鐵皮石斛論文

1、大理學(xué)院2014屆生物技術(shù)專業(yè)本科學(xué)生畢業(yè)論文鐵皮石斛組培幼苗幾種生長(zhǎng)因素的研究Study of Some Factors on the Growth of Tissue Culture Seedlings of Dendrobium Candidum學(xué) 院 農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院 專 業(yè) 生物技術(shù) 姓 名 方瑞花 年級(jí)學(xué)號(hào) 2010161141 指導(dǎo)教師 施繼惠 職 稱 講師 起止日期 2013.12月2014.4月 制表日期：2014 年 5 月 5 日目 錄一、中文題目、摘要、關(guān)鍵詞.1二、英文題目、摘要、關(guān)鍵詞.2三、前言.3四、正文.41、材料.42、實(shí)驗(yàn)方法.43、測(cè)定指標(biāo).44、實(shí)驗(yàn)

2、結(jié)果.55、討論與分析.86、結(jié)論.9五、參考文獻(xiàn).10六、總結(jié)與體會(huì).12七、謝辭.13鐵皮石斛組培幼苗幾種生長(zhǎng)因素的研究方瑞花（大理學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院2014屆生物技術(shù)班，云南大理 671003）指導(dǎo)教師：施繼惠 講師摘要：以鐵皮石斛組培幼苗為材料，探究不同濃度的香蕉和土豆添加物及其不同濃度的（土豆、香蕉）混合添加物，不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基（MS和1/2MS），3種不同碳源對(duì)組培幼苗壯苗、生根的影響。結(jié)果表明：(1)添加物，20%香蕉>15%香蕉、土豆混合物>20%土豆；(2)1/2MS比MS培養(yǎng)基更適合組培幼苗的生長(zhǎng)；(3)相同濃度條件下不同碳源效果為：白砂糖>蔗糖>

3、葡萄糖。因此，鐵皮石斛幼苗最佳的壯苗培養(yǎng)基為：12MS+白砂糖20g/L+活性炭2g/L +20%香蕉+9gL瓊脂，pH5.8-6.0關(guān)鍵詞：鐵皮石斛幼苗；添加物；碳源Study of Some Factors on the Growth of Tissue Culture Seedlings of Dendrobium CandidumFang Rui hua（Department of Agriculture and Biology , Dali University ,Yunnan,Dali 671003, China）Instructor：Shi Ji huiAbstract：In t

4、his article we study the effect of banana、potato and the mixture on cultivating strong seedlings and rooting of Dendrobiurn candidum. The effects of some factors by different medium and carbon source on the growth of tissue culture seedlings. The results showed:（1）The effect with additive on cultiva

5、ting strong seedlings and rooting of the concentration was 20% banana > 15% mixture with banana and potato >20% potato.（2）The medium of 1/2MS was the most suitable than the medium of MS on cultivating strong seedlings and rooting.（3）The order of Influence with strong seedlings and rooting when

6、 the same concentration of carbon source was : white granulated sugar> cane sugar > glucose. The results showed : The most suitable medium for seedlings growth and rooting was 1/2MS+ white granulated sugar 20 g/L+ activated carbon 2g/L+ banana 200g/L+9g/L agar , pH5.8-6.0Key words：Dendrobium c

7、andidum ；additive ；carbon source前言鐵皮石斛(Dendrobium candidum Wal1ex Lindl )屬蘭科石斛屬多年生附生草本別名鐵皮蘭，因其莖節(jié)處呈黑褐色，又名黑節(jié)草1。在我國(guó)主要分布于廣西、云南、貴州等地，生長(zhǎng)在海拔達(dá)1600m左右的山坡半陰濕的巖石上2。鐵皮石斛是2005年版中國(guó)藥典收錄的3種石斛原植物之一，是石斛藥材中最珍貴品種，具有滋陰清熱、益胃生津、止咳潤(rùn)肺的功效3。近年來(lái)研究表明鐵皮石斛中含有豐富的多糖類成分，這種多糖成分具有增強(qiáng)人體免疫力、防癌抗癌、恢復(fù)嗓音等功效，是極其珍貴的中藥材4。由于近年來(lái)過(guò)度采挖、原始森林生態(tài)環(huán)境破壞等原因

8、，使得野生鐵皮石解資源面臨枯竭，供應(yīng)緊張；加上鐵皮石解繁殖系數(shù)低，遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)上的需要5。為保護(hù)這一珍貴中藥品種，許多學(xué)者對(duì)鐵皮石解種子和莖尖培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了研究，但在試管苗階段增值系數(shù)低、試管苗莖細(xì)小、細(xì)弱，移栽成活率不高，影響了鐵皮石解試管苗快繁和大規(guī)模的工廠生產(chǎn)6-8。本實(shí)驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，以鐵皮石解組培幼苗為材料，系統(tǒng)地研究2種添加物及其混合添加物、2種培養(yǎng)基、3種碳源對(duì)試管苗壯苗、生根的影響，以提高鐵皮石斛在組織培養(yǎng)中的增殖率和生根率，為工廠化育苗提供技術(shù)支撐9。1. 材料由學(xué)院組培室提供的，無(wú)菌、生長(zhǎng)良好，株高0.51.0cm，具有1-2片真葉的無(wú)根鐵皮石斛組培幼苗，用于幼苗壯

9、苗和誘導(dǎo)生根等生長(zhǎng)因素的研究。2.試驗(yàn)方法2.1 添加物的篩選設(shè)9個(gè)處理，即以香蕉、土豆及其混合物各15%、20%、25%為添加物，添加至相同激素配比的1/2MS（蔗糖5%+活性炭2g/L培養(yǎng)基，瓊脂9g/L，pH5.8-6.0）。以不加添加物（K1）的處理為空白對(duì)照，每個(gè)處理5瓶，每瓶接種10顆組培幼苗，3個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。2.2 MS和1/2MS培養(yǎng)基的篩選設(shè)6個(gè)處理，即以香蕉、土豆各20%為添加物，分別添加至相同激素配比的MS和1/2MS培養(yǎng)基（蔗糖5%+活性炭2g/L培養(yǎng)基，瓊脂9g/L，pH5.8-6.0）。以不添加任何添加物的MS和1/2MS培養(yǎng)基為空白對(duì)照，每個(gè)處理5瓶，每瓶接種1

10、0顆組培幼苗，3個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。2.3 不同碳源的篩選設(shè)3個(gè)處理，即以濃度均為20g/L的蔗糖、白砂糖、葡萄糖為碳源，添加至相同激素配比的1/2MS+活性炭2g/L培養(yǎng)基，瓊脂9g/L，pH5.8-6.0。每種接種5瓶，每瓶接種10顆組培幼苗，3個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。3.測(cè)定指標(biāo)及方法3.1 苗數(shù)取出全部5瓶材料，用鑷子將幼苗全部取出，放置培養(yǎng)皿中待用。數(shù)出肉眼可見(jiàn)的幼苗數(shù)，記錄數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)各參數(shù)的總和如表1。3.2 株高取出全部5瓶材料，用鑷子將幼苗全部取出，放置培養(yǎng)皿中待用。測(cè)量50株石斛苗的株高10，記錄數(shù)據(jù)，即50個(gè)材料組，計(jì)算各參數(shù)平均值如表1。3.3 根數(shù)及根長(zhǎng)取出全部5瓶材料，用鑷子將幼

11、苗全部取出，即50個(gè)材料組，放置培養(yǎng)皿中待用。數(shù)出肉眼可見(jiàn)的根數(shù)，并用尺子測(cè)量其根長(zhǎng)10，記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算各參數(shù)平均值如表14.實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1 不同添加物對(duì)幼苗的影響表1添加物對(duì)幼苗的影響編號(hào)添加物及濃度株高/cm根長(zhǎng)/cm平均根數(shù)數(shù)/條葉寬/cm總苗數(shù)/顆生長(zhǎng)狀況X2X3X4T2T3T4H2H3H4香蕉15%香蕉20%香蕉25%土豆15%土豆20%土豆25%混合物15%混合物20%混合物25%1.803.561.641.703.111.603.431.941.101.751.871.501.431.721.062.511.691.424.396.715.013.554.213.485.795.

12、274.600.350.450.300.300.400.400.450.400.35105179160133149105160137105均勻整齊，健壯均勻整齊，根粗壯均勻整齊，健壯不整齊，弱均勻整齊，弱不整齊，弱均勻整齊，根粗壯均勻整齊，健壯均勻整齊，健壯注：混合物為香蕉和土豆的各半均勻混合添加物?！爸旮摺钡臏y(cè)量標(biāo)準(zhǔn)足從植株基部至新葉葉鞘環(huán)痕處?！叭~寬”的測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)是選擇各株中最寬新葉測(cè)量其值，最長(zhǎng)葉通常即為最寬葉?！案鶖?shù)”的測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)是植物中所有根總數(shù)11?！案L(zhǎng)”測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)是植株所有根的平均長(zhǎng)度。 圖1 20%香蕉（左）15%混合物（中）20%土豆 (右)由表1和圖1知，從株高、苗數(shù)、根數(shù)、根

13、長(zhǎng)、葉寬等指標(biāo)綜合來(lái)看，在添加的12個(gè)處理中：（1）以添加20%香蕉效果最好，其根長(zhǎng)達(dá)1.87cm，株高3.56cm，根誘導(dǎo)率12達(dá)到6.71，總苗數(shù)179顆，幼苗增殖效果也最好，可能是由于根的分化形成，加快了植株?duì)I養(yǎng)的吸收，促進(jìn)了莖葉的生長(zhǎng)，達(dá)到了壯苗生根的目的（2）其次是15%（香蕉、土豆）混合添加物效果較好，根長(zhǎng)2.51cm，株高3.43cm，平均根數(shù)5.79，總苗數(shù)160條（3）最后是20%土豆的生長(zhǎng)效果，根長(zhǎng)1.72cm，株高3.11cm。平均根數(shù)4.22，總苗數(shù)149條。綜上所述：添加物，20%香蕉>15%（香蕉+土豆）>20%土豆，表現(xiàn)在根粗壯，均勻整齊，葉色濃綠。這

14、表明，香蕉有利于誘導(dǎo)鐵皮石斛生根并且在一定程度上起到壯苗作用, 而且香蕉、土豆混合添加物效果均比土豆添加物更好。4.2 MS和1/2MS培養(yǎng)基對(duì)幼苗影響表2 MS和1/2MS培養(yǎng)基對(duì)幼苗的影響編號(hào)添加物及濃度培養(yǎng)基株高/cm根長(zhǎng)/cm平均根數(shù)總苗數(shù)/顆生長(zhǎng)狀況X3X3-1T3T3-1K1K2香蕉20%香蕉20%土豆20%土豆20%-1/2MSMS1/2MSMS1/2MSMS3.562.363.112.101.541.331.871.411.721.210.860.596.713.904.212.582.502.001791101599710484均勻整齊，根粗壯均勻整齊，根細(xì)均勻整齊，根細(xì)不整

15、齊，弱均勻整齊，根細(xì)不整齊，弱 圖2 MS+20%香蕉（X3-1）；MS+20%土豆（T3-1）； 圖3 1/2MS培養(yǎng)基（K1）；MS培養(yǎng)基(K2)由表2可知：K1>K2，即幼苗在12MS培養(yǎng)基上，普遍長(zhǎng)勢(shì)均勻，株高1.5-2.5cm,根長(zhǎng)0.86-1.87cm,平均根數(shù)2.50-6.71條；在MS培養(yǎng)基上，幼苗生長(zhǎng)一般不整齊，苗弱，株高1.3-2.3cm，根長(zhǎng)0.59-1.41cm,平均根數(shù)2.00-3.90cm。由圖1與圖2相比較：長(zhǎng)勢(shì)、株高、整齊度上均為：X3>X3-1；T3>T3-1；即加添加物的1/2MS培養(yǎng)基均比加添加物的MS培養(yǎng)基長(zhǎng)勢(shì)更好。由圖2與圖3比較：X

16、3-1、T3-1均比K1、K2長(zhǎng)勢(shì)更好，可知加了添加物的培養(yǎng)基比不加添加物的植株長(zhǎng)勢(shì)更好。由圖3可直觀看出，K1在長(zhǎng)勢(shì)，株高、整齊度均比K2更好。因此，無(wú)論是否添加附加物，1/2MS培養(yǎng)基都比MS培養(yǎng)基更適合鐵皮石斛組培試管苗階段幼苗的生長(zhǎng)。4.3 不同碳源對(duì)幼苗影響表3不同碳源對(duì)幼苗影響編號(hào)碳源培養(yǎng)基株高/cm根長(zhǎng)/cm平均根數(shù)數(shù)/條總苗數(shù)/顆生長(zhǎng)狀況XYM蔗糖白砂糖葡萄糖1/2MS1/2MS1/2MS3.423.753.250.821.100.682.323.171.968810680均勻整齊，根細(xì)均勻整齊，根細(xì)均勻整齊，根細(xì)碳源為鐵皮石斛幼苗的生長(zhǎng)提供必需的能量，不同的碳源對(duì)鐵皮石斛幼苗

17、的生長(zhǎng)有不同的影響。由表3可知，3種碳源的幼苗的長(zhǎng)勢(shì)均為根細(xì)，可能與碳源的添加濃度、激素配比等有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)不做探究。本實(shí)驗(yàn)由表3可知：3種碳源幼苗苗高，2.75cm>2.42cm>2.34cm；根長(zhǎng)，1.10cm>0.82cm>0.68cm；平均根數(shù)，3.17cm>2.32cm>1.96cm；總苗數(shù)，106>88>80。因此從幼苗株高、根長(zhǎng)、平均根數(shù)、總苗數(shù)等指標(biāo)上看均為：白砂糖>蔗糖>葡萄糖，白砂糖為碳源的培養(yǎng)基更適合鐵皮石斛幼苗生長(zhǎng)需要。5.分析與討論5.1 添加物香蕉和土豆都屬于天然添加物，它們的某些成分在培養(yǎng)基中一定程度上充當(dāng)

18、了緩沖劑，能夠調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值，對(duì)植物的生長(zhǎng)起到促進(jìn)或抑制的作用。蔣林和李小軍等研究認(rèn)為附加物中含有各種天然營(yíng)養(yǎng)成分及各種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，對(duì)于石解試管苗的生根壯苗較為有利12-13，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。該研究結(jié)果表明：香蕉、土豆提取物及其混合物對(duì)鐵皮石斛莖葉分化苗均有促根效果。香蕉泥對(duì)幼苗的壯苗與生根的促進(jìn)作用明顯優(yōu)于土豆，這與蔣波發(fā)現(xiàn)香蕉提取物對(duì)鐵皮石斛的生根壯苗的效果明顯優(yōu)于其它的附加物14，結(jié)果相似。實(shí)驗(yàn)以20%香蕉的促進(jìn)作用最突出，其次是15%香蕉、土豆的混合添加物較好，最后是20%土豆的壯苗效果良好。這與李國(guó)樹(shù)15以100g/L的香蕉提取物誘導(dǎo)根效果最佳不同，可能是研究培養(yǎng)

19、基的激素、碳源等營(yíng)養(yǎng)成分的濃度存在差異，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同。5.2 培養(yǎng)基在組織培養(yǎng)中，不同類型培養(yǎng)基所含的化學(xué)成分及其濃度各異，不同植物及植物的不同生長(zhǎng)階段對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的需求亦不相同，因此篩選合適類型的培養(yǎng)基是組織培養(yǎng)的首要任務(wù)。該實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛幼苗在12MS培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較好，與MS培養(yǎng)基更適合鐵皮石斛組培幼苗的生長(zhǎng)。這與吳輝等16研究得到12MS培養(yǎng)基適合金釵石斛試管苗生根的結(jié)果相似。但謝寅峰等17研究得到MS基本培養(yǎng)基添加20%香蕉泥時(shí)霍山石斛生根效果最好。石斛品種不同，所需營(yíng)養(yǎng)成分的濃度存在差異，這可能是導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果不同的原因。5.3 碳源培養(yǎng)基中的碳源是影響幼苗生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素，合適的碳

20、源能使植株健壯，生長(zhǎng)速度加快。該研究結(jié)果表明:相同濃度、相同條件下的幾種不同碳源植株生長(zhǎng)效果為，白砂糖>蔗糖>葡萄糖。因此以白砂糖為碳源的培養(yǎng)基更適合鐵皮石斛幼苗的生長(zhǎng)需要。這可能是白砂糖主要成分為蔗糖被細(xì)胞分解后形成葡萄糖和果糖,可比單純添加葡萄糖提供更均衡的碳源,因而有利于幼苗的生長(zhǎng)。與魏梅娟等18得到50g/L葡萄糖更有利于鐵皮石斛壯苗生長(zhǎng)結(jié)果不同，可能是研究實(shí)驗(yàn)所采用的添加物、激素配比濃度不同導(dǎo)致的差異。6結(jié)論在鐵皮石斛試管苗的培養(yǎng)過(guò)程中，影響其生長(zhǎng)的因素很多。該實(shí)驗(yàn)在其他條件相同的情況下，通過(guò)對(duì)天然添加物、培養(yǎng)基種類、碳源為探究單一因素變化對(duì)石斛試管苗生長(zhǎng)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

21、表明：(1)1/2MS培養(yǎng)基并且在其他條件不變的情況下，以20%香蕉為添加物，對(duì)幼苗的壯苗與生根的促進(jìn)作用最好，其次是15%（土豆、香蕉）混合添加物，最后是20%土豆添加物。(2)1/2MS比MS培養(yǎng)基更適合組培幼苗的生長(zhǎng)（3）相同濃度的蔗糖、葡萄糖、白砂糖相比較白砂糖效果最好。因此，鐵皮石斛幼苗最佳的壯苗培養(yǎng)基為：12MS+白砂糖20g/L+活性炭2g/L +20%香蕉+9gL瓊脂，pH5.8-6.0參考文獻(xiàn)1葉秀妹，劉煒?gòu)O，賴鐘雄.鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究進(jìn)展J.亞熱帶農(nóng)業(yè)研究, 2012,8(1):57-61.2王麗萍，梁淑云.鐵皮石斛原球莖誘導(dǎo)與增殖研究J.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)2010,26(01

22、):265-268.3莫昭展,貝學(xué)軍,韋江萍,等.不同培養(yǎng)條件對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響J. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(22):6835-6836.4楊虹,王順春,王崢濤,等.鐵皮石斛多糖的研究J.中國(guó)藥學(xué)雜志,2004,39(4):254.5陳瑞蕊,林先貴,施亞琴,等.藥用石料及其組培技術(shù)研究概要J.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2002,(5):65-66.6張明,夏鴻西,張玉進(jìn),等.石料組織培養(yǎng)研究進(jìn)展J.中國(guó)中藥雜志,2000,25(6):323-326.7唐桂香，黃福燈，周偉軍，等.鐵皮石解的種胚萌發(fā)及其離體繁殖研究J.中國(guó)中藥雜志,2005,30(20):1583-1586.8朱艷,秦民堅(jiān).鐵

23、皮石解莖段誘導(dǎo)叢生芽的研究J.中國(guó)野生植物資源,2003,22(2):56-57.9周俊輝,鐘雪鋒,蔡丁穩(wěn),等.鐵皮石解的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究J.仲愷農(nóng)業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,18(1):23-26.10蘇江,岑忠用,晰朝,等,2種不同附加物對(duì)鐵皮石斛增殖和生長(zhǎng)的影響研J.河池學(xué)院學(xué)報(bào),2012,32(5):9-12.11陳繼敏,藍(lán)偉泉,陳旭敏,等.不同添加物對(duì)石斛蘭牡苗生根的影響J.北方園藝,2009(3):78-81.12李小軍,劉石泉,潘維陵,等.香蕉提取物對(duì)霍山石料試管苗壯苗的影響J.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2004,25(6):469-472.13蔣林,卓宇,莫昭展,等.流蘇石斛叢生芽增殖和生根的研究J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2012,23(9):2310-2312.14蔣波,楊存亮,黃捷,等.鐵皮石解原球莖生長(zhǎng)分化及生根壯苗研究J.玉林師范學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2005,26(3):66-69.15李國(guó)樹(shù),徐成東,尚正麗,等.五種果蔬提取物對(duì)鐵皮石斛莖葉分化苗促根效果的影響J.北方園藝,2013(06):161-