第三章糖和苷類

1、湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院Wednesday, July 07, 2021王 糾 第三章第三章 糖和苷類化合物糖和苷類化合物本章基本內(nèi)容本章基本內(nèi)容 一、概述一、概述 二、糖和苷的結(jié)構(gòu)與分類二、糖和苷的結(jié)構(gòu)與分類 三、糖和苷的理化性質(zhì)三、糖和苷的理化性質(zhì) 四、糖和苷的提取與分離四、糖和苷的提取與分離 五、糖和苷的檢識(shí)五、糖和苷的檢識(shí) 六、苷結(jié)構(gòu)的研究六、苷結(jié)構(gòu)的研究 2p 苷的提取與分離苷的提取與分離p 苷的檢識(shí)苷的檢識(shí)p 苷的結(jié)構(gòu)研究苷的結(jié)構(gòu)研究 第三講第三講3掌握：苷的分類提取及其常用分離方法熟悉：苷的結(jié)構(gòu)研究方法。了解：苷的檢識(shí)方法41、提?。?、提?。核?、苷的提取分離四、苷的提取分離5p 苷的種

2、類不同，性質(zhì)不同，提取分離方苷的種類不同，性質(zhì)不同，提取分離方法也不同法也不同l苷：極性隨著糖基的增多而增大。糖基增多，苷苷：極性隨著糖基的增多而增大。糖基增多，苷元所占比例相應(yīng)變小，親水性增大。元所占比例相應(yīng)變小，親水性增大。l苷元：一般可溶于低極性有機(jī)溶劑。苷元：一般可溶于低極性有機(jī)溶劑。6 原生苷原生苷：先要設(shè)法先要設(shè)法抑制或破壞酶的活性抑制或破壞酶的活性,常常用的方法是采用用的方法是采用甲醇、乙醇或沸水甲醇、乙醇或沸水提取提取 , 或或在藥材中拌入在藥材中拌入CaCO3, 在提取過(guò)程中要在提取過(guò)程中要盡量盡量避免與酸或堿接觸避免與酸或堿接觸，以防苷類被酸或堿水解次生苷：次生苷：可利用發(fā)

3、酵、酶解、酸堿水解等可利用發(fā)酵、酶解、酸堿水解等方法處理藥材，選擇性部分水解以提高目標(biāo)方法處理藥材，選擇性部分水解以提高目標(biāo)物產(chǎn)量。提取前將藥材粗粉加適量水拌勻，物產(chǎn)量。提取前將藥材粗粉加適量水拌勻，加熱至加熱至35左右保持左右保持2448小時(shí)，再用有機(jī)小時(shí)，再用有機(jī)溶劑（醇、苯、氯仿、石油醚）進(jìn)行提取溶劑（醇、苯、氯仿、石油醚）進(jìn)行提取7 提取提取苷元苷元時(shí)，先用適當(dāng)方法徹底水解時(shí)，先用適當(dāng)方法徹底水解苷類（酶解或酸水解），再用乙酸乙酯、苷類（酶解或酸水解），再用乙酸乙酯、氯仿、石油醚等極性小的有機(jī)溶劑提出氯仿、石油醚等極性小的有機(jī)溶劑提出苷元；也可先提取總苷，再水解成苷元苷元；也可先提取總

4、苷，再水解成苷元 例如：例如：大豆苷元（葛根）大豆苷元（葛根）提取苷應(yīng)注意問(wèn)題提取苷應(yīng)注意問(wèn)題1) 破壞酶的活性破壞酶的活性 :2) 注意酸堿條件防止苷水解注意酸堿條件防止苷水解3) 根據(jù)需要采取不同方法提取苷根據(jù)需要采取不同方法提取苷 苷元苷元酸水解酸水解 原生苷原生苷防止水解防止水解 次生苷次生苷酶解酶解880以上加熱以上加熱60以上醇提取以上醇提取加入加入CaCO3后沸水煮后沸水煮 中中 藥藥 EtO H EtO H 提提 取取 物物 減減 壓壓 回回 收收 EtO H 濃濃 縮縮 物物 石石 油油 醚醚 提提 取取 石石 油油 醚醚 部部 分分 殘殘 留留 物物 （ 多多 為為 油油

5、脂脂 ） Et2O 或或 CH Cl3提提 取取 Et2O 或或 CH Cl3 殘殘 留留 物物 提提 取取 物物 （ 苷苷 元元 ） EtO Ac 提提 取取 EtO Ac 提提 取取 液液 殘殘 留留 物物 （ 含含 單單 糖糖 苷苷 或或 含含 糖糖 較較 少少 的的 苷苷 ） n-BuO H 提提 取取 n-BuO H 提提 取取 液液 （ 含含 糖糖 較較 多多 的的 苷苷 ） 苷類的提取和分離流程苷類的提取和分離流程( (系統(tǒng)溶劑提取法系統(tǒng)溶劑提取法 ) )9水沉水層先用水飽和 經(jīng)初步提取得到的苷類通常極性較大，且多為非經(jīng)初步提取得到的苷類通常極性較大，且多為非結(jié)晶性物質(zhì)，同時(shí)不同

6、程度地混有其他物質(zhì)，分離結(jié)晶性物質(zhì)，同時(shí)不同程度地混有其他物質(zhì)，分離困難，一般需先除去雜質(zhì)，再進(jìn)一步分離純化。困難，一般需先除去雜質(zhì)，再進(jìn)一步分離純化。n 除雜：可用溶劑沉淀法，也可用大孔樹(shù)脂吸附法來(lái)富集、除雜：可用溶劑沉淀法，也可用大孔樹(shù)脂吸附法來(lái)富集、純化總苷。純化總苷。2、分離、分離10粗提物溶于少量粗提物溶于少量甲醇或水，加丙甲醇或水，加丙酮或乙醚使較純酮或乙醚使較純的苷類沉淀析出的苷類沉淀析出粗提物溶于水粗提物溶于水,上大孔上大孔樹(shù)脂柱樹(shù)脂柱,先用水洗去無(wú)先用水洗去無(wú)機(jī)鹽、糖、多肽等雜機(jī)鹽、糖、多肽等雜質(zhì)質(zhì),再用逐步增加濃度再用逐步增加濃度的稀醇洗脫苷類的稀醇洗脫苷類n分離：綜合應(yīng)用

7、各種色譜法分離：綜合應(yīng)用各種色譜法硅膠：多用氯仿硅膠：多用氯仿-甲醇系統(tǒng)洗脫。甲醇系統(tǒng)洗脫。 （常用，適用大多數(shù)苷）（常用，適用大多數(shù)苷）反相硅膠：水反相硅膠：水-甲醇或水甲醇或水-乙腈系統(tǒng)。乙腈系統(tǒng)。 （皂苷、某些親水性苷）（皂苷、某些親水性苷）凝膠：凝膠：Sephadex LH-20、Sephadex G系列。水系列。水-醇系統(tǒng)洗脫。醇系統(tǒng)洗脫。（適于分子量不同的苷類，如蒽醌、二蒽酮類）（適于分子量不同的苷類，如蒽醌、二蒽酮類）大孔樹(shù)脂、活性炭、纖維素、聚酰胺、離子交換樹(shù)脂等大孔樹(shù)脂、活性炭、纖維素、聚酰胺、離子交換樹(shù)脂等大孔樹(shù)脂法、溶劑法等通?？沙羝渌s質(zhì)，獲得總苷；柱大孔樹(shù)脂法、溶劑

8、法等通?？沙羝渌s質(zhì)，獲得總苷；柱色譜法可得到單體化合物色譜法可得到單體化合物11物理吸附：物理吸附： 分子間力，無(wú)選擇性，可逆。分子間力，無(wú)選擇性，可逆。 硅膠、氧化鋁、活性炭硅膠、氧化鋁、活性炭化學(xué)吸附：化學(xué)吸附：化學(xué)鍵，選擇性較強(qiáng)，常不可逆。化學(xué)鍵，選擇性較強(qiáng)，常不可逆。 硅膠硅膠生物堿生物堿 堿性氧化鋁堿性氧化鋁黃酮、蒽醌等黃酮、蒽醌等半化學(xué)吸附半化學(xué)吸附：氫鍵，選擇性較弱，多可逆氫鍵，選擇性較弱，多可逆 聚酰胺聚酰胺根據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離根據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離12物理吸附的基本規(guī)律：極性相似者易于吸附物理吸附的基本規(guī)律：極性相似者易于吸附 n 非極性吸附劑：活性炭非極性吸附

9、劑：活性炭 對(duì)非極性成分吸附強(qiáng)對(duì)非極性成分吸附強(qiáng) 溶劑極性溶劑極性 吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附力吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附力 溶質(zhì)可被極性弱的溶劑洗脫溶質(zhì)可被極性弱的溶劑洗脫n 極性吸附劑：硅膠、氧化鋁極性吸附劑：硅膠、氧化鋁 對(duì)極性物質(zhì)親和力強(qiáng)對(duì)極性物質(zhì)親和力強(qiáng) 溶劑極性溶劑極性 吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附力吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附力 溶質(zhì)可被極性強(qiáng)的溶劑洗脫溶質(zhì)可被極性強(qiáng)的溶劑洗脫 13 一般物質(zhì)：官能團(tuán)的種類、數(shù)目、位置、碳鏈長(zhǎng)短一般物質(zhì)：官能團(tuán)的種類、數(shù)目、位置、碳鏈長(zhǎng)短 R-COOHR-COOHAr-OHAr-OHR-OHR-OHR-NH-R-NH-R-CO-NH-R-CO-NH- R-CHO R-CHOR-CO

10、-RR-CO-R R-COO-RR-COO-R R-O-RR-O-R R-XR-X R-HR-H溶劑：介電常數(shù)溶劑：介電常數(shù) ，極性，極性 環(huán)己烷（環(huán)己烷（1.881.88） 苯（苯（2.292.29） 無(wú)水乙醚（無(wú)水乙醚（4.474.47） 氯仿（氯仿（5.205.20） 乙酸乙酯（乙酸乙酯（6.116.11） 乙醇（乙醇（26.026.0） 甲醇（甲醇（31.231.2） 水（水（81.081.0）極性及強(qiáng)弱判斷極性及強(qiáng)弱判斷 14活性炭吸附法活性炭吸附法G結(jié)晶、重結(jié)晶中脫色、脫臭結(jié)晶、重結(jié)晶中脫色、脫臭A從大量稀水液中濃縮微量物質(zhì)從大量稀水液中濃縮微量物質(zhì)1 1）簡(jiǎn)單吸附法用于物質(zhì)的濃縮

11、與精制）簡(jiǎn)單吸附法用于物質(zhì)的濃縮與精制15硅膠吸附柱色譜硅膠吸附柱色譜n 氧化鋁吸附柱色譜氧化鋁吸附柱色譜 A A吸附劑：吸附劑：30306060倍，有時(shí)倍，有時(shí)100100200200倍倍 B B裝柱：裝柱： 徑高比（徑高比（d/hd/h）1:151:151:201:20 干法裝柱干法裝柱/ /濕法裝柱濕法裝柱 C C上樣：上樣： 干法上樣干法上樣/ /濕法上樣濕法上樣 D D洗脫：洗脫： 等度等度/ /梯度（洗脫劑極性遞增）梯度（洗脫劑極性遞增） E E托尾：托尾： 化學(xué)吸附：硅膠化學(xué)吸附：硅膠堿性成分堿性成分 洗脫劑中加入堿洗脫劑中加入堿 氧化鋁氧化鋁酸性成分酸性成分 洗脫劑中加入酸洗脫

12、劑中加入酸 F F洗脫系統(tǒng)的選擇：洗脫系統(tǒng)的選擇： TLC Rf=0.2TLC Rf=0.20.30.32 2）吸附柱色譜法）吸附柱色譜法16高分子聚合物高分子聚合物不溶于常見(jiàn)有機(jī)溶劑不溶于常見(jiàn)有機(jī)溶劑對(duì)堿穩(wěn)定對(duì)堿穩(wěn)定對(duì)酸特別是無(wú)機(jī)酸穩(wěn)定性差對(duì)酸特別是無(wú)機(jī)酸穩(wěn)定性差 可溶于濃鹽酸、冰乙酸、甲酸中可溶于濃鹽酸、冰乙酸、甲酸中性性 質(zhì)質(zhì)3 3）聚酰胺柱色譜）聚酰胺柱色譜 17分子間氫鍵分子間氫鍵半化學(xué)吸附半化學(xué)吸附吸附原理吸附原理18u化合物在含水溶劑中大致有以下規(guī)律：化合物在含水溶劑中大致有以下規(guī)律：形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目：越多，越強(qiáng)。形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目：越多，越強(qiáng)。形成氫鍵的基團(tuán)所處的位置：形成氫

13、鍵的基團(tuán)所處的位置： 處于易形成分子內(nèi)氫鍵者，減弱。處于易形成分子內(nèi)氫鍵者，減弱。分子中芳香化程度：高，增強(qiáng)。分子中芳香化程度：高，增強(qiáng)。影響吸附力的因素影響吸附力的因素19OHHOOHOHOHOHOHOHOHOHOHOH20u各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力水水 甲醇甲醇 乙醇乙醇 氫氧化鈉水溶液氫氧化鈉水溶液 甲酰胺甲酰胺 二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺 尿素水溶液尿素水溶液 影響吸附力強(qiáng)弱的因影響吸附力強(qiáng)弱的因素素u 化合物在不同溶劑中的吸附力，隨溶劑極性增強(qiáng)而增強(qiáng)化合物在不同溶劑中的吸附力，隨溶劑極性增強(qiáng)而增強(qiáng)n水中最強(qiáng)水中最強(qiáng)常以水裝柱、樣品以水溶解上樣常以水裝

14、柱、樣品以水溶解上樣n含水醇中次之含水醇中次之n醇中最弱醇中最弱常以濃度漸高的含水醇梯度洗脫常以濃度漸高的含水醇梯度洗脫 EtOH-HEtOH-H2 2O O最常用最常用弱弱強(qiáng)強(qiáng)21醌類、黃酮類等酚性的制備和分離。醌類、黃酮類等酚性的制備和分離。脫鞣處理脫鞣處理生物堿、萜類、甾類、糖類、氨基酸等極性生物堿、萜類、甾類、糖類、氨基酸等極性與非極性化合物的分離也有用途與非極性化合物的分離也有用途 應(yīng)應(yīng) 用用22高分子聚合物高分子聚合物白色球形顆粒白色球形顆粒多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不溶于酸、堿、有機(jī)溶劑不溶于酸、堿、有機(jī)溶劑吸附原理：分子間吸附原理：分子間力、氫鍵力、氫鍵分子篩分子篩 性質(zhì)性質(zhì)原理

15、原理4 4）大孔吸附樹(shù)脂）大孔吸附樹(shù)脂 23樹(shù)脂的性質(zhì)：非極性樹(shù)脂樹(shù)脂的性質(zhì)：非極性樹(shù)脂 易吸附非極性化合物易吸附非極性化合物 極性樹(shù)脂極性樹(shù)脂 易吸附極性化合物易吸附極性化合物溶劑的性質(zhì)：溶劑的性質(zhì)：物質(zhì)在溶劑中的溶解度大，樹(shù)脂對(duì)此物質(zhì)的吸附力就物質(zhì)在溶劑中的溶解度大，樹(shù)脂對(duì)此物質(zhì)的吸附力就小小影響吸附力強(qiáng)弱的因影響吸附力強(qiáng)弱的因素素24n水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。n最常用：乙醇最常用：乙醇水水 n廣泛應(yīng)用于化合物的分離與富集工作中廣泛應(yīng)用于化合物的分離與富集工作中 如：如：苷類、糖類的分離苷類、糖類的分離 生物堿的精制生物堿的精制 多糖、黃酮、三萜

16、類化合物的分離。多糖、黃酮、三萜類化合物的分離。 洗脫劑洗脫劑應(yīng)應(yīng) 用用25根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離透析法透析法超濾法超濾法超速離心超速離心凝膠濾過(guò)法凝膠濾過(guò)法 gel filtrationgel filtration： 凝膠滲透色譜凝膠滲透色譜 gel permeation chromtographygel permeation chromtography 分子篩濾過(guò)分子篩濾過(guò) molecular sieve filtrationmolecular sieve filtration26凝膠三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分子篩作用凝膠三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分子篩作用按分子量由大到小的順

17、序分離按分子量由大到小的順序分離原原 理理凝膠濾過(guò)法凝膠濾過(guò)法 gel filtrationgel filtration： 葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠Sephadex GSephadex G： 葡聚糖葡聚糖+ +交聯(lián)劑（環(huán)氧氯丙烷）交聯(lián)劑（環(huán)氧氯丙烷） 分子篩分子篩 水中應(yīng)用水中應(yīng)用 分離水溶性成份分離水溶性成份 商品型號(hào)按交聯(lián)度分類，以商品型號(hào)按交聯(lián)度分類，以1010倍吸水量（倍吸水量（ml/gml/g）表示）表示羥丙基葡聚糖凝膠羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20:Sephadex LH-20: Sephadex G-25 Sephadex G-25羥丙基化所得羥丙基化所得 分子篩和反相

18、色譜相結(jié)合分子篩和反相色譜相結(jié)合 水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中使用水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中使用 水溶性、脂溶性成分都可分水溶性、脂溶性成分都可分 凝膠的種類、性質(zhì)及應(yīng)用凝膠的種類、性質(zhì)及應(yīng)用28根據(jù)物質(zhì)離解程度不同分離進(jìn)行根據(jù)物質(zhì)離解程度不同分離進(jìn)行分離分離離子交換法離子交換法 離子交換樹(shù)脂為固定相，水，含水溶劑裝柱離子交換樹(shù)脂為固定相，水，含水溶劑裝柱含水流動(dòng)相通過(guò)樹(shù)脂含水流動(dòng)相通過(guò)樹(shù)脂可交換離子與樹(shù)脂上的交換基團(tuán)交換，吸附到樹(shù)脂上可交換離子與樹(shù)脂上的交換基團(tuán)交換，吸附到樹(shù)脂上 中性及無(wú)交換離子的成分流出中性及無(wú)交換離子的成分流出將吸附到柱上的成分洗脫下來(lái)將吸附到柱上

19、的成分洗脫下來(lái)離子交換原理離子交換原理29球形顆粒，不溶于水，可在水中溶脹球形顆粒，不溶于水，可在水中溶脹離子交換樹(shù)脂的性質(zhì)離子交換樹(shù)脂的性質(zhì)離子交換樹(shù)脂的結(jié)構(gòu)離子交換樹(shù)脂的結(jié)構(gòu)n母核n離子交換基團(tuán)30離子交換樹(shù)脂的種類離子交換樹(shù)脂的種類陽(yáng)離子交換樹(shù)脂：強(qiáng)酸性（陽(yáng)離子交換樹(shù)脂：強(qiáng)酸性（-SO-SO3 3-H-H+ +） 弱酸性（弱酸性（-COO-H-COO-H+ +） 陰離子交換樹(shù)脂：強(qiáng)堿性（陰離子交換樹(shù)脂：強(qiáng)堿性（-N+-N+（CHCH3 3）3 3ClCl- -） 弱堿性（弱堿性（-NH-NH2 2，-NH-NH-，-N=-N=） 31離子交換樹(shù)脂的應(yīng)用離子交換樹(shù)脂的應(yīng)用不同電荷離子的分離

20、不同電荷離子的分離 如水提液中酸性、堿性、兩性化合物的分離如水提液中酸性、堿性、兩性化合物的分離相同電荷但解離程度不同離子的分離相同電荷但解離程度不同離子的分離 如堿性不同的生物堿的分離如堿性不同的生物堿的分離 32水提液中酸性、堿性、兩性化合物的分離水提液中酸性、堿性、兩性化合物的分離33NOOCH3COCHPhCH2OHNOCH3CO CHPhCH2OHN+OH-OOCH3OCH3 堿性堿性 堿性不同的生物堿的分離堿性不同的生物堿的分離34苷的檢識(shí)苷的檢識(shí):苷由糖和苷元組成，含有糖基是苷苷由糖和苷元組成，含有糖基是苷類的共性。因此，其共性檢識(shí)的方法是檢識(shí)類的共性。因此，其共性檢識(shí)的方法是檢

21、識(shí)分子中是否含有糖，這和糖類的檢識(shí)類似。分子中是否含有糖，這和糖類的檢識(shí)類似。其苷元部分的檢識(shí)將在相應(yīng)的章節(jié)中介紹。其苷元部分的檢識(shí)將在相應(yīng)的章節(jié)中介紹。糖的檢識(shí)糖的檢識(shí):主要是利用糖的還原性和糖的脫水主要是利用糖的還原性和糖的脫水反應(yīng)所生成沉淀、產(chǎn)生的顏色變化等現(xiàn)象來(lái)反應(yīng)所生成沉淀、產(chǎn)生的顏色變化等現(xiàn)象來(lái)進(jìn)行理化檢識(shí)，色譜檢識(shí)則利用薄層色譜和進(jìn)行理化檢識(shí)，色譜檢識(shí)則利用薄層色譜和紙色譜等方法進(jìn)行。紙色譜等方法進(jìn)行。五、苷的檢識(shí)五、苷的檢識(shí)35p1 1、菲林反應(yīng)和多倫反應(yīng)：、菲林反應(yīng)和多倫反應(yīng)：僅還原糖反應(yīng)陽(yáng)性，僅還原糖反應(yīng)陽(yáng)性，非還原糖和苷類反應(yīng)陰性。非還原糖和苷類反應(yīng)陰性。p2 2、Mol

22、ishMolish反應(yīng)反應(yīng)p注意：注意：?jiǎn)翁?、低聚糖、多糖、苷類，單糖、低聚糖、多糖、苷類，MolishMolish反應(yīng)均為陽(yáng)性反應(yīng)均為陽(yáng)性丙酮、甲酸、乳酸、草酸、沒(méi)食子酸、苯三酚、丙酮、甲酸、乳酸、草酸、沒(méi)食子酸、苯三酚、-萘酚萘酚和葡萄糖醛酸以及各種醛糖衍生物和葡萄糖醛酸以及各種醛糖衍生物MolishMolish反應(yīng)也為陽(yáng)性反應(yīng)也為陽(yáng)性排除檢識(shí)反應(yīng)過(guò)程中水解產(chǎn)生的游離糖的干擾排除檢識(shí)反應(yīng)過(guò)程中水解產(chǎn)生的游離糖的干擾排除游離糖的干擾（正丁醇萃取苷類）排除游離糖的干擾（正丁醇萃取苷類）氨基糖反應(yīng)陰性，碳苷和糖醛酸苷有時(shí)呈陰性氨基糖反應(yīng)陰性，碳苷和糖醛酸苷有時(shí)呈陰性（一）理化檢識(shí)（一）理化檢識(shí)3

23、637p方法方法取樣品的提取液取樣品的提取液1 1mlml，加加5%5%-萘酚乙醇液萘酚乙醇液1 13 3滴，搖勻滴，搖勻后沿試管壁緩緩加入濃硫酸，若在兩液面間有紫色環(huán)產(chǎn)后沿試管壁緩緩加入濃硫酸，若在兩液面間有紫色環(huán)產(chǎn)生，說(shuō)明樣品組成中含有糖或苷類。生，說(shuō)明樣品組成中含有糖或苷類。樣品樣品提取液提取液紫色環(huán)紫色環(huán)濃硫酸濃硫酸-萘酚萘酚乙醇乙醇水提取液水提取液水液水液正丁醇液正丁醇液供試品供試品呈陽(yáng)性呈陽(yáng)性萃萃 取取正丁醇正丁醇蒸干蒸干Molish反應(yīng)反應(yīng)苷類苷類單糖、低單糖、低聚糖、多聚糖、多糖糖苷類苷類38n水提取液往往含有大量的單糖、低聚糖、多糖等，水提取液往往含有大量的單糖、低聚糖、多糖

24、等，難以直接檢識(shí)苷類，可用正丁醇萃取，正丁醇萃難以直接檢識(shí)苷類，可用正丁醇萃取，正丁醇萃取液蒸去溶劑后進(jìn)行取液蒸去溶劑后進(jìn)行Molish反應(yīng)，如呈陽(yáng)性則表反應(yīng)，如呈陽(yáng)性則表明含有苷類。明含有苷類。39樣品樣品濾液濾液菲林反應(yīng)菲林反應(yīng)多糖多糖反應(yīng)液反應(yīng)液呈陽(yáng)性呈陽(yáng)性Molish反應(yīng)反應(yīng)過(guò)過(guò) 濾濾苷類苷類乙醇乙醇溶解溶解不溶物不溶物氧化亞銅沉淀氧化亞銅沉淀游離糖游離糖因濃硫酸可將結(jié)合糖水解為游離糖，因濃硫酸可將結(jié)合糖水解為游離糖，MolishMolish反應(yīng)陽(yáng)性僅能說(shuō)反應(yīng)陽(yáng)性僅能說(shuō)明樣品中含有游離或結(jié)合的糖，卻不能判定是苷類還是游離明樣品中含有游離或結(jié)合的糖，卻不能判定是苷類還是游離糖或其他形式的

25、糖糖或其他形式的糖 樣品酸水解后放冷的反應(yīng)液出現(xiàn)沉淀，則樣品酸水解后放冷的反應(yīng)液出現(xiàn)沉淀，則存在苷類化合物。因?yàn)檐疹愒谒崴兴猱a(chǎn)存在苷類化合物。因?yàn)檐疹愒谒崴兴猱a(chǎn)生糖和苷元，苷元一般具有親脂性，水溶性生糖和苷元，苷元一般具有親脂性，水溶性差，易在水解液中析出沉淀。差，易在水解液中析出沉淀。多糖和低聚糖水解后產(chǎn)生單糖水溶性好，不多糖和低聚糖水解后產(chǎn)生單糖水溶性好，不會(huì)產(chǎn)生沉淀。會(huì)產(chǎn)生沉淀。 40p 3 3、水解反應(yīng)：、水解反應(yīng)：1、薄層色譜、薄層色譜1) 硅膠板硅膠板2) 展開(kāi)劑：正丁醇展開(kāi)劑：正丁醇-冰醋酸冰醋酸-水（水（4：1：5上層），乙上層），乙酸乙酯酸乙酯-正丁醇正丁醇-水（水（

26、4：5：1上層），氯仿上層），氯仿-甲醇甲醇-水水（65：35：10下層）等含水系統(tǒng)下層）等含水系統(tǒng)3) 顯色劑：硫酸、茴香醛硫酸、苯胺顯色劑：硫酸、茴香醛硫酸、苯胺-鄰苯二甲酸等鄰苯二甲酸等4) 硅膠用硅膠用0.03mol/L硼酸溶液或無(wú)機(jī)鹽水溶液代替水硼酸溶液或無(wú)機(jī)鹽水溶液代替水涂布薄層，能增加糖在固定相中的溶解度，樣品承涂布薄層，能增加糖在固定相中的溶解度，樣品承載量明顯增加。載量明顯增加。（二）色譜檢識(shí)（二）色譜檢識(shí)412、紙色譜、紙色譜展開(kāi)劑：展開(kāi)劑：正丁醇正丁醇- -冰醋酸冰醋酸- -水水(4(4：1 1：5 5上層，上層，BAW)BAW)，正丁醇，正丁醇- -乙醇乙醇- -水水(

27、4(4：2 2：1)1)，水飽和的苯酚。水飽和的苯酚。顯色劑：顯色劑：苯胺苯胺- -鄰苯二甲酸、間苯二酚鄰苯二甲酸、間苯二酚- -鹽酸等。鹽酸等。42問(wèn)題：紙色譜中以問(wèn)題：紙色譜中以BAWBAW和正丁醇作展開(kāi)和正丁醇作展開(kāi)劑，展開(kāi)糖，誰(shuí)的劑，展開(kāi)糖，誰(shuí)的RfRf值大？值大？（一）物理常數(shù)測(cè)定：如熔點(diǎn)、比旋度、溶解度等。（一）物理常數(shù)測(cè)定：如熔點(diǎn)、比旋度、溶解度等。（二）分子量和分子式的測(cè)定（二）分子量和分子式的測(cè)定p 經(jīng)典方法：元素分析，分子量測(cè)定。經(jīng)典方法：元素分析，分子量測(cè)定。p 現(xiàn)代方法：現(xiàn)代方法：質(zhì)譜法質(zhì)譜法（MS，mass spectrum） 六、苷的結(jié)構(gòu)研究六、苷的結(jié)構(gòu)研究43確定

28、分子量、分子式確定分子量、分子式提供部分結(jié)構(gòu)信息提供部分結(jié)構(gòu)信息 丟失碎片的大小丟失碎片的大小 如如1515、1717 碎片的碎片的m/zm/z及裂解方式及裂解方式（三）組成苷的苷元和糖的鑒定（三）組成苷的苷元和糖的鑒定苷用稀酸或酶進(jìn)行水解苷用稀酸或酶進(jìn)行水解單糖和苷元，再鑒定。單糖和苷元，再鑒定。1 1、苷元的結(jié)構(gòu)鑒定、苷元的結(jié)構(gòu)鑒定根據(jù)化學(xué)性質(zhì)判斷類型和母核結(jié)構(gòu)。（根據(jù)化學(xué)性質(zhì)判斷類型和母核結(jié)構(gòu)。（IRIR、UVUV）2 2、苷中組成糖的種類鑒定、苷中組成糖的種類鑒定常采用常采用PCPC、TLCTLC、GCGC對(duì)糖進(jìn)行鑒定，也可通過(guò)對(duì)糖進(jìn)行鑒定，也可通過(guò)NMRNMR進(jìn)行鑒定。進(jìn)行鑒定。3

29、3、苷中糖的數(shù)目的測(cè)定、苷中糖的數(shù)目的測(cè)定44（五）糖和糖之間連接順序的確定（五）糖和糖之間連接順序的確定45（六）苷鍵構(gòu)型的確定（六）苷鍵構(gòu)型的確定（或或構(gòu)型）構(gòu)型）1、利用酶水解進(jìn)行測(cè)定、利用酶水解進(jìn)行測(cè)定2、利用、利用NMR確定苷鍵構(gòu)型確定苷鍵構(gòu)型3、利用、利用klyne 經(jīng)驗(yàn)公式進(jìn)行測(cè)定經(jīng)驗(yàn)公式進(jìn)行測(cè)定 1、部分水解法、部分水解法2、利用、利用NMR確定確定（四）苷分子中苷元和糖，糖和糖之間連（四）苷分子中苷元和糖，糖和糖之間連接位置的確定接位置的確定1、苷元與糖分子之間連接位置的確定：、苷元與糖分子之間連接位置的確定：13CNMR法（苷化位移）法（苷化位移）2、糖與糖之間連接位置的確

30、定：、糖與糖之間連接位置的確定：乙酰解、甲醇解法、乙酰解、甲醇解法、 NMR法法p常用質(zhì)譜技術(shù)及特點(diǎn)常用質(zhì)譜技術(shù)及特點(diǎn)電子轟擊質(zhì)譜（電子轟擊質(zhì)譜（EI-MSEI-MS，electron impact ionizationelectron impact ionization）場(chǎng)解析質(zhì)譜（場(chǎng)解析質(zhì)譜（FD-MSFD-MS，field desorption ionizationfield desorption ionization） 快速原子轟擊質(zhì)譜（快速原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MSFAB-MS，fast atom bombardmentfast atom bombardment）電噴霧質(zhì)譜（電噴霧質(zhì)

31、譜（ESI-MSESI-MS，electrospray ionizationelectrospray ionization） 化學(xué)電離質(zhì)譜（化學(xué)電離質(zhì)譜（CI-MSCI-MS）高分辨快原子轟擊質(zhì)譜（高分辨快原子轟擊質(zhì)譜（HR-FAB-MSHR-FAB-MS）46樣品需加熱氣化，離化，得到樣品需加熱氣化，離化，得到M M+ +難氣化、易熱解的成份測(cè)不到難氣化、易熱解的成份測(cè)不到M M+ + 如糖、苷、氨基酸、肽、蛋白、核酸、抗生素如糖、苷、氨基酸、肽、蛋白、核酸、抗生素電子轟擊質(zhì)譜（電子轟擊質(zhì)譜（EI-MSEI-MS）場(chǎng)解析質(zhì)譜（場(chǎng)解析質(zhì)譜（FD-MSFD-MS）試樣稀液涂于鎢絲上作陽(yáng)極，對(duì)面加

32、陰極，通高壓，使電離試樣稀液涂于鎢絲上作陽(yáng)極，對(duì)面加陰極，通高壓，使電離難氣化、易熱解的成份，可得到難氣化、易熱解的成份，可得到 分子離子相關(guān)峰：分子離子相關(guān)峰：MMH+H+、MMNa+Na+、MMK+K+ 逐個(gè)脫去糖基的碎片峰：逐個(gè)脫去糖基的碎片峰：MMH-162+H-162+、MMH-162-146+H-162-146+苷元的碎片離子相對(duì)少苷元的碎片離子相對(duì)少47p離子槍發(fā)射高能離子與另一中性粒子碰撞，交換電荷，離子槍發(fā)射高能離子與另一中性粒子碰撞，交換電荷， 形成高速中性粒子，與樣品碰撞，使其電離形成高速中性粒子，與樣品碰撞，使其電離p難氣化、易熱解的成份，可得到難氣化、易熱解的成份，可

33、得到 分子離子相關(guān)峰：分子離子相關(guān)峰：MH+、MNa+、MK+ 逐個(gè)脫去糖基的碎片峰：逐個(gè)脫去糖基的碎片峰：MH-162+、MH-162-146+ p可得到苷元的碎片可得到苷元的碎片快速原子轟擊質(zhì)譜（快速原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MSFAB-MS）p分子量及分子量及M-1、M-H2O等等 裂解碎片的精確質(zhì)量裂解碎片的精確質(zhì)量高分辨快原子轟擊質(zhì)譜（高分辨快原子轟擊質(zhì)譜（HR-FAB-MSHR-FAB-MS）483 3、苷中糖的數(shù)目的測(cè)定、苷中糖的數(shù)目的測(cè)定p 經(jīng)典：利用經(jīng)典：利用PCPC或或TLCTLC法鑒定種類，再用光密度掃描測(cè)定單法鑒定種類，再用光密度掃描測(cè)定單糖斑點(diǎn)含量，算出各糖的分子比，推測(cè)

34、成苷的糖的數(shù)目。糖斑點(diǎn)含量，算出各糖的分子比，推測(cè)成苷的糖的數(shù)目。p 現(xiàn)代：利用質(zhì)譜（現(xiàn)代：利用質(zhì)譜（MSMS）測(cè)定苷和苷元的分子量）測(cè)定苷和苷元的分子量計(jì)算差計(jì)算差值值求出糖數(shù)目。求出糖數(shù)目。p 根據(jù)根據(jù)1H-NMR1H-NMR譜中端基碳質(zhì)子信號(hào)（譜中端基碳質(zhì)子信號(hào)（4.36.0ppm4.36.0ppm）推算）推算糖數(shù)目。糖數(shù)目。p 利用利用13C-NMR13C-NMR譜糖的端基碳信號(hào)（譜糖的端基碳信號(hào)（90112ppm90112ppm）或根據(jù)）或根據(jù)苷的總苷的總C C信號(hào)與苷元信號(hào)與苷元C C信號(hào)數(shù)目推算。信號(hào)數(shù)目推算。p 1H1H COSY 1H1H COSY，1H13C COSY1H1

35、3C COSY等二維譜推算糖數(shù)目。等二維譜推算糖數(shù)目。49原理：原理：1 1H H、1313C C等具有磁矩的原子在外加磁等具有磁矩的原子在外加磁場(chǎng)中受電磁波照射，吸收一定能量電磁波場(chǎng)中受電磁波照射，吸收一定能量電磁波，產(chǎn)生能級(jí)變化，引起核磁共振，產(chǎn)生能級(jí)變化，引起核磁共振氫核磁共振（氫核磁共振（1H-NMR）碳核磁共振譜（碳核磁共振譜（13C-NMR）二維核磁共振譜二維核磁共振譜 （2D-NMR）核磁共振核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）50氫核磁共振（氫核磁共振（1 1H-NMRH-NMR）n 應(yīng)用：應(yīng)用： 提供提供H的類型、數(shù)目、相鄰原子團(tuán)的信息的類

36、型、數(shù)目、相鄰原子團(tuán)的信息n 四個(gè)參數(shù)：四個(gè)參數(shù)：o化學(xué)位移（化學(xué)位移（ ）：11020ppm H的類型的類型 屏蔽效應(yīng)屏蔽效應(yīng)o積分值積分值/積分面積積分面積 同一環(huán)境下同一環(huán)境下H的個(gè)數(shù)的個(gè)數(shù)o自旋偶合裂分的峰數(shù)自旋偶合裂分的峰數(shù) 鄰位與其不等同的鄰位與其不等同的H的個(gè)數(shù)的個(gè)數(shù) 符合符合 n+1律律 s, d, t, qo偶合常數(shù)（偶合常數(shù)（J） H核間的距離核間的距離 相隔鍵數(shù)：相隔鍵數(shù)： 越少，越少，J大，通常為大，通常為3JH-H 二面角：越接近二面角：越接近90 ，J越??；越接近越小；越接近0、180，J越大越大 遠(yuǎn)程偶合遠(yuǎn)程偶合( (4 4J JH-HH-H) )：p鄰位偶合常數(shù)

37、：與兩面角有關(guān)鄰位偶合常數(shù)：與兩面角有關(guān)兩面角兩面角9090度度 J=0HzJ=0Hz；兩面角兩面角0 0或或180180度度 J=6J=68Hz8Hz；兩面角兩面角6060度度 J=2J=24Hz4Hz對(duì)于糖質(zhì)子對(duì)于糖質(zhì)子 當(dāng)當(dāng)2-2-H H為直立鍵時(shí)，為直立鍵時(shí)，1 1位苷鍵的取向不同，位苷鍵的取向不同，1-1-H H與與2-2-H H的的兩面角不同，偶合常數(shù)亦不同：兩面角不同，偶合常數(shù)亦不同： 1- 1-H H和和2-2-H H鍵為雙直立鍵，鍵為雙直立鍵， =180 =180，J=6J=68Hz8Hz 1- 1-H H為平伏鍵，為平伏鍵，2-2-H H直立鍵，直立鍵， =60 =60，J

38、=2J=24Hz4Hz OHOHORHOHOHHOROHROC3HOHOORHC3HOH52 當(dāng)當(dāng)2-H為平伏鍵的情況下，為平伏鍵的情況下，1-H無(wú)論處于平伏鍵還是直立無(wú)論處于平伏鍵還是直立鍵，與鍵，與2-H的兩面夾角均約的兩面夾角均約60度，故不能用該法判斷苷鍵構(gòu)型。度，故不能用該法判斷苷鍵構(gòu)型。OHOHORHOHOHHOROHROC3OHHOORHC3OHHOHOHORHOHOHHOH2COHOHORHOHOHHOCH2 六碳醛糖中六碳醛糖中C2構(gòu)型與葡萄糖不一致的構(gòu)型與葡萄糖不一致的D-甘露糖的苷鍵，就甘露糖的苷鍵，就不能用端基質(zhì)子的偶合常數(shù)來(lái)判斷其構(gòu)型。不能用端基質(zhì)子的偶合常數(shù)來(lái)判斷其

39、構(gòu)型。-D-D-甘露糖苷甘露糖苷 -D-D-甘露糖苷甘露糖苷53CCHbHaCHcHaHbHcHd Jac=1.6Jac=1.62.0Hz2.0HzJbc=0Jbc=01.5Hz1.5Hz烯丙偶合烯丙偶合芳環(huán)上的偶合芳環(huán)上的偶合Jab=6Jab=610 Hz10 HzJac=1Jac=13Hz3HzJad=0Jad=01 Hz1 Hz54碳核磁共振譜（碳核磁共振譜（1313C-NMRC-NMR）最重要的參數(shù)：最重要的參數(shù)： 化學(xué)位移化學(xué)位移 ：1 1200ppm 200ppm C C的類型的類型 1313C C的信號(hào)裂分的信號(hào)裂分 1313C-NMRC-NMR：異核偶合：異核偶合1 1H-NM

40、RH-NMR：同核偶合：同核偶合偶合裂分峰數(shù)：偶合裂分峰數(shù)：C C的級(jí)別的級(jí)別 符合符合n+1n+1律，律，s, d, t, qs, d, t, q，有有1 1J JC-HC-H 2 2J JC-HC-H 3 3J JC-HC-H55糖的糖的1H-NMR特征特征 化學(xué)位移規(guī)律：化學(xué)位移規(guī)律：甲基質(zhì)子：甲基質(zhì)子： 1.0ppm 特點(diǎn)：比較容易辨認(rèn)特點(diǎn)：比較容易辨認(rèn) 用途：用途：1 、確定甲基五碳糖的個(gè)數(shù)、確定甲基五碳糖的個(gè)數(shù)2 、確定糖的種類、確定糖的種類3、 確定糖與糖、糖與苷元的連接位置確定糖與糖、糖與苷元的連接位置56 p 端基質(zhì)子：端基質(zhì)子： 4.36.0ppm；其余部位的質(zhì)子其余部位的

41、質(zhì)子信號(hào)均在信號(hào)均在3.2-4.2左右左右 特點(diǎn)：比較容易辨認(rèn)特點(diǎn)：比較容易辨認(rèn) 用途：用途： 1、確定糖基的個(gè)數(shù)、確定糖基的個(gè)數(shù) 2、確定糖基的種類、確定糖基的種類 3、2D-NMR譜上糖信號(hào)的歸屬譜上糖信號(hào)的歸屬57 其余質(zhì)子信號(hào)：其余質(zhì)子信號(hào)： 3.24.2ppm 特點(diǎn)特點(diǎn): 信號(hào)集中信號(hào)集中,難以解析難以解析 歸屬歸屬: 往往需借助往往需借助2D-NMR技術(shù)。技術(shù)。5859端基質(zhì)子：端基質(zhì)子： 4.36.0ppm；其余其余部位的質(zhì)子信號(hào)均在部位的質(zhì)子信號(hào)均在3.2-4.260OCH35OCH2OH5甲基質(zhì)子： 1.0ppm端基質(zhì)子：端基質(zhì)子： 4.36.0ppm；其余部位其余部位3.2

42、-4.2 糖上碳信號(hào)可分為幾類，大致范圍為：糖上碳信號(hào)可分為幾類，大致范圍為：p CH3：18ppm 甲基五碳糖的甲基五碳糖的C6，一般有幾個(gè)信號(hào)一般有幾個(gè)信號(hào)(扣除扣除苷元中的甲基苷元中的甲基)可表示有幾個(gè)甲基五碳糖存在。可表示有幾個(gè)甲基五碳糖存在。p CH2OH：62ppm C5或或C6p CHOH：7085ppm 糖氧環(huán)上的糖氧環(huán)上的C2C4p -O-CH-O-：95105ppm 端基端基C，在此范圍內(nèi)有幾個(gè)信在此范圍內(nèi)有幾個(gè)信號(hào)可視為有幾種糖存在于糖鏈的重復(fù)單位中。號(hào)可視為有幾種糖存在于糖鏈的重復(fù)單位中。p 糖上糖上-OCH3: 65ppm糖的糖的13C NMR特征特征61糖糖C-1C

43、-2C-3C-4C-5C-6- D-葡萄糖葡萄糖96.775.176.770.676.861.7- D-葡萄糖葡萄糖92.972.573.870.672.361.6- D-半乳糖半乳糖97.372.973.869.776.062.2- D -半乳糖半乳糖93.269.470.270.371.462.062部分單糖分子的碳譜數(shù)據(jù)部分單糖分子的碳譜數(shù)據(jù)p 經(jīng)典方法：化學(xué)降解或酶解經(jīng)典方法：化學(xué)降解或酶解產(chǎn)物產(chǎn)物p現(xiàn)代方法：現(xiàn)代方法：NMR法法 2D-NMR譜中，譜中，HMBC（氫（氫-碳遠(yuǎn)程相關(guān)）譜已成為確定苷碳遠(yuǎn)程相關(guān)）譜已成為確定苷元連接位置的主要方法?？梢杂^察到糖的端基質(zhì)子與苷元元連接位置的

44、主要方法?？梢杂^察到糖的端基質(zhì)子與苷元-碳原子信號(hào)以及苷元碳原子信號(hào)以及苷元-碳原子上的質(zhì)子與糖的端基碳信號(hào)的碳原子上的質(zhì)子與糖的端基碳信號(hào)的相關(guān)峰。相關(guān)峰。13C-NMR譜是確定苷元與糖連接位置的有效方法譜是確定苷元與糖連接位置的有效方法(利用苷化利用苷化位移規(guī)律，將苷與苷元的碳譜相比較即可鑒別位移規(guī)律，將苷與苷元的碳譜相比較即可鑒別) 63（四）苷元和糖，糖和糖之間連接位置（四）苷元和糖，糖和糖之間連接位置的確定的確定1、苷元與糖分子之間連接位置的確定、苷元與糖分子之間連接位置的確定苷化位移苷化位移p 概念：糖與苷元成苷后，苷元的概念：糖與苷元成苷后，苷元的-C、-C和和糖的端基碳的化學(xué)位

45、移值均發(fā)生了改變，這種改糖的端基碳的化學(xué)位移值均發(fā)生了改變，這種改變稱變稱苷化位移。苷化位移。p 作用：作用：推測(cè)糖與苷元、糖與糖的連接位置以及推測(cè)糖與苷元、糖與糖的連接位置以及碳?xì)湫盘?hào)的歸屬。碳?xì)湫盘?hào)的歸屬。 64 醇羥基苷化引起醇羥基苷化引起-碳原子向低場(chǎng)位移（碳原子向低場(chǎng)位移（4-10ppm），）， -碳原子向高場(chǎng)位移（碳原子向高場(chǎng)位移（0.9-4.6ppm）；）； 如：伯醇如：伯醇 OOCH2CH2R+5.06.5 -3.55.065 酚羥基、羧基苷化引起酚羥基、羧基苷化引起-碳原子均向高場(chǎng)位移，碳原子均向高場(chǎng)位移，-碳碳原子向低場(chǎng)位移，此外對(duì)位碳原子也向低場(chǎng)移動(dòng)。原子向低場(chǎng)位移，此外

46、對(duì)位碳原子也向低場(chǎng)移動(dòng)。 （酚（酚羥基苷化引起端基碳向低場(chǎng)位移、羧基使端基碳向高場(chǎng)羥基苷化引起端基碳向低場(chǎng)位移、羧基使端基碳向高場(chǎng)位移）。如三萜類化合物位移）。如三萜類化合物齊墩果酸：齊墩果酸：OHCOOH-D-Glc-D-GlcC1= 106.9C1=95.7+0.3- 0.8- 0.2- 3.9- 1.2+ 10.3+ 0.334172215酯酯苷苷鍵鍵醇醇苷苷鍵鍵66p（1 1）化學(xué)方法化學(xué)方法: 將全甲基化苷進(jìn)行甲醇解，將全甲基化苷進(jìn)行甲醇解，鑒定（與對(duì)照品共色譜），未全甲醚化的鑒定（與對(duì)照品共色譜），未全甲醚化的單糖，游離羥基所在位置即糖與糖之間的單糖，游離羥基所在位置即糖與糖之間的

47、連接位置。連接位置。2、糖與糖之間連接位置的確定、糖與糖之間連接位置的確定67p以緩和酸水解和酶水解法最為常用。緩和酸水解多使用低以緩和酸水解和酶水解法最為常用。緩和酸水解多使用低濃度的無(wú)機(jī)強(qiáng)酸或中強(qiáng)度的有機(jī)酸濃度的無(wú)機(jī)強(qiáng)酸或中強(qiáng)度的有機(jī)酸( (如草酸如草酸) )進(jìn)行水解，可進(jìn)行水解，可使苷中的部分糖水解脫去。例如：使苷中的部分糖水解脫去。例如： 681 1）部分水解法）部分水解法結(jié)果分析：由于在水解產(chǎn)物中檢出木糖，因此可結(jié)果分析：由于在水解產(chǎn)物中檢出木糖，因此可以確定木糖連接在末端。以確定木糖連接在末端。p開(kāi)裂一部分苷鍵，保留另一部分苷鍵，分析水開(kāi)裂一部分苷鍵，保留另一部分苷鍵，分析水解產(chǎn)物

48、中得到的乙?；途厶牵部梢源_定糖解產(chǎn)物中得到的乙?；途厶?，也可以確定糖的連接順序。的連接順序。692 2）乙酰解法）乙酰解法用乙酐用乙酐- -ZnCIZnCI2 2乙酰解后，乙酰解后，TLCTLC檢出了單糖、四糖和三檢出了單糖、四糖和三糖的乙?；铮⑴c標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照進(jìn)行鑒定，由此可糖的乙?；?，并與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照進(jìn)行鑒定，由此可推出苷分子中糖的連接方式。推出苷分子中糖的連接方式。70甲基化的單糖，根據(jù)單糖的甲基化位置判斷糖的連接位置。甲基化的單糖，根據(jù)單糖的甲基化位置判斷糖的連接位置。OOO HO HO HO HO HO RO HOOOO M eO M eO M eO M eO M eO RO

49、M eOOO M eO M eO M eO HOO M eO M eO M eO M eO M e全甲基化全甲基化甲醇解甲醇解糖的端基半縮糖的端基半縮醛羥基甲基化醛羥基甲基化713 3）先甲基化，再甲醇解）先甲基化，再甲醇解將糖鏈全甲基化，然后水解苷鍵，用將糖鏈全甲基化，然后水解苷鍵，用GCGC鑒定所獲得的甲基化單糖，其中游離鑒定所獲得的甲基化單糖，其中游離-OH-OH的部位就是連結(jié)位置的部位就是連結(jié)位置, ,全甲基化的單糖即全甲基化的單糖即為末端糖。為末端糖。此外，目前常使用此外，目前常使用 1313C-NMR C-NMR 方法，主要方法，主要是通過(guò)歸屬各碳信號(hào)，以確定產(chǎn)生苷化是通過(guò)歸屬各碳

50、信號(hào)，以確定產(chǎn)生苷化位移的碳。位移的碳。p苷化位移苷化位移-要判斷苷中兩個(gè)糖的連接位置，要判斷苷中兩個(gè)糖的連接位置，可將該糖的碳譜數(shù)據(jù)與單糖比較，可將該糖的碳譜數(shù)據(jù)與單糖比較，若內(nèi)端若內(nèi)端糖的某碳原子向低場(chǎng)位移（糖的某碳原子向低場(chǎng)位移（4-7ppm)4-7ppm)，而其，而其鄰碳又向高場(chǎng)位移（鄰碳又向高場(chǎng)位移（1-4ppm1-4ppm），那么該碳），那么該碳原子為連接糖的位置。原子為連接糖的位置。p2D-NMR2D-NMR譜中，譜中，HMBCHMBC（氫（氫- -碳遠(yuǎn)程相關(guān)）已碳遠(yuǎn)程相關(guān)）已成為確定苷元的連接位置的主要方法。成為確定苷元的連接位置的主要方法。73（2 2）波譜解析）波譜解析NM

51、RNMR法法p EI-MS譜：全乙?；?、甲基化或三甲基硅醚化譜：全乙?；?、甲基化或三甲基硅醚化衍生化的糖基離子峰。衍生化的糖基離子峰。pFD-MS譜或譜或FAB-MS譜：各種不同解離程度的糖譜：各種不同解離程度的糖基碎片離子峰。如人參皂苷基碎片離子峰。如人參皂苷Rb2的的FD-MS譜中譜中(M+Na)+-132表明末端有表明末端有阿拉伯阿拉伯糖。糖。 (M+Na)+-162表明末端有葡萄糖。表明末端有葡萄糖。(M+Na)+-294表明葡萄表明葡萄糖糖-阿拉伯糖鏈。阿拉伯糖鏈。 74（3 3）MSMS法法（五）糖和糖之間連接順序的確定（五）糖和糖之間連接順序的確定p 經(jīng)典方法：化學(xué)降解或酶解經(jīng)典

52、方法：化學(xué)降解或酶解產(chǎn)物產(chǎn)物p 現(xiàn)代方法：現(xiàn)代方法：NMRNMR法法 糖與糖相連，內(nèi)側(cè)糖連接糖的碳原子移向低場(chǎng)（糖與糖相連，內(nèi)側(cè)糖連接糖的碳原子移向低場(chǎng)（447 7 ppmppm），相鄰碳原子移向高場(chǎng)（），相鄰碳原子移向高場(chǎng)（ -1 -1-4 ppm-4 ppm）75苷苷 緩和酸水解、酶解緩和酸水解、酶解 乙酰解乙酰解 全甲基化甲醇解全甲基化甲醇解 部分苷鍵斷裂部分苷鍵斷裂的裂解產(chǎn)物的裂解產(chǎn)物 推推 斷斷 分分 析析 p 一般不同的水解酶可水解不同類型的苷鍵，如麥一般不同的水解酶可水解不同類型的苷鍵，如麥芽糖酶能水解芽糖酶能水解-苷鍵，苦杏仁酶可水解苷鍵，苦杏仁酶可水解-苷鍵。苷鍵。 76（六）苷鍵構(gòu)型的確定（六）苷鍵構(gòu)型的確定（或或構(gòu)型）構(gòu)型）1、利用酶水解進(jìn)行測(cè)定、利用酶水解進(jìn)行測(cè)定2、利用、利用NMR確定苷鍵構(gòu)型確定苷鍵構(gòu)型H-2H-2為為a a鍵的糖鍵的糖葡萄糖、木糖、半乳糖等葡萄糖、木糖、半乳糖等H-1H-1為為a a鍵時(shí)：鍵時(shí)：H-1H-1和和H-2H-2為為aaaa偶合，偶合，Jaa=6Jaa=69Hz9HzH-1H-1為為e e鍵時(shí)：鍵時(shí)：H-1