藥物分析第十章

1、高職高專系列教材配套電子教案高等教育出版社高等教育電子音像出版社主編 張駿（第一版）高職高專系列配套電子教案 目錄緒論第一章 藥物分析基礎知識第二章 藥物物理常數測定法第三章 藥物的雜質檢查方法 第四章 芳酸及其酯類藥物分析 第六章 巴比妥類藥物分析 第七章 雜環(huán)類藥物分析 第八章 生物堿類藥物分析 第九章 糖、苷類藥物分析 第十章 甾體激素類藥物分析 第五章 胺類藥物分析 高職高專系列配套電子教案 目錄第十二章 抗生素類藥物分析 第十三章 藥物制劑分析 第十四章 中藥制劑和生化藥物的分析 第十五章 質量標準的制訂 第十一章 維生素類藥物分析 第十章 甾體激素類藥物分析甾體激素類藥物的分類 腎

2、上腺皮質激素 雄性激素 蛋白同化激素 性激素 孕激家 雌激素各種甾體激素結構上的差異主要在于其取代基的種類、位置和數目，雙鍵的位置和數目以及c10上有無角甲基等。 一、藥物結構與性質關系分析基本母核環(huán)戊烷駢多氫菲第十章 甾體激素類藥物分析23451016789121114131716151918abcdc20c21第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析二、鑒別試驗三、雜質檢查四、含量測定 （一）腎上腺皮質激素（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素 （三）孕激素（四）雌激素（五）其它激素第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析返返 回回 （一）腎上腺皮質激素 第十章 甾體激

3、素類藥物分析本類藥物的結構特點：（1）具有21個碳原子（2）a環(huán)具有4-3-酮基的，-不飽和羰基結構（3）c17具有-醇酮基并多數有-羥基（4）c10、c13具有角甲基；c11具有羥基或酮基（5）其它：有些皮質激素具有1，6、9-鹵素，16-羥基，6、12、16、16-甲基等。 一、藥物結構與性質關系分析 （一）腎上腺皮質激素 第十章 甾體激素類藥物分析在結構上，腎上腺皮質激素可以認為是皮質酮的衍生物。一、藥物結構與性質關系分析3ohohoch2ohc皮質酮 （一）腎上腺皮質激素 第十章 甾體激素類藥物分析 例如，氫化可的松、醋酸地塞米松、曲按西龍、地塞米松磷酸鈉等等。一、藥物結構與性質關系分

4、析h3choh3cooch2ohcoh氫化可的松 （一）腎上腺皮質激素 第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析返返 回回 （二）性激素雄性激素及蛋白同化激素 第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析och3hhhch3甲睪酮（methyltestosterone）ohch3常用的雄性激素為睪丸素的衍生物。例如，甲睪酮（甲基睪丸素）、丙酸睪酮和苯丙酸諾龍等。 （二）性激素雄性激素及蛋白同化激素 第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析och3hhhch3丙酸睪酮（testosterone propionate）hooch3ohhhhch3苯丙酸諾龍（nand

5、rolone phenylpropionate）hoo 第十章 甾體激素類藥物分析本類藥物的結構特點：（1）具有19個碳原子（2）蛋白質同化激素具18個碳原子（c10上無角甲基）（3）a環(huán)具有4-3-酮基；（4）c17上無側鏈，多數是一個-羥基，有些是由該羥基形成的酯，有些具有-甲基。 一、藥物結構與性質關系分析（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素返返 回回 （三）孕激素第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析孕激素也稱為黃體激素或孕酮，其典型藥物為黃體酮。典型的藥物有黃體酮、醋酸甲羥孕酮（安宮黃體酮）等。其結構如下：och3hhhch3黃體酮（progesterone）hch3oo

6、ch3hhhch3醋酸甲地孕酮（megestrol acelate）och3och3och3 （三）孕激素第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析本類藥物的結構特點：（1）具有21個碳原子（2）環(huán)具有4-3-酮基（3）c17上甲酮基，有些具有-羥基，與醋酸、己酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羥孕酮等）；還有些具有6、6-甲基、6-甲基、6-氯。返返 回回 （四）雌激素第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析雌激素又稱為卵泡激素。主要是雌二醇及其各種酯和炔雌醇及其衍生物。其典型藥物的主要結構如下：hohhhch3雌二醇（estradiol）hohhohhhc

7、h3炔雌醇（ethinylestradiol）ohcch （四）雌激素第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析 本類藥物的結構特點：（1）具有18個碳原子（2）a環(huán)為苯環(huán)（3）c3上具有酚羥且有些形成了酯或醚（4）c10上無角甲基（5）c17具有-羥基或酮基，有些羥基形成了酯，還有些具有乙炔基。 返返 回回 （五）其它激素第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析 除上述四種甾體激素外，中國藥典（2005年版）還收載了口服避孕藥物，如炔諾酮(norethisterone)、炔諾孕酮(norgestrel)、炔孕酮（ethisterone）等，其典型結構藥物結構如下：hhh

8、ch3炔諾酮（norethisterone）ohcchhohhh炔諾孕酮（norgestrel）ohcchhch3c （五）其它激素第十章 甾體激素類藥物分析一、藥物結構與性質關系分析 藥物的結構特點：（1）多數在a環(huán)上具有4-3-酮基，與黃體酮和睪酮一致（2）有的在c17具有-羥基、-乙炔基或甲酮基（3）有的在c10上無角甲基，與雌激素相同。 返返 回回 返返 回回 （一）與強酸呈色反應 （二）官能團的反應（三）氧化還原反應（四）沉淀反應（五）衍生物熔點第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗（六）水解反應（七）薄層色譜法（八）高效液相色譜法（九）紫外分光光度法（十）紅外吸收光譜法返返 回回

9、（一）與強酸呈色反應 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗1.許多甾體激素能與硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，其中以與硫酸的呈色反應應用較廣。 2.試劑：硫酸的呈色反應中最常用的試劑為甲醇和乙醇，而稀釋反應體系的試劑常為稀硫酸或水。 3.應用實例：以氫化可的松的鑒別為例取本品約2mg ，加硫酸2ml 使溶解，放置5 分鐘，顯棕黃色至紅色，并顯綠色熒光；將此溶液傾入10ml水中，即變成黃色至橙黃色，并微帶綠色熒光，同時生成少量絮狀沉淀。 返返 回回 （二）官能團的反應 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗1.酮基的呈色反應：酮基的呈色反應：甾體激素分子中，大多在c3和c20位上含有酮基，能與

10、羰基試劑肼發(fā)生呈色反應，產生有色物質腙。原理：常用的試劑：2,4二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼。 h2nnhno2no2 h2nnhcon co+h2nnhcnnh co+h2nnhcnnh （二）官能團的反應 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗2. c c1717位位 醇酮基的呈色反應醇酮基的呈色反應 ：某些，c17位上具有-醇酮基（-co-ch2oh）的甾體激素，具還原性，可與氧化劑四氮唑鹽發(fā)生呈色反應，產物的顏色隨所用試劑條件不同而定，多為紅色或藍色。 原理：-醇羥基可以被氧化為醛、或醇酮基發(fā)生斷裂。而氧化劑四氮唑鹽被還原而發(fā)生呈色反應， （二）官能團的反應 第十章 甾體激素類藥物分析

11、二、鑒別試驗3.3.甲酮基的呈色反應甲酮基的呈色反應 ：具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物亞硝基鐵氰化納芳香醛呈色黃體酮其他甾體亞硝基鐵氰化納藍紫色（靈敏、專屬）淡橙色或不顯色 （二）官能團的反應第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗4.4.有機氟的呈色反應有機氟的呈色反應 ：含氟的甾體激素藥物 氧瓶燃燒f茜素氟藍硝酸亞鈰顯藍紫色返返 回回 （三）氧化還原反應 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗1.1.堿性酒石酸銅的反應堿性酒石酸銅的反應 ：皮質激素的c1 7-醇酮基具有還原性堿性酒石酸銅cu2o（橙紅色） （三）氧化還原反應 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗2.2.與氨制硝酸銀

12、的反應與氨制硝酸銀的反應 ：皮質激素的c17-醇酮基具有還原性氨制硝酸銀ag（黑色）返返 回回（四）沉淀反應沉淀反應 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗含炔基的甾體激素硝酸銀銀鹽沉淀cchr+agno3ccagr+hno3（白色）返返 回回（五）衍生物熔點衍生物熔點 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗黃體酮鹽酸羥胺 黃體雙酮肟 m.p.235240m.p.200202koh炔雌醇苯甲酰氯 苯甲酸酯 （五）衍生物熔點衍生物熔點 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗m.p.約182苯丙酸諾龍 鹽酸氨基脲苯丙酸諾龍的縮氨脲衍生物 丙酸睪丸酮 醇制koh 丙酸睪丸酮的水解產物 m.p. 15

13、0156 返返 回回（六）水解反應 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗一些甾體激素類藥物具有醋酸酯、戊酸酯及己酸酯的結構，可先行水解，根據水解產物來鑒別。 醋酸可的松 醇制kohh2so4醋酸乙酯 （香氣）返返 回回（七）薄層色譜法 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗（八）高效液相色譜法通過比較供試品和對照品保留時間的一致性，進行鑒別 （九）紫外分光光度法 本類藥物的分子中存在共扼結構（ccco和），具紫外吸收。如：-3-酮 max240nm；苯環(huán)：280nmccco苯環(huán)返返 回回（十）紅外吸收光譜法 第十章 甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗中國藥典上收載的甾體激素類藥物的紅外光譜圖要求

14、與對照圖譜一致 。 返返 回回三、雜質檢查（一）有關物質（二）游離磷酸鹽（三）甲醇和丙酮（四）硒（五）雌酮 第十章 甾體激素類藥物分析返返 回回 三、雜質檢查來源：原料、中間體、異構體、降解產物。特點：結構相似、可能存在多個甾體雜質。方法（具一定的分離能力）：1. 薄層色譜法（多采用高、低濃度對比法）2. 高效液相色譜法（多采用不加校正因子的主成分自身對照法）tlc判定方法：規(guī)定雜質斑點數目； 比較雜質斑點顏色hplc判定方法：大多規(guī)定雜質峰面積（一）有關物質 第十章 甾體激素類藥物分析三、雜質檢查1. 薄層色譜法（多采用高、低濃度對比法） 醋酸氟輕松中醋酸氟輕松中“有關物質有關物質”的檢查的

15、檢查 取本品，加三氯甲烷-甲醇（9 1）溶解并制成每1ml中約含3mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（9 1）稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（97 3）為展開劑，展開，晾干，在105干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍試液，立即檢視。供試品溶液如顯雜質斑點，不得多于2個，其顏色與對照溶液的主斑點比較不得更深。 （一）有關物質 第十章 甾體激素類藥物分析三、雜質檢查2.高效液相色譜法（多采用不加校正因子的主成分自身對照法） 炔諾酮中炔諾酮中“有關物質有關物質”的檢查

16、的檢查 取本品，以甲醇溶解并稀釋制成每1ml中含2mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取3ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。用含量測定項下的色譜條件，取對照溶液10l注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高度約為滿量程的10%，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰面積的和不得大于對照溶液主蜂面積。 （一）有關物質第十章 甾體激素類藥物分析返返 回回三、雜質檢查 地塞米松磷酸鈉為地塞米松與磷酸形成的磷酸酯二鈉鹽，所以在其生產和貯存過程中可能引入磷酸鹽，因此中國藥典對地塞米松磷酸鈉進行游離磷酸鹽的檢查。 原理：

17、 方法：對照品法（二）游離磷酸鹽 第十章 甾體激素類藥物分析 onhmoophpohpomooh還原還原鉬藍鉬藍磷鉬酸銨磷鉬酸銨 740nm 三、雜質檢查第十章 甾體激素類藥物分析期律（二）游離磷酸鹽地塞米松磷酸鈉中游離磷酸鹽的檢查精密稱取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加鉬酸銨硫酸試液2.5ml與1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，搖勻，在20放置3050分鐘，照分光光度法，在740nm處測定吸收度，與對照液4.0ml同法處理的吸收度比較，不得更大。返返 回回三、雜質檢查第十章 甾體激素類藥物分析（三）甲醇和丙酮 甲醇和丙酮為地塞米松磷酸鈉生產過程中所使

18、用的溶劑，甲醇為二類限制使用的溶劑，丙酮為三類溶劑，中國藥典均采用氣相色譜法測其溶劑殘留的。 返返 回回三、雜質檢查第十章 甾體激素類藥物分析（四）硒劇毒劇毒來源 合成中用二氧化硒(seo2)脫氫原理與方法地塞米松磷酸鈉 氧瓶燃燒se6+鹽酸羥胺se4+ph2.02 2，3-二氨基萘試液 4，5-苯并苯硒二唑 環(huán)己烷 max378nm返返 回回三、雜質檢查 原理：zimmermann反應（五）雌酮（乙炔基） 第十章 甾體激素類藥物分析堿性koh乙醇hoc c2紅藍色紅藍色 間二硝基苯返返 回回四、含量測定高效液相色譜法紫外分光光度法比色法第十章 甾體激素類藥物分析四、含量測定（一）高效液相色譜

19、法特點：樣品用量少、靈敏度高、分離效能好、快速固定相：為十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相：大多是甲醇和水組成的混合液 檢測：可采用紫外檢測器于240nm或280nm波長檢測，（因為大多甾體激素都具有4-3-酮及苯環(huán)等共軛結構） 第十章 甾體激素類藥物分析返返 回回四、含量測定（二） 紫外分光光度法 4-3-酮基和苯環(huán)的共扼系統(tǒng)，于紫外光區(qū)有特征吸收4-3-酮基 max：240nm波長附近 腎上腺皮質激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 苯環(huán) max：280nm波長附近 雌激素第十章 甾體激素類藥物分析返返 回回四、含量測定（三） 比色法 1.四氮唑比色法2.異煙肼比色法3.kober反應比色法及鐵一

20、酚試劑比色法第十章 甾體激素類藥物分析四、含量測定（三） 比色法 1.四氮唑比色法原理： 17位-醇酮基（具還原性）第十章 甾體激素類藥物分析四氮唑鹽 oh-有色的甲臢比色四、含量測定第十章 甾體激素類藥物分析（三） 比色法 1.四氮唑比色法四氮唑鹽的種類： 2,3,5-三苯基氯化四氮唑(ttc)，其還原產物為不溶于水的深紅色三苯甲簪，max在480490nm，也稱紅四氮唑（rt） +2eoh-cnnnn clncnnhn(四、含量測定第十章 甾體激素類藥物分析（三） 比色法 1.四氮唑比色法四氮唑鹽的種類： 藍四氮唑（bt），即3,3-二甲氧苯基-雙-4,4-93,5-二苯基)氯化四氮唑，其

21、還原產物為暗藍色的雙甲膳，max在525nm左右。 cl-+cnnnnoch3+-clcnnnnoch3+4eoh-hcnnnnoch3hcnnnnoch3四、含量測定第十章 甾體激素類藥物分析（三） 比色法 1.四氮唑比色法倍他米松磷酸鈉的含量測定倍他米松磷酸鈉的含量測定精密稱取倍他米松磷酸鈉26.35mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取精密稱取倍他米松磷酸鈉對照品26.66mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各1ml, 分別置25ml量瓶中，各精密加異煙肼溶液（異煙肼75mg

22、，鹽酸0.1ml，加甲醇溶解并稀釋至100ml）20ml，搖勻，置60水浴中保溫1小時，冷卻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，在420nm的波長處測定供試品溶液與對照品溶液吸光度分別為0.654和0.663，計算倍他米松磷酸鈉的百分含量。 四、含量測定第十章 甾體激素類藥物分析（三） 比色法 1.四氮唑比色法討論：（1）溶劑和水分的影響含水量5%反應v含水10%a含水30%幾無反應 無水乙醇醛 a無醛無水乙醇(2) 堿的種類及加入順序的影響 具還原性先加四氮唑鹽溶液，再加堿液為好 原因：皮質激素與(ch3)4n+oh-長時間接觸后，有部分分解。四、含量測定第十章 甾體激素類藥物

23、分析（三） 比色法 1.四氮唑比色法討論：(3) 溫度與時間的影響 一般說來，呈色速度隨溫度增高而加快 。bp：在30反應1小時中國藥典(2005年版)：多數在25暗處反應4045分鐘。(4) 空氣中氧及光線的影響 對光敏感，在暗處顯色。ttc法形成的甲臢對空氣中氧敏感，使顏色強度，穩(wěn)定性。bp規(guī)定：加入試劑后，要往容器中充n2。四、含量測定第十章 甾體激素類藥物分析（三） 比色法 1.四氮唑比色法討論（5）基團影響 lc21：-羥基（c21-oh） 21 -oh酯化后較母體羥基反應速度慢， 即：游離體酯類如：可的松醋酸可的松 簡單酯復雜酯， 醋酸酯磷酸酯琥珀酸酯三甲基醋酸酯返返 回回四、含量

24、測定第十章 甾體激素類藥物分析（三） 比色法 2.異煙肼比色法原理：酮基h+異煙肼縮合黃色異煙腙，比色 h2o+noconhnnconhnh2+四、含量測定第十章 甾體激素類藥物分析（三） 比色法 2.異煙肼比色法討論：(1) 溶劑：無水乙醇，無水甲醇（2）酸的種類、濃度及異煙肼的濃度 常用hcl hcl：異煙肼=2m：1m時，獲最大吸收度。 四、含量測定第十章 甾體激素類藥物分析（三） 比色法 2.異煙肼比色法討論：(3)水分、溫度、光線和氧的影響 甾體激素與異煙肼的縮合反應為可逆反應，所以h2oa溫度，逆反應加速。 于密閉并不吸水的條件下，光與氧對反應不產生影響。 (4)關于反應的專屬性在該反應條件下， 對43酮具有一定的專屬性，室