ELISA檢測PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1ELISA檢測檢測免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)是用是用熒光素、酶熒光素、酶、或者、或者放射性核素放射性核素等標(biāo)記抗體或抗原，利用標(biāo)記技術(shù)的高度敏感性進(jìn)行的抗原抗體的反應(yīng)。等標(biāo)記抗體或抗原，利用標(biāo)記技術(shù)的高度敏感性進(jìn)行的抗原抗體的反應(yīng)。Y細(xì)胞1細(xì)胞2標(biāo)記物標(biāo)記物熒光素?zé)晒馑胤派院怂胤派院怂孛该阜派涿庖呒夹g(shù)放射免疫技術(shù)免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)第1頁/共12頁 酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)用酶標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。用酶標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。 可用酶標(biāo)測定儀測定光密度（可用酶標(biāo)測定儀測定光密度（ODOD）來反應(yīng)抗原或抗體含量，靈敏度可達(dá)到）來反應(yīng)抗原或抗

2、體含量，靈敏度可達(dá)到ng-pg/mlng-pg/ml水平。水平。Y酶酶酶具有高效催化性酶具有高效催化性：可以加快化學(xué)反應(yīng)的速度：可以加快化學(xué)反應(yīng)的速度 ；在反應(yīng)前后，沒有質(zhì)和量的改變；微量的酶便可發(fā)揮巨大的催化作用。；在反應(yīng)前后，沒有質(zhì)和量的改變；微量的酶便可發(fā)揮巨大的催化作用。 DH2 + H2O2D + 2H2O酶酶無色無色有色有色第2頁/共12頁 酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶免疫組化法酶免疫組化法用于檢測可溶性抗原或抗體用于檢測可溶性抗原或抗體用于檢測組織中或細(xì)胞表面的抗原用于檢測組織中或細(xì)胞表面的抗原第3頁/共12頁酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)-ELISA

3、 間接法間接法 雙抗體夾心法雙抗體夾心法待測抗體待測抗體酶標(biāo)二抗酶標(biāo)二抗底物底物AgAg待測抗原待測抗原第4頁/共12頁 雙抗原夾心法雙抗原夾心法AgAg酶標(biāo)酶標(biāo)AgAg待測抗體待測抗體底物底物此次試驗(yàn)用此法檢測乙肝表面抗體此次試驗(yàn)用此法檢測乙肝表面抗體HBsAbHBsAb第5頁/共12頁第6頁/共12頁乙肝表面抗體乙肝表面抗體ELISA檢測檢測檢測對象檢測對象：乙肝表面抗體：乙肝表面抗體HBsAbHBsAb檢測試劑檢測試劑：乙肝表面抗原：乙肝表面抗原HBsAgHBsAg、酶標(biāo)乙肝表面抗原、酶標(biāo)乙肝表面抗原HRP-HBsAgHRP-HBsAg酶促反應(yīng)酶促反應(yīng)：辣根過氧化物酶：辣根過氧化物酶HR

4、PHRP催化四甲基聯(lián)苯胺催化四甲基聯(lián)苯胺TMBTMB由無色顯藍(lán)色由無色顯藍(lán)色定性：判斷有無顏色變化定性：判斷有無顏色變化定量：用酶標(biāo)儀檢測光密度值，靈敏度可達(dá)定量：用酶標(biāo)儀檢測光密度值，靈敏度可達(dá)0.5ng/ml0.5ng/ml水平水平 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理第7頁/共12頁乙肝表面抗體乙肝表面抗體ELISA檢測檢測 操作步驟操作步驟 1. 1.從冰箱取出試劑盒，室溫平衡從冰箱取出試劑盒，室溫平衡3030分鐘。分鐘。 2.2.按如下方式加按如下方式加待測血清待測血清，每孔，每孔1 1滴。滴。待待2 2待待3 3待待1 1陽性陽性陰性陰性空白空白3.3.每孔加每孔加酶結(jié)合物酶結(jié)合物1 1滴（滴（孔上方

5、懸空滴加，無氣泡孔上方懸空滴加，無氣泡），混勻，空白孔不加，置），混勻，空白孔不加，置3737度溫箱度溫箱3030分鐘。分鐘。4.4.取出反應(yīng)板，棄液，拍干。取出反應(yīng)板，棄液，拍干。5.5.每孔每孔注滿注滿洗滌液洗滌液，（，（不要溢出不要溢出）靜置）靜置5 5秒后棄液，拍干，重復(fù)洗滌秒后棄液，拍干，重復(fù)洗滌5 5次，拍干。次，拍干。6.6.每孔加每孔加顯色劑顯色劑A A和和B B各各1 1滴，置滴，置3737度溫箱度溫箱1515分鐘。分鐘。7.7.每孔加每孔加終止液終止液1 1滴混勻，觀察結(jié)果。滴混勻，觀察結(jié)果。第8頁/共12頁 結(jié)果觀察結(jié)果觀察第9頁/共12頁 結(jié)果觀察結(jié)果觀察乙型肝炎病毒采用乙型肝炎病毒采用ELISAELISA檢測法具有檢測法具有操作簡便操作簡便、靈敏度高靈敏度高、試劑成本低試劑成本低、環(huán)保環(huán)保和和適用于大批量人群適用于大批量人群抗原、抗體篩查等優(yōu)點(diǎn)抗原、抗體篩查等優(yōu)點(diǎn), ,目前在國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室被廣泛使