色譜資料(液相)

1、內(nèi)部資料色譜資料(液相)一、液相色譜簡(jiǎn)介第2頁(yè)二、液相色譜的常見問題與維護(hù)第4頁(yè)三、液相色譜柱的使用與維護(hù)第8頁(yè)四、高效液相色譜柱常見故障總結(jié)第12頁(yè)一、液相色譜簡(jiǎn)介高效液相色譜法(HPLC)是目前應(yīng)用廣泛的分離、分析、純化有機(jī)化合物(包括能通過化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)化合物的無機(jī)物)的有效方法之一。 在已知的有機(jī)化合物中，約有80%能用高效液相色譜法分離、分析，而且由于此法條件溫和，不破壞樣品，因此特別適合高沸點(diǎn)、難氣化揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物和生命物質(zhì)。HPLC系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器是關(guān)鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、

2、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、與柱或保護(hù)住、柱溫控制器等，現(xiàn)代HPLC儀還有微機(jī)控制系統(tǒng)，進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型HPLC儀還備有自動(dòng)餾分收集裝置。目前常見的HPLC儀生產(chǎn)廠家國(guó)外有Waters 公司、Agilent 公司（原HP公司）、島津公司等，國(guó)內(nèi)有大連依利特公司、上海分析儀器廠、北京分析儀器廠等。一、輸液泵1.泵的構(gòu)造和性能輸液泵是HPLC系統(tǒng)中最重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個(gè)質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性。輸液泵應(yīng)具備如下性能：流量穩(wěn)定，其RSD應(yīng)小于0.5，這關(guān)系到定性定量的準(zhǔn)確性；流量范圍寬，分析型應(yīng)在0.110mlmin范圍內(nèi)連續(xù)調(diào)，制備型應(yīng)能達(dá)到100mlmin；輸

3、出壓力高，一般應(yīng)能達(dá)到150300KG/CM2：液缸容積??；密封性能好，耐腐蝕。泵的種類很多，按輸液性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵。恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵、柱塞往復(fù)泵和隔往復(fù)泵。恒壓泵受柱陰影響，流量不穩(wěn)定；螺旋泵缸體太大，這兩種泵己被淘汰目前應(yīng)用最多的是柱塞往復(fù)泵。柱塞往復(fù)泵的液缸容積小，可至0.1ml，因此易于清洗和更換流動(dòng)相，特別適合于再循環(huán)和梯度洗脫；改變電機(jī)轉(zhuǎn)速能方便地調(diào)節(jié)流量，流量不受柱壓影響；泵壓可達(dá)400KG/CM2。ADW主要缺點(diǎn)是輸出的脈沖性較大，現(xiàn)多彩采用雙泵系統(tǒng)來克服。雙泵按連接方式可分為并聯(lián)式和串聯(lián)式，一般說來并聯(lián)泵的流量重現(xiàn)性較好（RSD為0.1左右，串聯(lián)泵為0.

4、20.3），但出現(xiàn)故障的機(jī)會(huì)較多（因多了單向閥），價(jià)格也較貴。二、進(jìn)樣器一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥（以美國(guó)RHEODYNE公司的7725和7725I型最常見），其關(guān)鍵部件由圓形密封墊子（轉(zhuǎn)子）和固定底座（定子）組成。耐高壓（3540MPA），進(jìn)樣量準(zhǔn)確，重復(fù)性好（0.5），操作方便。六通閥進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50（最多75），并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。此法進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和重復(fù)性決定于注器取樣的熟練程度，而且易產(chǎn)生由進(jìn)樣引起的峰展寬。用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的510倍9最少3倍，這樣才能完全置換定量環(huán)內(nèi)和流

5、動(dòng)相，消除管壁效應(yīng)，確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。三、色譜柱色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3，5，7，10UM等，柱效理論值可達(dá)516萬米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對(duì)于同系物分析，只要500即可；對(duì)于較難的分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬的柱子，因此一般1030CM左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到最佳效率，除柱外死體積

6、要小外，不要有合理的柱結(jié)構(gòu)（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù)。即使最好的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍料徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。四、檢測(cè)器HPLC的檢測(cè)器分為兩類：通用型檢測(cè)器和專用型檢測(cè)器。1通用型檢測(cè)器可連續(xù)測(cè)量色譜柱的流出物的全部特性變化，通常采用差分測(cè)量法，這類檢測(cè)器包括示差折光檢測(cè)器、介電常數(shù)檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器等，通用檢測(cè)器適用范圍廣，但由于對(duì)流動(dòng)相有響應(yīng)，因此易受溫度變化、

7、流動(dòng)相和組分的變化的影響，噪聲和漂移都比較大，靈敏度較低，不能用梯度洗脫。2專用型檢測(cè)器用以測(cè)量被分離樣品組分某種特性的變化。這類檢測(cè)器對(duì)樣品中組分的某種物理或化學(xué)性質(zhì)敏感，而這一性質(zhì)是流動(dòng)相所不具備的，或至少在操作條件下不顯示。這類檢測(cè)器包括紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、放射性檢測(cè)器等。二、液相色譜的常見問題與維護(hù) 液相色譜中對(duì)流動(dòng)相的要求(1)溶劑必須純凈，在使用前需經(jīng)過濾板除去顆粒雜質(zhì)，必要時(shí)在進(jìn)樣口再加一塊濾板以除去可能由泵帶來的顆粒。(2)必須控制吸附色譜中溶劑的含水量，過量水會(huì)使吸附劑活性降低，溶質(zhì)保留值下降(3)如需在一定pH值下操作，須定期測(cè)定流動(dòng)相的pH值，大氣中的C02溶解在流動(dòng)

8、相內(nèi)將引起PH值的改變，特別是貯液瓶密閉不嚴(yán)時(shí)這種影響可能更大(4)軟質(zhì)或半軟質(zhì)填料的溶脹率隨溶劑極性的變化而變化，使用新柱時(shí)應(yīng)先用2530倍柱容積的合適動(dòng)相平衡；更換流動(dòng)相時(shí)，如果兩種流動(dòng)相不互溶，需采用過渡溶劑使前一種流動(dòng)相逐步溶解消除（例如，2、2、4-三甲基戊烷換成甲醇時(shí)，必須用乙酸乙酯或其他溶劑過渡，直到標(biāo)準(zhǔn)物保留值達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)）(5)為延長(zhǎng)不易裝填、價(jià)格昂貴的高效柱壽命，可在進(jìn)樣器和色譜柱之間安裝預(yù)柱，對(duì)流動(dòng)相和樣品中的顆粒和雜質(zhì)進(jìn)行最后的過濾；在填充和連接預(yù)柱時(shí)，不應(yīng)有造成譜帶變寬、分離度下降的死體積；預(yù)柱與色譜柱的體積之比應(yīng)保持為1：15至1：25，以減少譜帶變寬 關(guān)于梯度洗脫

9、HPLC有等強(qiáng)度（isocratic）和梯度（gradient）洗脫兩種方式。等度洗脫是在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定，適合于組分?jǐn)?shù)目較少，性質(zhì)差別不大的樣品。梯度洗脫是在一個(gè)周期內(nèi)程序控制流動(dòng)相的組成，如溶劑的極性、離子強(qiáng)度和PH值等，用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異罰大的復(fù)雜樣品。采用梯度洗脫可以縮短分析時(shí)間，提高分離度，改善峰形，提高檢測(cè)靈敏度，但是常常引起基線漂移和降低重現(xiàn)性。梯度洗脫有兩種方式：低壓梯度（外梯度）和高壓梯度（內(nèi)梯度）。兩種溶劑組成的梯度洗脫可按任意程度混合，即有多種洗脫曲線：線性梯度、凹形梯度、凸形梯度和階梯形梯度。線性梯度最常用，尤其適合于在反相柱上進(jìn)行梯度洗脫。在

10、進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相，有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍就不互溶，使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡?；旌先軇┑恼扯瘸ｋS組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘主度都較小，當(dāng)二者以相近

11、比例混合時(shí)粘度增大很多，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。 每次梯度洗脫之后必須對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理，使其恢復(fù)到初始流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱，使固定相與初始流動(dòng)相達(dá)到完全平衡。 如何處理液相泵發(fā)生故障要保持泵的良好操作性能，必須持續(xù)保持系統(tǒng)的清潔，確保使用的溶劑和試劑的質(zhì)量，流動(dòng)相進(jìn)入流路前必須進(jìn)行過濾和脫氣。 預(yù)防泵故障需要持久不間斷的努力: 1）、使用優(yōu)質(zhì)試劑和HPLC級(jí)溶劑，對(duì)泵對(duì)色譜柱都有好處； 2）、流動(dòng)相和溶劑在使用前使用優(yōu)質(zhì)材料過濾； 3）、對(duì)流動(dòng)相和溶劑進(jìn)處理脫氣； 4）、每次開始使用時(shí)要排氣放空，工作結(jié)束后從泵

12、及色譜柱中洗去緩沖液或有害物；不讓水及腐蝕性溶劑等有害物質(zhì)滯留泵及色譜柱中； 5）、定期更換在線過濾圈等墊圈； 8）、嚴(yán)格遵從泵操作手冊(cè)中的建議。 處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時(shí)間的重復(fù)性好。在等度洗脫時(shí)壓力波動(dòng)小于2%。梯度洗脫時(shí)壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。為了使故障發(fā)生后盡快排除，平時(shí)應(yīng)常備密封、單向閥（入口與出口）、泵頭裝置、各式接頭、保險(xiǎn)絲等部件，以及更換工具。若出現(xiàn)故障可參考以下方法：?jiǎn)蜗蜷y 現(xiàn)象：柱壓波動(dòng)范圍很大。原因：?jiǎn)卧蜷y污染或閥內(nèi)進(jìn)入氣泡引起。污染使得球與閥座密封不嚴(yán)，液流倒流，壓力不穩(wěn)，或球與閥座粘在一起阻死。氣泡進(jìn)入閥中會(huì)緊貼在閥體的一側(cè)，使球難

13、以返回到閥座，引起倒流，使壓力和流速變化范圍大，有時(shí)甚至為零。措施：對(duì)于污染用不同極性的一系列溶劑沖洗有可能解決問題，如用25mL水、甲醇、異丙醇、二氯甲烷依次沖洗?；虿鹣逻M(jìn)出單向閥放在10%的硝酸液內(nèi)超聲清洗3060min，若仍不解決問題則要更換單元向閥。對(duì)于閥內(nèi)進(jìn)入氣泡不必弄清氣泡存在何處，只要打開泄液閥大流速?zèng)_洗就可解決問題，在沖洗泵時(shí)可用扳手迅速打開泵頭上的輸出管路，以促進(jìn)氣泡排出。 塞桿密封墊 現(xiàn)象：在高壓下壓力不穩(wěn)定，從泵頭滲漏流動(dòng)相液體，反映在分析結(jié)果上是樣品保留時(shí)間的改變。原因：墊圈與運(yùn)動(dòng)著的柱塞桿緊緊接觸，是液相色譜系統(tǒng)中最易磨損的部件。緩沖液或其它含鹽的流動(dòng)相更加速墊圈的磨

14、損。墊圈磨損是不可避免的。措施：一旦墊圈損壞只有進(jìn)行更換。更換時(shí)注意要將柱塞桿縮至最后，松開泵頭的兩根收緊螺釘，操作時(shí)處處以平衡的動(dòng)作進(jìn)行，切不可搖動(dòng)或上下擺動(dòng)泵頭，否則柱塞桿極易折斷。 塞桿 現(xiàn)象：無流動(dòng)相流出，壓力波動(dòng)，更換新的墊圈后仍滲漏。原因：一旦出現(xiàn)以上現(xiàn)象，只有更換柱塞桿。更換進(jìn)要用專用工具，由于此項(xiàng)操作比較復(fù)雜困難，需請(qǐng)專業(yè)維修工程師來解決。也可自行按說明書的指導(dǎo)仔細(xì)進(jìn)行。 檢測(cè)器的一些故障及解決的方法檢測(cè)器UV檢測(cè)器為例：首先要保證檢測(cè)池的清潔，不僅每天用后要對(duì)檢測(cè)器進(jìn)行充分的沖洗，而且還要定期的用強(qiáng)溶劑反向沖洗檢測(cè)池。另外，檢測(cè)器用的燈是有一定壽命的，在清洗泵等其它不用檢測(cè)器

15、時(shí)可將檢測(cè)器關(guān)上。使用脫過氣的流動(dòng)相，防止池內(nèi)進(jìn)入氣泡。UV燈 現(xiàn)象：停泵監(jiān)測(cè)基線出現(xiàn)短噪音信號(hào)并伴有偶爾的長(zhǎng)噪音尖信號(hào)。原因：燈的能量降低。一般氘燈的正常壽命為4001000h，而汞燈和鎢燈可以達(dá)到2000h以上的壽命。措施：更換新燈。換燈時(shí)要戴手套，不能在燈上留下指痕，且嚴(yán)格按操作手冊(cè)進(jìn)行。更新?lián)Q燈日期，以積累燈的使用時(shí)間。檢測(cè)器 A、池內(nèi)氣泡。滯留在池內(nèi)的氣泡使基線一直向一邊漂移且伴有毛刺。而瞬間通過池內(nèi)的氣泡，則會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)噪音的尖峰。其解決的方法可將檢測(cè)器與泵出口直接相連，以23mL/min（不可超出池子的耐壓）的流速?zèng)_洗數(shù)分鐘。若是由于池內(nèi)存有相溶的溶劑時(shí)，則要將流動(dòng)相換為異丙醇進(jìn)行直

16、接沖洗檢測(cè)池。B、池污染阻塞。表現(xiàn)為系統(tǒng)壓力升高，且松開檢測(cè)器的入口接頭后壓力明顯下降。此時(shí)可將檢測(cè)器與泵直接相連，給出相應(yīng)的流速進(jìn)行反沖，但萬萬不可超過說明書內(nèi)對(duì)池耐壓的要求。C、池污染。其現(xiàn)象為基線向一邊漂移，停泵后故障仍存在。此時(shí)將檢測(cè)器與泵直接連接，用異丙醇或10%的硝酸進(jìn)行沖洗。若仍不能解決，則要將檢測(cè)池卸下，按說明書將池內(nèi)各個(gè)部件拆下逐個(gè)進(jìn)行清洗。 高效液相色譜系統(tǒng)中氣泡對(duì)檢測(cè)的影響及其解決方法在我們進(jìn)行液相色譜分析時(shí)，有時(shí)會(huì)遇到這樣一個(gè)問題：系統(tǒng)的流路中存在氣泡。由于氣泡的存在，會(huì)造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成分析靈敏度下降；氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時(shí)會(huì)使流動(dòng)相的流速

17、變慢或不穩(wěn)定，使基線起伏。造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條：一是流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；二是系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈；三是在注入樣品時(shí)不注意混入了空氣。為了避免這類問題的出現(xiàn)，液相色譜實(shí)際分析過程中必須重視對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理。常用的脫氣方法有以下幾種：1. 吹氦脫氣法 使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在0.1Mpa壓力下，以約60ml/min流速通入流動(dòng)相10-15min以驅(qū)除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑，脫氣效果較好，但在國(guó)內(nèi)因氦氣價(jià)格較貴，本法使用較少；2.加熱回流法 此法的脫氣效果較好；3.抽真空脫氣法 此時(shí)可使用微型真空泵，降壓至0.05

18、-0.07MPa即可除區(qū)溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機(jī)械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務(wù)。由于抽真空會(huì)引起混合溶劑組成的變化，故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對(duì)多元溶劑體系應(yīng)預(yù)先脫氣后再進(jìn)行混合，以保證混合后的比例不變。4.超聲波脫氣法 它是目前實(shí)驗(yàn)室使用最廣泛的脫氣方法，將配制好的流動(dòng)相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡(jiǎn)便，基本能滿足日常分析的要求。5.在線真空脫氣法 把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲(chǔ)液系統(tǒng)中，并結(jié)合膜過濾器，實(shí)現(xiàn)了流動(dòng)相在進(jìn)入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法，并適用于多元溶劑體系。其二，在液相色譜系統(tǒng)開

19、始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動(dòng)相，將流路中的空氣驅(qū)趕干凈。其三，在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。 液相色譜管路接頭故障解決方法1、管路阻塞 阻塞是管路的主要故障,管路完全阻塞，壓力會(huì)突然升高，超壓。部分阻塞開始不明顯，不斷滯留在液流中的微粒壓力會(huì)慢慢升高，最后完全阻塞。管路阻塞同時(shí)會(huì)看到接頭或墊圈滲漏，低壓好一些，高壓滲漏明顯。管路完全或部分阻塞是由下列原因引起的： 沒有很好過濾流動(dòng)相； 樣品中有微粒；泵或進(jìn)樣器墊圈產(chǎn)生碎片；預(yù)柱、護(hù)柱和分析柱中漏出填料；毛刺和銼屑進(jìn)入；流動(dòng)相中的結(jié)晶鹽； 微生物 系統(tǒng)中進(jìn)入了其它顆粒性物質(zhì)。 系統(tǒng)中管路阻塞的現(xiàn)象很少見，常見的是燒

20、結(jié)過濾片（玻璃砂芯）阻塞。用燒結(jié)過濾器或過濾片（孔徑2-10um）能去掉阻塞管路的微粒（如0.25mm管徑）。 用系統(tǒng)分段法檢查阻塞的管路，從后向前分別松開接頭檢查，找到阻塞管路后，應(yīng)立即拆下來疏導(dǎo)或換新。 如果是非剛性物質(zhì)阻塞，如生物樣品中的生化物質(zhì)（蛋白質(zhì)）、微生物等，可用極細(xì)的金屬絲導(dǎo)通，也可以在火頭上燒一燒，使有機(jī)物炭化，而后再導(dǎo)通。 如果是剛性物質(zhì)阻塞，要導(dǎo)通則十分困難，采用反沖的辦法有時(shí)能成功。就是將管子調(diào)頭用泵沖洗。操作時(shí)要注意保護(hù)眼睛和裸露的皮膚，因阻塞物會(huì)以很高的速度沖出來。 無法導(dǎo)通的管路要換上同樣規(guī)格的管子。如果換上新管后又被阻塞，則應(yīng)該停機(jī)檢查上面提到的引起阻塞的幾種原

21、因。2、管頭損壞 管子切口不平整或密封卡套不平滑都不能密封。要重新切割去壞管頭（包括卡套），調(diào)換新卡套，裝上接頭擠壓卡緊。 大多數(shù)滲漏是由接頭引起的，而不是管子問題。3、接頭故障的預(yù)防與解決辦法 幾乎所有的接頭故障都是可以避免的，按下列要求可以有效地預(yù)防接頭的故障：使用儀器設(shè)計(jì)時(shí)的部件（如同一廠商的部件）； 使用效果好的接頭部件（如零死體積，即樣品通過時(shí)V0=0）； 按要求組裝和擰緊接頭，不可擰得過緊； 避免接頭混淆使用，及時(shí)作好標(biāo)記； 使用合格的工具。組裝/拆卸接頭時(shí)要檢查在密封面上有無微粒和無機(jī)鹽晶體。這些污染物影響密封性能，更嚴(yán)重的使螺絲咬死。 最后，旋緊接頭時(shí)最好用死扳手，保證不咬壞接

22、頭。 平時(shí)要準(zhǔn)備一些要能用到的各種接頭備件。 液相色譜儀的保養(yǎng) 1HPLC的日常操作條件： 溫度：1030； 相對(duì)濕度80； 最好是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電干擾、高振動(dòng)設(shè)備。 2泵的保養(yǎng)： 1使用流動(dòng)相盡量要清潔； 2進(jìn)液處的沙芯過濾頭要經(jīng)常清洗； 3流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀； 4避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡; 3進(jìn)樣器的保養(yǎng)： 1每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染； 4柱的保養(yǎng)： 1柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)； 2當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)， 閥件或管路一定要清洗干凈； 3要注意流動(dòng)相的脫氣； 4避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相； 5進(jìn)樣樣品要提純； 6嚴(yán)格控制進(jìn)樣量； 7每天分析

23、工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品； 8每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?9若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉； 5檢測(cè)器(UV)的保養(yǎng)： 1紫外燈的保養(yǎng)：在分析前、柱平衡得差不多時(shí)，打開檢測(cè)器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。 2樣品池要保養(yǎng)。 六通進(jìn)樣閥使用和維護(hù)六通閥進(jìn)樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中最理想的進(jìn)樣器，它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。美國(guó)Rheodyne公司的六通閥進(jìn)樣器最為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣器。 工作原理: 手柄位進(jìn)樣(Load)位置時(shí)，樣品經(jīng)微量進(jìn)樣針從進(jìn)樣孔注射進(jìn)定量環(huán)，定量環(huán)充滿后，多余樣品從放空孔

24、排出；將手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至進(jìn)樣(Inject)位置時(shí)，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動(dòng)相沖洗定量環(huán)，推動(dòng)樣品進(jìn)入液相分析柱進(jìn)行分析。雖然六通閥進(jìn)樣器具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、壽命長(zhǎng)、日常無需維修等特點(diǎn)，但正確的使用和維護(hù)將能增加使用壽命，保護(hù)周邊設(shè)備，同時(shí)增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑?，六通閥進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣3萬次而無需維修。 手柄處于Load和Inject之間時(shí)，由于暫時(shí)堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途。在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入

25、空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積的75，如20l的定量環(huán)最多進(jìn)樣15l的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；使用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20l的定量環(huán)最少進(jìn)樣60至100l的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進(jìn)樣針配合20ul滿環(huán)進(jìn)樣。可根據(jù)進(jìn)樣體積的需要自己制作定量環(huán)，一般不要求精確計(jì)算定量環(huán)的體積，譬如，一根名義上10l的定量環(huán)，實(shí)際是9l還是1ll并不重要，因?yàn)楸粶y(cè)樣品和校正樣品的進(jìn)

26、樣體積保持一致，在計(jì)算結(jié)果時(shí)誤差都被抵消了。進(jìn)樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用0.45m的濾膜過濾。防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動(dòng)相沖洗，在進(jìn)樣閥的Load和Inject位置反復(fù)沖洗，再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)。六通閥使用和維護(hù)注意事項(xiàng)：樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45UM濾膜過濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。為防止緩沖鹽和

27、樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。三、液相色譜柱的使用與維護(hù) 液相色譜柱的安裝 液相色譜儀由高壓液體泵、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。 柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件。在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一

28、定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。b、柱填料： 液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在310 m的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒的粒徑在310 m之間。2、色譜柱的安裝：a、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。

29、b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。c、 按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動(dòng)為止，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰14-12圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象，請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰14圈，直至不漏液為止。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度

30、應(yīng)嚴(yán)格控制在2.5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸)。 液相色譜柱的使用 色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。1、樣品的前處理：a、最好使用流動(dòng)相溶解樣品。b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。c、使用0.45m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。2、流動(dòng)相的配制：液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備

31、以下的特點(diǎn)：a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。b、流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，最好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。3、流動(dòng)相流速

32、的選擇：因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mlmin，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8mlmin為佳。當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。 液相色譜柱的日常維護(hù)(1)每次開機(jī)時(shí)，流速和柱壓要逐漸增加，突然迅速增加，會(huì)使柱床受到?jīng)_擊，引起紊亂，產(chǎn)生空隙(2)在進(jìn)樣前使色譜系統(tǒng)充分平衡，是否平衡可由基線加以判斷(3)在進(jìn)樣前，檢查色譜系統(tǒng)的各個(gè)接頭，通常由此能發(fā)現(xiàn)是否有漏液現(xiàn)

33、象。如有漏液，空氣會(huì)從漏縫 進(jìn)人系統(tǒng)引起基線漂移，影響峰高和峰面積的重復(fù)性(4)不要把柱接頭上得太緊，否則易損壞接頭螺紋，引起滲漏(5)不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽(yáng)光下，氣流和陽(yáng)光都會(huì)使柱子產(chǎn)生溫度梯度造成基線漂 移；如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的，可以設(shè)法使柱子恒溫（配柱溫箱）(6)若儀器用做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)很多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱， 這樣有助于延長(zhǎng)柱壽命(7)如果懷疑樣品會(huì)污染色譜柱，可以用合適的溶劑(幾百毫升)慢慢沖洗柱子過夜，第二天早晨再用流動(dòng)相重新平衡柱子(約3min)(8)在因裝卸、更換、貯存等而挪動(dòng)柱子時(shí)，動(dòng)作要輕，不要使其受到碰

34、撞，以免柱床因震動(dòng)產(chǎn)生空隙或通道(9)柱要加標(biāo)簽，新舊分開，不要放在溫度變化很大的地方(10)柱子不用或貯藏時(shí)，應(yīng)封閉并貯存在惰性溶劑中 柱子的清洗 1柱子的清洗 即使樣品和流動(dòng)相已做過前處理，也仍難以完全避免柱子受到污染，因此必須對(duì)柱子行清洗。清洗應(yīng)定期進(jìn)行，如果在短期內(nèi)分析許多樣品，則以每日清洗一次為宜，至少也應(yīng)一周一次，防止有太多的雜質(zhì)在柱上堆積。反相柱的常規(guī)洗滌辦法是：分別取甲醇、三氯甲烷、水、甲醇各20倍柱體積（即對(duì)于一根4.6mm25cm的柱來說，通常是5060ml，而對(duì)于9.4mm50cm的柱來說，通常是500-600m1），使之通過柱子。然后用流動(dòng)相平衡（通常仍用20倍柱體積）

35、，柱一般將恢復(fù)正常。如果選擇性仍和以前不一樣，則表明還有其他雜質(zhì)留在柱子里，這時(shí)應(yīng)考慮更加嚴(yán)格的清洗：先用20倍柱體積的水，再用相同體積的0.05mol/L硫酸，最后用流動(dòng)相溶劑、酸洗常能洗下有機(jī)溶劑所不能洗下的剩余雜質(zhì)；在低pH值下做長(zhǎng)期清洗是不適宜的，但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min，一般對(duì)鍵合相沒有損害。注意，強(qiáng)堿不能用來清洗任何微粒硅膠柱(不論是鍵合相還是非鍵合相)，因?yàn)楣枘z骨架會(huì)溶解。對(duì)于嚴(yán)重污染的反相柱只能采用再生的方法。 2柱頭孔隙的處理 拆下不銹鋼燒結(jié)過濾器后，檢查柱床，?？梢娭^塌陷，此時(shí)先剔掉無規(guī)則床層和帶色填料，使柱床呈白色并完全水平，再用甲醇作糊狀填料

36、勻漿液，將填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液，重復(fù)數(shù)次，直到水平，完成了柱的再生。此時(shí)，如果柱頭孔隙深度小于1cm，可以采用下述局部重裝的辦法，否則，柱應(yīng)當(dāng)完全重裝或更換。 柱入口局部重裝時(shí)采用的填料可以和原填料一樣，也可用玻璃珠。粒徑大于20um的可用敲打充填法干裝。如果粒徑小于20um則要用合適的溶劑配成勻漿，勻漿逐次加入，每次加入前都要使上一次加入的全部沉降。把孔隙填滿后，用刮刀將填料刮平，更換柱入口接頭，把柱重新接到液相儀器上，慢慢地增加流動(dòng)相流速和系統(tǒng)壓力，直到操作上限為止。讓相當(dāng)于1020倍柱體積的流動(dòng)相通過柱子，然后逐漸降低流速，并使壓力降為零，再把柱子卸下來，并卸下入

37、口接頭，觀察柱的入口。此時(shí)孔隙應(yīng)當(dāng)減小，但是由于新加入的填料在系統(tǒng)的操作壓力下壓入柱頭，孔隙不可能一次就被全部充滿。重復(fù)上述重裝過程，直到柱上加不進(jìn)更多的填料為止。一旦柱子填充完畢，可加進(jìn)混合樣品，測(cè)定柱子的性能是否已經(jīng)改善。 色譜柱的再生高效液相柱是消耗品，會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加，出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰，柱效下降。需要定期進(jìn)行徹底清洗和再生。1.反相柱 分別用甲醇：水90：10、純甲醇、二氯甲烷等溶劑著流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積。然后再以相反的次序沖洗。2.正相柱分別用正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流

38、經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積（異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高）。注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷。所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。3.離子交換柱長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降，。用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。用戶還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的。 注意：如果柱子裝反了，可以調(diào)回來，但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷。在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能成銨根離子的

39、形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。 如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。 色譜柱的平衡每天用足夠的時(shí)間來平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問題方面獲得最大的補(bǔ)償，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)！- 一定得做！ 新的色譜柱在使用之前應(yīng)該在您自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來測(cè)定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。 平衡色譜柱 反相色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)

40、輸過程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用1020倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水過渡。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡平衡過程中，將流速緩慢地提高用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來平衡） 1使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度） 2大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是27.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍 3避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化 4流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過

41、濾處理 5如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中 6壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào) 反相系統(tǒng)換正相系統(tǒng)注意事項(xiàng) 在液相色譜儀使用過程中，我們經(jīng)常遇到液相色譜儀用戶正反相色譜系統(tǒng)互相現(xiàn)象，但由于使用操作不當(dāng)，常常不注意間損壞了色譜柱，同時(shí)加重了液相色譜系統(tǒng)的污染，導(dǎo)致分析工作出現(xiàn)麻煩，現(xiàn)在將置換工作的基本流程列出，供用戶參考：1. 首先用甲醇(或已睛)將色譜系統(tǒng)包括反相柱平衡好(保證20分鐘內(nèi)基線平直,無峰出現(xiàn))；2. 卸掉反相柱，封好保存；3. 將進(jìn)樣閥與檢測(cè)器短路,用異丙醇沖洗色譜系統(tǒng)10分鐘(流速1ml/min)，在這期間空撥進(jìn)樣閥三次；4. 換正己

42、烷(硅膠柱)沖洗系統(tǒng)20分鐘(流速2ml/min)， 此期間空撥進(jìn)樣閥三次；5. 安上硅膠色譜柱， 流速調(diào)到1ml/min,用正己烷沖洗系統(tǒng)， ,直到系統(tǒng)平衡；6. 進(jìn)三針標(biāo)準(zhǔn)品檢驗(yàn)面積 保留時(shí)間是否重復(fù),若不重復(fù),繼續(xù)沖洗直到重復(fù) 正相系統(tǒng)換反相系統(tǒng)注意事項(xiàng)在液相色譜儀使用過程中，我們經(jīng)常遇到液相色譜儀用戶正反相色譜系統(tǒng)互相現(xiàn)象，但由于使用操作不當(dāng)，常常不注意間損壞了色譜柱，同時(shí)加重了液相色譜系統(tǒng)的污染，導(dǎo)致分析工作出現(xiàn)麻煩，現(xiàn)在將置換工作的基本流程列出，供用戶參考：1. 首先用正己烷(硅膠柱)將色譜系統(tǒng)包括正相柱平衡好(保證20分鐘內(nèi)基線平直,無峰出現(xiàn))；2. 卸掉硅膠柱，封好保存；3.

43、將進(jìn)樣閥與檢測(cè)器短路，用異丙醇沖洗色譜系統(tǒng)10分鐘(流速1ml/min).在這期間空撥進(jìn)樣閥三次；4. 換甲醇(或已睛)沖洗系統(tǒng)20分鐘(流速2ml/min) ，此期間空撥進(jìn)樣閥三次；5. 安上反相色譜柱， 流速調(diào)到1ml/min,用甲醇(或已睛)沖洗系統(tǒng)，直到系統(tǒng)平衡；6. 進(jìn)三針標(biāo)準(zhǔn)品,檢驗(yàn)面積 保留時(shí)間是否重復(fù),若不重復(fù),繼續(xù)沖洗直到重復(fù)。四、高效液相色譜柱常見故障總結(jié)現(xiàn) 象判 斷排除方法1 柱壓高于正常值 (1)柱端過濾器堵塞 (2)長(zhǎng)期使用柱端固定相板結(jié) (3)分析生化、染料等易污染固定相的樣品 (1)拆下過濾器用硝酸超聲清洗 (2)挖掉板結(jié)部分修補(bǔ)柱端 (3)采用保護(hù)柱2 柱壓低于

44、正常值 某連接處泄漏 高壓查找泄漏處，連接處更換密封刃環(huán) 3 塔板數(shù)下降 (1)色譜柱老化 (2)柱被污染 (1)柱再生或換柱 (2)清洗故障現(xiàn)象可能的原因排除方法進(jìn)樣后不出峰(1) 檢測(cè)器選擇不當(dāng)，樣品無吸收 (2)試樣溶液濃度太低，而檢測(cè)靈敏度不高(3)檢測(cè)器到色譜工作站之間的信號(hào)線連接處不好或斷開 (4)進(jìn)樣用注射器堵塞或泄漏，使樣品溶液不 能進(jìn)入進(jìn)樣閥(1) 正確選擇檢測(cè)器，如樣品無吸收就不應(yīng)選擇UV檢測(cè)器，而應(yīng)選其他檢測(cè)器 (2)適當(dāng)提高樣品濃度和進(jìn)樣量，提高檢測(cè)靈敏度(3)修復(fù)接好信號(hào)線并將靈敏度調(diào)到適當(dāng)?shù)奈恢?(4)修理或更換注射器進(jìn)樣不出峰或者峰高不正常 (1)注射器泄漏 (2

45、)閥轉(zhuǎn)子上針頭密封墊磨損導(dǎo)致泄漏 (3)選用的注射器針頭與進(jìn)樣閥不匹配 (4)定子與轉(zhuǎn)子接觸密封面損壞引起內(nèi)通道斷 路 (5)定量管堵塞 (1)更換新注射器 (2)更換新的零件 (3)更換合適的針管 (4)損壞不嚴(yán)重的轉(zhuǎn)子重新研磨，使之恢復(fù)性能，否則更換新的轉(zhuǎn)子 (5)設(shè)法疏通，或更換定量環(huán)出現(xiàn)未知雜峰 (1)轉(zhuǎn)子針頭密封墊及進(jìn)樣針導(dǎo)管污染 (2)流動(dòng)相中有氣泡流入檢測(cè)器 (1)清洗進(jìn)樣閥的樣品通路和進(jìn)樣針 (2)排出氣泡峰形拖尾 (1)定量管與進(jìn)樣閥連接處出現(xiàn)死體積 (2)進(jìn)樣器內(nèi)有污染或不干凈 (3)色譜柱選擇不當(dāng)，試樣與固定相間有作用、(4)進(jìn)樣技術(shù)有誤 (5)樣品在流動(dòng)相中溶解度小 (

46、6)進(jìn)樣量太大 (7)色譜柱與閥、檢測(cè)器連接處出現(xiàn)死體積 (1)更換新管消除死體積 (2)可先用2：l：4的硫酸硝酸水的混合 溶液清洗，接著用蒸餾水洗凈然后用丙 酮或乙醚等溶劑清洗烘干 (3)更換色譜拄 (4)提高進(jìn)樣技術(shù) (5)選用對(duì)試佯溶解能力強(qiáng)的溶劑作為流動(dòng)相 (6)減少進(jìn)樣量 (7)重新裝柱或更換連接管路分離度變差 (1)柱端固定相板結(jié) (2)柱端床層塌陷 (3)柱子壽命已到 (4)進(jìn)樣量過大 (5)樣品濃度過大 (6)試樣溶解不完全 (7)色譜柱污染柱效下降 (1)挖掉修補(bǔ)，重填固定相 (2)修補(bǔ)柱稿 (3)更換新柱 (4)減少進(jìn)樣量 (5)減小配樣濃度 (6)換溶劑使其完全溶解 (

47、7更換柱子或用極性溶劑沖洗 保留時(shí)間不重復(fù) (1)更換流動(dòng)相對(duì)舊流動(dòng)相末完全被替換 (2)正相柱中流動(dòng)相脫水不完全 (3)柱溫變化 (4)緩沖液容量不夠 (5)柱內(nèi)條件變化 (6)柱塌陷或形成短路通道 (1)延長(zhǎng)平衡時(shí)間 (2)重新脫水 (3)用柱溫箱恒溫 (4)用較濃的緩沖液 (s)穩(wěn)定進(jìn)樣條件，調(diào)節(jié)流動(dòng)相 (6)更換色譜柱出現(xiàn)無規(guī)律色譜峰 長(zhǎng)期進(jìn)樣滯留在柱中的組分被洗脫出來 用強(qiáng)極性溶劑沖洗再用流動(dòng)相平衡平頂峰 (1)色譜柱超載 (2)檢測(cè)池及其透鏡、池窗等光學(xué)附件污染 (1)減少進(jìn)樣量 (2)清洗檢測(cè)池以及透鏡、池窗等光學(xué)附件峰分裂(一個(gè)組分有兩個(gè)峰)(1)樣品中可能有異構(gòu)體 (2)樣品不穩(wěn)定有部分分解 (3)進(jìn)樣量大，柱超載(1)按異構(gòu)體特征選擇條件，使兩(2)采取措施，防止試樣組分的分解(3)減小進(jìn)樣量色譜峰擺動(dòng)檢測(cè)池內(nèi)有氣泡排除檢測(cè)池內(nèi)的氣泡基線有尖峰不規(guī)則地漂移(1)色譜柱污染變臟(2)檢測(cè)池內(nèi)有氣泡通過(3)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)其他大功率電器的影響。(1)沖洗柱子、重新裝柱或更換新柱子(2)溶劑脫氣并徹底沖洗系統(tǒng)(3)消除噪音