傳代培養(yǎng)及細(xì)胞計(jì)數(shù)

1、傳代培養(yǎng)及細(xì)胞計(jì)數(shù)傳代培養(yǎng)及細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握傳代培養(yǎng)的一般方法和步驟以及培養(yǎng)過程中的無菌操作技術(shù)。2.熟悉培養(yǎng)細(xì)胞的觀察方法。3.學(xué)習(xí)血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)方法。實(shí)驗(yàn)原理u細(xì)胞在培養(yǎng)皿長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。u傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分皿就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分皿。實(shí)驗(yàn)用品u儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37）、培養(yǎng)皿、超凈工作臺(tái)、倒置相差顯微鏡。u材料：卵巢癌細(xì)胞HO-8910。u試劑：1640培養(yǎng)基（含血清10%）、0.25%胰蛋白酶、75%

2、消毒酒精。實(shí)驗(yàn)步驟1.實(shí)驗(yàn)前將無血清培養(yǎng)基和含血清培養(yǎng)基分裝并進(jìn)行溫育（37）。以溫度計(jì)實(shí)際顯示溫度為準(zhǔn)！實(shí)驗(yàn)步驟2.將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。實(shí)驗(yàn)步驟3.用不含血清1640培養(yǎng)基沖洗細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)步驟4.將無血清培養(yǎng)基吸出，加入0.25胰蛋白酶溶液1ml，使細(xì)胞都浸入溶液中。實(shí)驗(yàn)步驟5.消化30-40s后，棄去胰酶，加入含血清1640培養(yǎng)基2ml，終止消化，并充分吹打。吹打后將懸浮起來的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，1000rpm離心5min。實(shí)驗(yàn)步驟6.離心后，棄上清，加含血清1640重懸，混勻，取50ul用于細(xì)胞計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)步驟7. 血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理實(shí)驗(yàn)步驟8.根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果

3、，用含血清的培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度到1X105個(gè)/ml。分至兩個(gè)培養(yǎng)皿中，做好標(biāo)記，繼續(xù)培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)完畢，將培養(yǎng)基瓶口迅速過酒精燈火焰消毒，擰緊后，封口膜密封。拿出超凈臺(tái)，放入冰箱。實(shí)驗(yàn)后，請(qǐng)將超凈工作臺(tái)內(nèi)擦拭干凈，酒精噴灑消毒，并將酒精擦干凈，打開紫外燈滅菌。用過的離心管和血球計(jì)數(shù)板須清洗干凈。各個(gè)實(shí)驗(yàn)小組的同學(xué)負(fù)責(zé)將垃圾帶走，值日生打掃實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生。實(shí)驗(yàn)步驟：9、實(shí)驗(yàn)后的整理工作實(shí)驗(yàn)報(bào)告1.試述傳代培養(yǎng)的步驟和注意事項(xiàng)，并指出哪些是關(guān)鍵步驟。l傳代培養(yǎng)時(shí)要注意嚴(yán)格的無菌操作，并防止細(xì)胞之間的交叉污染。l酶解消化要適度，消化過度會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損害，消化不夠則難于將細(xì)胞解離下來。l傳代后第2-3天觀察細(xì)胞生長情況，了解細(xì)胞是否健康生長：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好。l掌握好代傳代時(shí)機(jī)：健康生長的細(xì)胞生長致