三葉青對(duì)CCl4致肝損傷大鼠血清五項(xiàng)生化指標(biāo)水平的影響

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減三葉青對(duì)CCI4致肝損傷大鼠血清五項(xiàng)生化指標(biāo)水平的影響（作者：?jiǎn)挝唬亨]編：）作者：伍昭龍，呂江明，李春艷，彭英福摘要：目的：研究三葉青水煎液對(duì)CCI4致大鼠急性肝損傷的保護(hù) 作用。方法：將40只SD大鼠隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組，模型對(duì) 照組，高、低劑量治療組及陽(yáng)性對(duì)照組，分別灌胃等容積 （10 mL/kg） 的生理鹽水、三葉青水煎液（1.6 g/mL、0.16 g/mL）和聯(lián)苯雙酯（0.000208 g/mL ），連續(xù)6 d，每天1次。末次給藥后，除正常組外 其他各組腹腔注射CCl4原液1次，造成大鼠急性肝損傷模型，檢測(cè) 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨

2、酶（AST ）、堿性磷酸酶（ALP）丙 二醛（MDA及超氧化物歧化酶（SOD水平。結(jié)果：與模型組比較， 三葉青高、低劑量治療組ALTASTALP及MDA含量均明顯降低（P0.05 或P0.01），但SOD舌性明顯升高（P0.05或P0.01）；高劑量組與陽(yáng)性 對(duì)照組比較，AST ALP及MDA水平差異顯著（P0.05）。結(jié)論：三葉 青對(duì)CCl4造成的大鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用，且三葉青高劑量保 護(hù)損傷肝的效果優(yōu)于聯(lián)苯雙酯。關(guān)鍵詞：三葉青；水煎液；肝損傷；CCl4三葉青為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤（TetrastigmaHemsleyanum Diels et Gilg ），主要分布于長(zhǎng)江以南

3、各地，藥源十分豐富。全草含有槲皮素、山柰酚、山柰酚-3-0-新橙皮糖苷等多種黃 酮類化合物1-3，具有清熱解毒、活血祛風(fēng)的功效4，民間用于治 療黃疸及急、慢性肝炎有較好的療效。藥理實(shí)驗(yàn)表明，三葉青能促進(jìn) 家兔肝細(xì)胞吸收和吞噬放射性四碘四氯熒光素5，有加強(qiáng)肝臟功能的作用。在此基礎(chǔ)上，我們研究了對(duì) CCI4造成的大鼠急性肝損傷5 項(xiàng)血清生化指標(biāo)水平的影響，以探討其作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用三葉青 治療肝病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法1.1 材料1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠40只，質(zhì)量（180 士 20）g，由中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供。1.1. 2藥品與試劑三葉青（塊根）米自湖南吉首市郊區(qū)，由李春艷副教授進(jìn)

4、行生藥學(xué) 鑒定；聯(lián)苯雙酯（浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠），批號(hào)：050604。ALT試劑盒，批號(hào)：010021; AST試劑盒，批號(hào)：020071; ALP試劑 盒，批號(hào)：030261，以上均為北京中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn) 品。MDA試劑盒，批號(hào)：20051202; SOD試劑盒，批號(hào)：20051212, 均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1 . 1. 3三葉青水煎液的制備取三葉青干燥塊根320 g，搗碎，加水1000 mL浸泡0.5 h后再煎 煮2 h，濾過(guò)。濾渣再加水1000 mL,煎煮1.5 h，濾過(guò)，合并濾液 并濃縮到200 mL。制得三葉青水煎液，每1 mL含生藥1.6 g。1

5、.1. 4儀器YS-2000 III半自動(dòng)生化分析儀（深圳越華科技發(fā)展有限公司）；723 可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；80-2B離心機(jī)（湖南星 科科學(xué)儀器有限公司）；HHW212C電熱恒溫水箱（天津泰斯特儀器有 限公司）。1 . 2方法1 . 2. 1實(shí)驗(yàn)大鼠分組、給藥及血清的制備SD大鼠隨機(jī)分為5組，每組8只，雌雄各半。分別為正常對(duì)照組、 模型對(duì)照組，灌胃10 mL/kg生理鹽水；三葉青高、低劑量治療組，灌 胃等容積的三葉青水煎液，濃度分別為1.6 g/mL、0.16 g/mL，給藥劑量為16 g/kg和1.6 g/kg，后者根據(jù)成人用量以K折算系數(shù)法 換算確定；陽(yáng)性對(duì)照組，灌胃

6、等容積的聯(lián)苯雙酯，質(zhì)量濃度為0.000208 g/mL，給藥劑量為0.00208 g/kg。以上各組均每天給藥1次，連續(xù)6 d。末次給藥后，除正常對(duì)照組外，其余大鼠按2 mL/kg腹腔注射CCI4 原液1次，建立急性肝損傷模型。該劑量由預(yù)實(shí)驗(yàn)確定，為文獻(xiàn) 7 的2倍。禁食24 h后，稱體重，以3 %戊巴比妥鈉按1 mL/kg腹腔 注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，3500 r/min離心10 min取血清，待 測(cè)。1 . 2. 2血清生化指標(biāo)的檢測(cè)血清ALT、AST ALP活性的檢測(cè)按試劑盒要求采用 YS-2000 III半 自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)方法為連續(xù)監(jiān)測(cè)法，溫度 37 C ;血 清MD

7、A濃度及總SOD舌性的檢測(cè)按試劑盒要求，采用 723-可見(jiàn)分光 光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)方法分別為 TBA（ thibabituric acid ，硫代 巴比妥酸）法和羥胺法。1 . 2. 3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（士 s）表示。各組間均數(shù)比較采用單 因素方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)。所有統(tǒng)計(jì)均用SPSS11.5統(tǒng)計(jì) 軟件分析。2 結(jié)果見(jiàn)表1。表1三葉青水煎液對(duì)肝損傷大鼠血清 ALT AST、ALP MDA及 SOD的影響由表1可以看出，正常對(duì)照組ALT AST ALP及MDA水平最低， SOD舌性最高；模型對(duì)照組則相反，兩組各指標(biāo)比較具有非常顯著性 差異（P治療組ALT AST AL

8、P及 MDA水平均顯著降低（P 3討論CCI4肝損傷模型現(xiàn)已廣泛用于護(hù)肝藥物的篩選和機(jī)理研究，其機(jī)制 為：CCl4在肝內(nèi)經(jīng)微粒體細(xì)胞色素 P450分解活化，形成三氯甲基自 由基（CCI3）和氯自由基（Cl）,導(dǎo)致肝微粒體的脂質(zhì)過(guò)氧化。由于脂質(zhì) 過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)而抗氧化能力下降，導(dǎo)致自由基生成增加，通過(guò)氧化 細(xì)胞膜脂質(zhì)，使肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受到損害8。據(jù)此，本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)選擇 檢測(cè)ALT AST ALP MDA及 SOD6來(lái)探討三葉青護(hù)肝作用的藥理 機(jī)制。研究表明，黃酮類化合物對(duì)CCI4和半乳糖胺誘導(dǎo)的肝臟毒性具有保 護(hù)作用9，同時(shí)還具有顯著的抗氧化作用10。三葉青由于含有多 種黃酮類化合物，并且其所含的

9、黃酮類化合物槲皮素等含有抗脂質(zhì)過(guò) 氧化作用的酚羥基基團(tuán)11，推測(cè)其護(hù)肝的主要有效成分可能即為該 類黃酮類物質(zhì)。三葉青能明顯降低肝損傷大鼠血清脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物 MDA勺含量，為其護(hù)肝的分子機(jī)制的研究提供了啟示：一方面可能由 于所含的酚羥基黃酮類化合物能直接捕捉、清除自由基，生成自由基中間體，阻斷或終止自由基連鎖反應(yīng)鏈，從而阻止或抑制氧自由基反 應(yīng)和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，最終抑制MDA勺生成；另一方面通過(guò)提高抗氧 化劑SOD勺活性來(lái)降低MDA的生成。兩方面的作用共同減輕肝細(xì)胞的 膜性結(jié)構(gòu)的破壞，抑制炎癥滲出，從而降低血清ALT AST及 ALP的活性，促進(jìn)肝功能的恢復(fù)。高劑量的三葉青保護(hù)損傷肝的作用優(yōu)于低

10、 劑量三葉青，提示三葉青的護(hù)肝作用在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴關(guān)系。 并且可能反映：三葉青的有效黃酮類化合物的抗過(guò)氧化能力存在量效 關(guān)系。通過(guò)CCI4所致的大鼠肝損傷模型，我們初步研究了三葉青水煎液對(duì) 大鼠肝損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明，該水煎液能明顯降低CCI4所致血清ALT AST及 ALP的升高，同時(shí)能對(duì)抗CCI4所致的肝脂質(zhì)過(guò)氧化 作用，提高肝損傷大鼠抗氧化能力。研究結(jié)果提示，三葉青水煎液能 提高肝臟的解毒能力，對(duì)肝損傷有一定的保護(hù)作用；但三葉青作為民 間常用的護(hù)肝中藥，對(duì)該藥的研究遠(yuǎn)不如其他護(hù)肝中藥，其護(hù)肝作用 的藥理機(jī)制還有待于進(jìn)一步深入研究。參考文獻(xiàn)：1 李瑛琦，陸文超，于治國(guó).三葉青的化

11、學(xué)成分研究 J.中 草藥，2003, 34(11) : 982-983.2 Abdul L. FlavonoIs, ellagic acid and anthocyaanidins in leaves of somemalaysian vitaceaeJ. Malays. J. Sci, 1980, (6): 95.3 劉東，鞠建華，林耕，等.三葉崖爬藤中的新黃酮碳甙J.植 物學(xué)報(bào)，2002, 44(2) : 227-229 .4 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊(cè))M.上海：上海人民出版 社，1977: 2123.5 Cai X. L. A study of Tetrastigma hemsle

12、ya num on liverfunctions of rabbit by the application of 131Irose bengalJ.Chin. Tradit. Herb Drugs, 1980, 11(1):38-39.6 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000: 726-727.7 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.第3版.北京： 人民衛(wèi)生出版社,2001 : 1346.8 Rouach H, Fataccioli V, Gentil M, et al. Effect ofchronic ethanol feeding on lipidperoxid

13、ationand proteinoxidation in relationto liver pathologyJ . Hepatology, 1997,25(2):351-355.9 Bohm K. H, Lotter H, Seligmann O, et al. AntihepatotoxicCglyco sylflavonesfrom the leaves of Allophyllus ed lis and gracilisJ . Planta. Med., 1992, 58(6):544.10 Budzianowski J, Pakulski G, Robak J. Studies onantioxidati