實(shí)驗(yàn)三霉菌、放線菌及土壤中微生物的分離純化

1、實(shí)驗(yàn)三 放線菌、霉菌的形態(tài)觀察及微生物的分離純化實(shí)驗(yàn)（一）放線菌、霉菌的形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膰Ｓ^察放線菌、霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征學(xué)習(xí)掌握霉菌染色的基本方法碓基本掌握細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌菌落形態(tài) 特征二、實(shí)驗(yàn)原理放線菌是介于細(xì)菌與絲狀真菌之間而又接1、放線菌：近于細(xì)菌的一類絲狀原核生物，因菌落呈放射狀而得名。放線菌的菌落在培養(yǎng)基上著生牢固，不易被接種針挑取， 由于胞子的存在，常使菌落表面呈粉末狀。它和細(xì)菌單染色一樣， 可用石炭酸復(fù)紅和呂氏美藍(lán)等染料著色后，在顯微鏡下觀察它們 的形態(tài)。放線菌是由不同長短的纖細(xì)的菌絲所組成的單細(xì)胞菌絲 體，菌絲內(nèi)無隔膜，菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng) 菌絲

2、（基內(nèi)菌絲）和有營養(yǎng)菌絲向上生長的氣生菌絲，有些氣生 菌絲分化成各種葩子絲，呈螺旋狀、波浪形或分枝狀等，著生形 式有叢生、互生和輪生三種。葩子的表面光滑或粗糙，圓或橢圓 和干形。胞子有各種顏色。這些形態(tài)特點(diǎn)都是鑒別放線菌的重要 依據(jù)。營養(yǎng)菌絲：又叫初級(jí)菌絲體或一級(jí)菌絲體，匍匐生長于培 養(yǎng)基內(nèi)，主要生理功能是吸收營養(yǎng)物，故亦稱基內(nèi)菌絲。營養(yǎng)菌絲 一般無隔膜，直徑0.2-0.8|1,但長度相差很大，短的小于100p, 長的可達(dá)600以上，有的無色素，有的產(chǎn)生黃.橙.紅.紫.蘭、 綠.褐.黑等不同色素，若是水溶性的色素，還可透入培養(yǎng)基內(nèi)， 將培養(yǎng)基染上相應(yīng)的顏色，如果是非水溶性（脂溶性）色素，則使

3、菌落呈現(xiàn)相應(yīng)的顏色，因此，色素是鑒定菌種的重要依據(jù)。氣生菌絲：又稱二級(jí)菌絲體。營養(yǎng)菌絲體發(fā)育到一定時(shí)期， 長出培養(yǎng)基外并伸向空間的菌絲為氣生菌絲。葩子絲：當(dāng)氣生菌絲體發(fā)育到一定程度，其上分化出可形成 葩子的菌絲即葩子絲，又名產(chǎn)葩絲或繁殖絲。放線菌最突出的特性之一是產(chǎn)生大量的.種類繁多的抗生素 ，根據(jù)估計(jì)，全世界共發(fā)現(xiàn)4000多種抗生素，其中絕大部分是由 放線茴產(chǎn)生的氣牛菌線抱子絲固體基質(zhì)2、霉菌霉備是一些“絲狀真菌”的統(tǒng)稱，不是分類學(xué)上的 名詞。凡是在基質(zhì)上長成毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀的絲狀 真菌統(tǒng)稱霉菌。霉菌形態(tài)比細(xì)菌、放線菌復(fù)雜，個(gè)體比較大，具有 分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。因此，在觀察是

4、要注意 菌絲的直徑大小，菌絲體有無隔膜，營養(yǎng)菌絲有無假扌艮， 無性繁殖或有性繁殖時(shí)形成的葩子是哪一種，葩子是怎樣 著生胡。也于霉菌的菌絲較粗大，而且葩子容易飛散，如將 菌體置于水中容易變形，故觀察時(shí)狀不用水浸法制片，而 將菌體置于乳酸石炭酸棉蘭染液中，使細(xì)胞不易干燥，并 有殺菌作用。午生抱子為歹生陽冏一 TLu. , 一 一I .匚歹隹他”更青霉 （科第狀摳孑穗次生小梗分生抱子何生探孑5初生小梗頂囊一 分生砲子梗a曲霉三、實(shí)驗(yàn)材料矗放線菌和真菌培養(yǎng)物1.放線菌培養(yǎng)物：鏈霉菌四天插片培養(yǎng)物。 來2亠黑曲霉培養(yǎng)物3各種玄菌示范片。載玻片、接種環(huán)、解剖針、解剖刀、酒精燈、鑲子等。乳酸石炭酸棉蘭染液、

5、碘液、酒精、蒸餡水等四、實(shí)驗(yàn)步驟插片法培養(yǎng)放線菌觀察放線菌氣生菌絲和 基內(nèi)菌絲的區(qū)別取插片_片，直接在顯微鏡下 進(jìn)行觀察，注意分界面兩側(cè)菌 絲形態(tài)的差異也0V逍於獨(dú)曲菸皈生惡單蛇生螺朕開環(huán)妙3?軸it! *宦簡柚鼠卄敬*味J沏蚓底形創(chuàng)形發(fā)輪生，無蟬虞瑕輪生，尤皺湮2、霉菌：在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蘭T用解剖針取少許霉 菌 于染色液中一挑開菌絲蓋上蓋玻 片觀察黑曲霉菌絲分 隔情況和分生胞子 著生情況（著重辨 認(rèn)分生胞子梗、足 細(xì)艙詡3分生葩I子）*r Mr押十卜 -故A -鬧: uh仝嚴(yán). i u t rOB52B s -記問J/SE.p . fljWl ! b，JTSfcT?RB %3l

6、* j J x* rEML2?M0A：6- r*y：- LJRiL-.r.- 一 -觀察根霉菌 絲情況和子 囊胞子情況（著重辨認(rèn) 胞子囊、包 囊梗、假 根）：五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄所觀察到的放線菌基內(nèi)菌絲和氣生菌絲的差別 繪制青霉(40x)、黑曲霉(40x)的形態(tài),，注明各部分名稱。1 為何要用乳酸石炭酸棉蘭染液對霉菌進(jìn)行染色?實(shí)驗(yàn)（二）、從土壤中稀釋分離微生物一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)微生物稀釋平板計(jì)數(shù)及劃線分離技術(shù)實(shí) 用 采用氨宜（選擇）培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，或加入某種 抑制劑有利于目標(biāo)微生物的生長，從而分離獲得目標(biāo) 微生物的純培養(yǎng)：常用稀釋平板分離法和劃線分離法 在固體培養(yǎng)基上形成單個(gè)菌落依據(jù)一個(gè)單細(xì)胞在

7、固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后可以長成一 菌落從而推算樣品中含有多少細(xì)菌或真菌的活菌數(shù)目三、實(shí)驗(yàn)步驟: 從土壤中稀釋分離微生物的方法如下:（一）土壤懸液制備 準(zhǔn)備1瓶土壤懸液：稱10克土壤放入帶玻璃珠的90ml瓶裝無菌水中手搖振蕩（10-20min）使土樣分散。（二）懸液稀釋：方法見下圖:（三）倒固體瓊脂培養(yǎng)基平板: 分離細(xì)菌的同學(xué)取一瓶牛肉膏培養(yǎng)基（ 200ml/瓶）熔化后加制霉菌素lml后倒平板。分離真菌的同學(xué)取一瓶馬丁-孟加拉紅培養(yǎng)基（ 200ml/瓶）熔化后冷至50C后加鏈霉素2ml倒平板。（四）懸液涂布（演示）：無菌操作（從稀至濃將菌液涂 布均勻）采用IO, 10-3 104稀釋液涂布馬丁-孟加

8、拉紅平板；采用KT* 10-4，10 = 5稀釋液涂布牛肉 膏蛋白豚平板,每人用剩下的1個(gè)平板做劃線分離，從 三角瓶中取土壤懸液作劃線分離（演示（五）培養(yǎng): 每個(gè)同學(xué)把平板用報(bào)紙包好（每個(gè)平板方向一致）， 寫上班級(jí)和姓名,皿底朝上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)（溫（六）檢查結(jié)果/曾司號(hào)曾粵li結(jié)果分嘲1我所涂平板種類：（牛肉膏或馬丁氏）2.計(jì)數(shù)：牛肉膏平板取單菌落數(shù)目在30 300個(gè) 左右的稀釋度來計(jì)數(shù)，馬丁氏平板取單菌落數(shù)目 在10700個(gè)左右的稀釋度來計(jì)數(shù)3. 我所計(jì)數(shù)的平板稀釋度是： 單菌落數(shù)目： 、 4. 計(jì)算：活菌數(shù)目/每克土壤二（計(jì)算過程=個(gè)/每克土壤對你和同伴的細(xì)菌及真菌計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告從土壤中稀釋分離微生物的原理、方法、步驟。N思考題為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45C左右才能倒平 板？(2) 要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為 什么？(3) 試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu) 缺點(diǎn)及應(yīng)用.(4)