酶免疫測定常用儀器設(shè)備的使用和維護

1、酶免疫測定常用儀器設(shè)備的使用和維護衛(wèi)生部臨床檢驗中心王露楠主要儀器設(shè)備加樣器 加樣系統(tǒng)洗板機酶標儀 全自動檢測系統(tǒng)酶標儀-酶標儀的發(fā)展 更寬的測定吸光度范圍。 從可見光擴展到紫外檢測。 增加溫控功能。 增加了酶動力學及凝集等測定功能。 增加了濾光片自動識別功能 增加了比色測定前的振板功能 增加了雙波長或多波長測定功能。 增加定性和定量測定統(tǒng)計分析軟件功能。酶標儀-酶標儀的發(fā)展酶標儀由通常的96孔檢測模式擴展到384甚至1536孔模式，這種酶標儀對于工作量較大、檢測項目較多的實驗室可加快檢測速度。酶標儀由單純的比色測定儀器發(fā)展至與發(fā)光、熒光、時間分辨熒光、紫外檢測相結(jié)合的多功能檢測儀器。此外，W

2、allac ViewLux也有比色、發(fā)光、熒光和時間分辨熒光測定功能。這些多功能免疫測定儀器的出現(xiàn)，對于實驗室來說，在進行ELISA測定的同時，也可以很方便地開展使用發(fā)光、熒光、時間分辨熒光方法的檢測項目，而無需再額外購買儀器設(shè)備，可大大節(jié)省實驗室的空間。酶標儀-酶標儀的使用 400 nm750或800 nm 450 nm和492 nm目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶（HRP），底物通常為四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD） 應(yīng)有620 nm 或630 nm或650 nm和 405 nm波長的濾光片酶標儀-酶標儀的使用2.在02.5之間即可以滿足ELISA

3、的測定可達到3.5以上對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何酶標儀-酶標儀的使用3. 酶標儀的光學系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道（通常為八或十二通道，亦有單通道）檢測，一般為硅光管或光導纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準。吸光度范圍、線性度、精密度和準確度測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系?？杀苊庖蛲ǖ啦煌碌牟町惷笜藘x-酶標儀的使用4. 酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過程中，因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。酶標

4、儀-酶標儀的使用5. 震板目的：板孔內(nèi)顏色均一6. 無需再外配溫箱。 溫育功能只是酶標儀的一個附加功能，是否具有并不能說明酶標儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣。作為實驗室是否選擇，則可根據(jù)自已實驗室的條件及需要來決定。酶標儀-酶標儀的使用7.指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其它測定方式如酶標動力學、紫外和凝集等的統(tǒng)計分析并報告結(jié)果的功能。 軟件功能是中高檔酶標儀的一個非常重要的功能。酶標儀如具有陽性判斷值（CUTOFF）及其測定“灰區(qū)”（即指測定吸光度處于CUTOFF周圍的一定區(qū)域，此區(qū)域內(nèi)結(jié)果應(yīng)為“可疑”）的統(tǒng)計計算功能，不但方便了實驗室工作人員，而且在某些特定的情況下，有很高的實用價值

5、。 四參數(shù)方程能較好地反映免疫測定的劑量反應(yīng)曲線，最為適合于定量酶免疫測定的曲線擬合。酶標儀酶標儀的選擇（1）工作需要（2）酶標儀的性能：測定波長范圍,濾光片配置,檢測速度,吸光度范圍,線性范圍,分辨率,準確度,精密度等。（3） 實驗室的財力（4）售后服務(wù)（5）外語水平酶標儀酶標儀的選擇酶標儀的中心定位 儀器會自動對酶標孔進行中心定位，中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準確。光源的參照通道參照通道是用來校準由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響 酶標儀-酶標儀的自檢和校準 1 酶標儀上應(yīng)有儀器名稱,型號,編號,生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,按鍵和開關(guān)均能正常工作,外

6、表面無明顯機械損傷;顯示文字應(yīng)清楚完整。 2. 選用492nm波長,在吸光度0.0A處,測定標稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進行),記錄儀器示值或均值,10分鐘后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測定值之差不應(yīng)超過0.005A。酶標儀-酶標儀的自檢和校準 3. 選用405,492和620 nm波長,以空氣為參比,分別測定標稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,用專用測試板代替酶標板,按儀器說明連續(xù)測定3次,按下式計算準確度： A=1/3(A1+A2+A3)-As (As為標準值);. 在酶標板第一排加注空白溶液,第二排加入濃度為200g/ml的重鉻酸鉀溶液,重復測定5次

7、.記錄每次測定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值與各次對應(yīng)孔吸光度值. 計算重復性。酶標儀-酶標儀的自檢和校準 5.選用540nm波長,將標稱值0.5,1.0A中性濾光片分別放入專用測試板樣本位置中,以空氣為參比,各重復測定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于專用測試板的同一孔位中,重復測定3次.線性誤差 6.選用492nm波長，放入96孔酶標板進行測定，用秒表計測儀器的打印出全部數(shù)據(jù)的時間。酶標儀-酶標儀的自檢和校準7.通道差檢測：取一只酶標板小孔杯（杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染）以酶標板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8個通道的相應(yīng)位置，蒸餾水

8、調(diào)零，采用雙波長（測定波長490nm，參比波長630或650nm，以下均相同）連續(xù)測三次，觀察其不同通道之間測量結(jié)果的一致性可用極差值來表示其通道差。8.孔間差的測量：選擇同一廠家、同一批號酶標板條（8條共96 孔）分別加入200 ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065 0.070 A）先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長檢測，其誤差大小用1.96s衡量。酶標儀雙波長問題雙波長測定： 由于標本中干擾組份的存在以及小孔杯本身質(zhì)量等原因，常常導致測定結(jié)果的假性增高，而酶標儀提供的雙波長測定功能則可以消除干擾組份或因素對測定結(jié)果的影響。 對于標本中干擾組份的清除，在選擇參比波長時，我們應(yīng)對于擾組份

9、的光譜進行研究，以正確選擇參比波長；而對于小孔杯本身質(zhì)量問題等干擾因素的消除，只要選擇遠離測定波長的參比波長即可以了，這對保證測定結(jié)果的準確性是非常重要的。 洗板機-洗板機的選用 1. 基本參數(shù)：洗板次數(shù)、條數(shù)、浸泡時間 另外盡可能有：底部沖洗、兩點吸液 最小的殘留量最小的殘留量 2.主要是對于國內(nèi)不同規(guī)格、尺寸略有差異的微孔板的兼容，儀器應(yīng)具有對微孔板的位置調(diào)節(jié)功能，適應(yīng)國內(nèi)ELISA試劑盒中微孔板條的實際情況。 主要是為了適應(yīng)新出現(xiàn)的一些應(yīng)用情況，如86式的微孔板，許多洗板機無法清洗。洗板機-洗板機的選用（ 3.儀器自身及洗滌效果的可靠性 一是儀器自身的可靠性，保證儀器在使用壽命期內(nèi)可以正

10、常顯示、精確運動等，這可通過考查儀器生產(chǎn)廠商的技術(shù)與生產(chǎn)實力來論證；二是洗滌效果的可靠性，即真正達到代替手工洗滌、甚至優(yōu)于手工洗滌的目的，這需要咨詢使用該儀器的上級單位或典型用戶。（ 4.配件是否充分 提供常用的、易損的配件，如清洗頭，應(yīng)該8道、12道各備用一個，并且定期淘汰，象洗液瓶、硅膠管等應(yīng)可方便買到洗板機-洗板機的選用 5.售后服務(wù)是否及時、價格是否合理 洗板機是使用率相對較高的儀器，單從運動角度對比，其頻率是酶標儀的幾十倍。 6.人機界面是否友好，最好是中文顯示。洗板機注意事項 1.有一定的洗滌次數(shù)多次洗滌有利于取得好的效果，一般不超過6次。 2.注意每孔的加液量以加滿為宜，但不可溢

11、出，一般為每孔300微升 3.建議在洗滌前進行位置調(diào)節(jié)，吸針要到微孔底部，以降低殘留量。 4.建議用戶采用兩點吸液與底部沖洗方式，以得到好的洗滌效果。 5. 每天使用后用雙蒸水沖洗管路。 6.定期維護、檢修儀器及配件。加樣器-加樣器的類型單道連續(xù)可調(diào)式移液器多通道連續(xù)可調(diào)式移液器單道連續(xù)移液器單道移液管配合使用的移液器加樣器-加樣器的使用加樣器-校準環(huán)境和用具要求校準環(huán)境和用具要求：室 溫：2025，測定中波動范圍不大于0.5。電子天平：放置于無塵和震動影響的臺面上，房間盡可能有空調(diào)。稱量時，為保證天平內(nèi)的濕度（相對濕度60-90%），天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10 ml蒸餾水的小燒杯。小燒杯： 51

12、0 ml體積。測定液體：溫度為2025的去氣雙蒸水。選定校準體積：（加樣器標定體積的中間體積；（最小可調(diào)體積（不小于擬校準體積的10%）。（擬校準體積； 如為固定體積加樣器，則只有一種校準體積。加樣器-校準步驟校準步驟：將加樣器調(diào)至擬校準體積，選擇合適的吸頭；調(diào)節(jié)好天平；來回吸吹蒸餾水3次，以使吸頭濕潤，用紗布拭干吸頭垂直握住加樣器，將吸頭浸入液面23 mm處，緩慢（13秒）一致地吸取蒸餾水；將吸頭離開液面，靠在管壁，去掉吸頭外部的液體；將加樣器以30角放入稱量燒杯中，緩慢一致地將加樣器壓至第一 檔，等待13秒，再壓至第二檔，使吸頭里的液體完全排出；記錄稱量值；擦干吸頭外面；按上述步驟稱量10次；取10次測定值的均值作為最后加樣器吸取的蒸餾水重量，按附表所列蒸餾水Z因子計算體積。按校準結(jié)果調(diào)節(jié)加樣器。加樣器注意事項根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭吸取液體時應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時，不要用力過猛，并應(yīng)注意計數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無吸頭時使用，吸頭有液體時不可平放或倒置。操作時要慢和穩(wěn)，吸嘴浸入液體深度要合適，吸液過程盡量保持不變；改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸嘴；發(fā)現(xiàn)吸嘴內(nèi)有殘液時必須更換；新吸嘴使用前應(yīng)先預(yù)測。加樣器注意事項使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水清洗活塞及密封圈。連續(xù)可調(diào)式移液器在