第五章色譜分離法-新2

1、第五章第五章 色譜分離法色譜分離法 chromatogrphyn第一節(jié)第一節(jié) 紙色譜法紙色譜法n第二節(jié)第二節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法n第三節(jié)第三節(jié) 凝膠色譜法凝膠色譜法n第四節(jié)第四節(jié) 超臨界流體色譜法超臨界流體色譜法吸附色譜吸附色譜排阻色譜排阻色譜（凝膠色譜）（凝膠色譜）分配色譜分配色譜離子交換色譜離子交換色譜吸附能力的差異吸附能力的差異分子尺寸的大小不同分子尺寸的大小不同兩相中分配系數(shù)的不同兩相中分配系數(shù)的不同親和力的差異親和力的差異Adsorption chromatographyExclusion chromatographyGel-permeation chromatographyPar

2、tition chromatographyIon-exchange chromatography色譜分離法的分類（原理）色譜分離法的分類（原理）5 51 1 紙色譜法紙色譜法紙色譜法紙色譜法：以：以濾濾紙吸附的水作固紙吸附的水作固定相，有機溶劑定相，有機溶劑作流動相的一種作流動相的一種色譜法。色譜法。5 51 1 紙色譜法紙色譜法一、基本原理和特點一、基本原理和特點二、定性分析二、定性分析三、操作技術(shù)三、操作技術(shù)四、應(yīng)用四、應(yīng)用一、基本原理和特點一、基本原理和特點基本原理：基本原理：它和萃取一樣，它也是根據(jù)它和萃取一樣，它也是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相間的分配比不同而進行不同物質(zhì)在兩相間的分配比不同而

3、進行分離的（相當(dāng)于逆流萃?。┓蛛x的（相當(dāng)于逆流萃?。┨攸c特點：操作簡單、分離效率高，但分：操作簡單、分離效率高，但分離速度慢。離速度慢。1.層析缸層析缸123456732.濾紙濾紙3.原點原點4.展開劑展開劑5.前沿前沿6.7.斑點斑點二、定性分析二、定性分析 組分分離后，它們在濾紙上的位置用組分分離后，它們在濾紙上的位置用比移比移值值來表示，它也是色譜定性分析的依據(jù)。來表示，它也是色譜定性分析的依據(jù)。aABbllaRaf,lbRbf, 將標(biāo)準(zhǔn)和樣品的將標(biāo)準(zhǔn)和樣品的 Rf 值進行比值進行比較，可以對樣品進行定性分析。較，可以對樣品進行定性分析。定性分析方法：定性分析方法：二、定性分析二、定性分

4、析影響比移值的因素：影響比移值的因素：1）欲分離物的本性欲分離物的本性:物質(zhì)在兩相的分配系數(shù)物質(zhì)在兩相的分配系數(shù),決定了決定了它的它的Rf大小大小2) 層析溶劑層析溶劑:同一組分在不同溶劑中同一組分在不同溶劑中Rf不同。通常不同。通常應(yīng)選這樣的層析劑，使溶質(zhì)的應(yīng)選這樣的層析劑，使溶質(zhì)的Rf在在0.05 0.85之間之間,不同組分的不同組分的Rf差值差值0.05.3）pH:影響它們的存在狀態(tài)影響它們的存在狀態(tài)二、定性分析二、定性分析4）濾紙濾紙: 質(zhì)地均一、厚薄適當(dāng)、具有一定機械強度、質(zhì)地均一、厚薄適當(dāng)、具有一定機械強度、不含雜質(zhì)不含雜質(zhì)5）溫度溫度: 溫度會影響溶質(zhì)的分配系數(shù)及流動相的擴溫度會

5、影響溶質(zhì)的分配系數(shù)及流動相的擴散速度。層析操作應(yīng)在恒溫下進行，溫度不超過散速度。層析操作應(yīng)在恒溫下進行，溫度不超過 0.5oC6）展開方式展開方式:展開方式不同展開方式不同, Rf也不同。下行法的也不同。下行法的Rf最大，上行法的最大，上行法的Rf較小，環(huán)行法的較小，環(huán)行法的 Rf也不大。也不大。三、操作技術(shù)三、操作技術(shù)1.1.濾紙的選擇和處理濾紙的選擇和處理2.2.固定相的選擇固定相的選擇3.3.試樣的制備和點樣試樣的制備和點樣4.4.展開展開5.5.顯色顯色1.濾紙的選擇與處理濾紙的選擇：濾紙的選擇： a. 要求濾紙質(zhì)地均勻、平整無折痕邊緣整齊要求濾紙質(zhì)地均勻、平整無折痕邊緣整齊 b. 要

6、求濾紙的纖維松緊適宜要求濾紙的纖維松緊適宜 c. 濾紙的雜質(zhì)含量少濾紙的雜質(zhì)含量少 以以0.1 0.4 mol/L HCl (或或 2 mol/L HAc)浸泡數(shù)浸泡數(shù)小時小時,除去無機雜質(zhì)后除去無機雜質(zhì)后,取出用蒸餾水洗凈取出用蒸餾水洗凈,再將濾再將濾紙放在丙酮紙放在丙酮-乙醇乙醇( 1 : 1 )中浸泡一周時間中浸泡一周時間,除去有除去有機雜質(zhì)機雜質(zhì), 再取出風(fēng)干備用再取出風(fēng)干備用.濾紙的處理濾紙的處理2.固定相的選擇v 紙層析紙層析以吸著在纖維素上的水以吸著在纖維素上的水作固定相。作固定相。v 反相紙層析反相紙層析用甲酰胺、二甲基用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇等作固定相。甲酰胺、丙二醇等

7、作固定相。v 若分離芳香油等非極性物，以石蠟若分離芳香油等非極性物，以石蠟油、硅油作固定相。油、硅油作固定相。3.試樣的制備和點樣A. 試樣的制備試樣的制備 固體試樣盡量不用水來溶解，而多采用乙醇、丙固體試樣盡量不用水來溶解，而多采用乙醇、丙酮、氯仿等有機溶劑來溶解，最好采用與展開劑極酮、氯仿等有機溶劑來溶解，最好采用與展開劑極性相似的溶劑。性相似的溶劑。 液體試樣可直接點樣。液體試樣可直接點樣。 ）先用鉛筆在距紙條一端）先用鉛筆在距紙條一端2 3 cm處劃一條直線處劃一條直線（起始線）并在線上隔一定距離劃一（起始線）并在線上隔一定距離劃一“x”號表示點樣號表示點樣位置；見下示意圖：位置；見下

8、示意圖：B.點樣方法點樣方法3.試樣的制備和點樣3.試樣的制備和點樣）點樣工具：點樣工具：微量注射器、毛細(xì)滴管微量注射器、毛細(xì)滴管（0.5 mm) ；）點樣方法：點樣方法：用點樣工具吸取試液輕輕與用點樣工具吸取試液輕輕與“x”號接觸，使點樣的斑點直徑為號接觸，使點樣的斑點直徑為0.2 0.5 cm, 每次每次點樣點樣2 20 L于濾紙上，以冷風(fēng)吹干；于濾紙上，以冷風(fēng)吹干；）干后，將紙的兩邊用線縫好，以圓筒形式）干后，將紙的兩邊用線縫好，以圓筒形式置于層析缸中展開。置于層析缸中展開。4.展開欲分離物在兩相中的溶解度；欲分離物在兩相中的溶解度；展開劑的極性展開劑的極性展開劑與欲分離物間應(yīng)無化學(xué)反應(yīng)

9、展開劑與欲分離物間應(yīng)無化學(xué)反應(yīng)欲分離物在展開劑中的分配系數(shù)最好不受溫度欲分離物在展開劑中的分配系數(shù)最好不受溫度的影響的影響欲分離物在兩相間的分配平衡瞬間達到欲分離物在兩相間的分配平衡瞬間達到A. 展開劑的選擇展開劑的選擇4.展開B. 展開方法展開方法 展開展開前，前，層析缸與已點樣濾紙必須預(yù)先經(jīng)水蒸汽、溶層析缸與已點樣濾紙必須預(yù)先經(jīng)水蒸汽、溶劑蒸氣飽和劑蒸氣飽和。方法：將溶劑和水置于分液漏斗中充分振。方法：將溶劑和水置于分液漏斗中充分振蕩，分層后，將水層放入小燒杯內(nèi)，置于層析缸中平衡蕩，分層后，將水層放入小燒杯內(nèi)，置于層析缸中平衡一段時間，使濾紙吸飽蒸汽，然后移去小燒杯，將溶劑一段時間，使濾紙

10、吸飽蒸汽，然后移去小燒杯，將溶劑倒入溶劑槽中，立即將點好樣的濾紙的一端浸入溶劑槽倒入溶劑槽中，立即將點好樣的濾紙的一端浸入溶劑槽內(nèi)展層。內(nèi)展層。 展開方式可分為展開方式可分為上行法、下行法上行法、下行法和和環(huán)行法環(huán)行法及及雙向展開雙向展開法法等。等。4.展開B. 展開方法（上行法）展開方法（上行法）將點有試樣的濾紙條的下端浸將點有試樣的濾紙條的下端浸入溶劑（但不能浸沒點樣處）入溶劑（但不能浸沒點樣處）上端固定在層析缸的上部，保上端固定在層析缸的上部，保持垂直，將缸密閉，使溶劑沿持垂直，將缸密閉，使溶劑沿下端上升而展層。待溶液上升下端上升而展層。待溶液上升到距離紙上端到距離紙上端3 4 cm 3

11、 4 cm 時，將時，將濾紙取出，用鉛筆在溶劑前沿濾紙取出，用鉛筆在溶劑前沿處畫線作記號（見右圖）處畫線作記號（見右圖）4.展開B. 展開方法（下行法）展開方法（下行法） 溶劑自紙溶劑自紙的上端向下的上端向下降（借助于降（借助于重力的作重力的作用），具有用），具有分離速度快分離速度快及連續(xù)揮發(fā)及連續(xù)揮發(fā)色譜的優(yōu)點。色譜的優(yōu)點。玻皿玻皿玻片玻片玻璃棒玻璃棒原點原點剪成鋸齒狀，便剪成鋸齒狀，便于溶劑滴下于溶劑滴下4.展開B. 展開方法（環(huán)行法）展開方法（環(huán)行法）取一張圓形濾紙在取一張圓形濾紙在直徑的兩邊各畫兩直徑的兩邊各畫兩根平行線，用剪刀根平行線，用剪刀沿這兩根線剪至圓沿這兩根線剪至圓心處，在紙

12、的中央心處，在紙的中央滴上試液，干后，滴上試液，干后，將濾紙夾在兩個大將濾紙夾在兩個大小相同培養(yǎng)皿之間，小相同培養(yǎng)皿之間，使剪開的紙條的尾使剪開的紙條的尾端浸入流動相。端浸入流動相。4.展開B. 展開方法（雙向展開法）展開方法（雙向展開法）有時用一種溶劑不能將樣有時用一種溶劑不能將樣品中組份分開時，可以試用雙品中組份分開時，可以試用雙向展開法。該法是用正方形或向展開法。該法是用正方形或長方形濾紙，在紙的一角上點長方形濾紙，在紙的一角上點樣，先用一種展開劑朝一個方樣，先用一種展開劑朝一個方向展開，展開完畢，待溶劑揮向展開，展開完畢，待溶劑揮發(fā)后，再用另一種展開劑朝與發(fā)后，再用另一種展開劑朝與原來

13、垂直的方向進行第二次展原來垂直的方向進行第二次展層。層。4.顯色a. 有色物：直接觀察各個色斑有色物：直接觀察各個色斑無色物：無色物： 物理法顯色物理法顯色：用紫外燈照，觀察有無吸收或發(fā)出各種不同：用紫外燈照，觀察有無吸收或發(fā)出各種不同顏色的熒光斑點，并用鉛筆畫下斑點的位置及大小。顏色的熒光斑點，并用鉛筆畫下斑點的位置及大小。 化學(xué)法顯色化學(xué)法顯色：利用各種物質(zhì)的特性反應(yīng)，噴灑適當(dāng)?shù)娘@色：利用各種物質(zhì)的特性反應(yīng)，噴灑適當(dāng)?shù)娘@色劑。如若被分離的物質(zhì)含有氨基酸，則可噴茚三酮，多數(shù)劑。如若被分離的物質(zhì)含有氨基酸，則可噴茚三酮，多數(shù)氨基酸呈紫色，個別氨基酸呈黃色。其它化合物所用顯色氨基酸呈紫色，個別氨

14、基酸呈黃色。其它化合物所用顯色劑可從手冊里查閱。劑可從手冊里查閱。四、應(yīng)用四、應(yīng)用例氨基酸的分離（固定相為水）例氨基酸的分離（固定相為水）流動相流動相分離情況分離情況正丁醇：正丁醇：2 mol/L HAc = 1 : 1酪氨酸、二碘酪氨酸酪氨酸、二碘酪氨酸用水飽和的芐醇用水飽和的芐醇亮氨酸、異亮氨酸亮氨酸、異亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水酸：水16 : 16 : 0.1 : 3.9亮氨酸、異亮氨酸亮氨酸、異亮氨酸四、應(yīng)用四、應(yīng)用例例2. 糖的分離糖的分離(固定相為水固定相為水)流動相流動相分離情況分離情況醋酸乙脂醋酸乙脂:吡啶吡啶:水水= 2 : 1 : 1木糖、阿拉伯糖、甘

15、露糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖葡萄糖丁醇丁醇:吡啶吡啶:水水= 45 : 25 : 40乳糖、半乳糖、葡萄糖乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇丁醇:乙醇乙醇:水水: NH3 = 40 : 10 : 49 : 1尿中葡萄糖尿中葡萄糖丁醇丁醇:乙醇乙醇:水水= 10 : 1 : 2蜜二糖、果糖、葡萄糖、蜜二糖、果糖、葡萄糖、四、應(yīng)用四、應(yīng)用例脂肪酸的分離（固定相為水）例脂肪酸的分離（固定相為水）流動相流動相分離情況分離情況95%乙醇：濃氨水乙醇：濃氨水100 : 1同系的直鏈脂肪酸同系的直鏈脂肪酸正己醇：正己醇： 1.5 mol/L 氨水氨水1 : 1烷氧基酸烷氧基酸流動相流動相1:乙醇：濃氨水乙醇：

16、濃氨水 : H2O = 80 : 5 : 15流動相流動相2：乙二醇乙醚：桉樹腦：乙二醇乙醚：桉樹腦：88%甲酸甲酸 = 5 : 5 : 2草酸、酒石酸、檸檬酸、蘋草酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、羥基醋酸、順丁烯二果酸、羥基醋酸、順丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、烏頭酸、己二酸、延胡索酸、烏頭酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸葵二酸四、應(yīng)用四、應(yīng)用例例4. 醇、酚的分離（固定相為水）醇、酚的分離（固定相為水）流動相流動相分離情況分離情況丁醇：丁醇：5%NaHCO3 1 : 1甲醇、乙醇、異丙醇、甲醇、乙醇、異丙醇、異丁醇、異戊醇、辛醇異丁醇、異戊醇、辛醇己烷飽和甲醇己烷飽和甲

17、醇乙醇、異丙醇、丙醇、乙醇、異丙醇、丙醇、異丁醇、正丁醇異丁醇、正丁醇丁醇：乙醇：水丁醇：乙醇：水 4 : 1.1 : 1.9乙二醇、丙三醇、甘露乙二醇、丙三醇、甘露糖醇、山梨醇、肌醇糖醇、山梨醇、肌醇四、應(yīng)用四、應(yīng)用流動相流動相分離情況分離情況正丁醇：濃氨水：正丁醇：濃氨水：水水4 : 1 : 5磺胺嘧啶、磺胺噻睉、磺胺嘧啶、磺胺噻睉、Sulfamerzine、p,p-sulfonyldianiline正丁醇：醋酸：水正丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5對胺基苯甲酸、維生素對胺基苯甲酸、維生素C、N甲基甲基菸酰胺、菸堿酰胺、菸酸、潘妥寧、泛菸酰胺、菸堿酰胺、菸酸、潘妥寧、泛酸、酸、VB6、V

18、B1甲苯：石油醚：乙甲苯：石油醚：乙醇：水醇：水200 : 100 : 30 : 70雌酮、雌二酮、雌三酮、馬烯雌酮、脫雌酮、雌二酮、雌三酮、馬烯雌酮、脫氫皮質(zhì)甾酮酸、孕甾酮、順式睪丸甾酮氫皮質(zhì)甾酮酸、孕甾酮、順式睪丸甾酮例例5. 其它類的分離（固定相為水）其它類的分離（固定相為水）四、應(yīng)用四、應(yīng)用例例6無機應(yīng)用（固定相為水）無機應(yīng)用（固定相為水）流動相流動相分離情況分離情況12 mol/LHCl:甲醇甲醇:丁醇丁醇:甲甲基異丁酮基異丁酮55 : 35 : 5 : 5K+、Rb + 、Cs +乙醇：水乙醇：水80 : 20Li + 、Na + 、K +10% HCl的水飽和丁醇的水飽和丁醇Zn

19、2+Ga3+In3+ Al 3+苯酚苯酚:甲醇甲醇:HCl 5 : 3 : 2Al3+Ga3+In3+Tl 3+四、應(yīng)用四、應(yīng)用例例7生物學(xué)應(yīng)用生物學(xué)應(yīng)用黑毛黑毛紅毛紅毛黃毛黃毛白白毛毛 取不同顏色兔毛取不同顏色兔毛(300 500 mg), 干干法灰化法灰化, 溶于稀溶于稀HCl 中中,用丙酮用丙酮 : 丁醇丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展開后展開后,顯顯色色Exercise 1用紙色譜分離混合物中物質(zhì)用紙色譜分離混合物中物質(zhì)A A和和B B，已知兩者的比移值分，已知兩者的比移值分別為別為0.500.50和和0.600.60，問欲使層析后斑點顯著分開，斑點間，問欲使層析后斑點

20、顯著分開，斑點間至少間隔至少間隔1cm1cm，問濾紙應(yīng)截取多長？，問濾紙應(yīng)截取多長？ 設(shè)前沿為設(shè)前沿為l，原點到，原點到A、B斑點中心距離分別為斑點中心距離分別為a、b，兩斑點間至少間隔，兩斑點間至少間隔1cm，那么兩斑點中心相距為，那么兩斑點中心相距為2.0cm，則可列出：，則可列出：解：解：cm20l0 .2l50.0l60.00 .2ab60.0lb50.0la原點應(yīng)距濾紙下端原點應(yīng)距濾紙下端4cm，前沿應(yīng)距濾紙上端，前沿應(yīng)距濾紙上端2-3cm，應(yīng)截取濾，應(yīng)截取濾紙長紙長20+4+2=26cm,濾紙條應(yīng)截取濾紙條應(yīng)截取26-27cm長。長。Exercise 2紙色譜法分離混合離子紙色譜法

21、分離混合離子, ,若混合離子極性大小若混合離子極性大小順序為順序為ABC,ABC,用弱極性有機溶劑展開后其用弱極性有機溶劑展開后其R Rf f值大小順序為值大小順序為_。 C, B, A 5 52 2 薄層色譜法（薄層色譜法（TLCTLC）一、基本原理和特點一、基本原理和特點二、吸附劑二、吸附劑三、操作技術(shù)三、操作技術(shù)四、應(yīng)用四、應(yīng)用一、基本原理和特點一、基本原理和特點原理原理: 經(jīng)典的薄層色譜是以吸附劑為固定相的一經(jīng)典的薄層色譜是以吸附劑為固定相的一種液相色譜法，利用試樣組分在流動相（展開劑）種液相色譜法，利用試樣組分在流動相（展開劑）和固定相（吸附劑）之間反復(fù)和固定相（吸附劑）之間反復(fù)吸附

22、吸附、溶解而分離。、溶解而分離。 實際上，薄層色譜的固定相不僅僅局限于吸實際上，薄層色譜的固定相不僅僅局限于吸附劑，也可以在鋪好的惰性薄層上均勻地再涂附劑，也可以在鋪好的惰性薄層上均勻地再涂一種作為固定液的液體，進行一種作為固定液的液體，進行分配分離分配分離。一、基本原理和特點一、基本原理和特點特點特點: 裝置簡單、操作方便裝置簡單、操作方便 展開時間短（展開時間短（1060min） 靈敏度高：可以檢出靈敏度高：可以檢出0.01g 顯色方法多于紙色譜顯色方法多于紙色譜缺點：缺點：Rf值的重復(fù)性差值的重復(fù)性差定性分析：定性分析：Rf定量分析：定量分析： 光度法或熒光法光度法或熒光法二、吸附劑二、

23、吸附劑要求：要求：合適的吸附力合適的吸附力與展開劑、被吸附物質(zhì)均不起化學(xué)反應(yīng)與展開劑、被吸附物質(zhì)均不起化學(xué)反應(yīng)粒度細(xì)小而且均勻粒度細(xì)小而且均勻 常用的吸附劑有常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠氧化鋁、硅膠。此外，硅藻土、。此外，硅藻土、硅酸鹽、雜多酸鹽、聚酰胺、纖維素也可用作吸硅酸鹽、雜多酸鹽、聚酰胺、纖維素也可用作吸附劑。附劑。根據(jù)范氏方程，減少根據(jù)范氏方程，減少渦流擴散項渦流擴散項1. 1. 氧化鋁氧化鋁 氧化鋁可分為中性、堿性和酸性三種，一般常氧化鋁可分為中性、堿性和酸性三種，一般常用用堿性氧化鋁堿性氧化鋁。通常用于分離。通常用于分離碳?xì)浠衔?、生物碳?xì)浠衔铩⑸飰A類和對堿性物質(zhì)比較穩(wěn)定的中性

24、和堿性物質(zhì)堿類和對堿性物質(zhì)比較穩(wěn)定的中性和堿性物質(zhì)。酸性化合物可用酸性氧化鋁分離。酸性化合物可用酸性氧化鋁分離。氧化鋁的活性與含水量密切相關(guān)（含一定量的水氧化鋁的活性與含水量密切相關(guān)（含一定量的水份時，吸附劑表面的吸附中心會被水分子占據(jù)）份時，吸附劑表面的吸附中心會被水分子占據(jù)）1. 1. 氧化鋁氧化鋁活性活性 含水量含水量() 100 150oC, 除去除去Al2O3中與羥基結(jié)合的部分水份，中與羥基結(jié)合的部分水份，使使Al2O3有一定的活性有一定的活性150 300oC， Al2O3活性達活性達 級級300 400oC，Al2O3活性達活性達 級級 600oC， Al2O3進一步脫水并開始燒

25、結(jié)進一步脫水并開始燒結(jié)一般要求薄板用的活性為一般要求薄板用的活性為 級級 由于脫水過程受到許多因素的影響，因此由于脫水過程受到許多因素的影響，因此，每批生產(chǎn)的，每批生產(chǎn)的Al2O3 ，其表面積和表面孔穴結(jié)構(gòu)，其表面積和表面孔穴結(jié)構(gòu)并不一致，活性也不相同。并不一致，活性也不相同。 Al2O3活性的測定：取20 L染料溶液（偶氮苯30 mg、對甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅、和對氨基偶氮苯各20 mg ，溶解于50 mL CCl4中），加到薄板上，用CCl4展層，根據(jù)下表確定活性。活性活性 Rf,偶氮苯偶氮苯 0.59 0.74 0.85 0.95Rf,對對-甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯 0.16 0.

26、49 0.69 0.89Rf,蘇丹黃蘇丹黃 0.01 0.25 0.57 0.78Rf,蘇丹紅蘇丹紅 0.00 0.10 0.33 0.56Rf,偶氮苯偶氮苯 0.00 0.03 0.08 0.19Al2O3活性表活性表市售的供薄層色譜用的市售的供薄層色譜用的Al2O3有有:Al2O3 H氧化鋁中無粘合劑氧化鋁中無粘合劑Al2O3 G氧化鋁中含煅石膏（一般氧化鋁中含煅石膏（一般5煅石膏）煅石膏）煅石膏煅石膏CaSO4，作為粘合劑，作為粘合劑Al2O3 HF254氧化鋁中不含煅石膏，僅含熒光指氧化鋁中不含煅石膏，僅含熒光指示劑（在示劑（在254 nm下呈黃綠色熒光）下呈黃綠色熒光）Al2O3 G

27、F254氧化鋁中既含煅石膏又含熒光指示氧化鋁中既含煅石膏又含熒光指示劑（在劑（在254 nm下呈黃綠色熒光）下呈黃綠色熒光）上述商品可以直接調(diào)料涂敷（上述商品可以直接調(diào)料涂敷（1份料，份料，2份水調(diào)合）份水調(diào)合）2. 2. 硅膠硅膠硅膠是硅膠是微酸性吸附劑微酸性吸附劑，適用于，適用于酸性、中性酸性、中性物質(zhì)的物質(zhì)的分離（如有機酸、氨基酸、萜類、甾類），堿性物質(zhì)分離（如有機酸、氨基酸、萜類、甾類），堿性物質(zhì)則能與硅膠作用（當(dāng)用中性溶劑展層，堿性物質(zhì)有時則能與硅膠作用（當(dāng)用中性溶劑展層，堿性物質(zhì)有時停留在原點不動，或者得到拖尾的斑點，而不能很好停留在原點不動，或者得到拖尾的斑點，而不能很好的分離）

28、的分離）活性活性 含水量（）含水量（） 0 5 15 25 35注注硅膠薄層的活化溫度不能高于硅膠薄層的活化溫度不能高于200oC硅膠活性的測定硅膠活性的測定：稱取二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍：稱取二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍各各40mg40mg溶于溶于100 mL 100 mL 苯中，將此混合液滴加于薄層上，苯中，將此混合液滴加于薄層上，用石油醚展開用石油醚展開10 cm10 cm，混合物應(yīng)不動；如用苯展開，則，混合物應(yīng)不動；如用苯展開，則應(yīng)分成三個斑點，其應(yīng)分成三個斑點，其R Rf f值分別為：二甲黃值分別為：二甲黃0.580.58，蘇丹，蘇丹紅紅0.190.19，靛酚藍，靛酚藍0.080.08（展層

29、時間（展層時間30 30 45 min45 min），則認(rèn)），則認(rèn)為此硅膠合格。經(jīng)本法測定的活性與為此硅膠合格。經(jīng)本法測定的活性與AlAl2 2O O3 3活性活性 級相當(dāng)。級相當(dāng)。薄層用薄層用商品硅膠商品硅膠有：硅膠有：硅膠H H（不含粘結(jié)劑）、硅（不含粘結(jié)劑）、硅膠膠G G（含粘結(jié)劑煅石膏）、硅膠（含粘結(jié)劑煅石膏）、硅膠HFHF254254（含熒光物質(zhì)的（含熒光物質(zhì)的硅膠）硅膠硅膠）硅膠GFGF254254（含有煅石膏和熒光劑）（含有煅石膏和熒光劑）3. 3. 吸附劑的選擇吸附劑的選擇1）根據(jù)樣品組分的性質(zhì)）根據(jù)樣品組分的性質(zhì) 親脂性選擇硅膠、氧化鋁、乙?；w維素、聚酰胺等親脂性選擇硅膠、

30、氧化鋁、乙酰化纖維素、聚酰胺等 親水性選擇離子交換纖維素、硅藻土等親水性選擇離子交換纖維素、硅藻土等 酸性物質(zhì)首選硅膠板，堿性物質(zhì)首選氧化鋁板酸性物質(zhì)首選硅膠板，堿性物質(zhì)首選氧化鋁板 極性很大的物質(zhì)解吸難時可用聚酰胺（如酚）極性很大的物質(zhì)解吸難時可用聚酰胺（如酚）2）根據(jù)吸附劑的性質(zhì)）根據(jù)吸附劑的性質(zhì)u 適宜活性：活性大，易脫尾；活性小，不能分離適宜活性：活性大，易脫尾；活性小，不能分離u 考慮吸附劑對樣品的作用：如堿性氧化鋁對酯的水解考慮吸附劑對樣品的作用：如堿性氧化鋁對酯的水解起催化作用。起催化作用。三、操作技術(shù)三、操作技術(shù)1. 1. 薄層板的制備薄層板的制備2. 2. 樣品溶液的配制樣品

31、溶液的配制3. 3. 點樣點樣4. 4. 展開展開5. 5. 顯色顯色6. 6. 定性定量分析定性定量分析7. 7. 常見問題及消除方法常見問題及消除方法1.1.薄層板的制備薄層板的制備 玻璃板玻璃板 a .a .平整、去油、去污（可用濃平整、去油、去污（可用濃H H2 2SOSO4 4-K-K2 2CrOCrO7 7洗液浸洗液浸洗，或丙酮擦洗，自來水洗凈后，烘干）洗，或丙酮擦洗，自來水洗凈后，烘干） b. b. 玻璃板的尺寸根據(jù)自己的需要自由選擇，小的玻璃板的尺寸根據(jù)自己的需要自由選擇，小的可用可用2.52.5 7.5cm7.5cm的載玻片的載玻片, ,大的可用大的可用20 20 20cm2

32、0cm的玻片。的玻片。 涂鋪液涂鋪液 取一定量的吸附劑放入研缽中，加入需要的水或適取一定量的吸附劑放入研缽中，加入需要的水或適當(dāng)?shù)娜軇?，研磨時間以調(diào)成稀糊狀為度，當(dāng)濃度均一當(dāng)?shù)娜軇心r間以調(diào)成稀糊狀為度，當(dāng)濃度均一后，即成膠狀物，色澤潔白為最佳，立即傾入玻璃板后，即成膠狀物，色澤潔白為最佳，立即傾入玻璃板上，用下述方法涂布。上，用下述方法涂布。1.1.薄層板的制備薄層板的制備 涂布方法涂布方法 軟板的制備軟板的制備：干法鋪層。：干法鋪層。 硬板的制備硬板的制備：濕法鋪板。：濕法鋪板。方法有方法有傾注法，平鋪法和涂傾注法，平鋪法和涂鋪器鋪器法三種。目前廣為應(yīng)用法三種。目前廣為應(yīng)用的是涂鋪器法

33、，操作簡便，的是涂鋪器法，操作簡便，薄板厚度均勻，適合于定量薄板厚度均勻，適合于定量分析。分析。1.1.薄層板的制備薄層板的制備 活化活化 薄板薄板首先風(fēng)干首先風(fēng)干，否則濕板一下加熱到高溫，否則濕板一下加熱到高溫，烘出的薄板很酥松，使用效果不好。烘出的薄板很酥松，使用效果不好。 氧化鋁氧化鋁G板在板在150 160oC, 烘烘4小時小時(級左級左右右) 硅膠硅膠G板在板在110oC烘烘1小時小時 薄板經(jīng)活化后，一定要儲藏在密閉的干燥器薄板經(jīng)活化后，一定要儲藏在密閉的干燥器或烘箱中備用。或烘箱中備用。2.2.樣品溶液的制備樣品溶液的制備 首先將固體樣品粉碎過篩首先將固體樣品粉碎過篩：疏松的粉末過

34、：疏松的粉末過4040目目篩，堅實的粉末過篩，堅實的粉末過8080目篩目篩 用適宜的方法和溶劑提取樣品組分用適宜的方法和溶劑提取樣品組分：其提取方法：其提取方法包括索式提取器提取法、冷浸法、熱回流法、振搖包括索式提取器提取法、冷浸法、熱回流法、振搖提取法、超聲提取法。提取法、超聲提取法。 樣品溶液的精制樣品溶液的精制（除去雜質(zhì)）：溶劑萃取或柱色（除去雜質(zhì)）：溶劑萃取或柱色譜法譜法 溶液的蒸發(fā)與殘渣的溶解溶液的蒸發(fā)與殘渣的溶解（對溶液濃縮）：（常（對溶液濃縮）：（常用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、KDKD濃縮器、水浴蒸發(fā)等）濃縮器、水浴蒸發(fā)等）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀KD濃縮器3.3.點樣點樣 點樣方法類似于紙色

35、譜點樣方法類似于紙色譜 點樣量一般點樣量一般110L。 點樣器有點樣器有微量注射器微量注射器，容量毛細(xì)管和精密的自，容量毛細(xì)管和精密的自動或半自動點樣儀動或半自動點樣儀 點樣的形狀一般為圓點，直徑小于點樣的形狀一般為圓點，直徑小于3mm切勿損傷切勿損傷薄層表面薄層表面4.4.展開展開1 1）對展開劑的要求）對展開劑的要求 能夠溶解待測組分能夠溶解待測組分 能使待測組分與雜質(zhì)分開能使待測組分與雜質(zhì)分開 使待測組分的使待測組分的Rf值在值在0.20.8之間，定量測定之間，定量測定最好在最好在0.30.5之間。之間。 不能與待測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)不能與待測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng) 具有適中的沸

36、點和比較小的粘度具有適中的沸點和比較小的粘度 混合溶劑最好臨用前新鮮配制混合溶劑最好臨用前新鮮配制。2 2）展開劑的性質(zhì)）展開劑的性質(zhì)A 極性：極性： 單一溶劑的極性順序是：單一溶劑的極性順序是：石油醚石油醚環(huán)己烷環(huán)己烷二硫二硫化碳化碳苯苯四氯化碳四氯化碳三氯乙烯三氯乙烯甲苯甲苯二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿乙醚乙醚乙酸乙酯乙酸乙酯丙酮丙酮乙醇乙醇甲醇甲醇水水 混合溶劑的極性參數(shù)混合溶劑的極性參數(shù)P=APABPB（A是體積是體積分?jǐn)?shù)分?jǐn)?shù)）B 強度強度 在吸附色譜中，用在吸附色譜中，用o表示，指溶劑在單位表面積表示，指溶劑在單位表面積的標(biāo)定活性的吸附劑上的吸附能。分配色譜與極性的標(biāo)定活性的吸附劑上的吸

37、附能。分配色譜與極性參數(shù)有關(guān)。參數(shù)有關(guān)。C C 展開劑的選擇性展開劑的選擇性組別組別溶劑名稱溶劑名稱脂肪族醚，三級烷胺，四甲基胍，六甲基磷酰胺脂肪族醚，三級烷胺，四甲基胍，六甲基磷酰胺脂肪醇脂肪醇吡啶，四氫呋喃，酰胺（除甲酰胺），乙二醇醚，亞吡啶，四氫呋喃，酰胺（除甲酰胺），乙二醇醚，亞砜砜乙二醇，苯甲醇，甲酰胺，乙酸乙二醇，苯甲醇，甲酰胺，乙酸二氯甲烷，二氯乙烷二氯甲烷，二氯乙烷a磷酸三甲苯酯，脂肪族酮和酯，聚醚，二氧六環(huán)磷酸三甲苯酯，脂肪族酮和酯，聚醚，二氧六環(huán)b腈，砜，碳酸丙烯酯腈，砜，碳酸丙烯酯硝基化合物，芳香醚，芳烴，鹵代芳烴硝基化合物，芳香醚，芳烴，鹵代芳烴氟烷醇，間甲苯酚，氟烷醇

38、，間甲苯酚，氯仿氯仿，水，水 根據(jù)溶劑分子與樣品分子間的四種作用力，將溶根據(jù)溶劑分子與樣品分子間的四種作用力，將溶劑分為八組。劑分為八組。3 3）展開劑的選擇）展開劑的選擇A 總原則：總原則： 先用一展開劑，它的極性或強度能夠使容量因子先用一展開劑，它的極性或強度能夠使容量因子k最最好在好在0.55之間（或之間（或Rf值在值在0.20.6)，然后保持此強度不，然后保持此強度不變，然后根據(jù)溶劑的選擇性再更換其他的展開劑，直變，然后根據(jù)溶劑的選擇性再更換其他的展開劑，直到使待測組分很好分離。到使待測組分很好分離。B 二元展開劑的選擇二元展開劑的選擇 由一個強度較強的溶劑和一個強度近于零的溶劑由一個

39、強度較強的溶劑和一個強度近于零的溶劑（強度調(diào)節(jié)劑）混合并計算其強度。（強度調(diào)節(jié)劑）混合并計算其強度。正相正相TLC多用多用正正己烷己烷為強度調(diào)節(jié)劑，反相為強度調(diào)節(jié)劑，反相TLC則使用則使用水水。3 3）展開劑的選擇）展開劑的選擇C 多元展開劑的選擇多元展開劑的選擇Glajch提出了確定溶劑強度和選擇性的最優(yōu)化三提出了確定溶劑強度和選擇性的最優(yōu)化三角形法角形法. 做法如下：先選三種做法如下：先選三種選擇性相選擇性相差大差大的純?nèi)軇?，再選一種調(diào)節(jié)極的純?nèi)軇?，再選一種調(diào)節(jié)極性的純?nèi)軇┙M成三個相等洗脫強性的純?nèi)軇┙M成三個相等洗脫強度的二元基本溶劑度的二元基本溶劑A,B,C.BACDEFGHIJ 然后再

40、分別配成然后再分別配成A:B:C=0.5:0.5:0, (D)0.5:0:0.5(E), 0:0.5:0.5(F) 和和0.33:0.33:0.33(G),0.67:0.16:0.16(H)0.16:0.16:0.67 (I),0.16:0.67:0.16(J)的幾種混合溶劑。的幾種混合溶劑。以正相以正相TLC法為例：法為例：1） 先選擇溶劑選擇性相差較大的三種溶劑：乙醚先選擇溶劑選擇性相差較大的三種溶劑：乙醚()、氯仿、氯仿()和二氯甲烷和二氯甲烷()。選。選正己烷為極性調(diào)正己烷為極性調(diào)節(jié)劑。節(jié)劑。2) 用氯仿用氯仿-正己烷的不同比例在硅膠板上分離樣品，正己烷的不同比例在硅膠板上分離樣品，發(fā)

41、現(xiàn)用發(fā)現(xiàn)用氯仿氯仿：正己烷：正己烷34：66的組成比例可使斑點的組成比例可使斑點(待測組分待測組分)的的Rf在在0.30.5之間，算出極性參數(shù)：之間，算出極性參數(shù)：P=4.10.34+0.10.66=1.46。保持。保持P不變，計算出不變，計算出其他兩個二元溶劑的體積比。二氯甲烷：正己烷其他兩個二元溶劑的體積比。二氯甲烷：正己烷45：55，乙醚：正己烷，乙醚：正己烷50：50。3)再根據(jù)再根據(jù)Glajch三角形圖，確定其他七種多元體系三角形圖，確定其他七種多元體系的體積比。的體積比。4 4）展開方式）展開方式TLCTLC的展開方式類似于紙色譜。的展開方式類似于紙色譜。矮矮型色譜缸型色譜缸內(nèi)一般

42、用內(nèi)一般用近水平近水平上行上行展開，展開，不加粘合劑的板層也適合在此展開；不加粘合劑的板層也適合在此展開；直立直立上行上行一般在長方筒形或雙底槽一般在長方筒形或雙底槽色譜缸中進行，這種展開色譜缸中進行，這種展開只適合含只適合含有粘合劑有粘合劑的薄層的薄層。5.5.顯色顯色1 1）光學(xué)檢出法）光學(xué)檢出法 本身是有色物，可以直接觀測斑點的位置和本身是有色物，可以直接觀測斑點的位置和顏色顏色 本身無色但在紫外線的照射下會發(fā)出不同顏本身無色但在紫外線的照射下會發(fā)出不同顏色的熒光色的熒光 在可見光和紫外光下都不顯示，也沒有合適在可見光和紫外光下都不顯示，也沒有合適的顯色方法，可以用熒光薄板的顯色方法，可

43、以用熒光薄板( (硅膠硅膠HFHF254+366254+366, ,硅硅膠膠GFGF254254,.),.)進行分離進行分離, ,欲測物吸收紫外線欲測物吸收紫外線, ,在熒在熒光背景下呈暗色光背景下呈暗色5.5.顯色顯色3）生物自顯影）生物自顯影 對于抗菌素等具有生物活性的物質(zhì)，將分離后的對于抗菌素等具有生物活性的物質(zhì)，將分離后的薄層與具有適當(dāng)微生物的瓊脂培養(yǎng)基表面接觸，經(jīng)薄層與具有適當(dāng)微生物的瓊脂培養(yǎng)基表面接觸，經(jīng)過培養(yǎng)后觀察抑菌點。過培養(yǎng)后觀察抑菌點。4）放射自顯影）放射自顯影 在薄層上分離的放射性同位素的輻射線，可使照相在薄層上分離的放射性同位素的輻射線，可使照相底片感光，照片所呈暗度與

44、斑點的放射活性成正比，底片感光，照片所呈暗度與斑點的放射活性成正比，因此，得到的放射顯跡圖可以定性和定量。因此，得到的放射顯跡圖可以定性和定量。2) 2) 蒸氣顯色法蒸氣顯色法 利用一些物質(zhì)的蒸氣與樣品作用生成不同顏色或利用一些物質(zhì)的蒸氣與樣品作用生成不同顏色或產(chǎn)生熒光。如多數(shù)有機物吸附碘蒸氣顯示黃色斑點。產(chǎn)生熒光。如多數(shù)有機物吸附碘蒸氣顯示黃色斑點。5.5.顯色顯色5 5）試劑顯色法）試劑顯色法 薄層色譜中顯色最多的方法是薄層色譜中顯色最多的方法是光學(xué)檢出法和試光學(xué)檢出法和試劑顯色法劑顯色法 展開后的薄層根據(jù)待測化合物的性質(zhì)選擇適展開后的薄層根據(jù)待測化合物的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)娘@色劑使之生成顏色穩(wěn)

45、定、輪廓清晰、靈當(dāng)?shù)娘@色劑使之生成顏色穩(wěn)定、輪廓清晰、靈敏度高的色斑。敏度高的色斑。 由于對薄層板的處理方式不同，試劑顯色法由于對薄層板的處理方式不同，試劑顯色法又分為又分為噴霧顯色噴霧顯色和和浸漬顯色浸漬顯色兩種。兩種。 不加粘合劑的薄板禁用不加粘合劑的薄板禁用 有些顯色反應(yīng)需要加熱，一般在恒溫烤箱內(nèi)有些顯色反應(yīng)需要加熱，一般在恒溫烤箱內(nèi)進行，溫度控制在進行，溫度控制在100110。表表 主要顯色試劑主要顯色試劑試劑試劑配制及使用方法配制及使用方法檢出范圍檢出范圍濃濃H2SO4噴霧噴霧, 100 120oC , 觀察顏色變化觀察顏色變化高級醇、醛、高級醇、醛、酮、甾體酮、甾體H2SO4-K2

46、Cr2O75g K2Cr2O7+100mL H2SO4, 噴霧噴霧,280oC觀觀察顏色變化察顏色變化全部有機物全部有機物2,7-二氯熒光二氯熒光黃黃(0.2%乙醇乙醇)噴霧，紫外線照射噴霧，紫外線照射類脂類化合物類脂類化合物I2-KI1g I2 +10gKI溶于溶于50mLH2O中，加入中，加入2mLHAc，稀釋至，稀釋至100mL，噴霧，噴霧生物堿生物堿試劑試劑配制及使用方法配制及使用方法檢出范圍檢出范圍溴甲酚綠溴甲酚綠0.04g溶于溶于100mL乙醇中，以乙醇中，以0.1 mol / L NaOH調(diào)至藍色剛調(diào)至藍色剛消失，消失， pH3.6顯黃色顯黃色羧基酸羧基酸Ag(NH3)2+2.6

47、gAgNO3溶于溶于50mL水，加水，加入入NH3H2O至沉淀剛好消失至沉淀剛好消失還原性物質(zhì)、醛、還原性物質(zhì)、醛、還原糖還原糖茚三酮茚三酮0.5%丙酮溶液丙酮溶液胺類（如麻黃堿、胺類（如麻黃堿、氨基酸等）氨基酸等）FeCl31g溶于溶于100mL酚羥基、鞣質(zhì)、黃酚羥基、鞣質(zhì)、黃酮酮磷鉬酸磷鉬酸5g溶于溶于100mL95%乙醇乙醇脂肪、甾類、類脂、脂肪、甾類、類脂、三萜酸、生物堿三萜酸、生物堿續(xù)表續(xù)表 主要顯色試劑主要顯色試劑6.6.定性定量分析定性定量分析1 1） 定性分析定性分析 比移值定性比移值定性：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照。：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照。 光譜定性光譜定性：薄層掃描儀：薄層掃描儀 各種聯(lián)用檢測儀

48、器聯(lián)用各種聯(lián)用檢測儀器聯(lián)用：將斑點吸附轉(zhuǎn)：將斑點吸附轉(zhuǎn)移到試管中，用其他方法純化，然后進行移到試管中，用其他方法純化，然后進行紫外、熒光、紅外等光譜法定性。紫外、熒光、紅外等光譜法定性。6.6.定性定量分析定性定量分析2 2） 定量分析定量分析 目視比較半定量法目視比較半定量法：雜質(zhì)的限量實驗。：雜質(zhì)的限量實驗。 測量斑點面積測量斑點面積：要求斑點邊緣清晰：要求斑點邊緣清晰 從薄層上將被測組分洗脫下來進行定量測從薄層上將被測組分洗脫下來進行定量測定定：先確定斑點，再取下斑點和吸附劑，最后：先確定斑點，再取下斑點和吸附劑，最后用適當(dāng)?shù)南疵搫┫疵摲治鑫铮M行測定用適當(dāng)?shù)南疵搫┫疵摲治鑫?，進行測定

49、薄層色譜掃描儀原位定量測定薄層色譜掃描儀原位定量測定：紫外可：紫外可見吸收測定或熒光測定法。見吸收測定或熒光測定法。7.7.常見問題及消除辦法常見問題及消除辦法1 1）斑點拖尾現(xiàn)象）斑點拖尾現(xiàn)象酸性物質(zhì)用中性溶劑展開時，造成拖尾。酸性物質(zhì)用中性溶劑展開時，造成拖尾。（在展開劑中加入一定濃度的酸）。堿性物（在展開劑中加入一定濃度的酸）。堿性物質(zhì)類似。質(zhì)類似。在堿性氧化鋁薄層上分離酸性物質(zhì)，或在在堿性氧化鋁薄層上分離酸性物質(zhì)，或在硅膠硅膠G G板上分離生物堿，由于成鹽而造成拖尾。板上分離生物堿，由于成鹽而造成拖尾。（禁止此類操作）（禁止此類操作）點樣量過多造成拖尾（減少點樣量）點樣量過多造成拖尾（

50、減少點樣量）7.7.常見問題及消除辦法常見問題及消除辦法3 3）邊緣效應(yīng)）邊緣效應(yīng) 板層中部斑點的板層中部斑點的RfRf值小于兩側(cè)斑點的值小于兩側(cè)斑點的RfRf值，值，這是因為沸點較低的和與吸附劑親和力弱的溶這是因為沸點較低的和與吸附劑親和力弱的溶劑在薄層的兩個邊緣處較易揮發(fā)（用刀片刮去劑在薄層的兩個邊緣處較易揮發(fā)（用刀片刮去同樣寬度的邊或增加板層的預(yù)飽和時間）同樣寬度的邊或增加板層的預(yù)飽和時間）2 2）S S形及波浪形斑點形及波浪形斑點 主要由于吸附劑的顆粒細(xì)度和板層厚度不主要由于吸附劑的顆粒細(xì)度和板層厚度不均勻造成（鋪板時要注意這個問題）均勻造成（鋪板時要注意這個問題）7.7.常見問題及消

51、除辦法常見問題及消除辦法5 5）RfRf值不穩(wěn)定值不穩(wěn)定 溫度、分配系數(shù)、展開劑的揮發(fā)、板層厚度和溫度、分配系數(shù)、展開劑的揮發(fā)、板層厚度和不同批號的薄層板都影響不同批號的薄層板都影響RfRf值。注意逐一分析。值。注意逐一分析。4 4）展速慢）展速慢 加入丙酮等中等極性溶劑可使不相混合的溶加入丙酮等中等極性溶劑可使不相混合的溶劑混合，加快展速。劑混合，加快展速。四、應(yīng)用四、應(yīng)用1. 氨基酸分離氨基酸分離薄層薄層:硅膠硅膠G板板; 流動相流動相: 正丁醇正丁醇:醋酸醋酸:水水=3:1:1Rf值值:丙氨酸丙氨酸0.27, 氨基辛酸氨基辛酸0.60, 精氨酸鹽酸鹽精氨酸鹽酸鹽0.08, 磺基丙氨酸磺基

52、丙氨酸0.14, 胱氨酸鹽酸鹽胱氨酸鹽酸鹽0.16, 二羥基苯丙氨二羥基苯丙氨酸酸0.45, 甘氨酸甘氨酸0.22, 組氨酸鹽酸鹽組氨酸鹽酸鹽0.06, 羥脯氨酸羥脯氨酸0.20, 亮氨酸亮氨酸0.47, 甲硫氨酸甲硫氨酸0.40, 頡氨酸頡氨酸0.36, 苯丙苯丙氨酸氨酸0.49, 脯氨酸脯氨酸0.19, 肌氨酸肌氨酸0.17, 蘇氨酸蘇氨酸0.25, 色色氨酸氨酸0.562.核苷核苷,核苷酸核苷酸, 寡核苷酸的分離寡核苷酸的分離薄層薄層:硅膠硅膠F254 流動相流動相: 正丁醇正丁醇:HAc:H2O = 5:2:3Rf值值:腺苷腺苷-5-磷酸磷酸0.35, 胞苷胞苷-5-磷酸磷酸0.24,

53、 脫氧腺苷脫氧腺苷-5-磷酸三氯乙酯磷酸三氯乙酯0.74, 脫氧胸苷酰脫氧胸苷酰(3,5)脫氧胸腺嘧脫氧胸腺嘧啶核苷啶核苷0.61, 5-甲基尿苷甲基尿苷-5-磷酸酯磷酸酯(胸苷胸苷-5-磷酸磷酸)0.37, 5-0-磷酸基脫氧胸腺嘧啶核苷酰磷酸基脫氧胸腺嘧啶核苷酰-(35)脫氧胸腺苷酰脫氧胸腺苷酰-(3,5)脫氧胸苷脫氧胸苷0.19, 5-0-三氯乙基三氯乙基-磷酸脫氧腺苷酰磷酸脫氧腺苷酰(3,5)脫氧腺苷脫氧腺苷0.68, 尿苷尿苷-5-磷酸磷酸0.30四、應(yīng)用四、應(yīng)用3.類固醇、固醇的分離類固醇、固醇的分離薄層薄層：Al2O3 流動相流動相：C6H6:乙酸乙酯乙酸乙酯=4:1Rf值值:

54、膽甾醇膽甾醇0.83, 別色膽甾醇別色膽甾醇0.77, -谷甾醇谷甾醇0.63, 豆甾醇豆甾醇0.62, -谷甾烷醇谷甾烷醇0.444.堿金屬的分離堿金屬的分離薄層薄層: 硅膠卷硅膠卷 流動相流動相：含：含0.1mol/L I2 的硝基甲烷的硝基甲烷: C6H6 = 40:60Rf值值:Cs+0.55, Rb+ 0.47, K+ 0.36, NH4+ 0.24, Na+ 0.18, Li+ 0.06四、應(yīng)用四、應(yīng)用5 53 3 凝膠色譜法凝膠色譜法一、基本原理和特點一、基本原理和特點二、凝膠的種類和性質(zhì)二、凝膠的種類和性質(zhì)三、操作技術(shù)三、操作技術(shù)四、應(yīng)用四、應(yīng)用一、基本原理和特點一、基本原理和

55、特點 1.原理原理：按：按溶質(zhì)分子大小分離溶質(zhì)分子大小分離。小分子可以擴散到凝膠空隙，。小分子可以擴散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。所以凝膠色譜又稱為出峰。所以凝膠色譜又稱為排阻排阻色譜色譜。 它的分離機理與其他色譜完全它的分離機理與其他色譜完全不同，它不是依靠溶質(zhì)在兩相間不同，它不是依靠溶質(zhì)在兩相間的作用力不同而分離的。的作用力不同而分離的。 2. 特點：特點： 全部在死體積前出峰全

56、部在死體積前出峰。所以保留時間短，柱內(nèi)。所以保留時間短，柱內(nèi)峰擴展就比其他分離方法小很多，所以峰通常比較峰擴展就比其他分離方法小很多，所以峰通常比較窄，有利于檢測。窄，有利于檢測。 分離對象范圍寬。分離對象范圍寬?？蓪ο鄬Ψ肿淤|(zhì)量在可對相對分子質(zhì)量在100-105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離 固定相和流動相選擇方便，固定相和流動相選擇方便，根據(jù)流動相不同，根據(jù)流動相不同，分為兩類：以水溶液作流動相的叫做分為兩類：以水溶液作流動相的叫做凝膠過濾色譜，凝膠過濾色譜，分離溶于水的物質(zhì)分離溶于水的物質(zhì)；以有機溶劑為流動相的叫做；以有機溶劑為流動相的叫做凝凝膠滲透色譜，分離不溶于水的

57、物質(zhì)膠滲透色譜，分離不溶于水的物質(zhì)。 只能分離相對分子質(zhì)量相差只能分離相對分子質(zhì)量相差10以上的分子以上的分子，不能分離分子量接近、分子大小相似的分子。不能分離分子量接近、分子大小相似的分子。一、基本原理和特點一、基本原理和特點二、凝膠的種類和性質(zhì)二、凝膠的種類和性質(zhì) 1. 1. 凝膠的種類凝膠的種類 所謂所謂凝膠凝膠，是含有大量液體（一般是水）的柔軟而富有彈，是含有大量液體（一般是水）的柔軟而富有彈性的物質(zhì)，是一種經(jīng)過交聯(lián)而具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體。性的物質(zhì)，是一種經(jīng)過交聯(lián)而具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體。 根據(jù)根據(jù)凝膠的來源凝膠的來源分類，凝膠可分為分類，凝膠可分為無機凝膠無機凝膠和和有機凝膠有

58、機凝膠兩類。兩類。 根據(jù)根據(jù)凝膠的制備方法凝膠的制備方法可分為可分為均勻凝膠、半均勻凝膠和非均勻凝膠、半均勻凝膠和非均勻凝膠均勻凝膠。 根據(jù)根據(jù)凝膠使用的強度凝膠使用的強度可分為可分為軟質(zhì)凝膠、半硬質(zhì)凝膠、硬軟質(zhì)凝膠、半硬質(zhì)凝膠、硬質(zhì)凝膠。質(zhì)凝膠。 根據(jù)根據(jù)凝膠對溶劑的適用范圍凝膠對溶劑的適用范圍，凝膠可分為，凝膠可分為親水性、親油親水性、親油性和兩性凝膠。性和兩性凝膠。二、凝膠的種類和性質(zhì)二、凝膠的種類和性質(zhì) 多孔硅膠多孔硅膠 是使用較多的是使用較多的無機凝膠無機凝膠，它的特點是穩(wěn)定性好、機，它的特點是穩(wěn)定性好、機械強度好，可在柱中直接更換溶劑。缺點是吸附問題，械強度好，可在柱中直接更換溶劑

59、。缺點是吸附問題，需要經(jīng)特殊處理。一般表面未處理硅膠可用于水、酸需要經(jīng)特殊處理。一般表面未處理硅膠可用于水、酸體系，但不能用于強堿性溶劑；表面硅烷化的硅膠可體系，但不能用于強堿性溶劑；表面硅烷化的硅膠可用于有機溶劑。用于有機溶劑。 由于多孔硅膠的機械強度高，因此在交聯(lián)聚苯乙由于多孔硅膠的機械強度高，因此在交聯(lián)聚苯乙烯凝膠后，細(xì)粒度的多孔硅膠已經(jīng)發(fā)展成為一種很好烯凝膠后，細(xì)粒度的多孔硅膠已經(jīng)發(fā)展成為一種很好的高速、高效凝膠色譜填料。其中以的高速、高效凝膠色譜填料。其中以BondagelBondagel更有更有特色，能成功分離水中的生化體系。特色，能成功分離水中的生化體系。二、凝膠的種類和性質(zhì)二、

60、凝膠的種類和性質(zhì) 交聯(lián)聚苯乙烯凝膠交聯(lián)聚苯乙烯凝膠 商品名叫商品名叫StyrogelStyrogel，這種凝膠孔徑分布比較寬，這種凝膠孔徑分布比較寬，因此分子量分離范圍比較大，可分離分子量從因此分子量分離范圍比較大，可分離分子量從16001600到到4000000040000000的生物大分子。的生物大分子。 主要使用非極性溶劑，丙酮、乙醇等極性溶主要使用非極性溶劑，丙酮、乙醇等極性溶劑不能應(yīng)用，且不能在柱中直接更換溶劑。最高劑不能應(yīng)用，且不能在柱中直接更換溶劑。最高使用溫度為使用溫度為150150，一般裝完柱后不再拆下來。，一般裝完柱后不再拆下來。洗脫劑可用甲基亞砜。洗脫劑可用甲基亞砜。 適