中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi)容課件

1、中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 1 2010年版中國(guó)藥典 微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi)容 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 2 藥品微生物檢驗(yàn)概況藥品微生物檢驗(yàn)概況 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 【性狀】 【鑒別】 【檢查】 無(wú)菌/微生物限度 【含量測(cè)定】 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 3 藥品微生物檢驗(yàn)概況藥品微生物檢驗(yàn)概況 可控性可控性有效性有效性 安全性安全性 藥品質(zhì)量體系藥品質(zhì)量體系 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 4 藥品微生物檢驗(yàn)概況藥品微生物檢驗(yàn)概況 n新中國(guó)第一部藥典（1953年版）收載了無(wú)菌 檢查法 n我國(guó)開展藥品微生物限度檢查始于1972年- 1978年頒發(fā)了第一個(gè)“藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

2、”。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 5 藥品微生物檢驗(yàn)概況藥品微生物檢驗(yàn)概況 從“欣弗”到“刺五加”，頻繁的不良事件， 把藥品微生物檢驗(yàn)工作推到一個(gè)前所未有的 關(guān)注高度，提供了發(fā)展的機(jī)遇 藥品質(zhì)量事故高發(fā)期，如何快速、準(zhǔn)確地獲 得檢驗(yàn)結(jié)果，又是對(duì)當(dāng)前藥品微生物檢驗(yàn)工 作的一個(gè)挑戰(zhàn) 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 6 藥品微生物檢驗(yàn)概況藥品微生物檢驗(yàn)概況 環(huán)境保證環(huán)境保證 培養(yǎng)基保證培養(yǎng)基保證 無(wú)菌性檢查無(wú)菌性檢查 靈敏度檢查靈敏度檢查 有效的方法有效的方法 方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證 SOP操作操作 有效的結(jié)果有效的結(jié)果 可靠的結(jié)論可靠的結(jié)論 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 藥品微生物檢驗(yàn)的關(guān)鍵點(diǎn)藥品微生物

3、檢驗(yàn)的關(guān)鍵點(diǎn) 藥品微生藥品微生 物實(shí)驗(yàn)室物實(shí)驗(yàn)室 規(guī)范指導(dǎo)規(guī)范指導(dǎo) 原則原則 藥品微生物檢藥品微生物檢 驗(yàn)替代方法驗(yàn)驗(yàn)替代方法驗(yàn) 證指導(dǎo)原則證指導(dǎo)原則 微生物限度檢查微生物限度檢查 法指導(dǎo)原則法指導(dǎo)原則 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 7 藥品微生物檢驗(yàn)概況藥品微生物檢驗(yàn)概況 2010版微生物檢驗(yàn)方法增修訂主要成果版微生物檢驗(yàn)方法增修訂主要成果 藥品微生物限度檢查和無(wú)菌檢查的各論標(biāo)準(zhǔn)化 修訂了無(wú)菌檢查法 增修訂了微生物限度檢查法 修訂了一個(gè)指導(dǎo)原則滅菌法 新增了四個(gè)指導(dǎo)原則 抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則 微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則 藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)

4、原則 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 8 各論標(biāo)準(zhǔn)化 微生物限度檢查各論 富馬酸酮替芬滴鼻液 【微生物限度】 取本品10ml，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉- 蛋白胨緩沖液制成1：10的供試液。 細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)：取供試液，采用培養(yǎng)基 稀釋法（0.2ml/皿），依法檢查（附錄XI J），應(yīng)符 合規(guī)定。 控制菌：取規(guī)定量供試液，依法檢查（附錄XI J）， 應(yīng)符合規(guī)定。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 9 各論標(biāo)準(zhǔn)化 聚維酮碘溶液 【微生物限度】 取本品10ml，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉- 蛋白胨緩沖液制成1：10的供試液。 細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)：取供試液，用平皿法測(cè) 定菌數(shù)，澆注含4硫代硫

5、酸鈉（W/V）的計(jì)數(shù)用培 養(yǎng)基，依法檢查（附錄XI J），應(yīng)符合規(guī)定。 控制菌：取規(guī)定量供試液，接種至含4硫代硫酸 鈉（W/V）的增菌培養(yǎng)基中，依法檢查（附錄XI J），應(yīng)符合規(guī)定。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 10 各論標(biāo)準(zhǔn)化 無(wú)菌檢查各論 亞葉酸鈣注射液 【無(wú)菌】 取本品，采用薄膜過(guò)濾法處理，以金黃色葡 萄球菌為陽(yáng)性對(duì)照菌，依法檢查（附錄XI H），應(yīng)符合規(guī) 定。 注射用泮托拉唑鈉 【無(wú)菌】 取本品，用0.9無(wú)菌氯化鈉溶液溶解，經(jīng)薄 膜過(guò)濾法處理，以金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性對(duì)照菌，依 法檢查（附錄XI H），應(yīng)符合規(guī)定。 復(fù)方庚酸炔諾酮注射液 【無(wú)菌】 取本品，加含1聚山梨酯80的pH

6、7.0無(wú)菌氯 化鈉蛋白胨緩沖液稀釋，經(jīng)薄膜過(guò)濾法處理，用 pH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗（每膜不少于 100ml），以金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性對(duì)照菌，依法檢 查（附錄XI H），應(yīng)符合規(guī)定。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 11 各論標(biāo)準(zhǔn)化 甲硝唑注射液 【無(wú)菌】 取本品，經(jīng)薄膜過(guò)濾法處理，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液分次沖洗（每膜不少于500ml），以生孢梭 菌為陽(yáng)性對(duì)照菌，依法檢查（附錄XI H），應(yīng)符合規(guī)定。 注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉 【無(wú)菌】 取本品，加0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液溶解并制成每 1ml中約含40mg的溶液，經(jīng)薄膜過(guò)濾法處理，用無(wú)菌氯 化鈉蛋白胨緩沖液分次沖洗（每

7、膜不少于500ml），以 大腸埃希菌為陽(yáng)性對(duì)照菌，依法檢查（附錄 H），應(yīng) 符合規(guī)定。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 12 無(wú)菌檢查法 前言部分 培養(yǎng)基 靈敏度檢查 稀釋液、沖洗液等 方法驗(yàn)證 薄膜過(guò)濾法 直接接種法 培養(yǎng)及觀察 結(jié)果判斷 表1、表2和表3 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 13 前言部分 新增 檢驗(yàn)環(huán)境：檢驗(yàn)全過(guò)程“防止污染的措施不得 影響供試品中微生物的檢出” 環(huán)境監(jiān)控：“日常檢驗(yàn)還需要對(duì)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控” -在每次無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)動(dòng)態(tài)跟蹤監(jiān) 測(cè)浮游菌、沉降菌、操作臺(tái)和物品表面接觸菌 及手套菌 人員資質(zhì)：“ 無(wú)菌檢查人員必須具備微生物專 業(yè)知識(shí)，并經(jīng)過(guò)無(wú)菌技術(shù)的培

8、訓(xùn)” 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 14 培養(yǎng)基 刪除了硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基用于培養(yǎng)好氧菌、 厭氧菌的規(guī)定 刪除了改良馬丁培養(yǎng)基用于培養(yǎng)真菌的規(guī)定 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 15 培養(yǎng)基 選擇性培養(yǎng)基 中和劑或表面活性劑- “ 如對(duì)氨基苯甲酸（用 于磺胺類供試品）、聚山梨酯80（用于非水溶 性供試品）或-內(nèi)酰胺酶（用于-內(nèi)酰胺類供 試品）” 修訂為： 在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適宜的中和劑、 滅活劑或表面活性劑，其用量同驗(yàn)證試驗(yàn)。 (中和劑、滅活劑見微生物限度檢查法中表1） 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 16 干擾物干擾物可選用的中和劑或滅活方法可選用的中和劑或滅活方法 戊

9、二醛戊二醛 酚類、乙醇、吸附物酚類、乙醇、吸附物 醛類醛類 季銨類化合物（季銨類化合物（QACs）、）、 對(duì)羥基苯甲酸酯對(duì)羥基苯甲酸酯 汞類制劑汞類制劑 雙胍類化合物雙胍類化合物 碘酒、洗必泰類碘酒、洗必泰類 鹵化物鹵化物 乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA） 磺胺類磺胺類 -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 亞硫酸氫納亞硫酸氫納 稀釋法稀釋法 稀釋法、甘氨酸、硫代硫酸鹽稀釋法、甘氨酸、硫代硫酸鹽 卵磷脂、聚山梨酯卵磷脂、聚山梨酯 亞硫酸氫納、巰基乙酸鹽、硫代硫酸鹽亞硫酸氫納、巰基乙酸鹽、硫代硫酸鹽 卵磷脂卵磷脂 聚山梨酯聚山梨酯 硫代硫酸鹽硫代硫酸鹽 鎂或鈣離子鎂或鈣離子 對(duì)氨基苯甲酸對(duì)氨基苯

10、甲酸 -內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶 表表1 常見干擾物的中和劑或滅活方法常見干擾物的中和劑或滅活方法 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 17 靈敏度檢查 修訂了黑曲霉的孢子懸液制備方法 規(guī)定應(yīng)使用含0.05（v/v）聚山梨酯80的 0.9無(wú)菌氯化鈉溶液，洗脫孢子及稀釋孢子 液，制成每1ml中含孢子數(shù)小于100 cfu的孢子 懸液 刪除了：（用管口帶有薄的無(wú)菌棉花或紗 布能過(guò)濾菌絲的無(wú)菌毛細(xì)吸管） 吸出孢子懸液 的操作方法 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 18 靈敏度檢查 規(guī)定了稀釋后的工作用菌液的保存條件和保存 期限 “ 菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使 用，若保存在28，可在24小時(shí)內(nèi)使

11、用。黑 曲霉孢子懸液可保存在28，在驗(yàn)證過(guò)的 貯存期內(nèi)使用?！?中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 19 稀釋液、沖洗液及其制備方法部分 在 原有 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液 的基礎(chǔ)上增加： “可根據(jù)供試品的特性，選用其他經(jīng)驗(yàn)證的適 宜的溶液作為稀釋液、沖洗液。” -擴(kuò)大了稀釋液、沖洗液的選擇范圍：滿足供 試品的充分溶解或調(diào)節(jié)供試品的pH使適宜微生 物的生長(zhǎng)、有利消除供試品的抑菌性，提高方 法檢出率。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 20 方法驗(yàn)證 刪除了銅綠假單胞菌，增訂了大腸埃希菌 是因在驗(yàn)證試驗(yàn)的實(shí)踐中，發(fā)現(xiàn)作為革蘭 氏陰性桿菌代表的銅綠假單胞菌

12、在驗(yàn)證試驗(yàn)中 對(duì)大部分抗生素不敏感，而大腸埃希菌對(duì)抗革 蘭氏陰性桿菌為主的抗生素敏感性較好 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 21 方法驗(yàn)證 明確了驗(yàn)證試驗(yàn)所需樣品量是供試品的檢驗(yàn)量 而不是供試品的檢驗(yàn)數(shù)量 刪除了原：“ 將規(guī)定量供試品按 ” 修訂為： 薄膜過(guò)濾法驗(yàn)證試驗(yàn)樣品量： “ 取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量按薄 膜 過(guò)濾法過(guò)濾。” 直接接種法驗(yàn)證試驗(yàn)樣品量： “接入每支培養(yǎng)基規(guī)定量的供試品量” 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 22 薄膜過(guò)濾法 增訂了抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾 膜的規(guī)定 對(duì)每片濾膜的總沖洗量進(jìn)行了規(guī)定，不得過(guò) 1000ml 修訂了無(wú)菌氣（噴）霧劑供試品的

13、檢驗(yàn)方法， 規(guī)定冰室的溫度應(yīng)至少為-20 對(duì)裝有藥物的注射器供試品的檢驗(yàn)方法進(jìn)行了 詳細(xì)的規(guī)定不需要將原裝配好的針頭取下 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 23 直接接種法直接接種法 刪除刪除原直接接種法中原直接接種法中-內(nèi)酰胺類或磺胺類供試內(nèi)酰胺類或磺胺類供試 品項(xiàng)品項(xiàng) 因該兩類供試品的無(wú)菌檢查以采用因該兩類供試品的無(wú)菌檢查以采用 薄膜過(guò)濾法加中和劑更好薄膜過(guò)濾法加中和劑更好 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 24 培養(yǎng)及觀察 對(duì)于培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生 物生長(zhǎng)的情況，刪除了可劃線接種于斜面培養(yǎng) 基上的規(guī)定，同時(shí)刪除了可根據(jù)斜面是否有菌 生長(zhǎng)而判斷的規(guī)定 中國(guó)藥典微生物檢

14、驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 25 結(jié)果判斷 增訂了陽(yáng)性對(duì)照管和陰性對(duì)照管的實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì) 于整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷的作用-“ 陽(yáng)性對(duì)照管陽(yáng)性對(duì)照管 應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則，應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則， 試驗(yàn)無(wú)效。試驗(yàn)無(wú)效?！?中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 26 表1、表2和表3 表1 修訂了注釋項(xiàng)，對(duì)供試品容器裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基的情 況，明確規(guī)定最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)加倍 表2 修訂了表格名稱，明確了該表格用于確定液體制劑的最少檢 驗(yàn)量 修訂了注釋項(xiàng)，對(duì)供試品容器裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基的情 況，明確規(guī)定最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)加倍 表3 修訂了表格名稱，明確了該表格用于確定固體制劑的最少

15、檢 驗(yàn)量 修訂了注釋項(xiàng)，對(duì)供試品容器裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基的情 況，明確規(guī)定最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)加倍 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 27 微生物限度檢查法 前言及檢驗(yàn)量 供試液制備 計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基適用性 計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的方法驗(yàn)證 計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的操作方法 控制菌檢查的培養(yǎng)基適用性 控制菌檢查的方法驗(yàn)證 控制菌檢查的內(nèi)容 標(biāo)準(zhǔn)體系 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 28 前言及檢驗(yàn)量 前言中修訂了控制菌檢查的溫度，規(guī)定與細(xì)菌 計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)溫度相同，均為3035 前言中增訂了對(duì)于特殊品種可以最小包裝單位 報(bào)告的規(guī)定 檢驗(yàn)量中對(duì)要求進(jìn)行沙門菌檢查的供試品，其 檢驗(yàn)量應(yīng)增加20g或20ml的規(guī)定 中國(guó)藥典微生物檢

16、驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 29 供試液制備 增訂了貼劑供試品的制備方法 取規(guī)定量供試品，去掉貼劑的保護(hù)層，放置在 無(wú)菌玻璃或塑料片上，粘貼面朝上。用適宜的 無(wú)菌多孔材料（如無(wú)菌紗布）覆蓋貼劑的粘貼 面以避免貼劑粘貼在一起。然后將其置于適宜 體積并含有滅活劑（如聚山梨酯80或卵磷脂） 的稀釋劑中，用力振蕩至少30分鐘，或以其他 方法制備成供試液。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 30 供試液制備 修訂了離心沉淀法，刪除了高速離心的規(guī)定， 并對(duì)該方法的使用范圍進(jìn)行了限定 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 31 計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基適用性 該部分內(nèi)容均為新增 規(guī)定了該內(nèi)容的應(yīng)用范圍 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)

17、數(shù)用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行 培養(yǎng)基的適用性檢查，包括成品培養(yǎng)基、由脫水 培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 32 計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基適用性 采用標(biāo)準(zhǔn)菌種計(jì)數(shù)，回收率以及形態(tài)比較的判 定方法 標(biāo)準(zhǔn)菌種為：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、 枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉；規(guī)定了 稀釋后的工作菌液的保存條件和保存期限 引入了對(duì)照培養(yǎng)基的概念 判定的依據(jù)：回收率大于70，且形態(tài)一致 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 33 計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的方法驗(yàn)證 增訂了常見干擾物的中和劑或滅活方法的參考 表格 對(duì)采用多種方法仍無(wú)法得到滿意驗(yàn)證結(jié)果的情 況，提供了兩種辦法 允許使用更高稀釋級(jí)

18、的供試液進(jìn)行方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)， 并以該稀釋級(jí)供試液作為最低稀釋級(jí)供試液進(jìn)行供 試品檢驗(yàn) 允許選擇回收情況最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn) 行供試品的檢驗(yàn) 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 34 計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的操作方法 平皿法 刪除了應(yīng)取23個(gè)連續(xù)適宜稀釋級(jí)供試液進(jìn)行檢驗(yàn) 的規(guī)定 細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)為3天，霉菌、酵母菌培養(yǎng)時(shí)間 延長(zhǎng)為5天；規(guī)定必要時(shí)均可延長(zhǎng)至7天 菌數(shù)報(bào)告規(guī)則進(jìn)行了修訂：計(jì)數(shù)不再設(shè)置下限；以 最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告供試品中 所含的菌數(shù) 薄膜過(guò)濾法 濾膜直徑調(diào)整為約50mm，并規(guī)定若采用其它直徑 的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整 總沖洗量規(guī)定不得超過(guò)1000ml 中國(guó)藥典微生物檢

19、驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 35 控制菌檢查的培養(yǎng)基適用性 該部分內(nèi)容均為新增 規(guī)定了該部分內(nèi)容的應(yīng)用范圍以及檢查的項(xiàng)目 采用標(biāo)準(zhǔn)菌種比較的判定方法 根據(jù)培養(yǎng)基的用途不同，分為增菌培養(yǎng)基的促 生長(zhǎng)能力、固體培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力、培養(yǎng)基 的抑制能力、固體培養(yǎng)基的指示能力、液體培 養(yǎng)基的指示能力等5種檢查方法 在檢查中引入了涂布接種的概念 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 36 控制菌檢查的方法驗(yàn)證 刪除了陰性菌對(duì)照組的概念 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 37 控制菌檢查的內(nèi)容 所有的生化試驗(yàn)均修訂為鑒定試驗(yàn) 大腸菌群的培養(yǎng)基進(jìn)行了修訂，現(xiàn)改用乳糖膽 鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 梭菌的增菌培養(yǎng)基修訂為梭菌增菌培養(yǎng)

20、基，刪 除了庖肉培養(yǎng)基 增訂了白色念珠菌檢查法，并增訂了與之相關(guān) 的培養(yǎng)基 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 38 標(biāo)準(zhǔn)體系 菌落計(jì)數(shù)單位從“個(gè)”修訂為“cfu” 陰道、尿道給藥制劑增訂了白色念珠菌控制要 求 直腸給藥制劑刪除了大腸埃希菌的控制要求 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 39 滅菌法 前言 濕熱滅菌法 過(guò)濾除菌法 生物指示劑的制備 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 40 前言 修訂了滅菌法的定義，強(qiáng)調(diào)滅菌法的作用是使 被滅菌物品中殘存微生物的概率下降至某一預(yù) 期水平，從而突出了滅菌不是絕對(duì)的這一理念。 修訂了無(wú)菌保證水平的表述方式，強(qiáng)調(diào)其含義 在于物品中活微生物的概率降低至某

21、個(gè)可接受 的水平。明確了對(duì)于最終滅菌物品而言，其微 生物存活概率，即無(wú)菌保證水平不得高于百萬(wàn) 分之一。 在選擇確定滅菌工藝時(shí)，增訂了應(yīng)考慮滅菌后 物品的穩(wěn)定性的規(guī)定。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 41 濕熱滅菌法 增訂了選擇濕熱滅菌條件時(shí)應(yīng)綜合考慮的因素，如滅 菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透力以及微生物污染程度等 修訂了F0值的概念，突出了等效121標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間的 含義 規(guī)定當(dāng)選用F0值概念進(jìn)行滅菌程序控制時(shí)，除了對(duì)滅 菌程序進(jìn)行驗(yàn)證外，還必須在生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)微生物進(jìn) 行監(jiān)控，證明其數(shù)量低于設(shè)定的限度 對(duì)熱不穩(wěn)定物品，強(qiáng)調(diào)應(yīng)在生產(chǎn)全過(guò)程對(duì)產(chǎn)品中污染 的微生物進(jìn)行連續(xù)監(jiān)控，并防止耐熱菌的污染。規(guī)

22、定 這一類產(chǎn)品的F0值一般不低于8min，刪除了“如產(chǎn)品 的熱穩(wěn)定性很差時(shí)，可允許濕熱滅菌的F0低于8”的規(guī) 定。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 42 過(guò)濾除菌法 對(duì)過(guò)濾器孔徑的定義進(jìn)行了說(shuō)明，強(qiáng)調(diào)孔徑與微生物 的截留性能有關(guān)，而不是平均孔徑的分布系數(shù) 根據(jù)濾器孔徑的定義，規(guī)定用于最終除菌的過(guò)濾器， 必須選擇除菌級(jí)過(guò)濾器，并應(yīng)提供截留實(shí)驗(yàn)證明 對(duì)過(guò)濾器的穩(wěn)定性以及與被過(guò)濾液體的相容性進(jìn)行了 規(guī)定，明確過(guò)濾器使用者具有了解并評(píng)估這些性能的 責(zé)任 增訂了濾膜完整性測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)，指出該測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)來(lái) 自于相關(guān)細(xì)菌截留實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù) 規(guī)定了過(guò)濾操作的生產(chǎn)環(huán)境無(wú)菌環(huán)境，將原標(biāo)準(zhǔn)中 的“建議”修訂為“應(yīng)”

23、中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 43 生物指示劑的制備 規(guī)定生物指示劑在制備完成后，應(yīng)測(cè)定D值和 孢子總數(shù)。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 44 抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則 前言 產(chǎn)品分類 培養(yǎng)基 測(cè)定方法 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 45 抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則目的目的 如果藥物本身不含有充分的抗菌力，在正常儲(chǔ)存和使用過(guò) 程中可能發(fā)生細(xì)菌污染和大量繁殖；對(duì)患者引起污染或造成 藥物變質(zhì)。在生產(chǎn)過(guò)程中添加適合的防腐劑以保證藥品的質(zhì) 量。 所有防腐劑都具有一定的毒性，而且在貯存過(guò)程中其有效 性有可能因藥物的活性成分提高或降低，為保證藥品的質(zhì)量 和用藥安全，添加

24、防腐劑的量應(yīng)根據(jù)制劑本身是否具抗菌活 性，保持最低有效量。 防腐劑效力的測(cè)定可為生產(chǎn)過(guò)程中添加防腐劑提供指導(dǎo)， 隨著科學(xué)發(fā)展，新型防腐劑大量出現(xiàn)，防腐劑效力的測(cè)定更 為重要；使生產(chǎn)者正確掌握產(chǎn)品中添加防腐劑的效力，有助 于選擇合適的防腐劑，也可對(duì)防腐劑使用的正確性給予評(píng)價(jià)。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 46 抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則國(guó)內(nèi)外國(guó)內(nèi)外 現(xiàn)狀現(xiàn)狀 目前歐洲、美國(guó)、英國(guó)等國(guó)藥典均已在附錄中收載了 防腐劑效力測(cè)定，雖然方法不同，但均采用了生物測(cè)定 方法。我國(guó)藥典防腐劑效力測(cè)定目前還是空白，有必要 經(jīng)過(guò)研究，制訂出科學(xué)、簡(jiǎn)便、易行的測(cè)試方法收載于 藥典附錄中。防腐

25、劑效力的測(cè)定，不但為生產(chǎn)者提供正 確的使用防腐劑的指導(dǎo)，而且可對(duì)使用防腐劑的正確性 給予評(píng)價(jià)。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 47 前言 規(guī)定了本指導(dǎo)原則的用途：測(cè)定抑菌劑活性， 評(píng)價(jià)抑菌效力；指導(dǎo)制劑研發(fā)中抑菌劑的選擇 指出由于抑菌劑存在一定毒性，故制劑中抑菌 劑的量應(yīng)為最低有效劑量 指出本指導(dǎo)原則用于包裝未開啟的成品制劑 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 48 產(chǎn)品分類 根據(jù)不同用途產(chǎn)品對(duì)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)耐受程度 的差異，將產(chǎn)品分成四類： 1類：注射劑、其他非腸道制劑，包括乳劑、耳用 制劑、無(wú)菌鼻用制劑及眼用制劑 2類：局部給藥制劑、非無(wú)菌鼻用制劑及用于黏膜 的乳劑 3類：口服非固體

26、制劑（非抗酸制劑） 4類：非固體抗酸制劑 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 49 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基不同與微生物限度檢查法，主要采用 TSB和TSA用于細(xì)菌生長(zhǎng)，沙氏葡萄糖肉湯和 瓊脂培養(yǎng)基用于真菌生長(zhǎng) 培養(yǎng)基適用性檢查標(biāo)準(zhǔn)菌種與微生物限度檢查 略有不同，使用銅綠假單胞菌代替枯草芽孢桿 菌 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 50 測(cè)定方法 菌種來(lái)源：除了培養(yǎng)基適用性檢查中的菌種外，允許 使用制劑中常見的污染微生物 菌液制備：允許使用固體或液體培養(yǎng)基制備工作用菌 種，并采用比濁法制備每1ml中含108cfu的菌懸液 供試品接種： 容器選擇以供試品原包裝容器為首選，當(dāng)供試品性狀、裝量 等因素限值時(shí)

27、，允許將供試品轉(zhuǎn)移至其他無(wú)菌容器中，但轉(zhuǎn) 移應(yīng)不影響供試品的特性。 取供試品至少5份，接種試驗(yàn)菌，根據(jù)供試品類別不同，試驗(yàn) 菌的接種量有所區(qū)別，體積不得過(guò)供試品體積的0.51， 放置溫度為2025，應(yīng)避光 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 51 存活菌數(shù)測(cè)定 可使用平皿法或薄膜過(guò)濾法 測(cè)定細(xì)菌用TSA，測(cè)定真菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng) 基 測(cè)定方法必須進(jìn)行驗(yàn)證 測(cè)定結(jié)果應(yīng)進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換 結(jié)果判斷：與初始值進(jìn)行比較，并判斷是否符 合規(guī)定 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 52 表 防腐劑抗菌效力標(biāo)準(zhǔn) 1 類類 供供 試試 品品 細(xì)細(xì) 菌菌 7天菌數(shù)下降不少于天菌數(shù)下降不少于1.0 lg，14天菌數(shù)

28、下降天菌數(shù)下降 不少于不少于3.0 lg ，第，第14天到天到28天菌數(shù)不增加。天菌數(shù)不增加。 真真 菌菌 與初始值比，到與初始值比，到7、14、28天菌數(shù)均不增加。天菌數(shù)均不增加。 2 類供類供 試試 品品 細(xì)細(xì) 菌菌 14天菌數(shù)下降不少于天菌數(shù)下降不少于2.0 lg ， 14天到天到28天菌數(shù)天菌數(shù) 不增加。不增加。 真真 菌菌 與初始值比，到與初始值比，到14、28天菌數(shù)均不增加。天菌數(shù)均不增加。 3 類類 供供 試試 品品 細(xì)細(xì) 菌菌 14天菌數(shù)下降不少于天菌數(shù)下降不少于1.0 lg ， 14天到天到28天菌數(shù)均不增加。天菌數(shù)均不增加。 真真 菌菌 與初始值比，與初始值比，14、28天

29、菌數(shù)均不增加。天菌數(shù)均不增加。 4 類類 供供 試試 品品 細(xì)菌，真細(xì)菌，真 菌菌 與初始值比，與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增長(zhǎng)。天菌數(shù)均不增長(zhǎng)。 注注：1、表中、表中“不增加不增加”是指對(duì)前一個(gè)測(cè)定時(shí)間，試驗(yàn)菌增加的數(shù)量不超是指對(duì)前一個(gè)測(cè)定時(shí)間，試驗(yàn)菌增加的數(shù)量不超 過(guò)過(guò)0.5 lg。 2、0時(shí)菌數(shù)時(shí)菌數(shù) 供試品加入試驗(yàn)菌，搖勻，立即取樣檢查，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，供試品加入試驗(yàn)菌，搖勻，立即取樣檢查，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)， 為為0時(shí)時(shí) ，即初始值。，即初始值。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 53 實(shí)例實(shí)例 1、 氯化鈉注射液、氯化鈉注射液、 碳酸氫鈉注射液不含抑菌劑碳酸氫鈉注射液不含抑菌劑 加入菌從

30、初始到加入菌從初始到6h就開始無(wú)限增加，不具抑菌力，就開始無(wú)限增加，不具抑菌力， 抗病毒口服液從初始到抗病毒口服液從初始到24 h對(duì)數(shù)值無(wú)變化，對(duì)數(shù)值無(wú)變化，72h后明后明 顯降低，具一定的抑菌力。顯降低，具一定的抑菌力。 2、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼 液、鯨脂滴耳液、潔爾陰洗液從初始值到液、鯨脂滴耳液、潔爾陰洗液從初始值到7天后計(jì)算天后計(jì)算 值大于值大于1.0 lg降低值，從初始值到降低值，從初始值到14天后計(jì)算值大于天后計(jì)算值大于 3.0 lg,具較強(qiáng)的抑菌效力。具較強(qiáng)的抑菌效力。 3、波斯特是特效抑菌劑具極強(qiáng)的抑菌效力，、波斯特是特效

31、抑菌劑具極強(qiáng)的抑菌效力，72h 抑菌效力達(dá)抑菌效力達(dá)100%。 采用對(duì)數(shù)值計(jì)算簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、易于判斷采用對(duì)數(shù)值計(jì)算簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、易于判斷。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 54 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則 USP31版MICROBIOLOGICAL BEST LABORATORY PRACTICES FDA藥品質(zhì)量控制微生物實(shí)驗(yàn)室檢查指南 ISO/IEC17025檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求 CNAL/AC05 2003實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測(cè)實(shí) 驗(yàn)室的應(yīng)用說(shuō)明 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可中心，食品安全 微生物檢 測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范（征求意見稿） 藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 中國(guó)藥典微生物

32、檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 55 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則 前言 人員 培養(yǎng)基 菌種 實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行 設(shè)備 文件 實(shí)驗(yàn)記錄 結(jié)果的判斷 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 56 前言 規(guī)定了該指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)質(zhì)量控制 指出制訂實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的必要性 人員 人員的專業(yè)背景 人員培訓(xùn)應(yīng)覆蓋儀器設(shè)備操作、微生物檢驗(yàn)技 術(shù)和實(shí)驗(yàn)室生物安全等 應(yīng)通過(guò)內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗(yàn)證或使用標(biāo)準(zhǔn)菌 株等方法評(píng)估檢驗(yàn)人員的能力 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 57 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基的制備 應(yīng)按處方配制培養(yǎng)基，也可使用市售的脫水培養(yǎng)基 配制培養(yǎng)基的水應(yīng)該是純化水 培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可 采用薄膜過(guò)濾

33、除菌 培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。應(yīng)對(duì)高壓 滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證，確保在一定裝載 方式下的正常熱分布 應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（25下測(cè)定） 應(yīng)對(duì)分裝后的培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量檢查，并記錄批數(shù)量、 有效期及無(wú)菌情況等信息 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 58 培養(yǎng)基的貯藏 自配培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號(hào)、配制日期等信息， 商品化的成品培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號(hào)、生產(chǎn)日期 和失效期等信息。 滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快從滅菌器內(nèi)取出，瓊脂培養(yǎng) 基應(yīng)防止冷凍，容器應(yīng)密閉，防止水分流失；瓊脂 平板宜臨用新配，如置冰箱保存，一般不超過(guò)一周， 如需延長(zhǎng)，則應(yīng)對(duì)保存期進(jìn)行驗(yàn)證。 固體培養(yǎng)基滅菌后只允許再

34、融化一次，一般采用水 浴加熱或流通蒸汽的方式，如使用微波爐，應(yīng)避免 過(guò)度加熱和水分流失。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)置45 50的水浴中保溫，時(shí)間不得超過(guò)8小時(shí)。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 59 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序 所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn) 培養(yǎng)基質(zhì)量控制的項(xiàng)目有：pH值、適用性檢查和定 期的穩(wěn)定性檢查 當(dāng)培養(yǎng)基的配制和滅菌程序等均已驗(yàn)證，則同一批 次的脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行一次 用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，用于關(guān)鍵區(qū)域 監(jiān)控的培養(yǎng)基宜雙層包裝和終端滅菌，以防出現(xiàn)假 陽(yáng)性 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 60 菌種 菌種的來(lái)源：

35、已認(rèn)可的國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo) 準(zhǔn)菌株，或與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生 菌株 由標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)活得到的為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株；應(yīng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ) 備菌株進(jìn)行純度和特性確認(rèn)；建議采用凍干、液氮或 超低溫保存的方法 使用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備工作菌株 冷凍菌株解凍后，不得重新冷凍和再次使用 工作菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代 代的定義：活的培養(yǎng)物接種到微生物生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng) 基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代 一次 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立文件化的程序管理菌種（從標(biāo)準(zhǔn)菌株到 工作菌株） 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 61 實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行 實(shí)驗(yàn)室布局的原則：最大程度防止微生物的污染，防 止檢驗(yàn)過(guò)程對(duì)環(huán)境和人員

36、造成危害 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備：滿足無(wú)菌檢查、微生物限度檢查和無(wú) 菌采樣等活動(dòng)的獨(dú)立設(shè)置的潔凈室（區(qū)）或隔離系統(tǒng)； 配套的細(xì)菌（真菌）實(shí)驗(yàn)室、培養(yǎng)室、準(zhǔn)備區(qū)、樣品 接受和貯藏區(qū)、標(biāo)準(zhǔn)菌株貯藏區(qū)、污染物處理區(qū)和文 檔處理區(qū)等輔助實(shí)驗(yàn)室；上述區(qū)域應(yīng)明確標(biāo)識(shí) 應(yīng)建立潔凈區(qū)的使用、維護(hù)、驗(yàn)證等活動(dòng)的標(biāo)準(zhǔn)操作 規(guī)程 實(shí)驗(yàn)室的操作應(yīng)避免交叉污染 應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)室生物安全的應(yīng)急控制預(yù)案 應(yīng)建立微生物實(shí)驗(yàn)廢棄物的處理規(guī)程 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 62 設(shè)備 微生物實(shí)驗(yàn)室所用的儀器設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)，并 記錄 培養(yǎng)箱、冰箱等重要設(shè)備應(yīng)確保狀態(tài)正常，并 有措施保證其工作的連續(xù)性 培養(yǎng)箱、冰箱、滅菌器等應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行

37、連 續(xù)觀測(cè)和記錄，應(yīng)評(píng)估發(fā)生的偏差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 的影響 水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應(yīng)定期 清潔和消毒 無(wú)菌器具應(yīng)有明顯的標(biāo)識(shí) 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 63 文件 一般包括以下內(nèi)容 人員培訓(xùn)與資格確認(rèn) 設(shè)備驗(yàn)收、檢定（校準(zhǔn)、期間核查）和維修 設(shè)備關(guān)鍵參數(shù)和使用記錄（如24小時(shí)或7天記錄圖） 培養(yǎng)基制備、貯藏和質(zhì)量控制 檢驗(yàn)過(guò)程中的關(guān)鍵步驟 數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計(jì)算 數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 64 實(shí)驗(yàn)記錄 原始記錄至少包括以下內(nèi)容 實(shí)驗(yàn)日期 檢品名稱 實(shí)驗(yàn)人員姓名 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 偏差（存在時(shí)） 實(shí)驗(yàn)參數(shù)（設(shè)備、菌種、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基信息等） 簽名 中國(guó)

38、藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 65 結(jié)果的判斷 主要是對(duì)不符合標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果進(jìn)行判斷 導(dǎo)致不符合的原因 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的污染 樣品污染了超過(guò)限度標(biāo)準(zhǔn)的微生物 對(duì)前一種原因，應(yīng)充分考慮實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、抽樣 條件、樣品檢驗(yàn)過(guò)程等環(huán)節(jié) 如確定為第一種原因，則應(yīng)判結(jié)果無(wú)效，重新 進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 對(duì)重試應(yīng)加以監(jiān)控 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 66 微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則 制訂該指導(dǎo)原則的目的在于指導(dǎo)對(duì)微生物限 度檢查法的應(yīng)用，是對(duì)該檢查法某些未盡事 宜的說(shuō)明 主要對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行了說(shuō)明 應(yīng)采用產(chǎn)品中可能污染的微生物進(jìn)行表面活性劑、 滅活劑、中和劑等的毒性試驗(yàn) 應(yīng)選擇操作簡(jiǎn)便、快速的檢驗(yàn)方法，避免對(duì)微生 物的

39、損傷；去除抑菌作用首選薄膜過(guò)濾法 對(duì)離心法限制使用的原因作出了解釋 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 67 對(duì)培養(yǎng)基適用性實(shí)驗(yàn)中提到的對(duì)照培養(yǎng)基作出 了說(shuō)明，并指出由中檢所提供。 對(duì)方法驗(yàn)證中允許使用更高稀釋級(jí)供試液進(jìn)行 驗(yàn)證作出了解釋，指出應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的微生物限 度確定更高稀釋級(jí)的上限 對(duì)供試品中檢出疑似菌的情況，指出應(yīng)采用被 認(rèn)可的菌種鑒定方法 明確了附錄收載的“藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”的 法律地位 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 68 對(duì)于只有原則性要求的制劑（如：丸劑、口服 片劑、膠囊劑、顆粒劑），應(yīng)對(duì)其被微生物污 染的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估。在保證產(chǎn)品對(duì)患者安全的 前提下，通過(guò)回顧性驗(yàn)證或在線

40、驗(yàn)證積累的微 生物污染數(shù)據(jù)表明每批均符合微生物限度標(biāo)準(zhǔn) 的要求，那么可不進(jìn)行批批檢驗(yàn)，但必須保證 每批最終產(chǎn)品均符合微生物限度規(guī)定。并指出 這些制劑中如有必要進(jìn)行微生物限度檢查則應(yīng) 在產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的各論中予以規(guī)定 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 69 對(duì)于難以判斷創(chuàng)傷程度的局部給藥制劑，在沒有證據(jù) 證明產(chǎn)品不存在安全風(fēng)險(xiǎn)的情況下，應(yīng)符合無(wú)菌檢查 法的要求。 對(duì)動(dòng)物類原藥材粉作了明確規(guī)定，利于標(biāo)準(zhǔn)的正確理 解和執(zhí)行。具體規(guī)定如下：含動(dòng)物類原藥材粉的口服 中藥制劑要求不得檢出沙門菌。其中的動(dòng)物類原藥材 粉是指除蜂蜜、王漿、動(dòng)物角、阿膠外的所有動(dòng)物類 原藥材粉，如牡蠣、珍珠等貝類，海蜇、等水產(chǎn)品，

41、冬蟲夏草、人工牛黃等。 制訂產(chǎn)品微生物限度的標(biāo)準(zhǔn)除了依據(jù)附錄收載的標(biāo)準(zhǔn) 外，還應(yīng)該綜合考慮原料來(lái)源、性質(zhì)、生產(chǎn)工藝、給 藥途徑及對(duì)患者潛在的風(fēng)險(xiǎn)，因此，對(duì)某些特殊的產(chǎn) 品，應(yīng)制訂更嚴(yán)格的限度標(biāo)準(zhǔn) 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 70 藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則 前言 微生物檢驗(yàn)的類型及驗(yàn)證參數(shù) 替代方法驗(yàn)證的一般要求 定性檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證 定量檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 71 本指導(dǎo)原則是為所采用的試驗(yàn)方法能否替代藥 典規(guī)定方法用于藥品微生物的檢驗(yàn)提供指導(dǎo)。 三類微生物檢驗(yàn)的新技術(shù) （1）基于微生物生長(zhǎng)信息的檢驗(yàn)技術(shù)，如生物 發(fā)光技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、比濁法等；

42、（2）直接測(cè)定被測(cè)介質(zhì)中活微生物的檢驗(yàn)技術(shù)， 如固相細(xì)胞計(jì)數(shù)法、流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法等； （3）基于微生物細(xì)胞所含有特定組成成分的 分析技術(shù)，如脂肪酸測(cè)定技術(shù)、核酸擴(kuò)增技術(shù)、 基因指紋分析技術(shù)等。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 72 在生物技術(shù)和制藥行業(yè)中，對(duì)微生物質(zhì)量進(jìn)行控制主要有兩 方面的工作：過(guò)程監(jiān)控和成品放行。 傳統(tǒng)方法的弱點(diǎn)是檢驗(yàn)速度慢。利用傳統(tǒng)方法所得到的微生 物質(zhì)量控制信息，只能作為產(chǎn)品放行評(píng)價(jià)的一部分內(nèi)容，而 不能用于及時(shí)指導(dǎo)生產(chǎn)過(guò)程中的各工藝環(huán)節(jié)。 替代方法的優(yōu)點(diǎn)是檢驗(yàn)速度快，能夠?qū)ιa(chǎn)過(guò)程的關(guān)鍵工藝 環(huán)節(jié)作出及時(shí)的微生物質(zhì)量評(píng)價(jià)。 在醫(yī)藥行業(yè)完全有必要也有可能使用微生物檢驗(yàn)

43、的替代方法 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 73 前言 目的在于對(duì)如何開展替代方法的驗(yàn)證提供指導(dǎo) 介紹了可供選擇的替代方法的主要類別，強(qiáng)調(diào) 了這些方法與傳統(tǒng)方法相比具有的優(yōu)勢(shì) 明確了藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室可以使用替代方 法，但需要對(duì)替代方法進(jìn)行驗(yàn)證，以證明其應(yīng) 用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 74 微生物檢驗(yàn)的類型以及驗(yàn)證參數(shù) 根據(jù)藥品微生物檢驗(yàn)的特點(diǎn)，確定微生物檢驗(yàn) 的類型主要包括：定性實(shí)驗(yàn)和定量實(shí)驗(yàn) 主要的驗(yàn)證參數(shù)與分析方法驗(yàn)證中的表述基本 一致，但都根據(jù)微生物檢驗(yàn)的特點(diǎn)，賦予了新 的含義 定性檢驗(yàn)時(shí)，采用非參數(shù)的統(tǒng)計(jì)技術(shù)；定量檢 驗(yàn)時(shí)，采用參數(shù)的統(tǒng)計(jì)技

44、術(shù) 如僅僅是對(duì)傳統(tǒng)方法某一環(huán)節(jié)的替代，則只需 對(duì)該環(huán)節(jié)開展驗(yàn)證 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 75 替代方法驗(yàn)證的一般要求 由替代方法研發(fā)者或方法使用者完成不含樣品 情況下，替代方法的專屬性、精密度和檢測(cè)限 等參數(shù)的驗(yàn)證 使用至少2個(gè)批號(hào)的樣品，每個(gè)樣品平行進(jìn)行3 此獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，完成各參數(shù)的驗(yàn)證 在開始各參數(shù)驗(yàn)證時(shí)，涉及的菌種除包括微生 物限度檢查法和無(wú)菌檢查法中培養(yǎng)基適用性檢 查規(guī)定的菌株外，還應(yīng)根據(jù)替代方法及樣品的 特點(diǎn)增加相應(yīng)的菌株。各菌種應(yīng)分別進(jìn)行驗(yàn)證。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 76 定性檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證 專屬性：是指檢測(cè)樣品中可能存在的特定微生 物種類的能力 檢測(cè)限：是

45、指在替代方法設(shè)定的檢驗(yàn)條件下， 樣品中能被檢出的微生物的最低數(shù)量 重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件發(fā) 生變化時(shí)，所得檢驗(yàn)結(jié)果的精密度。應(yīng)優(yōu)先測(cè) 定該驗(yàn)證參數(shù) 耐用性：是指當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時(shí)， 檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的能力，為方法正常使用時(shí) 的可靠性提供依據(jù)。應(yīng)優(yōu)先測(cè)定該驗(yàn)證參數(shù)。 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 77 定量檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證 在進(jìn)行結(jié)果處理時(shí)，應(yīng)根據(jù)微生物定量檢驗(yàn)的 特點(diǎn)選擇合適的數(shù)據(jù)處理方式，如進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn) 換 準(zhǔn)確度：是指替代方法的檢驗(yàn)結(jié)果與藥典方法 檢驗(yàn)結(jié)果一致的程度 精密度：是指在檢驗(yàn)范圍內(nèi)，對(duì)同一個(gè)均勻的 樣品多次重復(fù)取樣測(cè)定，其檢驗(yàn)結(jié)果的一致程 度，通常采用標(biāo)

46、準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)表示 專屬性：是指通過(guò)檢測(cè)適宜的試驗(yàn)菌，以證明 檢驗(yàn)方法與其設(shè)定目的相適應(yīng)的能力 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 78 定量限：是指樣品中能被準(zhǔn)確定量測(cè)定的微生 物最低數(shù)量 線性：是指在一定范圍內(nèi)，檢驗(yàn)結(jié)果與樣品中 微生物數(shù)量成比例關(guān)系的程度 范圍：是指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和 線性，檢驗(yàn)方法適用的高低限濃度或數(shù)量的區(qū) 間 重現(xiàn)性：是指相同的樣品在正常的實(shí)驗(yàn)條件發(fā) 生變化時(shí)，所得檢驗(yàn)結(jié)果的精密度。 耐用性：是指當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時(shí)， 檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的能力，為方法正常使用時(shí) 的可靠性提供依據(jù) 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 79 無(wú)菌和微生物限度檢查的幾個(gè)問(wèn)題無(wú)菌和微生物限度檢查的幾個(gè)問(wèn)題 無(wú)菌檢查選擇薄膜過(guò)濾法/直接接種法的問(wèn)題 原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題 純化水微生物限度檢查問(wèn)題 中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi) 容 80 原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題 原料藥是藥品生產(chǎn)過(guò)程中引入微生物污染的重要來(lái)源之一， 雖然一些藥品在生產(chǎn)過(guò)程或終產(chǎn)品階段可以采取一些滅菌 措施殺滅污染微生物，但可能因?yàn)橛纱艘氲乃谰w、毒 素等無(wú)法消除而危害患者，而原料藥過(guò)高的微生物荷載可 能直接挑戰(zhàn)