醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測

1、醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測2l醫(yī)療機構消毒是預防院內(nèi)感染的重要措施之一，消毒效果的監(jiān)測是評價其消毒設備運轉是否正常、消毒藥劑是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否達標的唯一手段，因而在醫(yī)院消毒、滅菌工作中必不可少。l醫(yī)療機構消毒效果監(jiān)測時需遵循以下原則：監(jiān)測人員需經(jīng)過專業(yè)培訓，掌握一定的消毒知識，熟悉消毒設備和藥劑性能，具備熟練的檢驗技能；選擇合理的采樣時間(消毒后、使用前)；遵循嚴格的無菌操作。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測3l檢測方法和判定標準：l消毒技術規(guī)范2002年版。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測4l一、壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測一

2、、壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測l（1） 化學監(jiān)測法：l1）化學指示卡(管)監(jiān)測方法: 將既能指示蒸汽溫度，又能指示溫度持續(xù)時間的化學指示管(卡) 放入大包和難以消毒部位的物品包中央，經(jīng)一個滅菌周期后，取出指示管(卡)，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達到滅菌條件。l2）化學指示膠帶監(jiān)測法: 將化學指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過滅菌處理l3）對預真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌，每日進行一次B-D試驗。l4）結果判定: 檢測時，所放置的指示管(卡)、膠帶的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，判為滅菌合格；若其中之一未達到規(guī)定的條件，則滅菌過程不合格。l5）注意事項:

3、 監(jiān)測所用化學指示物須經(jīng)衛(wèi)生部批準，并在有效期內(nèi)使用。l（2） 生物監(jiān)測法（略）2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測5l二、紫外線消毒效果的監(jiān)測二、紫外線消毒效果的監(jiān)測l 紫外線燈管輻照度值的測定l（1）檢測方法: l紫外線輻照計測定法：開啟紫外線燈 5min 后，將測定波長為 253.7nm 的紫外線輻照計探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離 1m 的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測6l（2）結果判定: 普通 30w 直管型紫外線燈，新燈輻照強度 90W/cm2為合格；使用中紫外線燈輻照強度70W/cm2 為合格；30W 高強度

4、紫外線新燈的輻照強度180W/cm2 為合格。l（3）注意事項: 測定時電壓 220VV，溫度 2025，相對濕度60，紫外線輻照計必須在計量部門檢定的有效期內(nèi)使用；指示卡應獲得衛(wèi)生許可批件，并在有效期內(nèi)使用。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測72021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測8l三、手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測三、手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測l采樣時間:在消毒后立即采樣。l采樣方法：l(1) 手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面積約 30cm2)，并隨之轉動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入

5、10ml 含相應中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。l(2) 皮膚粘膜采樣:用 5cm5cm 的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml 含相應中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測92021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測10l 檢測方法l細菌總數(shù)檢測:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，用無菌吸管吸取 1.0ml 待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內(nèi)

6、加入已溶化的 4548 的營養(yǎng)瓊脂 15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置 361溫箱培養(yǎng) 48h，計數(shù)菌落數(shù)。l采樣結果計算方法：l 細菌總數(shù)(cfu/cm2)（平板上菌落數(shù) 稀釋 倍數(shù)）/采樣面積(cm2)l致病菌檢測：參考消毒技術規(guī)范3.17.15。l 2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測112021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測12l四、物品和環(huán)境表面消毒效果的四、物品和環(huán)境表面消毒效果的監(jiān)測監(jiān)測l采樣時間:在消毒處理后進行采樣。l采樣方法:用 5cm5cm 的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積100cm2，連續(xù)采樣 4 個，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子

7、 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。l門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測132021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測14l檢測方法l細菌總數(shù)檢測:檢測方法按手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測執(zhí)行。小型物體表面的結果計算，用 cfu/件表示。l致病菌的檢測：請參閱消毒技術規(guī)范2002版3.17.15。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測15l注意事項l（1）送檢時間不得超過 6h，若樣品保存于 04，則不得超過24h。l（2）被采樣本表面積10

8、0cm2取全部表面；被采樣本表面積100cm2，取 100cm2。l（3）若消毒因子為化學消毒劑，采樣液中應加入相應中和劑。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測16l 結果判定l、類區(qū)域：細菌總數(shù)5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。l類區(qū)域細菌：總數(shù)10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。l類區(qū)域細菌：總數(shù)15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。l母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、 新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測17l 中和劑：在微生物殺滅試驗中，用以消除試驗中和劑：在微生物殺滅試驗中，用以消除試驗微生物與消毒劑的混懸液中

9、和微生物表面上殘留微生物與消毒劑的混懸液中和微生物表面上殘留的消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的的消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的試劑。試劑。l 對消毒效果進行監(jiān)測時，在抽樣的同時會將連對消毒效果進行監(jiān)測時，在抽樣的同時會將連同殘余消毒劑一起被采集到樣品中并可能被攜帶同殘余消毒劑一起被采集到樣品中并可能被攜帶到培養(yǎng)基或檢驗體系內(nèi)，會對未被殺死的殘存細到培養(yǎng)基或檢驗體系內(nèi)，會對未被殺死的殘存細菌生長產(chǎn)生影響，使得存活細菌檢不出，導致消菌生長產(chǎn)生影響，使得存活細菌檢不出，導致消毒效果高于實際效果或滅菌效果出現(xiàn)假陰性。所毒效果高于實際效果或滅菌效果出現(xiàn)假陰性。所以，在對消毒劑殺菌效果進

10、行監(jiān)測時，必須首先以，在對消毒劑殺菌效果進行監(jiān)測時，必須首先設法去除殘余消毒劑，使殘存細菌脫離其影響，設法去除殘余消毒劑，使殘存細菌脫離其影響，獲得正常的復蘇生長條件，以便有效的檢驗。獲得正常的復蘇生長條件，以便有效的檢驗。 2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測18l無菌檢驗用洗脫液：l 吐溫80 1gl 蛋白胨 10gl 氯化鈉 8.5gl 蒸餾水 1000mll將各成分加入到1000ml 0.03mol/LPBS液中，加熱溶解后調PH至7.27.4，于121壓力蒸汽滅菌20min備用。lPBS即磷酸鹽緩沖液。 2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測19l0.03mol/L PBS緩沖

11、液：緩沖液： 無水磷酸氫二鈉無水磷酸氫二鈉 2.83g 磷酸二氫鉀磷酸二氫鉀 1.36g 蒸餾水蒸餾水 加至加至 1000ml 將各成分加入到將各成分加入到 1000ml 蒸餾水中，待蒸餾水中，待完全溶解后，調完全溶解后，調 pH至至 7.27.4； 注意：去結晶水注意：去結晶水2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測20l磷酸二氫磷酸二氫（Na2HPO412H2O）142142 + 1218=2.83XX=7.13g（每（每1000mL）2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測21l硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉（Na2S2O35H2O）158158 + 518=5XX=7.85g（每（每1000mL

12、）2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測22l含相應中和劑的洗脫液種類：l1、卵磷脂 1gl 吐溫80 1gl 無菌洗脫液 加至100mll此中和劑用于中和75%乙醇、氯已定、苯扎溴銨。l2、卵磷脂 1gl 吐溫80 1gl 甘氨酸 0.5gl 無菌洗脫液 加至100mll此中和劑用于中和2%戊二醛。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測23l3、卵磷脂 1gl 吐溫80 1gl 硫代硫酸鈉 0.5gl 無菌洗脫液 加至100mll此中和劑用于中和0.5%碘伏。l4、卵磷脂 0.5gl 吐溫80 2gl 硫代硫酸鈉 0.5gl 無菌洗脫液 加至100mll此中和劑用于中和雙鏈季銨鹽消毒劑和

13、其他復方消毒劑。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測24l5、吐溫80 0.3gl 硫代硫酸鈉 0.5gl 無菌洗脫液 加至100mll此中和劑用于中和單方含氯消毒劑和過氧化物消毒劑（如過氧乙酸、過氧化氫）。l以上含相應中和劑的洗脫液都要調PH至7.27.4，于121壓力蒸汽滅菌20min備用。F保存條件和時間：保存條件和時間：44冰箱半年，常溫一個月冰箱半年，常溫一個月（出現(xiàn)混濁、結晶、長菌等應放棄）。（出現(xiàn)混濁、結晶、長菌等應放棄）。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測25l五、空氣消毒效果的監(jiān)測五、空氣消毒效果的監(jiān)測l采樣時間:在消毒處理后、操作前進行采樣。l采樣方法：l平板暴露

14、法l(1) 布點方法:室內(nèi)面積30m2，設內(nèi)、中、外對角線3點，內(nèi)、外點布點部位距墻壁1m處；室內(nèi)面積30m2，設 4 角及中央 5 點，4 角的布點部位距墻壁 1m 處。l(2) 采樣方法:將普通營養(yǎng)瓊脂平板(直徑為 9cm)放在室內(nèi)各采樣點處，采樣高度為距地面 1.5m 采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露 5min，蓋好立即送檢。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測262021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測27l檢測方法：將送檢的平板置37溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)，并分離致病菌。l平板暴露法結果計算公式：l細菌總數(shù)（cfu/m3）=50000N/ATl式中A為平板面積（cm2）

15、；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落數(shù)（cfu）。l注意事項l采樣前，關好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進行采樣。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測28l細菌總數(shù)（cfu/m3）=N100/A5/T1000/10l=50000N/ATl這是個經(jīng)驗公式，是基于5分鐘內(nèi)在100cm2培養(yǎng)基上降落的細菌數(shù)相當于10升空氣中含有的細菌數(shù)得出的。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測29l結果判定l類區(qū)域：細菌總數(shù)10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；l類區(qū)域：細菌總數(shù)200cfu/m3(或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球

16、菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；l類區(qū)域：細菌總數(shù)500cfu/m3(或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測30v撞擊法：v使用撞擊式空氣微生物采樣器采樣，由6層孔徑不一的撞擊器組合成一體，采樣時空氣中的活性粒子通過各層篩孔由大至小有規(guī)律地分別撞擊在各層平板上。不僅能測得空氣中帶菌粒子濃度，還能測出其大小分布情況；v儀器組成：采樣器（主體）、抽氣泵、流量計及平皿等部件；v選擇采樣器原則：捕獲率高；性能穩(wěn)定、使用方便、易消毒；噪聲低；2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測312021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測32l一、戊二

17、醛含量的測定l試劑：l1、6.5%三乙醇胺溶液。l2、0.04%溴酚藍乙醇溶液。l3、鹽酸羥胺中性溶液：17.5g鹽酸羥胺加水75ml溶解，用異丙醇稀釋至500ml，搖勻，加0.04%溴酚藍乙醇溶液15ml，用6.5%三乙醇胺溶液滴定至溶液顯藍綠色（PH4.2）。l4、0.25mol/L硫酸標準溶液。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測33l操作：l向250ml碘量瓶中精確加入戊二醛消毒劑10.0ml，精確加入6.5%三乙醇胺溶液20.0ml及鹽酸羥胺中性溶液25ml，搖勻，靜置反應1小時后，用0.25mol/L硫酸標準溶液滴定至溶液顯藍綠色（PH4.2），記錄用去的硫酸溶液總量。同時，以

18、不含戊二醛的三乙醇胺、鹽酸羥胺中性溶液重復上述操作（空白對照），重復測3次，取均值進行以下計算。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測34l由于1mol/L硫酸標準溶液1ml相當于0.1001g戊二醛，故可按下式計算戊二醛含量：l戊二醛含量 100%l式中：C為硫酸標準溶液物質的量濃度（mol/L）；V1和V2分別為空白和樣品滴定中用去的硫酸標準溶液ml數(shù)；W為碘量瓶中戊二醛樣品ml數(shù)）。 2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測35l二、有效碘含量的測定l試劑：l1、0.5%淀粉溶液。l2、36%乙酸。l3、0.1mol/L硫代硫酸鈉標準溶液。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測36l

19、操作：l向100ml碘量瓶中精確加入含碘消毒劑5.0ml及36%乙酸1滴，用0.1mol/L硫代硫酸鈉標準溶液滴定（通常用25ml滴定管，若預計有效碘含量大于5%時用50ml滴定管），邊滴邊搖勻，待溶液呈淡黃色時加入0.5%淀粉溶液10滴（溶液立即變藍色），繼續(xù)滴定至藍色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復測3次，取均值進行以下計算。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測37l由于1mol/L硫代硫酸鈉標準溶液1ml相當于0.1269g有效碘，故可按下式計算有效碘含量：l有效碘含量 100%l式中：C為硫代硫酸鈉標準溶液物質的量濃度（mol/L）；V為滴定用去的硫代硫酸鈉標準溶液ml數(shù)；

20、W為碘量瓶中含碘消毒劑ml數(shù)）。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測38l三、過氧乙酸含量的測定l試劑：l1、0.5%淀粉溶液。l2、10%碘化鉀溶液。l3、2mol/L硫酸標準溶液。l4、0.01mol/L高錳酸鉀溶液。l5、10%硫酸錳溶液。l6、3%鉬酸銨溶液。l7、0.05mol/L硫代硫酸鈉標準溶液。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測39l操作：l取1ml過氧乙酸樣液于100ml容量瓶中用水稀釋至刻度，混勻。l向100ml碘量瓶中加2.0mol/L硫酸5ml、10%硫酸錳3滴、過氧乙酸稀釋液5ml，搖勻后用0.01mol/L高錳酸鉀滴定至呈粉紅色，隨即加10%碘化鉀10ml

21、、3%鉬酸銨3滴，搖勻并用0.05mol/L硫代硫酸鈉滴定至淡黃色，加0.5%淀粉3滴（溶液立即變藍色），繼續(xù)用硫代硫酸鈉滴定至藍色消失，記錄消耗的總量，重復3次取均值計算。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測40l由于1mol/L硫代硫酸鈉標準溶液1ml相當于0.03803g過氧乙酸，故可按下式計算過氧乙酸含量：l過氧乙酸含量 100%l式中：C為硫代硫酸鈉標準溶液物質的量濃度（mol/L）；V為滴定用去的硫代硫酸鈉標準溶液ml數(shù)；W為碘量瓶中所含消毒劑ml數(shù)。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測41l四、有效氯含量的測定l試劑：l1、0.5%淀粉溶液。l2、10%碘化鉀溶液。l3、

22、2mol/L硫酸標準溶液。l4、0.1mol/L硫代硫酸鈉標準溶液。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測42l操作：l液體含氯消毒劑取1.0ml于100ml容量瓶中用水稀釋至刻度，混勻。l向100ml碘量瓶中加2.0mol/L硫酸10ml、10%碘化鉀10ml、含氯消毒劑稀釋液10.0ml。此時溶液出現(xiàn)棕色。蓋上蓋并振搖混勻后加水數(shù)滴于碘量瓶蓋緣，置暗處5min 。打開蓋，讓蓋緣水流入瓶內(nèi)。用0.1mol/L硫代硫酸鈉（裝于25ml滴定管中）滴定溶液呈淡黃色時，加0.5%淀粉10滴（溶液立即變藍色），繼續(xù)用硫代硫酸鈉滴定至藍色消失，記錄消耗的總量，重復3次取均值計算。2021-7-11醫(yī)療

23、機構消毒監(jiān)督與檢測43l由于1mol/L硫代硫酸鈉標準溶液1ml相當于0.03545g有效氯，故可按下式計算有效氯含量：l有效氯含量 100%l式中：C為硫代硫酸鈉標準溶液物質的量濃度（mol/L）；V為滴定用去的硫代硫酸鈉標準溶液ml數(shù)；W為碘量瓶中所含消毒劑ml數(shù)。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測44l0.1000mol/L硫代硫酸鈉標準溶液l一、配制l稱取26g硫代硫酸鈉(Na2S2O35H2O)，溶于1000ml純水中，緩緩煮沸10min，冷卻，保存于棕色瓶中，2周后進行標定。l二、標定l精確稱取于120烘干至恒重的基準重鉻酸鉀0.1500g,置于250ml碘量瓶中，溶于25m

24、l水中，加2g碘化鉀及20%硫酸溶液20ml，搖勻，密塞，在暗處放置10min后，加水150ml，用配制好的硫代硫酸鈉溶液滴定至近終點時，加0.5%淀粉溶液3ml，繼續(xù)滴定至藍色消失而顯亮綠色，同時做空白試驗。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測45lC(Na2S2O35H2O)l式中：C(Na2S2O35H2O)為硫代硫酸鈉標準溶液的物質的量濃度（mol/L）；m為重鉻酸鉀的質量（g）；V1和V2分別標準和空白試驗消耗的硫代硫酸鈉標準溶液（ml）數(shù)。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測46七、使用中消毒液染菌量測定七、使用中消毒液染菌量測定檢測方法：1）涂抹法:用無菌吸管吸取消毒液

25、1.0ml，加入 9.0ml 含有相應中和劑的采樣管內(nèi)混勻，用無菌吸管吸取上述溶液 0.2ml，滴于干燥普通瓊脂平板，每份樣品同時做2個平行樣，一平板置 20 培養(yǎng) 7d，觀察霉菌生長情況，另一個平板置35溫箱培養(yǎng) 72h記數(shù)菌落數(shù)，同時按 3.17.15的原則檢測致病菌。消毒液染菌量(cfu/ml)每個平板上的菌落502021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測47l2）傾注法：用無菌吸管吸取消毒液 1.0ml，加入到 9.0ml 含相應中和劑的無菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取 0.5ml 放入 2 只滅菌平皿內(nèi)，加入已熔化的 4548 的營養(yǎng)瓊脂 15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一

26、平板置 20培養(yǎng) 7d，觀察霉菌生長情況;另一個平板置361培養(yǎng) 72h，計數(shù)菌落數(shù)，同時按 3.17.15的原則檢測致病菌。l消毒液染菌量(cfu/ml)每個平板上的菌落數(shù) 20l結果判斷:消毒液染菌量100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。l注意事項:采樣后 1h 內(nèi)檢測。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測48l八、內(nèi)鏡消毒滅菌效果監(jiān)測八、內(nèi)鏡消毒滅菌效果監(jiān)測l采樣時間:在消毒滅菌后、使用前進行采樣。l采樣方法:用沾有含相應中和劑的無菌生理鹽水的棉拭子，在被檢內(nèi)鏡上從鏡頭至鏡身反復涂擦，剪去手接觸部位，將棉拭子投入到 5ml 含相應中和劑的生理鹽水采樣管中，立即送檢。2021-7-

27、11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測49l檢測方法l(1)細菌總數(shù)的檢測:按規(guī)范3.17.6.3.(1)執(zhí)行。l(2)致病菌檢測:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，按規(guī)范3.17.15原則檢測致病菌。l結果判定:滅菌后內(nèi)鏡，未檢出任何微生物為合格。l消毒后的內(nèi)鏡，細菌總數(shù)20cfu/件，并未檢出致病菌為合格。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測50l3.17.15.1 檢測原則:致病菌的檢測依據(jù)污染情況進行相應指標的檢測。l3.17.15.2 金黃色葡萄球菌檢測。l(1)增菌、分離l取采樣液 1ml，接種于 5ml SCDLP 液體培養(yǎng)基中，于361增菌 24h。取 1 白金耳上述增

28、菌液，在血平板上作劃線分離，361培養(yǎng) 24h。l(2)觀察菌落特征:在血瓊脂平板上菌落形態(tài)為金黃色、圓形凸起、 表面光滑、周圍有溶血圈。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測51l(3)鏡檢:挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，鏡下為革蘭陽性、成葡萄狀排列的球菌。l(4)生化反應:取可疑菌落作觸酶、葡萄糖發(fā)酵、血漿凝固酶、甘露醇發(fā)酵、新生霉素敏感試驗，均為陽性者即為金黃色葡萄球菌。l1）甘露醇發(fā)酵試驗：）甘露醇發(fā)酵試驗：取上述可疑菌落接種于甘露醇培養(yǎng)基，于361培養(yǎng) 24 h，發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測52l2）血漿凝固試驗：）血漿凝固試驗：玻片法：潔凈玻片一端滴一滴滅菌生理鹽水，另一端滴一滴血漿，用白金耳挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混勻，min 內(nèi)觀察有無固體顆粒狀物，若血漿出現(xiàn)凝塊，生理鹽水均勻混濁為陽性，兩者均混濁為陰性。試管法：吸取 1:4新鮮血 0.5ml，放在滅菌小試管中，再加入等量待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物，混勻后放入361孵箱中，同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌肉湯培養(yǎng)物作對照，每 30s.觀察一次，h 內(nèi)出現(xiàn)凝塊者為陽性。2021-7-11醫(yī)療機構消毒監(jiān)督與檢測53l3.17.15.3 乙型溶血性鏈球菌檢測l(1)增菌、分離:取樣品 1ml，接種于1葡萄糖肉湯，37增菌 24h。取 1 白金耳增菌液在血平板上作劃線分