梅毒的實驗室診斷課件

1、梅毒的實驗室診斷梅毒的實驗室診斷梅毒的實驗室診斷梅毒是一種幾乎可以侵犯全身所有器官，而產(chǎn)生多種癥狀和體征的慢性傳染性疾病。十六世紀初由歐洲傳入亞洲，后蔓延我國。梅毒又稱為楊梅瘡、廣東瘡、疳瘡、下疳、霉瘡等。梅毒的實驗室診斷本草綱目：“楊梅瘡，古方不載，亦有無病者；近時起于嶺南，傳及四方?！钡谝徊空撌雒范咀钔晟频膶Ｖ旱谝徊空撌雒范咀钔晟频膶Ｖ好汞徝劁浢汞徝劁浢鞔鞔?陳同成陳同成我國解放后，基本上消滅了此病，但近年來又我國解放后，基本上消滅了此病，但近年來又有新的病例發(fā)現(xiàn)有新的病例發(fā)現(xiàn)2009年廣東省報告梅毒39112例，報告數(shù)占全國報告總數(shù)的11.95%，位居全國第二位，較2008年增長1

2、0.44%。梅毒的實驗室診斷n病原體為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(Treponema pallidum subspecies pallidum) 蒼白亞種 梅毒 蒼白螺旋體 地方亞種 地方性梅毒 極細亞種 雅司病密螺旋體屬 品他螺旋體 品他病梅毒的實驗室診斷梅毒螺旋體的生物學特性1、直徑、直徑 0.100.15m，有，有814個致密而規(guī)則的個致密而規(guī)則的 小螺旋，兩端尖直。小螺旋，兩端尖直。2、原生質(zhì)圓柱體上緊繞著、原生質(zhì)圓柱體上緊繞著34根周漿鞭毛，故運根周漿鞭毛，故運 動活躍，運動方式多樣。動活躍，運動方式多樣。3、G-，但不易著色。，但不易著色。Fontana鍍銀染

3、色呈棕褐色。鍍銀染色呈棕褐色。4、在無活細胞的人工培養(yǎng)基中難培養(yǎng)，生長慢。、在無活細胞的人工培養(yǎng)基中難培養(yǎng)，生長慢。梅毒的實驗室診斷5、抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感；對青霉、抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感；對青霉 素、四環(huán)素、紅霉素等抗生素敏感。素、四環(huán)素、紅霉素等抗生素敏感。梅毒螺旋體梅毒的實驗室診斷梅毒的傳播途徑n1、直接性接觸、直接性接觸n2、血液傳播：輸血、血液傳播：輸血n3、垂直傳播：胎盤傳播。、垂直傳播：胎盤傳播。n4、間接傳播：日常用品、接吻、哺乳、間接傳播：日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑。醫(yī)療器械等途徑。梅毒的實驗室診斷梅毒的分期梅毒的實驗室診斷梅毒螺旋體梅毒螺旋體

4、皮膚或粘膜局部繁殖皮膚或粘膜局部繁殖淋巴管淋巴管附近淋巴結(jié)附近淋巴結(jié)局部無任何癥狀局部無任何癥狀14144040天天( (潛伏期平均潛伏期平均3 3周周) )入侵部位炎癥反應入侵部位炎癥反應初瘡（硬下疳）一期梅毒初瘡（硬下疳）一期梅毒不治療不治療48周周自然消失自然消失一期潛伏梅毒一期潛伏梅毒期（初期）梅毒：期（初期）梅毒：梅毒的實驗室診斷期（初期）梅毒：期（初期）梅毒：期梅毒（包皮硬下疳）期梅毒 （巨大下疳）部位：絕大部份在外生殖器。部位：絕大部份在外生殖器。形態(tài)：園形或橢園形，直徑約形態(tài)：園形或橢園形，直徑約1 12cm2cm，邊界清楚，周圍稍隆起，邊界清楚，周圍稍隆起，內(nèi)含大量梅毒螺旋體

5、，傳染性極強。內(nèi)含大量梅毒螺旋體，傳染性極強。 特點特點: : 常單個；觸診有軟骨樣感；無痛可自愈。常單個；觸診有軟骨樣感；無痛可自愈。梅毒的實驗室診斷梅毒螺旋體梅毒螺旋體血液血液人體免疫作用人體免疫作用大部分螺旋體被殺死大部分螺旋體被殺死其余的螺旋體繁殖其余的螺旋體繁殖低熱、淺表淋巴結(jié)腫大低熱、淺表淋巴結(jié)腫大皮膚粘膜疹皮膚粘膜疹骨骼、眼晴、神經(jīng)系統(tǒng)等的炎癥癥狀骨骼、眼晴、神經(jīng)系統(tǒng)等的炎癥癥狀不治療不治療癥狀可自然消失，呈現(xiàn)潛伏狀態(tài)癥狀可自然消失，呈現(xiàn)潛伏狀態(tài)二期潛伏梅毒二期潛伏梅毒二期梅毒二期梅毒期（中期）梅毒期（中期）梅毒梅毒的實驗室診斷期（中期）梅毒期（中期）梅毒n發(fā)生于硬下疳出現(xiàn)后發(fā)生

6、于硬下疳出現(xiàn)后28周。周。n皮疹泛發(fā)對稱，一般無自覺癥狀皮疹泛發(fā)對稱，一般無自覺癥狀n梅毒疹和淋巴結(jié)中，存在大量梅毒螺旋體。梅毒疹和淋巴結(jié)中，存在大量梅毒螺旋體。期梅毒（玫瑰疹）期梅毒（梅毒疹）梅毒的實驗室診斷二期復發(fā)二期復發(fā)梅毒可反梅毒可反復出現(xiàn)復出現(xiàn)2 2年后年后晚期晚期梅毒梅毒侵犯侵犯皮膚粘膜皮膚粘膜骨骼骨骼心血管系統(tǒng)心血管系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)期（晚期）梅毒：期（晚期）梅毒：梅毒的實驗室診斷期（晚期）梅毒：期（晚期）梅毒：n 基本損害為慢性肉芽腫基本損害為慢性肉芽腫n 病損內(nèi)螺旋體少但破壞性大病損內(nèi)螺旋體少但破壞性大期梅毒（樹膠腫）期梅毒（樹膠腫） 期梅毒（潰瘍壞死）期梅毒（潰瘍壞死）梅

7、毒的實驗室診斷梅毒的實驗室檢測方法n顯微鏡檢測法：顯微鏡檢測法： （1） 暗視野顯微鏡檢查 （2） 鍍銀染色檢查n血清學檢測法：血清學檢測法： 非梅毒螺旋體抗原血清試驗 （1）VDRL(性病研究實驗室試驗性病研究實驗室試驗)：需滅活：需滅活 （2）USR（不加熱血清反應素試驗）（不加熱血清反應素試驗） （3）RPR(加速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗加速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗) （4）TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗甲苯胺紅不加熱血清試驗) 梅毒螺旋體抗原血清試驗 （1）FTA-ABS （2）TPPA/ TPHA （3）TP-ELISA （4）發(fā)光法發(fā)光法 （5）膠體金法膠體金法 梅毒的實驗室診斷暗

8、視野顯微鏡檢查n標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液皮損的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液n方法：暗視野顯微鏡下查找梅毒螺旋體。方法：暗視野顯微鏡下查找梅毒螺旋體。n結(jié)果：典型的梅毒螺旋體呈白色發(fā)光結(jié)果：典型的梅毒螺旋體呈白色發(fā)光, 其螺旋其螺旋較密而均勻。運動方式：較密而均勻。運動方式： 伸縮其螺旋間距離伸縮其螺旋間距離而移動（主要方式）而移動（主要方式）蛇行式蛇行式旋轉(zhuǎn)式旋轉(zhuǎn)式n評價：評價：. 簡單、可靠。簡單、可靠。. 早期：硬下疳（梅毒血清學試驗仍陰性）。早期：硬下疳（梅毒血清學試驗仍陰性）。. 陰性不能排出患梅毒的可能性陰性不

9、能排出患梅毒的可能性 梅毒的實驗室診斷暗視野顯微鏡下的梅毒螺旋體螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方 法，法，WHO指定其為性病實驗室必備項目之一指定其為性病實驗室必備項目之一梅毒的實驗室診斷鍍銀染色檢查n基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體n結(jié)果：棕褐色的梅毒螺旋體梅毒的實驗室診斷血清學檢測法梅毒螺旋體侵入人體后產(chǎn)生：梅毒螺旋體侵入人體后產(chǎn)生： 抗心磷脂抗體：即非特異性抗體、反應素?？剐牧字贵w：即非特異性抗體、反應素。兩種抗體兩種抗體 抗梅毒螺旋體抗體：抗梅毒螺旋體抗體：梅毒的實驗室診斷非梅毒螺旋體抗原血清試驗n

10、TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗甲苯胺紅不加熱血清試驗）n基本原理：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入甲苯胺紅，與待檢血清中的反應素結(jié)合，形成肉眼可見的紅色絮狀物。梅毒的實驗室診斷n定性試驗 (1)加樣：吸取50微升血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈中。 (2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原。 (3)反應：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(1005)轉(zhuǎn)/分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果梅毒的實驗室診斷n定量試驗 （1）稀釋液準備：在圈內(nèi)加入50微升生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。 （2）加樣：吸取50微升血清與各圈中生理鹽水做系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。 （

11、3）同定性試驗中的(2)、(3)。 梅毒的實驗室診斷n凝集反應強度分級：3+4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的紅色絮狀物，液體清亮。2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到大的紅色絮狀物，液體較清亮。1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的紅色絮狀物，液體渾濁。：圓圈內(nèi)僅見紅色集中于中央一點或均勻分散。梅毒的實驗室診斷 孔孔 號號 1 2 3 4 5 6 7 81 2 3 4 5 6 7 8 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 原倍原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 陽性陽性K K 陰性陰性K K生理鹽水生理鹽水(ul) (ul) - - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -50.0

12、 50.0 50.0 50.0 50.0 - -樣樣 品品(ul) (ul) 50.050.0 50.050.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0棄棄50.0 -50.0 - - -陽性血清陽性血清(ul) - - - - - - (ul) - - - - - - 50.050.0 - -陰性血清陰性血清(ul) - - - - - - - (ul) - - - - - - - 50.050.0抗原懸液抗原懸液(ul) (ul) 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.716.7 16.7 16.7 16.7 1

13、6.7 16.7 16.7 16.7 操作操作步驟步驟梅毒的實驗室診斷VDRLVDRLUSRUSRRPRRPRTRUSTTRUST抗原成分抗原成分心磷脂、卵磷心磷脂、卵磷脂、脂、 膽固醇膽固醇同前同前+EDTA+EDTA+氯氯化膽堿化膽堿同前同前+EDTA+EDTA+氯氯化膽堿化膽堿+ +活性炭活性炭同前同前+EDTA+EDTA+氯化氯化膽堿膽堿+ +甲苯胺紅甲苯胺紅抗原穩(wěn)定性抗原穩(wěn)定性不穩(wěn)定不穩(wěn)定,1,1天天穩(wěn)定穩(wěn)定4 4 8 8 保存保存1212個月個月穩(wěn)定穩(wěn)定4 4 8 8 保存保存1212個月個月穩(wěn)定穩(wěn)定4 4 8 8 保存保存1212個月個月血清試驗前處理血清試驗前處理需滅活需滅活不

14、需滅活不需滅活不需滅活不需滅活不需滅活不需滅活反應板及結(jié)果反應板及結(jié)果判斷判斷玻片，肉眼或玻片，肉眼或顯微鏡顯微鏡玻片，肉眼或玻片，肉眼或顯微鏡顯微鏡紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼注釋注釋唯一用于檢查腦唯一用于檢查腦脊液的試驗，診脊液的試驗，診斷神經(jīng)梅毒斷神經(jīng)梅毒結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷一期敏感性一期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）74%-87%74%-87%77%-88%77%-88%77%-99%77%-99%77%-99%77%-99%二期敏感性二期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）100%100%100%100%100%100%100%100%晚期敏

15、感性晚期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）98%98%99%99%98%98%99%99%四種非特異性試驗方法比較四種非特異性試驗方法比較梅毒的實驗室診斷TPPAn基本原理：用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒，其致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集。梅毒的實驗室診斷操作步驟n 1. 試劑準備：試驗前將試劑和待檢標本恢復到室溫。 2. 加稀釋液：每份樣本做4孔，加標本稀釋液加至微量反應板孔內(nèi)，第1孔100微升，第24孔各25微升。 3. 樣本稀釋：取血清25微升加至第1孔，混勻后取25微升至第2孔，混勻后取25微升至第3孔，混勻后取25微升至第4孔，混勻后棄去

16、25微升。 4. 加對照液：第3孔加未致敏顆粒25微升，第4孔加致敏顆粒25微升。 5. 混合：將反應板置振蕩器振蕩30秒。 6.反應：置有蓋濕盒，孵育2 h，或放4冰箱過夜觀察結(jié)果。梅毒的實驗室診斷結(jié)果判斷n 1.觀察加未致敏顆粒的第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗。n 2. 觀察凝集反應強度：分級如下。 4+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊。 3+： 顆粒光滑覆蓋大部分孔底。 2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)。 1+： 顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)。 ：顆粒沉集孔底，中央形成一小點。 一：顆粒緊密沉積孔底中央。梅毒的實驗室診斷梅毒的實驗室診斷梅毒血清試驗假陽性因素：梅毒血清試驗假陽性因素：技術(shù)性：技術(shù)性：標本的污染標本的污染溶血溶血操作失誤操作失誤生物學假陽性：生物學假陽性：某些疾?。航Y(jié)核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺某些疾?。航Y(jié)核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性心臟病、風疹、系統(tǒng)性炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性心臟病、風疹、系統(tǒng)性硬化癥等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中假陽硬化癥等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中假陽性。性。生理機能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學假陽性。生理機能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學假陽性。梅毒的實驗室診斷nTRUST TPPA 臨床意義 初期梅毒早期或排出 + + 現(xiàn)癥梅毒 + 生物學假陽性 +