實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)課件

1、實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)實實 驗驗 一一微生物培養(yǎng)基的配制和微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌及純培養(yǎng)滅菌及純培養(yǎng)實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)一、微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌一、微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌（不做）（不做）目的要求目的要求實驗材料實驗材料實驗程序?qū)嶒灣绦驅(qū)嶒炓晃⑸锱囵B(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)1、目、目 的的了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。配制過程。了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)2、材、材 料料

2、 和和 器器 皿皿主要藥品主要藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、營養(yǎng)瓊脂等營養(yǎng)瓊脂等。儀器儀器：高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、：高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、紫外線殺菌燈。紫外線殺菌燈。其它其它：天平、藥匙、電爐、：天平、藥匙、電爐、1N HCl、1N NaOH、pH試紙、三角燒瓶、量筒、玻棒、試紙、三角燒瓶、量筒、玻棒、試管、培養(yǎng)皿、吸管、牛皮紙、紗繩、硅膠試管、培養(yǎng)皿、吸管、牛皮紙、紗繩、硅膠塞、標簽等。塞、標簽等。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)3、方法和步驟、方法和步驟培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法

3、實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)培養(yǎng)基的概念及種類培養(yǎng)基的概念及種類培養(yǎng)基的配方、配制步驟培養(yǎng)基的配方、配制步驟（1）培養(yǎng)基的配制）培養(yǎng)基的配制實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)基 是指由人工配制的、適合微生物生長是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。培養(yǎng)基的介紹培養(yǎng)基的介紹碳源、氮源、無機鹽、能源、生長因子、水碳源、氮源、無機鹽、能源、生長因子、水營養(yǎng)物質(zhì)的濃度要適宜營養(yǎng)物質(zhì)的濃度要適宜營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比要適宜營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比要適宜培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等水活度和氧化還原

4、電勢等物理化學(xué)條件要適宜。物理化學(xué)條件要適宜。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)細菌：細菌： pH 7.08.0放線菌：放線菌：pH 7.58.5酵母菌：酵母菌： pH 3.86.0霉菌：霉菌：pH 4.05.8藻類：藻類： pH 6.07.0原生動物：原生動物： pH 6.08.0初始初始pHpH通常培養(yǎng)條件：通常培養(yǎng)條件：實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 1.1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 2.2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加

5、入2%2%左右的凝固劑的左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。 3.3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%0.20.5%凝固凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng) 瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自18801880年代開始用于配制年代開始用于配制微生物培養(yǎng)基以來，至今經(jīng)久不衰。微生物培養(yǎng)基以來，至今經(jīng)久不衰。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)實驗室的常用培養(yǎng)基：實驗室的常用培養(yǎng)基：細菌：細菌： 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌：高氏放線菌：高氏1 1號合成培養(yǎng)

6、基培養(yǎng)；號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；霉菌：霉菌： 查氏合成培養(yǎng)基；查氏合成培養(yǎng)基；實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制配方、配料配方、配料加熱溶解加熱溶解調(diào)調(diào)pH(pH(略略) )過濾（略）過濾（略）分裝分裝( (倒平板不分裝）倒平板不分裝）滅菌滅菌包扎包扎( (試管放在燒杯試管放在燒杯) )擺斜面、倒平板擺斜面、倒平板貯存貯存實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制1、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基2、固體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基3、半固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)牛肉膏蛋白

7、胨牛肉膏蛋白胨固體固體培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基配方(P.78)：牛肉膏牛肉膏 0.3g 蛋白胨蛋白胨 1g 氯化鈉氯化鈉 0.5g 瓊脂瓊脂 1.5g 水水 100mL pH 7.27.4 滅菌滅菌 121，20min牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨半固體半固體培養(yǎng)基配方：培養(yǎng)基配方： 瓊脂瓊脂 0.3g牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨液體液體培養(yǎng)基配方：培養(yǎng)基配方： 瓊脂瓊脂 0g實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨營養(yǎng)瓊脂：營養(yǎng)瓊脂：按照配方生產(chǎn)的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，屬于固體培養(yǎng)基。按照配方生產(chǎn)的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，屬于固體培養(yǎng)基。今天固體培養(yǎng)基用營養(yǎng)瓊脂。今天固體培養(yǎng)基用營養(yǎng)瓊脂。液體培

8、養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基按照上述配方稱量。液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基按照上述配方稱量。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)配制步驟：配制步驟：P.78實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時徹底滅菌，以任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。菌。常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾除菌、輻射滅菌、化學(xué)藥品滅菌等方法。

9、濾除菌、輻射滅菌、化學(xué)藥品滅菌等方法。本實驗培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，本實驗培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的。達到滅菌的。P.90 （2）培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌 一般培養(yǎng)基一般培養(yǎng)基: 121.3, 15-30 min 含糖培養(yǎng)基含糖培養(yǎng)基: 112.6 , 15-30 min 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)器皿的滅菌：器皿的滅菌： 干熱空氣：干熱空氣： 160， 2

10、 小時小時無菌室的消毒：無菌室的消毒： 紫外光紫外光 化學(xué)藥物熏蒸（苯酚；高錳酸鉀化學(xué)藥物熏蒸（苯酚；高錳酸鉀+甲醛）甲醛）實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)1、實驗?zāi)康摹嶒災(zāi)康?）掌握常用的分離純化微生物的基本操）掌握常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)：作技術(shù)：平板劃線法；平板劃線法；2）掌握微生物無菌操作技術(shù)；）掌握微生物無菌操作技術(shù)；3）熟悉不同微生物在固體斜面、半固體）熟悉不同微生物在固體斜面、半固體和液體培養(yǎng)基上的生長特征。和液體培養(yǎng)基上的生長特征。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)1） 微生物在自然界中無處不在，尤其在土壤微生物在自然界中無

11、處不在，尤其在土壤中存在極其豐富。但自然界中的微生物都以混中存在極其豐富。但自然界中的微生物都以混雜狀態(tài)存在。要研究某種微生物的性質(zhì)，首先雜狀態(tài)存在。要研究某種微生物的性質(zhì)，首先要獲得這種微生物的純培養(yǎng)物。要獲得這種微生物的純培養(yǎng)物。2）在固體平板、固體斜面、半固體和液體培）在固體平板、固體斜面、半固體和液體培養(yǎng)基上，不同的微生物有其固有的培養(yǎng)特征。養(yǎng)基上，不同的微生物有其固有的培養(yǎng)特征。這些培養(yǎng)特征可以作為微生物分類鑒定的指標。這些培養(yǎng)特征可以作為微生物分類鑒定的指標。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)今天接種的菌種：今天接種的菌種：l枯草桿菌枯草桿菌 芽孢桿菌屬的一種。單個細胞芽孢桿菌屬

12、的一種。單個細胞0.70.823微微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運動能運動。 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長時，常形成皺醭。培養(yǎng)基中生長時，常形成皺醭。需氧菌。廣泛分布在需氧菌。廣泛分布在土壤及腐敗的有機物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。土壤及腐敗的有機物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。 實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)l大腸桿菌大腸桿菌 需氧及兼性厭氧。需氧及兼性厭氧。G短桿菌，周鞭毛，短桿菌，周鞭毛，有動力有動力，周身有菌毛。，周身有菌毛。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)l變形桿菌變形

13、桿菌 為革蘭氏染色陰性、無芽胞、無莢膜、周身鞭毛、為革蘭氏染色陰性、無芽胞、無莢膜、周身鞭毛、運動活潑運動活潑、兩端鈍圓的小桿菌。兼性厭氧。有些種在兩端鈍圓的小桿菌。兼性厭氧。有些種在普通固體培養(yǎng)基上菌落呈遷徙生長。普通固體培養(yǎng)基上菌落呈遷徙生長。 在自然界中存在極廣，水、泥土、陰溝及各種腐在自然界中存在極廣，水、泥土、陰溝及各種腐敗的動、植物中最多，也存在于健康人和動物的腸道敗的動、植物中最多，也存在于健康人和動物的腸道中。它們是條件致病菌，在特殊情況下對人致病，如中。它們是條件致病菌，在特殊情況下對人致病，如食物中毒、尿路感染、夏季腹瀉或其他混合感染。食物中毒、尿路感染、夏季腹瀉或其他混合

14、感染。 實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)l葡萄球菌葡萄球菌 是一群革蘭氏陽性球菌，因常堆聚成葡萄串狀，是一群革蘭氏陽性球菌，因常堆聚成葡萄串狀，故名。在液體培養(yǎng)基的幼期培養(yǎng)中，常常分散，細菌故名。在液體培養(yǎng)基的幼期培養(yǎng)中，常常分散，細菌細胞單獨存在。代表種有金黃色葡萄球菌（細胞單獨存在。代表種有金黃色葡萄球菌（S-taphylococcusaureus）（黃色）、白色葡萄球菌）（黃色）、白色葡萄球菌（Salbus）（白色）、檸檬色葡萄球菌）（白色）、檸檬色葡萄球菌（Scitreus）（橙色）。）（橙色）。 葡萄球菌無鞭毛，葡萄球菌無鞭毛，不能運動不能運動。無芽胞，除少數(shù)菌。無芽胞，除少數(shù)菌

15、株外一般不形成莢膜。株外一般不形成莢膜。 在肉湯培養(yǎng)基中在肉湯培養(yǎng)基中24小時后呈均勻混濁生長，在瓊小時后呈均勻混濁生長，在瓊脂平板上形成圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，脂平板上形成圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，不透明的菌落。不同種的菌標產(chǎn)生不同的色素，如金不透明的菌落。不同種的菌標產(chǎn)生不同的色素，如金黃色、白色、檸檬色。黃色、白色、檸檬色。 實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)3、實驗操作、實驗操作（1）接種）接種l每組每人固體平板、試管斜面、半固體、液體每組每人固體平板、試管斜面、半固體、液體培養(yǎng)基各培養(yǎng)基各1個。個。l每組每組1人接種枯草桿菌，人接種枯草桿菌，1人接種大腸桿菌，

16、人接種大腸桿菌，1人接種變形桿菌，人接種變形桿菌，1人接種白色葡萄球菌。人接種白色葡萄球菌。l寫上自己的班級、學(xué)號、菌名。寫上自己的班級、學(xué)號、菌名。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)平板接種方法參閱平板接種方法參閱p.129；斜面接種方法參閱斜面接種方法參閱p.8；液體接種方法參閱液體接種方法參閱p.99；半固體接種參閱半固體接種參閱P.49。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)（2）培養(yǎng)特征觀察）培養(yǎng)特征觀察l于于37下培養(yǎng)下培養(yǎng)24h后觀察各種菌株在不同的培養(yǎng)基上后觀察各種菌株在不同的培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征，比較它們培養(yǎng)特征之間的差異的培養(yǎng)特征，比較它們培養(yǎng)特征之間的差異(實驗報告實驗報告上的重點內(nèi)容上的重點內(nèi)容)。l平板培養(yǎng)特征的描述參閱平板培養(yǎng)特征的描述參閱p.18表表2，斜面培養(yǎng)特征參，斜面培養(yǎng)特征參閱閱P.9，液體培養(yǎng)特征的描述參閱，液體培養(yǎng)特征的描述參閱P.100，半固體培養(yǎng)，半固體培養(yǎng)特征的描述參閱特征的描述參閱P.49-50。l明天中午明天中午12:30觀察結(jié)果并記錄。觀察結(jié)果并記錄。實驗一微生物培養(yǎng)基的配制滅菌及純培養(yǎng)思考題：思考題：l某人將培養(yǎng)了某人將培養(yǎng)了5天的革蘭氏陽性菌進行革蘭氏染色，天的革蘭氏陽性菌進行革蘭氏染色，他很奇怪地發(fā)現(xiàn)在油鏡下細菌顯紅色。這是怎么回他很奇怪