立了酶免疫分析技術(shù)

14、(EIA)。因 其標(biāo)記物制備簡單，有效期長，對環(huán)境無污染等特點(diǎn)， EIA技術(shù)得到了迅速的普及和發(fā)展。20世紀(jì)90年代后 期，在EIA中引進(jìn)了放大系統(tǒng)，主要是生物素親和素 系統(tǒng)的應(yīng)用，使測定的靈敏度趕上或超過了RIA。（1） 酶聯(lián)免疫熒光測量法（ELIFA）同時(shí)兼具酶聯(lián)免疫吸附 試驗(yàn)（ELISA）和熒光免疫分析（FIA）兩種方法的優(yōu) 點(diǎn)，其靈敏度較傳統(tǒng)的ELISA明顯提高，最小檢出值 達(dá)10-15mol/L。（2）增強(qiáng)發(fā)光酶免疫分析法（ELEIA） 是20世紀(jì)80年代后期發(fā)展起來的新型免疫分析技術(shù)， 其特點(diǎn)是：酶促增強(qiáng)發(fā)光信號，且發(fā)光信號保持穩(wěn)定， 該方法的最小檢出值達(dá)10-20mol/孔。 臨

15、床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 15 3、化學(xué)發(fā)光免疫分析 v1981年，Pannagli將化學(xué)發(fā)光原理與免疫反應(yīng)結(jié)合起來，建立了 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）。這種方法雖然靈敏度可以達(dá)到放 免的水平，但是影響檢測結(jié)果的因素較多，穩(wěn)定性較差，而且在 發(fā)生化學(xué)反應(yīng)之后，樣品的發(fā)光無法再現(xiàn)。為了克服這一方法學(xué) 上的缺陷，有的學(xué)者著手研究發(fā)光穩(wěn)定劑，以便使發(fā)光信號的持 續(xù)時(shí)間延長。最近的研究結(jié)果證明，使用甲基吖啶酯標(biāo)記抗體更 為理想，因不必加催化劑，所以受外界因素的干擾少，且操作簡 單，穩(wěn)定性高，標(biāo)記蛋白后不影響發(fā)光信號的產(chǎn)生。目前，在這 一領(lǐng)域全自動(dòng)測定儀器的研制發(fā)展很快，極大地提高了該方法

16、的 分析效率和普及推廣。 v近年來，免疫電化學(xué)發(fā)光（IECL）技術(shù)正在快速發(fā)展。這一方法 具有靈敏、快速、穩(wěn)定、選擇性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、易于操作、方法 靈活多樣的優(yōu)點(diǎn)。它是集電化學(xué)發(fā)光、生物素抗生物素、免疫 分析，并由固相免疫分析發(fā)展起來的磁微球等技術(shù)于一體，是眾 多學(xué)科交叉的研究領(lǐng)域。 vIECL分析方法多樣，廣泛地應(yīng)用于抗原、半抗原和抗體的免疫檢 測，其線性范圍也較寬，符合臨床檢驗(yàn)的需要。IECL技術(shù)的發(fā)展 趨勢在于合成新的發(fā)光標(biāo)記物，優(yōu)化標(biāo)記技術(shù)和免疫分析方法。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 16 3. 1 免免 疫疫 化化 學(xué)學(xué) 發(fā)發(fā) 光光 分分 析析(CL IA) v是將標(biāo)記物改

17、為能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的化合物 ,代 替放射性標(biāo)記物 ,最終根據(jù)發(fā)光信號的強(qiáng)弱來 反映復(fù)合物的量 。 v免疫化學(xué)發(fā)光分析的優(yōu)點(diǎn)是有很高的靈敏度 , 無放射性元素對人體的危害 。主要缺點(diǎn)是發(fā) 光時(shí)間短 ,需要嚴(yán)格掌握 測量的時(shí)間 ,否則會 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 17 3. 2 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)(CL EIA ) vCL EIA 的標(biāo)記物是堿性磷酸酶標(biāo)記的抗 v體 ,底物是金剛烷 。經(jīng)過夾心法免疫反應(yīng) ,復(fù) 合物帶有酶標(biāo)記 ,加入底物 ,酶促反應(yīng)使底物 斷裂 ,同時(shí)產(chǎn)生發(fā)光 。 vCL EIA由于酶的存在 ,發(fā)光時(shí)間較 CL IA 長 , 結(jié)

18、果更加可靠 。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 18 3. 3 電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù) (ECL IA) vECL IA 標(biāo)記物是三丙胺 ,實(shí)驗(yàn)形成的復(fù)合 物含三丙胺 ,三丙胺在電極周圍失去電子成為 還原劑 。底物 是三價(jià)釕的化合物 ,該化合物 在還原性三丙胺的作用下還原 成二價(jià)釕 ,同 時(shí)發(fā)出光子 。發(fā)射光子后的二價(jià)釕即復(fù)原成 三 價(jià) ,又可再次被還原 ,再發(fā)射光子 ,從而使 信號明顯增強(qiáng) 。較 CL IA 和 CL EIA 法具有 結(jié)果穩(wěn)定可靠 、信號明顯增強(qiáng)發(fā)射的光 子能 反復(fù)利用等特點(diǎn) 。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 19 4、時(shí)間分辨熒光免疫分析

19、技術(shù)（、時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)（TrFLA) TrFLA 的標(biāo)記物由鑭系元素（銪）通過一定的 連接劑與抗體蛋 白相連而組成 。具有信號 強(qiáng) ,縮短測量時(shí)間并提高靈敏度等 優(yōu)點(diǎn) 。 存在的缺點(diǎn)是標(biāo)記物和熒光增強(qiáng)劑制備難度 大 ,且熒 光增強(qiáng)劑含一定有毒物質(zhì) ,廢物應(yīng)該 嚴(yán)格處理 。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 20 5、生物芯片 v生物芯片可以分為基因芯片,蛋白芯片和芯片實(shí)驗(yàn)室三類?；?因芯片指將大量探針分子固定于支持物上,與標(biāo)記的樣品分子 進(jìn)行染交,通過檢測每個(gè)探針分子的染交信號強(qiáng)度進(jìn)而獲取樣 品分子的數(shù)量和序列信息。它以其可同時(shí)、快速、準(zhǔn)確地分 析數(shù)以千計(jì)基因組信息的本領(lǐng)而顯示出

20、了巨大的威力,已應(yīng)用 于基因表達(dá)檢測、尋找新基因、染交測序、基因突變和多態(tài) 性分析以及基因文庫作圖等方面。 蛋白芯片以蛋白質(zhì)代替 DNA 作為檢測目標(biāo)物,比基因芯片更 進(jìn)一步的接近生命活動(dòng)的物質(zhì)層面,因而有著比基因芯片更加 直接的應(yīng)用前景。 芯片實(shí)驗(yàn)室是生物芯片技術(shù)發(fā)展的最終目標(biāo)。它將樣品制備、 生物反應(yīng)以及檢測分析的整個(gè)過程集約化形成幑型分析系統(tǒng)。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 21 6、液體芯片檢測技術(shù)、液體芯片檢測技術(shù) v隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展 ,蛋白質(zhì)芯片已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生 物樣品的核酸序列檢測和蛋白質(zhì)的研究中 。液相懸浮芯片 技術(shù)是今年來剛剛興起的一種新的檢測技術(shù) 。它集中了免

21、疫學(xué) 、分子生物學(xué) 、高分子化學(xué) 、激光檢測技術(shù) 、微流體 技術(shù) 和計(jì)算機(jī)等方面的先進(jìn)技術(shù)為一體 ,利用細(xì)胞大小的塑 料顆 粒作為載體 ,以流式細(xì)胞術(shù)作檢測平臺 ,可在較短時(shí)間 內(nèi)對 核酸 、多肽 、小分子蛋白質(zhì)等進(jìn)行快速檢測 。 v液態(tài)芯片技術(shù)檢測靈敏 ,低限可至 10pg ; 反應(yīng)時(shí)間短 ,速 度 快 ,在 35 - 60 分鐘內(nèi)完成測定 。具有很高的準(zhǔn)確性和重 復(fù) 性 。反應(yīng)條件比較溫和 ,有利于探針和被檢測物的充分反 應(yīng) ,大多數(shù)反應(yīng)不需洗滌 ,反應(yīng)過程接近天然狀態(tài) 。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 22 7、表面增強(qiáng)的激光解析、表面增強(qiáng)的激光解析/ 電離化飛行電離化飛行 時(shí)間

22、質(zhì)譜時(shí)間質(zhì)譜 v表面增強(qiáng)的激光解析/ 電離化飛行時(shí)間質(zhì)譜 原理是通過 親合作用 ,蛋白質(zhì)結(jié)合到芯片的化學(xué)或生物位點(diǎn)上 ,激光脈沖 使芯片中的分析物解析形 成荷電子 ,由于各種蛋白質(zhì)的分子 量及所帶電荷的不同 ,在 儀器場中飛行的時(shí)間長短不一 , 質(zhì) 量較輕的離子飛行速度 快 ,較早到達(dá)檢測器 ,較重的離子飛 行速度 慢，較晚達(dá)到檢測器，根據(jù)到達(dá)檢測器的飛行時(shí)間不 同而被檢測即測定離子的質(zhì)荷比（M/Z）與離子的飛行時(shí)間 成正比 ，檢測離子。 v該方法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高及分辨率高等特點(diǎn)，為生命 科學(xué)等領(lǐng)域提供了一種強(qiáng)有力的分析測試手段，并正扮演著 越來越重要的作用。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和

23、臨 床應(yīng)用 23 8、其他檢測技術(shù) vPCR：新華網(wǎng)合肥2009年8月24日電，記者從安徽省科技廳獲悉，經(jīng) 過多年研究，以中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)為依托的安徽省分子醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 在腫瘤標(biāo)志物相關(guān)基因檢測試劑盒的研究上取得重大突破，目前，已有5 項(xiàng)發(fā)明專利獲國家專利局授權(quán)，并成功轉(zhuǎn)讓實(shí)施產(chǎn)業(yè)化。其在診斷腫瘤 的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)技術(shù)上，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）新型診斷 技術(shù)，達(dá)到國際先進(jìn)水平。 v基因探針 v流式細(xì)胞術(shù) v高效毛細(xì)管電泳 v熒光偏振 v 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 24 三、TM臨床檢測的基本原則 v腫瘤標(biāo)志物臨床檢測的基本原則（中華 醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會 腫瘤標(biāo)志物專家委

24、員 會 ） v1、TM對腫瘤的輔助診斷價(jià)值： 由于目前臨床常用的TM在診斷惡性腫瘤 時(shí)，靈敏度和特異性不夠高，只能用于腫瘤 的輔助診斷；不能作為腫瘤診斷的主要依據(jù)； 也不提倡對無癥狀人群進(jìn)行普查。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 25 三、TM臨床檢測的基本原則 v2 、應(yīng)用TM對高危人群進(jìn)行篩查時(shí)應(yīng)遵循下 列原則： （1）該腫瘤標(biāo)志物對早期腫瘤的發(fā)現(xiàn)有 較高的靈敏度。 （2）測定方法的靈敏度、特異性高、重 復(fù)性好AEP、PSA。 （3）篩查費(fèi)用經(jīng)濟(jì)、合理。 （4）篩查發(fā)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物異常升高， 但無癥狀和體征時(shí)，必須復(fù)查和隨訪。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 26 三、TM臨床檢

25、測的基本原則 v3、 TM的器官定位價(jià)值： 由于絕大多數(shù)TM對器官特異性不強(qiáng)，因 此，TM陽性不能對腫瘤進(jìn)行絕對定位。但少 數(shù)腫瘤標(biāo)志物（如前列腺特異性抗原、甲胎 蛋白和甲狀腺球蛋白等對器官定位有一定的 價(jià)值）。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 27 三、TM臨床檢測的基本原則 v4、 TM在判斷腫瘤的大小和臨床分期的價(jià)值： 大多數(shù)情況下，TM濃度與腫瘤的大小和 臨床分期之間存在著一定的關(guān)聯(lián)。但各期腫 瘤的TM濃度變化范圍較寬，會有互相重疊。 因此，不能根據(jù)TM濃度高低來判斷腫瘤的大 小及進(jìn)行臨床分期。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 28 三、TM臨床檢測的基本原則 v5、 TM

26、在腫瘤監(jiān)測中的價(jià)值： TM的主要臨床應(yīng)用價(jià)值是判斷腫瘤治療 療效和復(fù)發(fā)監(jiān)測。臨床可通過對腫瘤患者治 療前后及隨訪中TM濃度變化的監(jiān)測，了解腫 瘤治療是否有效，并判斷其預(yù)后，為進(jìn)一步 治療提供參考依據(jù)。為確定何種TM適用于對 腫瘤患者進(jìn)行治療監(jiān)測，在患者治療前應(yīng)做 相關(guān)TM檢測。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 29 三、TM臨床檢測的基本原則 v6 、TM濃度變化對腫瘤的療效判斷價(jià)值：惡性腫瘤 治療后TM濃度的變化與療效之間有一定的相關(guān)性， 治療后TM濃度變化，常有三種類型： （1）TM濃度下降到參考范圍，提示腫瘤治療有 效。 （2）TM濃度下降但仍持續(xù)在參考范圍以上，提 示有腫瘤殘留和

27、/或腫瘤轉(zhuǎn)移。 （3）TM濃度下降到參考范圍一段時(shí)間后，又重 新升高，提示腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 30 療效監(jiān)測：療效監(jiān)測：許多許多TM能明確手術(shù)、放療或藥物治療是能明確手術(shù)、放療或藥物治療是 否有效，有的否有效，有的TM可反映腫瘤的殘存量，這種定量可反映腫瘤的殘存量，這種定量 關(guān)系具有重要臨床應(yīng)用價(jià)值。療效觀察可參照下列關(guān)系具有重要臨床應(yīng)用價(jià)值。療效觀察可參照下列 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)： 無效：無效：TM濃度與治療前相比下降濃度與治療前相比下降 50 改善：改善： TM濃度與治療前相比下降濃度與治療前相比下降50 有效：有效： TM濃度與治療前相比下降濃度與治療前相比下

28、降90 顯效：顯效： TM濃度下降至臨界值以下。濃度下降至臨界值以下。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 31 三、TM臨床檢測的基本原則 v7 、TM的定期隨訪原則： 惡性腫瘤治療結(jié)束后，應(yīng)根據(jù)病情對治療前升 高的TM作定期隨訪監(jiān)測。不同的TM半衰期不同， 所以監(jiān)測的時(shí)間和周期也不同。 大部分國內(nèi)外專家建議：治療后6W做首次測定； 3年內(nèi)每3個(gè)月測定一次；3至5年每半年測定一次； 5至7年每年測定一次；隨訪中如發(fā)現(xiàn)有明顯升高， 應(yīng)1月后復(fù)測一次，連續(xù)2次升高，可預(yù)示復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn) 移。此預(yù)示常早于臨床癥狀和體征，而有助于臨床 及時(shí)處理。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 32 三、TM臨床

29、檢測的基本原則 v8、 TM的聯(lián)合檢測原則：同一種腫瘤或不同類型的 腫瘤可有一種或幾種TM異常；同一種TM可在不同 的腫瘤中出現(xiàn)。為提高TM的輔助診斷價(jià)值和確定何 種TM可作為治療后的隨訪監(jiān)測指標(biāo)，可進(jìn)行聯(lián)合檢 測，但聯(lián)合檢測的指標(biāo)須經(jīng)科學(xué)分析、嚴(yán)格篩選。 在上述前提下，合理選擇幾項(xiàng)靈敏度、特異性能互 補(bǔ)的TM構(gòu)成最佳組合，進(jìn)行聯(lián)合檢測。經(jīng)過臨床應(yīng) 用，以循證醫(yī)學(xué)的觀點(diǎn)來評價(jià)和修改聯(lián)合檢測的TM 組合。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 33 測定TM的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)遵循的基本原則 v1、 實(shí)驗(yàn)室必須使用國家有關(guān)機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的儀 器和試劑，做好室內(nèi)質(zhì)控和參加室間質(zhì)評， 以保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性

30、和可比性。 v2 、使用不同方法、不同試劑測定同一種TM 時(shí)，其結(jié)果可能出現(xiàn)差異。為此同一患者在 治療前后及隨訪中，應(yīng)采用同一種方法和試 劑； 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 34 測定TM的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)遵循的基本原則 v3、 在更換檢測方法和試劑時(shí)，應(yīng)作比對試 驗(yàn)。 v4、 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作者應(yīng)了解TM的方法學(xué)評價(jià)， 并積極參加對TM的評估和臨床應(yīng)用的討論。 v5 、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)團(tuán)體應(yīng)制定相應(yīng)的TM應(yīng)用 原則。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 35 四、四、影響血液和體液中腫瘤標(biāo)志物影響血液和體液中腫瘤標(biāo)志物 濃度的因素濃度的因素 1腫瘤的大小和腫瘤細(xì)胞的數(shù)目：腫瘤越大細(xì)腫瘤的大小和腫瘤

31、細(xì)胞的數(shù)目：腫瘤越大細(xì) 胞越多，腫瘤標(biāo)志物的濃度越高。胞越多，腫瘤標(biāo)志物的濃度越高。 2腫瘤細(xì)胞合成和分泌腫瘤標(biāo)志物的速度：腫瘤腫瘤細(xì)胞合成和分泌腫瘤標(biāo)志物的速度：腫瘤 細(xì)胞合成和分泌腫瘤標(biāo)志物的速度越快，血液循環(huán)中細(xì)胞合成和分泌腫瘤標(biāo)志物的速度越快，血液循環(huán)中 腫瘤標(biāo)志物的濃度越高。腫瘤標(biāo)志物的濃度越高。 3腫瘤組織的血液供應(yīng)好壞：若血液供應(yīng)差，腫瘤組織的血液供應(yīng)好壞：若血液供應(yīng)差， 血液循環(huán)中腫瘤標(biāo)志物的濃度低。血液循環(huán)中腫瘤標(biāo)志物的濃度低。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 36 4腫瘤細(xì)胞是否有壞死和壞死的程度：腫瘤腫瘤細(xì)胞是否有壞死和壞死的程度：腫瘤 細(xì)胞壞死后，釋放出大量腫瘤標(biāo)

32、志物，使腫瘤局部細(xì)胞壞死后，釋放出大量腫瘤標(biāo)志物，使腫瘤局部 和血液中腫瘤標(biāo)志物的濃度升高。和血液中腫瘤標(biāo)志物的濃度升高。 5腫瘤細(xì)胞的分化程度和腫瘤的分期：腫瘤腫瘤細(xì)胞的分化程度和腫瘤的分期：腫瘤 細(xì)胞分化程度越差，惡性程度越高，越晚期，產(chǎn)生細(xì)胞分化程度越差，惡性程度越高，越晚期，產(chǎn)生 的腫瘤標(biāo)志物越多。的腫瘤標(biāo)志物越多。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 37 6 6腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)和合成腫瘤標(biāo)志物：腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)和合成腫瘤標(biāo)志物： 有些腫瘤細(xì)胞不表達(dá)、不攜帶腫瘤標(biāo)志物，則有些腫瘤細(xì)胞不表達(dá)、不攜帶腫瘤標(biāo)志物，則 在血液和體液中就檢測不到。在血液和體液中就檢測不到。 7 7腫瘤標(biāo)志物

33、在體內(nèi)的降解和排泄速度：腫瘤標(biāo)志物在體內(nèi)的降解和排泄速度： 若肝、腎功能差，排泄速度慢，則腫瘤標(biāo)志物若肝、腎功能差，排泄速度慢，則腫瘤標(biāo)志物 在體內(nèi)可異常升高。在體內(nèi)可異常升高。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 38 分析前分析前 1. 1. 標(biāo)本采集對檢測結(jié)果的影響標(biāo)本采集對檢測結(jié)果的影響: : 前列腺按摩、前列腺穿刺、射精、導(dǎo)尿和直腸前列腺按摩、前列腺穿刺、射精、導(dǎo)尿和直腸 鏡檢查后，血液鏡檢查后，血液PSAPSA和和PAPPAP值可升高值可升高( (宜在此操作過宜在此操作過 后一周取樣）；后一周取樣）； 肝、腎功能異常和膽道排泄不暢、膽汁淤滯等肝、腎功能異常和膽道排泄不暢、膽汁淤滯

34、等 均可造成如均可造成如CEACEA、ALPALP、GGTGGT等濃度增高。等濃度增高。 TM實(shí)驗(yàn)室檢測應(yīng)注意的問題實(shí)驗(yàn)室檢測應(yīng)注意的問題 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 39 某些藥物會影響腫瘤標(biāo)志物的濃度，如抗雄激素某些藥物會影響腫瘤標(biāo)志物的濃度，如抗雄激素 治療前列腺癌時(shí)可抑制治療前列腺癌時(shí)可抑制PSAPSA產(chǎn)生，導(dǎo)致產(chǎn)生，導(dǎo)致PSAPSA假陰性結(jié)果假陰性結(jié)果 。 唾液和汗液污染標(biāo)本可使鱗狀上皮細(xì)胞癌相關(guān)抗唾液和汗液污染標(biāo)本可使鱗狀上皮細(xì)胞癌相關(guān)抗 原（原（SCCSCC）、）、CA 19-9CA 19-9濃度升高，濃度升高，CEACEA也會輕度升高。也會輕度升高。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志

35、物的檢測和臨 床應(yīng)用 40 2.2.標(biāo)本保存對檢測結(jié)果的影響標(biāo)本保存對檢測結(jié)果的影響: : 血液標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)離心，若從采血到血清血液標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)離心，若從采血到血清 分離的間隔時(shí)間分離的間隔時(shí)間60min60min， NSENSE濃度會從血小板中釋濃度會從血小板中釋 放而增高；保存於放而增高；保存於44冰箱中，冰箱中，2424小時(shí)內(nèi)測定；如在小時(shí)內(nèi)測定；如在2 2 3 3個(gè)月內(nèi)測定，則應(yīng)個(gè)月內(nèi)測定，則應(yīng)-20-20保存，保存，避免反復(fù)凍融。避免反復(fù)凍融。 酶類和激素類腫瘤標(biāo)志物不穩(wěn)定，易降解，應(yīng)酶類和激素類腫瘤標(biāo)志物不穩(wěn)定，易降解，應(yīng) 及時(shí)測定或低溫保存。及時(shí)測定或低溫保存。 臨床醫(yī)學(xué)

36、腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 41 由于紅細(xì)胞和血小板中也存在神經(jīng)元特異性由于紅細(xì)胞和血小板中也存在神經(jīng)元特異性 烯醇化酶（烯醇化酶（NSENSE），因此，樣本溶血可使血液中），因此，樣本溶血可使血液中NSENSE 濃度增高（濃度增高（RBCRBC中有大量的中有大量的NSENSE，1%1%的溶血可使血清的溶血可使血清 NSENSE升高升高5ug/L)5ug/L)。 黃疸血樣本，會引起黃疸血樣本，會引起PSAPSA的檢測值升高。的檢測值升高。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 42 分析中分析中 1.1.測定方法和試劑對檢測結(jié)果的影響：測定方法和試劑對檢測結(jié)果的影響： 從方法學(xué)來看，腫瘤標(biāo)志

37、物測定方法很多，有從方法學(xué)來看，腫瘤標(biāo)志物測定方法很多，有 放射免疫測定法，酶聯(lián)免疫測定法，化學(xué)發(fā)光免疫放射免疫測定法，酶聯(lián)免疫測定法，化學(xué)發(fā)光免疫 測定法等，每種測定方法有自己的精密度和重復(fù)性測定法等，每種測定方法有自己的精密度和重復(fù)性 ，但手工操作的方法重復(fù)性較差，誤差比較大，操，但手工操作的方法重復(fù)性較差，誤差比較大，操 作時(shí)要特別認(rèn)真；用自動(dòng)化儀器進(jìn)行測定，重復(fù)性作時(shí)要特別認(rèn)真；用自動(dòng)化儀器進(jìn)行測定，重復(fù)性 好，誤差小。好，誤差小。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 43 有研究報(bào)道，有研究報(bào)道，使用使用1212種不同的種不同的CEACEA試劑盒檢測試劑盒檢測 某一混合血清中某一混

38、合血清中CEACEA的濃度，結(jié)果其差異超過的濃度，結(jié)果其差異超過100%100% 。導(dǎo)致分析間誤差的主要原因是沒有測定的標(biāo)準(zhǔn)化導(dǎo)致分析間誤差的主要原因是沒有測定的標(biāo)準(zhǔn)化 ，包括缺乏統(tǒng)一的抗原、抗原成分、校正品和參考，包括缺乏統(tǒng)一的抗原、抗原成分、校正品和參考 方法等。方法等。因此，在工作中要盡量使用同一種方法，因此，在工作中要盡量使用同一種方法， 同一種儀器和同一廠家的試劑盒進(jìn)行測定。同一種儀器和同一廠家的試劑盒進(jìn)行測定。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 44 2. 2. 交叉污染對檢測結(jié)果的影響：交叉污染對檢測結(jié)果的影響： 當(dāng)測定非常高濃度標(biāo)本時(shí)，交叉污染成為當(dāng)測定非常高濃度標(biāo)本時(shí)，交

39、叉污染成為 一個(gè)導(dǎo)致假陽性的潛在問題。所以應(yīng)不時(shí)地復(fù)一個(gè)導(dǎo)致假陽性的潛在問題。所以應(yīng)不時(shí)地復(fù) 查有無標(biāo)本被交叉污染。查有無標(biāo)本被交叉污染。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 45 3. 3. 嗜異性抗體對檢測結(jié)果的影響：嗜異性抗體對檢測結(jié)果的影響： 大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物的測定中常使用一對鼠單克隆大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物的測定中常使用一對鼠單克隆 抗體來與腫瘤抗原反應(yīng)，如果病人血清中存在嗜異性抗體來與腫瘤抗原反應(yīng)，如果病人血清中存在嗜異性 抗體（特別是人抗鼠抗體），它可能在兩種鼠單克隆抗體（特別是人抗鼠抗體），它可能在兩種鼠單克隆 抗體間起抗體間起“橋梁橋梁”作用，導(dǎo)致在無抗原的情況下，出作用，導(dǎo)致在無

40、抗原的情況下，出 現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物濃度增高的假象?，F(xiàn)腫瘤標(biāo)志物濃度增高的假象。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 46 分析后：分析后： 1參考值范圍：不同標(biāo)本如血液、尿液、胸、參考值范圍：不同標(biāo)本如血液、尿液、胸、 腹水等，必須有不同的參考值。腹水等，必須有不同的參考值。 不同地區(qū)、不同人群、不同方法、不同試劑和不同地區(qū)、不同人群、不同方法、不同試劑和 設(shè)備應(yīng)建立自己的參考值范圍。設(shè)備應(yīng)建立自己的參考值范圍。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 47 3一般病人的結(jié)果在排除檢測方法引起的誤差后一般病人的結(jié)果在排除檢測方法引起的誤差后 ，上升或下降，上升或下降25都有臨床價(jià)值。對于測定結(jié)果特

41、別都有臨床價(jià)值。對于測定結(jié)果特別 異常的標(biāo)本必須復(fù)查，以防測定誤差。異常的標(biāo)本必須復(fù)查，以防測定誤差。 4由于腫瘤標(biāo)志物測定其臨床意義的特殊性，必由于腫瘤標(biāo)志物測定其臨床意義的特殊性，必 須加強(qiáng)與臨床的交流和溝通當(dāng)改變腫瘤標(biāo)志物檢測方須加強(qiáng)與臨床的交流和溝通當(dāng)改變腫瘤標(biāo)志物檢測方 法和試劑時(shí)，必須通知臨床，否則會影響結(jié)果的判斷法和試劑時(shí)，必須通知臨床，否則會影響結(jié)果的判斷 。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 48 5必須知道腫瘤標(biāo)志物的半壽期（手術(shù)后必須知道腫瘤標(biāo)志物的半壽期（手術(shù)后 降到一半所需的時(shí)間），降到一半所需的時(shí)間），這有助解釋某些腫瘤這有助解釋某些腫瘤 標(biāo)志物，如標(biāo)志物，如A

42、FPAFP和和hCG hCG 的濃度變化，的濃度變化，對于臨床療對于臨床療 效判斷有重要意義。效判斷有重要意義。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 49 主要腫瘤標(biāo)志物經(jīng)手術(shù)后半壽期 腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物半壽期半壽期參考范圍參考范圍 CEA34天天10ng/mL CA19-98.5天天37Uml AFP45天天10.9ng/mL PSA2.33.2天天4ng/mL HCG1220小時(shí)小時(shí)2.9mIU/mL CA15-3815天天28U/ml CA1254.8天天35U/ml SCC20分分1.5g/L CYFRA21-14天天3.3ng/mL 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 50 引

43、起假陰性的主要因素是引起假陰性的主要因素是: : 產(chǎn)生腫瘤標(biāo)志物的腫瘤細(xì)胞數(shù)目少產(chǎn)生腫瘤標(biāo)志物的腫瘤細(xì)胞數(shù)目少 細(xì)胞或細(xì)胞表面被封閉細(xì)胞或細(xì)胞表面被封閉 機(jī)體體液中一些抗體與腫瘤標(biāo)志機(jī)體體液中一些抗體與腫瘤標(biāo)志( ( 腫瘤抗原腫瘤抗原) )形成免疫復(fù)合物形成免疫復(fù)合物 腫瘤組織本身血循環(huán)差腫瘤組織本身血循環(huán)差, , 其所產(chǎn)生的腫瘤標(biāo)志物不能分泌到其所產(chǎn)生的腫瘤標(biāo)志物不能分泌到 外周血中。外周血中。 血標(biāo)本的采集血標(biāo)本的采集, , 貯存不當(dāng)也會影響腫瘤標(biāo)志物測定的結(jié)果貯存不當(dāng)也會影響腫瘤標(biāo)志物測定的結(jié)果 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 51 引起假陽性的主要因素是引起假陽性的主要因素是:

44、: 良性疾病時(shí)良性疾病時(shí), ,如某些炎癥性疾病使一些腫瘤標(biāo)志物表達(dá)增加。如某些炎癥性疾病使一些腫瘤標(biāo)志物表達(dá)增加。 某些生理變化某些生理變化, ,如妊娠和月經(jīng)時(shí)如妊娠和月經(jīng)時(shí), AFP, AFP、CAl25CAl25、HCGHCG會升高。會升高。 與自身免疫性疾病有關(guān)與自身免疫性疾病有關(guān)( (如紅斑狼瘡、白塞氏病、腎小球腎炎如紅斑狼瘡、白塞氏病、腎小球腎炎 等等), ), 當(dāng)這些疾病加重時(shí)當(dāng)這些疾病加重時(shí), ,腫瘤標(biāo)志物多呈陽性反應(yīng)。腫瘤標(biāo)志物多呈陽性反應(yīng)。 在腫瘤手術(shù)治療、化療和放療過程中在腫瘤手術(shù)治療、化療和放療過程中, , 由于腫瘤組織受到破由于腫瘤組織受到破 壞或腫瘤壞死時(shí)壞或腫瘤壞死

45、時(shí), , 也會使某些腫瘤標(biāo)志物的產(chǎn)生增加也會使某些腫瘤標(biāo)志物的產(chǎn)生增加, , 從而從而 影響腫瘤標(biāo)志物的測定影響腫瘤標(biāo)志物的測定, ,造成假陽性。造成假陽性。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 52 五.TM的臨床應(yīng)用 1.1.普查：普查：迄今為止還沒有一種理想的迄今為止還沒有一種理想的TMTM，因此使，因此使TMTM用用 于普查受到限制。于普查受到限制。 2.2.定位定位: :TMTM基本上不能對腫瘤進(jìn)行定位，因?yàn)榻^大多基本上不能對腫瘤進(jìn)行定位，因?yàn)榻^大多 數(shù)數(shù)TMTM都無器官特異性，只有極少數(shù)都無器官特異性，只有極少數(shù)TMTM如如PSAPSA、PAPPAP具具 有器官特異性，但這些指標(biāo)

46、卻又不具備腫瘤特異性。有器官特異性，但這些指標(biāo)卻又不具備腫瘤特異性。 3.3.確診：確診：任何一種任何一種TMTM都存在假陽性和假陰性的問題，都存在假陽性和假陰性的問題， 因此單憑因此單憑TMTM的測定值通常不能對腫瘤進(jìn)行確診的測定值通常不能對腫瘤進(jìn)行確診。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 53 4.4.分期：分期：大多數(shù)大多數(shù)TMTM與疾病的分期有關(guān)，且濃度與腫瘤與疾病的分期有關(guān)，且濃度與腫瘤 的大小或分期有關(guān)系。如結(jié)腸癌的大小或分期有關(guān)系。如結(jié)腸癌CEACEA濃度與腫瘤大濃度與腫瘤大 小有關(guān)、幾乎所有的小有關(guān)、幾乎所有的TMTM在腫瘤晚期時(shí)均呈現(xiàn)較高的在腫瘤晚期時(shí)均呈現(xiàn)較高的 濃度。

47、但這是總體而言，由于各期濃度。但這是總體而言，由于各期TMTM的濃度范圍很的濃度范圍很 廣，且互相重疊，因此并不能根據(jù)個(gè)體測定值來判廣，且互相重疊，因此并不能根據(jù)個(gè)體測定值來判 斷腫瘤的大小，也不能以斷腫瘤的大小，也不能以TMTM的濃度來精確地指示各的濃度來精確地指示各 期腫瘤。期腫瘤。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 54 注意：注意： 1 1）如化療、放療或手術(shù)后立即測定）如化療、放療或手術(shù)后立即測定TMTM濃度，濃度， 可能會有短暫的升高，這是由于腫瘤細(xì)胞壞可能會有短暫的升高，這是由于腫瘤細(xì)胞壞 死所致。死所致。 2 2）化療、放療或手術(shù)后）化療、放療或手術(shù)后TMTM濃度持續(xù)恒定升

48、高，濃度持續(xù)恒定升高， 可能表示治療無效，應(yīng)盡可能改用其他治療可能表示治療無效，應(yīng)盡可能改用其他治療 方法。方法。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 55 v6.預(yù)后：預(yù)后：有些有些TM對特定的腫瘤具有預(yù)后價(jià)值對特定的腫瘤具有預(yù)后價(jià)值, 如術(shù)前如術(shù)前TM濃度增加濃度增加,術(shù)后濃度減低術(shù)后濃度減低,則可能預(yù)則可能預(yù) 后較好后較好,特別是在病程監(jiān)測中特別是在病程監(jiān)測中,TM的濃度增加的濃度增加 或降低與疾病的預(yù)后密切相關(guān)。或降低與疾病的預(yù)后密切相關(guān)。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 56 7.預(yù)測預(yù)測:TM另一重要的特性就是預(yù)測價(jià)值另一重要的特性就是預(yù)測價(jià)值,其依據(jù)其依據(jù) 是是Bayes

49、法則，可用陽性預(yù)測值（法則，可用陽性預(yù)測值（PPV）和陰）和陰 性預(yù)測值性預(yù)測值(NPV)來表示。某一來表示。某一TM的靈敏度、特的靈敏度、特 異性、異性、PPV和和NPV不是固定不變的，而是依賴不是固定不變的，而是依賴 于選定的臨界值。將臨界值提高可增加特異性，于選定的臨界值。將臨界值提高可增加特異性， 但靈敏度隨之下降；反之，將臨界值降低，則但靈敏度隨之下降；反之，將臨界值降低，則 靈敏度提高，但特異性又下降。靈敏度提高，但特異性又下降。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 57 腫瘤標(biāo)志物檢測的目的是要達(dá)到腫瘤的早期腫瘤標(biāo)志物檢測的目的是要達(dá)到腫瘤的早期 診斷，早期治療，因此，希望找到

50、特異性強(qiáng)，敏診斷，早期治療，因此，希望找到特異性強(qiáng)，敏 感性高的腫瘤標(biāo)志物。感性高的腫瘤標(biāo)志物。腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合應(yīng)用有腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合應(yīng)用有 助于提高檢測的助于提高檢測的敏感性。敏感性。 六、腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合應(yīng)用六、腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合應(yīng)用 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 58 一種腫瘤可分泌多種腫瘤標(biāo)志物，而不同的腫瘤一種腫瘤可分泌多種腫瘤標(biāo)志物，而不同的腫瘤 或同種腫瘤的不同組織類型可有相同的腫瘤標(biāo)志物，或同種腫瘤的不同組織類型可有相同的腫瘤標(biāo)志物， 而且在不同的腫瘤患者體內(nèi)，腫瘤標(biāo)志物的質(zhì)和量變而且在不同的腫瘤患者體內(nèi)，腫瘤標(biāo)志物的質(zhì)和量變 化也較大?；草^大。因此，單獨(dú)檢測一種腫瘤標(biāo)

51、志物，可能會因此，單獨(dú)檢測一種腫瘤標(biāo)志物，可能會 因?yàn)闇y定方法的靈敏度不夠而出現(xiàn)假陰性，聯(lián)合檢測因?yàn)闇y定方法的靈敏度不夠而出現(xiàn)假陰性，聯(lián)合檢測 多種腫瘤標(biāo)志物有利于提高檢出的陽性率。多種腫瘤標(biāo)志物有利于提高檢出的陽性率。為此，為此，選選 擇一些特異性較高，可以互補(bǔ)的腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合測定擇一些特異性較高，可以互補(bǔ)的腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合測定 ，對提高腫瘤的檢出率是有價(jià)值的。，對提高腫瘤的檢出率是有價(jià)值的。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 59 腫瘤標(biāo)記物的現(xiàn)實(shí)腫瘤標(biāo)記物的現(xiàn)實(shí)： v腫瘤標(biāo)記物非常之多腫瘤標(biāo)記物非常之多 v單個(gè)標(biāo)記物的敏感性或特異性偏低，不能滿足臨床要求。單個(gè)標(biāo)記物的敏感性或特異性偏低

52、，不能滿足臨床要求。 v理論上和實(shí)踐上都提倡一次同時(shí)測定多種標(biāo)記物，以提高理論上和實(shí)踐上都提倡一次同時(shí)測定多種標(biāo)記物，以提高 敏感性和特異性。敏感性和特異性。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 60 為什么重視腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合監(jiān)測為什么重視腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合監(jiān)測 v敏感性和特異性的限制，對早期腫瘤的檢出陽性率較低敏感性和特異性的限制，對早期腫瘤的檢出陽性率較低 v單一選用一種腫瘤標(biāo)志物對腫瘤進(jìn)行診斷、監(jiān)測是不夠的單一選用一種腫瘤標(biāo)志物對腫瘤進(jìn)行診斷、監(jiān)測是不夠的 v一種腫瘤?？赡墚a(chǎn)生多種腫瘤標(biāo)志物一種腫瘤?？赡墚a(chǎn)生多種腫瘤標(biāo)志物 v聯(lián)合檢測數(shù)種腫瘤標(biāo)志物有可能取長補(bǔ)短，提高診斷水平聯(lián)合檢測數(shù)種腫

53、瘤標(biāo)志物有可能取長補(bǔ)短，提高診斷水平 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 61 腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合應(yīng)用的要點(diǎn)腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合應(yīng)用的要點(diǎn) v靈敏度與特異性的關(guān)系靈敏度與特異性的關(guān)系 v假陰性與假陽性的關(guān)系假陰性與假陽性的關(guān)系 v腫瘤標(biāo)記物與患者個(gè)體差異和與患者臨床具體情況的關(guān)系腫瘤標(biāo)記物與患者個(gè)體差異和與患者臨床具體情況的關(guān)系 v腫瘤標(biāo)記物的分析要結(jié)合臨床情況腫瘤標(biāo)記物的分析要結(jié)合臨床情況 v腫瘤標(biāo)記物不是腫瘤確診的唯一依據(jù)，腫瘤確診是一定要有腫瘤標(biāo)記物不是腫瘤確診的唯一依據(jù)，腫瘤確診是一定要有 組織或細(xì)胞病理學(xué)的診斷依據(jù)。組織或細(xì)胞病理學(xué)的診斷依據(jù)。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 62 常

54、用腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測的臨床應(yīng)用常用腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測的臨床應(yīng)用 腫瘤腫瘤 首選標(biāo)志物首選標(biāo)志物 補(bǔ)充標(biāo)志物補(bǔ)充標(biāo)志物 肺癌肺癌 CEACEA、NSENSE、CYFRA21-1 TPACYFRA21-1 TPA、SCCSCC、ACTHACTH、降鈣素、降鈣素、TSATSA 肝癌肝癌 AFP AFUAFP AFU、GTGT、CEACEA、ALPALP 乳腺癌乳腺癌 CA15-3CA15-3、CEA CA549CEA CA549、hCGhCG、降鈣素、鐵蛋白、降鈣素、鐵蛋白 胃癌胃癌 CA72-4 CEACA72-4 CEA、CA19-9CA19-9、CA242CA242 前列腺癌前列腺癌 PSAP

55、SA、f-PSA PAPf-PSA PAP 結(jié)腸直腸癌結(jié)腸直腸癌 CEA CA19-9CEA CA19-9、CA50 CA50 胰腺癌胰腺癌 CA19-9 CA50CA19-9 CA50、CEACEA、CA125 CA125 卵巢癌卵巢癌 CA125 CEACA125 CEA、hCGhCG、CA19-9 CA19-9 睪丸腫瘤睪丸腫瘤 AFPAFP、hCGhCG 宮頸癌宮頸癌 SCC CA125SCC CA125、CEACEA、TPA TPA 膀胱癌膀胱癌 無無 TPATPA、CEA CEA 骨髓瘤骨髓瘤 本本- -周蛋白、周蛋白、2- 2-M M 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 63

56、臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 64 七.TM測定的合理應(yīng)用及注意事項(xiàng) 1.1.動(dòng)態(tài)記錄動(dòng)態(tài)記錄TMTM的濃度變化的濃度變化: : TMTM測定的臨床價(jià)值重要的在于動(dòng)態(tài)觀察測定的臨床價(jià)值重要的在于動(dòng)態(tài)觀察, , 有時(shí)候即使在參考范圍內(nèi)的濃度變化有時(shí)候即使在參考范圍內(nèi)的濃度變化, ,可能也可能也 是有價(jià)值的。是有價(jià)值的。 2.2.定期測定定期測定TMTM的濃度的濃度: : 應(yīng)根據(jù)不同的患者、不同的腫瘤制定不應(yīng)根據(jù)不同的患者、不同的腫瘤制定不 同的測定時(shí)間表。同的測定時(shí)間表。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 65 一般的原則：一般的原則： 治療前：治療前：應(yīng)測定每個(gè)病人應(yīng)測定每個(gè)病人T

57、M的原始值；的原始值； 治療后第治療后第1年至第年至第2年：年：應(yīng)每月測定；應(yīng)每月測定； TM濃度明顯下降后：濃度明顯下降后：每三個(gè)月測定一次；每三個(gè)月測定一次； 第第3年至第年至第5年：年：每年測定每年測定12次；次； 第第6年起：年起：每年一次；每年一次； 此外，每次改變治療方案、此外，每次改變治療方案、TM濃度增加或懷濃度增加或懷 疑復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移時(shí)，均應(yīng)及時(shí)測定疑復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移時(shí)，均應(yīng)及時(shí)測定TM濃度。濃度。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 66 3.3.合理的選用合理的選用TM:TM: 同一腫瘤可能含有一種或多種同一腫瘤可能含有一種或多種TM,TM,而不同或同種腫瘤的而不同或同種腫瘤的

58、 不同組織類型既可有共同的不同組織類型既可有共同的TM,TM,也可有不同的也可有不同的TMTM。 4.TM4.TM的組合測定的組合測定: : 合理的組合將有助于提高檢測的靈敏度合理的組合將有助于提高檢測的靈敏度, ,但常導(dǎo)致特異但常導(dǎo)致特異 性的下降性的下降, ,因此因此,TM,TM的組合測定應(yīng)同時(shí)考慮靈敏度和特異性。的組合測定應(yīng)同時(shí)考慮靈敏度和特異性。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 67 TM檢測與臨床診斷 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 68 0 5 10 15 20 25 30 35 治療治療 0 1 2 3 4 5 6月 病人基礎(chǔ)測定值的變化，對于結(jié)果的分析極有價(jià)值病人基

59、礎(chǔ)測定值的變化，對于結(jié)果的分析極有價(jià)值 。故應(yīng)監(jiān)測病人治療前、治療中和治療后各個(gè)階段腫。故應(yīng)監(jiān)測病人治療前、治療中和治療后各個(gè)階段腫 瘤標(biāo)志物含量的變化，最好畫一張腫瘤標(biāo)志物含量的瘤標(biāo)志物含量的變化，最好畫一張腫瘤標(biāo)志物含量的 變化的曲線圖，以便綜合分析。變化的曲線圖，以便綜合分析。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 69 The end 謝謝大家謝謝大家 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 70 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 71 八八. .腫瘤標(biāo)志物的臨床價(jià)值評價(jià)腫瘤標(biāo)志物的臨床價(jià)值評價(jià) 1.1.靈敏度或敏感性（靈敏度或敏感性（SESE）：）： 是指該指標(biāo)的真陽性率或陽性率，

60、或是指腫瘤是指該指標(biāo)的真陽性率或陽性率，或是指腫瘤 患者的患者的TMTM陽性率；陽性率； 靈敏度真陽性數(shù)真陽性數(shù)假陰性數(shù)靈敏度真陽性數(shù)真陽性數(shù)假陰性數(shù)100100 真陽性數(shù)被檢病人總數(shù)真陽性數(shù)被檢病人總數(shù) 100 100 如：在如：在100100例腫瘤病人中檢測結(jié)果例腫瘤病人中檢測結(jié)果7070例病人為例病人為 陽性，則其靈敏度為陽性，則其靈敏度為7070100100，即，即7070，其中，其中3030例例 為假陰性。為假陰性。 臨床醫(yī)學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢測和臨 床應(yīng)用 72 2.2.特異性特異性（SPSP）：）： 是指該指標(biāo)的真陰性率或陰性率，或是指非腫是指該指標(biāo)的真陰性率或陰性率，或是指非腫 瘤