實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)課件

1、實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1 實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 血涂片制備染色及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)血涂片制備染色及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn) 王王 梅梅 江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院 臨床檢驗(yàn)與輸血教研室臨床檢驗(yàn)與輸血教研室 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)2 涂片技術(shù)涂片技術(shù)是制備血液樣品最常用的技術(shù)。將是制備血液樣品最常用的技術(shù)。將 血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本，染色后可對血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本，染色后可對 血液中各種細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行形態(tài)觀察、細(xì)胞計(jì)數(shù)、血液中各種細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行形態(tài)觀察、細(xì)胞計(jì)數(shù)、 細(xì)胞大小測量等工作。細(xì)胞大小測量等工作。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制

2、備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)3 血涂片制備血涂片制備 推片 載玻片 血液 一張滿意的血涂片應(yīng)厚薄均勻 頭 體 尾鮮明 涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭 部寫上姓名和編號 李四 B 1 2 3 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)4 方法與步驟方法與步驟 推片：擠出第二滴血置于載玻片的右側(cè)推片：擠出第二滴血置于載玻片的右側(cè) 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)5 再取另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，再取另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣， 先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開 成線狀。成線狀。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)6 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)

3、數(shù)7 3045 兩玻片的角度以兩玻片的角度以30-4530-45為宜，輕輕將雙凹片向?yàn)橐?，輕輕將雙凹片向 前勻速推進(jìn)，即涂成血液薄膜。前勻速推進(jìn)，即涂成血液薄膜。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)8 血涂片血涂片 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)9 不良血涂片不良血涂片 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)10 實(shí)驗(yàn)用品實(shí)驗(yàn)用品 器材器材: 醫(yī)用一次性采血針、酒精棉球、經(jīng)脫脂洗醫(yī)用一次性采血針、酒精棉球、經(jīng)脫脂洗 凈的載玻片凈的載玻片 、雙凹片（推片）、雙凹片（推片） 。 試劑試劑: Wrights（瑞氏）染液：（瑞氏）染液：Wrights色素粉色素粉 末末0.1g，溶于，溶于60 ml甲醇。甲醇。 實(shí)

4、驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)11 瑞氏染色原理瑞氏染色原理 瑞氏粉瑞氏粉是由是由伊紅伊紅和和美藍(lán)美藍(lán)混合后組成的一種中性鹽染料。伊紅是混合后組成的一種中性鹽染料。伊紅是 一種酸性染料，為伊紅鈉鹽，其有色部分為陰離子；美藍(lán)是一種堿一種酸性染料，為伊紅鈉鹽，其有色部分為陰離子；美藍(lán)是一種堿 性染料，為氯化美藍(lán)，有色基團(tuán)為陽離子。如以性染料，為氯化美藍(lán)，有色基團(tuán)為陽離子。如以M+代表美藍(lán)，以代表美藍(lán)，以 E-代表伊紅。將適量的代表伊紅。將適量的ME溶解在溶解在甲醇甲醇中，即成為中，即成為瑞氏染液瑞氏染液。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)12 甲醇的作用甲醇的作用可使可使ME溶解，解離為溶解，解離為M

5、+和和E，這兩種有色離，這兩種有色離 子可以選擇性地吸附血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而著色。子可以選擇性地吸附血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而著色。 各種細(xì)胞及細(xì)胞的各種成分由于其化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染各種細(xì)胞及細(xì)胞的各種成分由于其化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染 料的親和力也不一樣，因此，在血片上可以見到不同的著色。料的親和力也不一樣，因此，在血片上可以見到不同的著色。細(xì)細(xì) 胞中堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結(jié)合染成紅色胞中堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結(jié)合染成紅色 ；細(xì)胞中的酸性物質(zhì)；細(xì)胞中的酸性物質(zhì) 可與染液中的堿性染料美藍(lán)結(jié)合染成藍(lán)色可與染液中的堿性染料美藍(lán)結(jié)合染成藍(lán)色 ；當(dāng)細(xì)胞含酸、堿性物；當(dāng)細(xì)胞含酸、堿性物 質(zhì)各半時，它們既與酸

6、性染料作用，又與堿性染料作用，染成淡質(zhì)各半時，它們既與酸性染料作用，又與堿性染料作用，染成淡 紫紅色。紫紅色。 瑞氏染色原理瑞氏染色原理 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)13 血涂片染色血涂片染色 勿沖洗再加勿沖洗再加瑞氏染色瑞氏染色液液5-8滴后將滴后將液和液和 液充分混勻靜置液充分混勻靜置10分鐘分鐘 直接流水沖洗3-5分鐘 （切勿先倒掉染液） 涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡 分類計(jì)數(shù)100個白細(xì)胞 李四李四 123123 涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-8滴滴 覆蓋整個血膜覆蓋整個血膜1分鐘分鐘 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)14 染色 濃染：待涂片在空氣中完全 干燥后，滴加數(shù)滴W

7、rights 染液蓋滿血膜為止，染色3 5 min。 淡染：然后滴加等量緩沖液， 使其與染液均勻混合，靜置 1015 min。用流水沖去染 液，吸水紙吸干，鏡檢。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)15 血涂片的觀察血涂片的觀察 低倍鏡觀察低倍鏡觀察 1.1.染色情況染色情況( (滿意、偏酸、偏堿）滿意、偏酸、偏堿） 2.2.細(xì)胞分布情況細(xì)胞分布情況 油鏡下分類計(jì)數(shù)：體尾交界處。油鏡下分類計(jì)數(shù)：體尾交界處。 油鏡分類時應(yīng)按一定走向，不要重復(fù)計(jì)數(shù)。（共計(jì)油鏡分類時應(yīng)按一定走向，不要重復(fù)計(jì)數(shù)。（共計(jì) 數(shù)數(shù)100100個白細(xì)胞）個白細(xì)胞） 李四李四123 123 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)16 體尾

8、交界處體尾交界處 理想?yún)^(qū)理想?yún)^(qū)域域 細(xì)胞重疊細(xì)胞重疊 細(xì)胞太稀細(xì)胞太稀 理想?yún)^(qū)域理想?yún)^(qū)域 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)17 各類成熟白細(xì)胞的形態(tài)學(xué)：各類成熟白細(xì)胞的形態(tài)學(xué)： q中性粒細(xì)胞（中性粒細(xì)胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈在瑞氏染色血涂片上呈 圓形圓形，直徑直徑1013m，胞漿胞漿染粉紅色染粉紅色，核形核形一一 葉（桿狀核）至五葉不等，葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見以三葉者多見，染成染成 深紫紅色深紫紅色，胞漿胞漿中有許多中有許多細(xì)小均勻紫紅色顆粒細(xì)小均勻紫紅色顆粒。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)18 q嗜酸性粒細(xì)胞（嗜酸性粒細(xì)胞（EoEo）：）：較中性粒細(xì)胞稍大較中性粒細(xì)胞稍

9、大，胞胞 核核多為兩葉，呈眼鏡、八字形多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質(zhì)核染色質(zhì)粗糙粗糙 染深紫紅色染深紫紅色，胞漿胞漿內(nèi)充滿內(nèi)充滿粗大均勻的嗜酸性顆粗大均勻的嗜酸性顆 粒粒，瑞氏染色時呈，瑞氏染色時呈桔紅色桔紅色，有折光性。，有折光性。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)19 q嗜堿性粒細(xì)胞（嗜堿性粒細(xì)胞（Ba）：）：胞漿胞漿中含有大小不等中含有大小不等 的的嗜堿性顆粒嗜堿性顆粒，瑞氏染色時呈，瑞氏染色時呈蘭黑色蘭黑色。于光學(xué)顯。于光學(xué)顯 微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易 溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；核核呈呈

10、淡紫紅淡紫紅 色?？床磺迳？床磺澹蕳U狀或分葉狀。，呈桿狀或分葉狀。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)20 q淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（Ly）：）：胞體胞體呈圓形，直徑介于呈圓形，直徑介于 615m之間，在成人血涂片中以小淋巴細(xì)胞之間，在成人血涂片中以小淋巴細(xì)胞 為多見，直徑為多見，直徑69m，核核大呈深紫色致密而濃大呈深紫色致密而濃 染染，胞漿胞漿量極少量極少；大淋巴細(xì)胞；大淋巴細(xì)胞胞漿胞漿量較多，呈量較多，呈 清澈的淡藍(lán)色清澈的淡藍(lán)色，可見，可見少量嗜苯胺藍(lán)顆粒少量嗜苯胺藍(lán)顆粒，胞核胞核 圓或橢圓圓或橢圓，常偏向細(xì)胞一側(cè)常偏向細(xì)胞一側(cè)，染色較深。，染色較深。 實(shí)驗(yàn)二血涂片制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)21 q單核細(xì)胞（單核細(xì)胞（Mo）：）：在瑞氏染色涂片上為在瑞氏染色涂片上為12 20m，胞體胞體圓形、橢圓形或不規(guī)則形圓形、橢圓形或不規(guī)則形；核形核形多多 種多樣，最重要的特點(diǎn)是種多樣，最重要的特點(diǎn)是染色質(zhì)染色質(zhì)較細(xì)致疏松，呈較細(xì)致疏松，呈 絲網(wǎng)狀或條縷狀絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡著色較淡胞漿胞漿較多，淡蘭色較多，淡蘭色， 含大量含大量細(xì)小塵土