生物血紅蛋白的提取和分離新人教選修

1、一、基礎知識：一、基礎知識： 凝膠色譜法（分配色譜法）：凝膠色譜法（分配色譜法）： 1、凝膠：、凝膠： 一些微小多孔的球體（內含許多貫穿的一些微小多孔的球體（內含許多貫穿的 通道，由多糖類構成如葡聚糖、瓊脂糖，通道，由多糖類構成如葡聚糖、瓊脂糖， 具多孔的凝膠就叫分子篩）具多孔的凝膠就叫分子篩） 2、概念：、概念：根據(jù)被根據(jù)被分離物質的蛋白質相對分離物質的蛋白質相對 分子質量的大小分子質量的大小，利用具有網(wǎng)狀結構的凝，利用具有網(wǎng)狀結構的凝 膠的分子篩作用，來進行分離。膠的分子篩作用，來進行分離。 3、原理：、原理：當不同的蛋白質通過凝膠時，相當不同的蛋白質通過凝膠時，相 對（對（ ）的蛋白質容

2、易進入）的蛋白質容易進入 凝膠內部的通道，路程（凝膠內部的通道，路程（ ），移動速），移動速 度（度（ ），而（），而（ ）的蛋）的蛋 白質無法進入凝膠內部的通道，只能在白質無法進入凝膠內部的通道，只能在 （ ）移動，路程（）移動，路程（ ），移動速），移動速 度（度（ ），相對分子質量不同的蛋白質因），相對分子質量不同的蛋白質因 此得以分離。此得以分離。 相對分子質量較小相對分子質量較小 較長較長 較慢較慢相對分子質量較大相對分子質量較大 凝膠外部凝膠外部 較短較短 較快較快 4、具體過程、具體過程 1、概念：在一定的范圍內，能對抗外、概念：在一定的范圍內，能對抗外 來少量強酸、強堿或稍加稀

3、釋不引起溶液來少量強酸、強堿或稍加稀釋不引起溶液 PH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具 有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液。有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液。 緩沖溶液：緩沖溶液： 2、作用：、作用： 能夠抵制（能夠抵制（ ）的對溶液）的對溶液 的（的（ ）的影響，維持）的影響，維持PH基本不變?；静蛔儭?外界的酸或堿外界的酸或堿 PH值值 3、緩沖溶液的配制、緩沖溶液的配制 通常由（通常由（ ）種緩沖劑溶解于水）種緩沖劑溶解于水 中配制而成。調節(jié)緩沖劑的（中配制而成。調節(jié)緩沖劑的（ ） 就可以制得（就可以制得（ ）使用的）使用的 緩沖液。緩沖液。 12 使用比例使

4、用比例 在不同在不同PH范圍內范圍內 人體血液中緩沖液人體血液中緩沖液: NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 電泳：電泳： 1、概念：指帶電粒子在電場作用下發(fā)、概念：指帶電粒子在電場作用下發(fā) 生遷移的過程。生遷移的過程。 2、原理：許多重要的生物大分子，如、原理：許多重要的生物大分子，如 （ ）等都具有）等都具有( ) 在在( )下下，這些基團會帶上，這些基團會帶上 （ ） 。在電場的作用下，這些。在電場的作用下，這些 帶電分子會向著與其（帶電分子會向著與其（ ） 移動。電泳利用了待分離樣品中各種分子移動。電泳利用了待分離樣品中各種分子 （ ）以及分子本身）以及分

5、子本身 （ ）、（）、（ ）的）的不同使帶電分子不同使帶電分子 產(chǎn)生不同的（產(chǎn)生不同的（ ），從而實現(xiàn)樣），從而實現(xiàn)樣 品中各種分子的分離。品中各種分子的分離。 多肽、核酸多肽、核酸可解離的基團可解離的基團 正電或負電正電或負電 所帶電荷相反的電極所帶電荷相反的電極 帶電性質的差異帶電性質的差異 大小大小 形狀形狀 遷移速度遷移速度 一定的一定的PH 分類：分類： 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳和和聚丙稀酰胺凝膠電泳。聚丙稀酰胺凝膠電泳。 測定（測定（ ）通）通 常用十二烷基硫酸鈉（常用十二烷基硫酸鈉（SDS）聚丙稀聚丙稀 酰胺凝膠電泳酰胺凝膠電泳 蛋白質相對分子質量蛋白質相對分子質量 為了消除

6、靜電荷對遷移率的影響可以在凝膠為了消除靜電荷對遷移率的影響可以在凝膠 中加入中加入( )。SDS能使蛋白質發(fā)生完全變性。能使蛋白質發(fā)生完全變性。 由幾條肽鏈組成的蛋白質復合體在由幾條肽鏈組成的蛋白質復合體在SDS的作用的作用 下會解聚成單條肽鏈，下會解聚成單條肽鏈，因此測定的結果只是因此測定的結果只是 ( )。SDS能與各種蛋白質能與各種蛋白質 形成蛋白質形成蛋白質SDS復合物，復合物，SDS所所帶帶負電荷負電荷的的 量大大超過了蛋白質分子原有電荷量。量大大超過了蛋白質分子原有電荷量。因而因而 掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別，使電泳掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別，使電泳 遷移率完全取決于遷移率

7、完全取決于( )。 蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于 它所帶靜電荷的多少以及分子的大小等因素。它所帶靜電荷的多少以及分子的大小等因素。 SDS 單條肽鏈的分子量單條肽鏈的分子量 分子的大小分子的大小 聚丙烯酰胺凝膠電泳對分離大分子具有聚丙烯酰胺凝膠電泳對分離大分子具有 較高的分辨率，但核酸比蛋白質分子大較高的分辨率，但核酸比蛋白質分子大 得多，只能采用較大孔徑的瓊脂糖凝膠得多，只能采用較大孔徑的瓊脂糖凝膠 電泳。核酸分子本身含有大量的磷酸根，電泳。核酸分子本身含有大量的磷酸根， 核酸帶負電荷核酸帶負電荷，在電場中向正極移動。，在電場中向正極移動。 溴

8、化乙啶熒光染料對核酸染色在紫外線溴化乙啶熒光染料對核酸染色在紫外線 的照射下，發(fā)出橙紅色熒光。根據(jù)熒光的照射下，發(fā)出橙紅色熒光。根據(jù)熒光 條帶的粗細和分布的位置，可以對其鑒條帶的粗細和分布的位置，可以對其鑒 定。定。 說明：說明： 電泳檢測結果電泳檢測結果 在紅細胞的組成中，在紅細胞的組成中， 約約90%90%是血紅蛋白。是血紅蛋白。 它由它由四個肽鏈四個肽鏈組成，組成， 包括兩個包括兩個肽鏈和肽鏈和 兩個兩個肽鏈。每條肽鏈。每條 肽鏈環(huán)繞一個肽鏈環(huán)繞一個亞鐵亞鐵 血紅素血紅素基團，可攜基團，可攜 帶帶一分子氧或一分一分子氧或一分 子二氧化碳子二氧化碳。血紅。血紅 蛋白因含蛋白因含血紅血紅素而

9、素而 呈現(xiàn)紅色。呈現(xiàn)紅色。 蛋白質的提取和分離一般分為四步：蛋白質的提取和分離一般分為四步： （1 1）樣品處理：包括洗滌紅細胞；血紅蛋）樣品處理：包括洗滌紅細胞；血紅蛋 白稀釋；離心等操作收集到的血紅蛋白溶白稀釋；離心等操作收集到的血紅蛋白溶 液。液。 （2 2）粗分離：透析除去分子較小的雜質。）粗分離：透析除去分子較小的雜質。 （3 3）純化：通過凝膠色譜法將分子量較大）純化：通過凝膠色譜法將分子量較大 的雜質蛋白質除去。的雜質蛋白質除去。 （4 4）純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳）純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳 鑒定。鑒定。 二二 實驗操作實驗操作 蛋白質的提取和分離一般分為四步：蛋

10、白質的提取和分離一般分為四步： 1.樣品處理樣品處理 血血 液液 血漿血漿 水分水分 固體物質固體物質 血漿蛋白血漿蛋白 無機鹽無機鹽 磷脂磷脂 葡萄糖等葡萄糖等 血細胞血細胞 白細胞白細胞 血小板血小板 紅細胞紅細胞 （最多）（最多） 血紅血紅 蛋白蛋白 （ ） 兩個兩個a a肽鏈肽鏈 兩個兩個一肽鏈肽鏈 樣品處理樣品處理粗分離粗分離純化純化純度鑒定純度鑒定 共四條肽鏈共四條肽鏈90 1 1、紅細胞的洗滌：、紅細胞的洗滌： 目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝 固；離心將血液分層，用膠頭吸管吸出黃色血漿；固；離心將血液分層，用膠頭吸管吸出黃色血

11、漿； 用生理鹽水洗滌。用生理鹽水洗滌。 2 2、血紅蛋白的釋放：、血紅蛋白的釋放： 在蒸餾水和甲苯作用下，紅細胞破裂釋放在蒸餾水和甲苯作用下，紅細胞破裂釋放 3 3、分離血紅蛋白溶液：、分離血紅蛋白溶液： 離心分層；濾紙過濾去除脂溶性沉淀層；分液漏離心分層；濾紙過濾去除脂溶性沉淀層；分液漏 斗分出紅色透明液體。斗分出紅色透明液體。 4 4、透析：、透析： 裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（PHPH為為7.07.0）透析。）透析。 有機溶劑有機溶劑 無色透明的甲苯層無色透明的甲苯層 脂類物質脂類物質 白色脂溶性物質沉淀白色脂溶性物質沉淀 層層 血紅蛋白溶液血紅蛋白溶液

12、紅色透明液體紅色透明液體 紅細胞破碎物沉淀紅細胞破碎物沉淀 暗紅色沉淀暗紅色沉淀 物物 1、隨著人類跨入蛋白質組時代，對蛋、隨著人類跨入蛋白質組時代，對蛋 白質的研究和應用越來越深入，首先要白質的研究和應用越來越深入，首先要 做的一步是做的一步是 A 弄清各種蛋白質的空間結構弄清各種蛋白質的空間結構 B 弄清各種蛋白質的功能弄清各種蛋白質的功能 C 弄清各種蛋白質的合成過程弄清各種蛋白質的合成過程 D 獲得高純度的蛋白質獲得高純度的蛋白質 2、用凝膠色譜法分離蛋白質的過程中，、用凝膠色譜法分離蛋白質的過程中， 關于蛋白質的敘述，正確的是關于蛋白質的敘述，正確的是 A 相對分子質量較小的蛋白質行

13、程大于相對分子質量較小的蛋白質行程大于 相對分子質量較大的蛋白質相對分子質量較大的蛋白質 B 相對分子質量較小的蛋白質行程小于相對分子質量較小的蛋白質行程小于 相對分子質量較大的蛋白質相對分子質量較大的蛋白質 C 相對分子質量較小的蛋白質行程等于相對分子質量較小的蛋白質行程等于 相對分子質量較大的蛋白質相對分子質量較大的蛋白質 D 二者根本無法比較二者根本無法比較 3、使用、使用SDS-聚丙烯酰胺電泳過程中，不聚丙烯酰胺電泳過程中，不 同蛋白質的電泳遷移率完全取決于同蛋白質的電泳遷移率完全取決于 A 電荷的多少電荷的多少 B 分子的大小分子的大小 C 肽鏈的多少肽鏈的多少 D 分子形狀的差異分

14、子形狀的差異 4、在采血容器中加入檸檬酸鈉的目的是、在采血容器中加入檸檬酸鈉的目的是 A 調節(jié)調節(jié)pH B 維持紅細胞的能量供應維持紅細胞的能量供應 C 防止微生物生長防止微生物生長 D 防止血液凝固防止血液凝固 5、一分子血紅蛋白最多可攜帶的、一分子血紅蛋白最多可攜帶的 O2分子分子 數(shù)和數(shù)和CO2分子數(shù)分別是分子數(shù)分別是 A 4、2 B 4、4 C 2、1 D、1、1 6、記住樣品處理中的血紅蛋白溶液離心后、記住樣品處理中的血紅蛋白溶液離心后 分層順序分層順序自上而下自上而下是：是： 有有機溶劑機溶劑-脂脂類物質類物質-血血紅蛋白溶液紅蛋白溶液- -紅紅細胞破碎物沉淀細胞破碎物沉淀 考試寶

15、典考試寶典 考試寶典考試寶典 wpe36xrz wpe36xrz 是在這里蹲點吧！是在這里蹲點吧！”“”“你就不能配合點嗎。你就不能配合點嗎?！薄啊薄澳阌譀]讓我配合。你又沒讓我配合?！北蝗诉z忘的慕容凌娢終于從地上站了起來，但被人遺忘的慕容凌娢終于從地上站了起來，但 感覺自己的腦細胞正急速死亡，智商再次跌入谷底。韓哲軒怎么會知道我的真名？百蝶好像也知道他去找過夏樺。感覺自己的腦細胞正急速死亡，智商再次跌入谷底。韓哲軒怎么會知道我的真名？百蝶好像也知道他去找過夏樺。 “呃呃”慕容凌娢強壯鎮(zhèn)定的笑了笑，慕容凌娢強壯鎮(zhèn)定的笑了笑，“韓哲軒你怎么會在這里？韓哲軒你怎么會在這里？”“”“百蝶不是說了嗎，我

16、就是在這里專門等你們百蝶不是說了嗎，我就是在這里專門等你們 的。的?！表n哲軒極其爽快的承認了自己的行為，韓哲軒極其爽快的承認了自己的行為，“我看見你們兩個出來，就跟上了。剛想叫住你就看見你往后摔了我看見你們兩個出來，就跟上了。剛想叫住你就看見你往后摔了幸幸 好我閃的快好我閃的快”這劇情跟我想的怎么不一樣？按照言情小說的正常套路，我不是應該被人準確無誤的接住嗎？然后不這劇情跟我想的怎么不一樣？按照言情小說的正常套路，我不是應該被人準確無誤的接住嗎？然后不 就順理成章的就順理成章的慕容凌娢居然做起了花癡的白日夢。慕容凌娢把自己的幻想和現(xiàn)實仔細對照了一下，又看了看面前這慕容凌娢居然做起了花癡的白日夢

17、。慕容凌娢把自己的幻想和現(xiàn)實仔細對照了一下，又看了看面前這 個笑得漫不經(jīng)心的人，悲痛的捂住了臉個笑得漫不經(jīng)心的人，悲痛的捂住了臉童話里的故事果真都是騙人的童話里的故事果真都是騙人的自己怎么能指望這種人呢？自己怎么能指望這種人呢？“凌娢你怎么凌娢你怎么 了？了？”百蝶看著一直發(fā)呆的慕容凌娢，稍許有些擔憂，百蝶看著一直發(fā)呆的慕容凌娢，稍許有些擔憂，“不會真的摔傻了吧！不會真的摔傻了吧！”“”“沒沒沒事。沒事。”慕容凌娢緊張的搖了慕容凌娢緊張的搖了 搖頭，生怕百蝶看出什么端倪。搖頭，生怕百蝶看出什么端倪?！安贿^韓哲軒，你怎么會知道我的真名？不過韓哲軒，你怎么會知道我的真名？”既然韓哲軒知道了自己的名

18、字，也就是知道既然韓哲軒知道了自己的名字，也就是知道 了自己一開始就說了謊，真的好尷尬??！了自己一開始就說了謊，真的好尷尬啊！“像我這種開掛玩家，怎么能連這種東西都不知道呢。像我這種開掛玩家，怎么能連這種東西都不知道呢。”韓哲軒居然沒有再提韓哲軒居然沒有再提 起起“白綾白綾”這個化名，這讓慕容凌娢很是欣慰。這個化名，這讓慕容凌娢很是欣慰。“是夏先生告訴你的吧！是夏先生告訴你的吧！”慕容凌娢絕對不會相信這是可以猜到的東西。慕容凌娢絕對不會相信這是可以猜到的東西。 “如果你樂意這樣想，我不介意。如果你樂意這樣想，我不介意?！? (古風一言古風一言) )那時，誰繡芙蓉鴛鴦戲。而今，誰惹青絲千里外。第

19、那時，誰繡芙蓉鴛鴦戲。而今，誰惹青絲千里外。第016016章章 原來不是青原來不是青 樓樓“是夏先生告訴你的吧！我的真名。是夏先生告訴你的吧！我的真名。”慕容凌娢絕對不會相信這是可以猜到的東西。慕容凌娢絕對不會相信這是可以猜到的東西?！叭绻銟芬膺@樣想，我不介如果你樂意這樣想，我不介 意。意。”韓哲軒攤開雙手，還是一副漫不經(jīng)心的樣子。韓哲軒攤開雙手，還是一副漫不經(jīng)心的樣子?！澳强磥硎俏蚁脲e了，你是怎么知道的？那看來是我想錯了，你是怎么知道的？”“”“猜得。猜得?！薄啊薄芭叮瓉砼?，原來 是這樣啊是這樣啊”慕容凌娢表面上笑著說，心里卻在告誡自己，冷靜慕容凌娢表面上笑著說，心里卻在告誡自己，冷靜一

20、定要冷靜，不能著急，不能生氣一定要冷靜，不能著急，不能生氣這算是答這算是答 復嗎？太敷衍了吧！不想告訴我就直說嗎，真是煩人。韓哲軒最終也沒有告訴慕容凌娢他是怎么知道她的真實姓名的，復嗎？太敷衍了吧！不想告訴我就直說嗎，真是煩人。韓哲軒最終也沒有告訴慕容凌娢他是怎么知道她的真實姓名的， 因為這個話題很快就被百蝶機智的轉移了，她可不想看著兩個人如此尷尬的僵持在大街上，畢竟這樣太引人注意了。因為這個話題很快就被百蝶機智的轉移了，她可不想看著兩個人如此尷尬的僵持在大街上，畢竟這樣太引人注意了。 “凌娢，你不是覺得餓了嗎？趕快走吧。凌娢，你不是覺得餓了嗎？趕快走吧?！卑俚饺萘鑺蔚母觳脖銓⑺蚯巴先?/p>

21、，強行拉開了她和韓哲軒的距離。百蝶拉著慕容凌娢的胳膊便將她向前拖去，強行拉開了她和韓哲軒的距離。 “就是，如果為了那種小事而餓死在大街上可就劃不來了。就是，如果為了那種小事而餓死在大街上可就劃不來了。”要不是被百蝶拉著，慕容凌娢早就撲上去把韓哲軒暴打一要不是被百蝶拉著，慕容凌娢早就撲上去把韓哲軒暴打一 頓了，尤其是他那張好看但欠揍的臉，總是笑得讓人很不爽。不過話說回來，那個高度對她來說可能不太好觸碰。頓了，尤其是他那張好看但欠揍的臉，總是笑得讓人很不爽。不過話說回來，那個高度對她來說可能不太好觸碰?！耙?不是害怕胳膊疼，我早就把你的臉打成豬頭了！不是害怕胳膊疼，我早就把你的臉打成豬頭了！”就算打不成，氣勢就算打不成，氣勢 二二 實驗操作實驗操作 蛋白質的提取和分離一般分為四步：蛋白質的提取和分離一般分為四