實驗二+環(huán)境中微生物的檢查

1、實驗二實驗二 環(huán)境中微生物的環(huán)境中微生物的檢查及油鏡的使用檢查及油鏡的使用一、目的要求一、目的要求1. 證明微生物存在的廣泛性，體會無菌操作的重要性。2. 比較來自不同場所細菌的數(shù)量、種類和菌落特征。3. 學習并掌握油鏡的原理和使用方法。二、基本原理二、基本原理1.1. 微生物廣泛存在微生物廣泛存在 培養(yǎng)基含有微生物生長所需的營養(yǎng)，接種到平板上的微生物因種類不同，所形成的菌落特征也不相同，可通過平板培養(yǎng)檢查微生物的數(shù)量和類型。 2 鏡油的作用鏡油的作用折射率：折射率：空氣1.0、水1.33、 香柏油1.52、玻璃1.55（1 1）增加照明亮度）增加照明亮度 （2 2）增加分辨率）增加分辨率 鏡

2、油作為介質(zhì)可使物鏡的數(shù)字孔徑增大，從而增加分辨率。 光學顯微鏡在使用最短波長的可見光(=450nm)作為光源時可達到最大分辨率：0.18m；因為人肉眼的正常分辨能力為0.25mm，因此光學顯微鏡最大放大倍數(shù)只能達到光學顯微鏡最大放大倍數(shù)只能達到1000-1500倍倍。 分辨率分辨率=0.5/nsin 工作距離：0.1mm 分辨率分辨率=0.5/nsin ：光源波長：物鏡鏡口角的半數(shù) n：玻片與物鏡間介質(zhì)的折射率 nsin：數(shù)值孔徑值是決定物鏡性能的的最重要是決定物鏡性能的的最重要指標指標3.3.油鏡的使用方法油鏡的使用方法 （1）先用低倍鏡、高倍鏡找到要觀察的樣品區(qū)域;（2）移開物鏡，滴香柏油

3、; (3）然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置，油鏡就會浸在香柏油中; （4）用微調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)，直至視野中出現(xiàn)清晰物象。 三、實驗材料三、實驗材料1.培養(yǎng)基及藥品：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng) 基、香柏油、二甲苯。 2. 器材及其他用具：顯微鏡、無菌平皿、酒精燈、鏡頭紙、標準片等。四、實驗內(nèi)容四、實驗內(nèi)容 1. 倒平板：每平板倒入培養(yǎng)基約15mL，冷凝 2. 寫標簽：標明班級、姓名、樣品來源、日 期，貼在皿底的一邊。 3. 環(huán)境中細菌檢查 1）空氣：移去平板的皿蓋，30min后蓋上皿蓋。2）超凈工作臺中：將一平板放在超凈工作臺 上，移去皿蓋，30min后蓋上皿蓋。3）手指：在平板上劃兩個區(qū)，分別在洗手前、 后在兩個區(qū)域中

4、按手印，蓋上皿蓋。4）任選一物品：頭發(fā)、飯卡、錢幣、衣物、手帕等， 接種后蓋上皿蓋五、結(jié)果觀察五、結(jié)果觀察1. 參照教材中的表格，以每組為單位，描述菌落的特 征、類型及數(shù)量。2. 比較哪種來源的樣品的平板菌落數(shù)與類型最多。 頭發(fā)上頭發(fā)上的細菌的細菌頭發(fā)和手指上的細菌頭發(fā)和手指上的細菌六、思考題 P14(4)l通過本次實驗，在防止培養(yǎng)基的污染與防止通過本次實驗，在防止培養(yǎng)基的污染與防止細菌的擴散方面，你學到些什么？有什么體細菌的擴散方面，你學到些什么？有什么體會？會？上次實驗習題解答上次實驗習題解答1. 培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌（P54，第1題） 配制培養(yǎng)基的原料、藥品及自來水中含有大量

5、的微生物，培養(yǎng)基中營養(yǎng)豐富，適合一些微生物的生長繁殖。培養(yǎng)基配好后若不及時滅菌（特別是高溫季節(jié)），會導致微生物在培養(yǎng)基中的大量繁殖，不僅營養(yǎng)物質(zhì)被消耗，而且培養(yǎng)基酸化，pH下降，滅菌后瓊脂不凝固，已不適合對目的微生物的培養(yǎng)。所以，培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌。2. 在配制培養(yǎng)基的操作過程中應注意什么問題（P54，第2題）（1）藥品稱量蛋白胨很易吸潮、稱取時動作要迅速。稱藥時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，瓶蓋也不要蓋錯。（2）藥品融化 在瓊脂融化過程中，應控制火力，以免培養(yǎng)基益出，不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦；不可用銅鍋或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養(yǎng)基中，影響微生物生長。（3）調(diào)pH

6、: pH不要挑過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基的離子濃度。（4）分裝 分裝過程中，注意不要使培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾染棉塞而引起污染，若已沾上，可用報紙、紗布擦凈等。（5）滅菌 含糖培養(yǎng)基和非含糖培養(yǎng)基要分別滅菌，使用不同的溫度和時間，滅菌要及時、徹底，按時出鍋，以防棉塞潮濕。3. 高壓滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力降為零時才能打開排氣閥，開鍋取物？（P66，第1題） 空氣的膨脹壓力大于水蒸汽的壓力，當蒸氣中含有空氣時，在同一壓力下，含蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。鍋內(nèi)冷空氣若不排盡，壓力表指針所指位置只代表壓力，不代表同一點的溫度，實際溫度比壓力表指針所指位置的溫度低得多。所以高壓滅菌開始之前，要將鍋內(nèi)冷空氣排盡。 當壓力沒降為零時打開排氣閥，會出現(xiàn)由于試管（三角瓶、培養(yǎng)袋）