現(xiàn)代生化技術(shù)練習(xí)題匯總復(fù)習(xí)提綱

1、第一章 生命大分子物質(zhì)的制備習(xí)題1、作為現(xiàn)代生化制備的主要對象的蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子有何特點(diǎn)？（1）成分復(fù)雜：生物材料的組成極其復(fù)雜，常常包含有數(shù)百種乃至幾千種化合物。有的生物大分子在分離過程中還在不斷的代謝，所以生物大分子的分離純化方法差別極大，想找到一種適合各種生物大分子分離制備的標(biāo)準(zhǔn)方法是不可能的。（2）含量甚微：許多生物大分子在生物材料中的含量極微，只有萬分之一、幾十萬分之一，甚至幾百萬分之一。分離純化的步驟繁多，流程又長，有的目的產(chǎn)物要經(jīng)過十幾步、幾十步的操作才能達(dá)到所需純度的要求。（3）易變性易被破壞：許多生物大分子一旦離開了生物體內(nèi)的環(huán)境時(shí)就極易失活，因此分離過程中如何防止其

2、失活，就是生物大分子提取制備最困難之處。過酸、過堿、高溫、劇烈的攪拌、強(qiáng)輻射及本身的自溶等都會使生物大分子變性而失活，所以分離純化時(shí)一定要選用最適宜的環(huán)境和條件。（4）具經(jīng)驗(yàn)性：生物大分子的制備幾乎都是在溶液中進(jìn)行的，溫度、ph值、離子強(qiáng)度等各種參數(shù)對溶液中各種組成的綜合影響，很難準(zhǔn)確估計(jì)和判斷，因而實(shí)驗(yàn)結(jié)果常有很大的經(jīng)驗(yàn)成份，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性較差，個(gè)人的實(shí)驗(yàn)技術(shù)水平和經(jīng)驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果會有較大的影響。（5）均一性的相對性：生物大分子制備物的均一性（即純度）的鑒定，通常只采用一種方法是不夠的，必須同時(shí)采用23種不同的純度鑒定法才能確定。2、生物物質(zhì)制備方案的設(shè)計(jì)基本原則是什么？生物物質(zhì)的制備一般包括初

3、始階段、中間階段和精制階段。在制備方法的選擇上，初始階段宜選擇粗放、分辨率低、快速、有利于縮小樣品體積和減少后工序的方法，主要考慮樣品量和處理速度兩個(gè)指標(biāo)；中間階段選擇的方法應(yīng)在考慮樣品處理量的基礎(chǔ)上適當(dāng)提高分辨率。精制階段宜選擇精確、分辨率高、需樣品少的方法。在安排各種分離純化方法的使用程序時(shí)應(yīng)注意：（1）不適宜連續(xù)使用同一種分離純化方法，應(yīng)該交叉使用，因?yàn)槊恳徊椒蛛x后，性質(zhì)相似的物質(zhì)聚在一塊；（2）使用順序還要考慮到有利于減少工序、提高效率。3、綜合評價(jià)生物物質(zhì)制備步驟方法的好壞應(yīng)從哪些方面進(jìn)行？每一個(gè)制備步驟方法的好壞，除了從分辨本領(lǐng)和重現(xiàn)性二方面考慮外，還注意方法本身的回收率和純化倍數(shù)

4、，特別是制備某些含量很少的物質(zhì)時(shí)，回收率的高低十分重要。因此綜合評價(jià)試驗(yàn)方案的優(yōu)劣應(yīng)從分辨本領(lǐng)、重現(xiàn)性、回收率和純化倍數(shù)等方面進(jìn)行。一個(gè)好的制備方法應(yīng)該使純化倍數(shù)和收得率都同時(shí)有較大提高。但在實(shí)際過程中，隨純化倍數(shù)的提高，收得率是逐漸降低的。因此應(yīng)該根據(jù)材料的來源難易（難收得率優(yōu)先考慮，易純化倍數(shù)優(yōu)先考慮）和制備物的目的等方面來綜合評定方法的優(yōu)劣。4、利用下表中的方案制備長春花strictosidine合成酶，現(xiàn)已測得各步驟總蛋白和總活力結(jié)果，試完成下表。步驟總蛋白（mg）總活力（nkat）比活力（nkat/mg）產(chǎn)率（%）提純倍數(shù)（1）粗抽提液（2）硫酸銨沉淀（3）dead纖維素柱層析（4）

5、羥基磷灰石柱層析（5）sephadex g-75凝膠柱層析（6）等點(diǎn)聚焦65446638.75.90.720.085.25.13.93.82.00.55、提取生物活性物質(zhì)時(shí)，活性保護(hù)性措施有哪些？提取一些具有生理活性的物質(zhì)時(shí)，除了考慮被提取物溶解度外，還應(yīng)考慮被提取物活性的保護(hù)。對于一些生物大分子如蛋白質(zhì)、酶和核酸來說，主要措施有如下幾點(diǎn)：（1）采用緩沖系統(tǒng)；（2）加入保護(hù)劑；（3）抑制水解酶的破壞；（4）其它一些特殊要求的保護(hù)措施。6、蛋白質(zhì)、dna和rna的常用提取方法有哪些？（1）蛋白質(zhì)和酶的提取方法：水溶液提取、有機(jī)溶劑提取（2）dna的提取方法：濃鹽法、陰離子去污劑法、苯酚抽提法、水

6、抽提法（3）rna的提取方法：苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法。7、提取組織中的胰島素時(shí)，為什么采用68乙醇溶液（用草酸調(diào)溶液的ph為2.53.0）為溶劑進(jìn)行提取。胰島素可溶于稀酸、稀堿和稀醇溶液，但在組織中與其共存的糜蛋白酶對胰島素有極高的水解活性，采用68乙醇溶液（用草酸調(diào)溶液的ph為2.53.0）進(jìn)行提取，可以從下面三個(gè)方面抑制了糜蛋白酶的水解活性： 68的乙醇可以使糜蛋白酶暫時(shí)失活； 草酸可以除去激活糜蛋白酶的ca+； 選用ph2.53.0，是糜蛋白酶不宜作用的ph值。第二章 常用生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)習(xí)題1、蛋白質(zhì)的化學(xué)物理檢測方法主要有哪些？各方法的基本原理是什么？紫外吸收法：苯丙氨酸、酪氨酸

7、、色氨酸等氨基酸在280nm波長左右具有紫外吸收，且吸光度與其濃度成線性，根據(jù)此性質(zhì)可用于蛋白質(zhì)的定量測定。凱氏定氮法：該法根據(jù)一般蛋白質(zhì)含氮量為16%的特點(diǎn)，將樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。然后加堿蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸溶液滴定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。雙縮脲法：雙縮脲在堿性溶液中與cu2+結(jié)合生成紫色絡(luò)合物，這一呈色反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中的肽鍵類似雙縮脲結(jié)構(gòu)，故亦能呈雙縮脲反應(yīng)。在一定的濃度范圍內(nèi)，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系。蛋白質(zhì)濃度越高，

8、體系的顏色越深。反應(yīng)產(chǎn)物在540nm處有最大光吸收。 福林酚試劑法：folin-酚試劑由試劑a和試劑b兩部分組成。在folin-酚試劑法中，蛋白質(zhì)中的肽鍵首先在堿性條件下與酒石酸鉀鈉-銅鹽溶液（試劑a）起作用生成紫色絡(luò)合物（類似雙縮脲反應(yīng)）。由于蛋白質(zhì)中酪氨酸、色氨酸的存在，該絡(luò)合物在堿性條件下進(jìn)而與試劑b（磷鉬酸和磷鎢酸、硫酸、溴等組成）形成藍(lán)色復(fù)合物，其呈色反應(yīng)顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。考馬斯亮藍(lán)法：考馬斯亮藍(lán)g-250存在著兩種不同的顏色形式，紅色和藍(lán)色?？捡R斯亮藍(lán)g-250在酸性游離狀態(tài)下呈棕紅色，最大光吸收在465nm，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，最大光吸收在595nm。2、糖類的

9、化學(xué)檢測方法主要有哪些？蘭愛農(nóng)（lane-eynon）法、斐林試劑快速法（gb法）、碘量法、銅試劑法、高錳酸鉀法3、核酸的化學(xué)檢測方法主要有哪些？ 定磷法、二苯胺法和地衣酚法4、凱氏定氮法的基本原理是什么？其主要操作步驟包括哪些？該法中加入硫酸鉀和硫酸銅的作用是什么？原理：樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。然后加堿蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸溶液滴定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。主要操作步驟：消化、蒸餾、滴定加入硫酸鉀可以提高溶液的沸點(diǎn)而加快有機(jī)物的分解，硫酸銅主要作為催化

10、劑，同時(shí)可以指示消化終點(diǎn)的到達(dá)。5、放射自顯影技術(shù)的基本原理是什么？其原理是將放射性同位素（如14c和3h）標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時(shí)間后，將標(biāo)本制成切片或涂片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)一定時(shí)間的放射性曝光，組織中的放射性即可使乳膠感光。然后經(jīng)過顯影、定影處理顯示還原的黑色銀顆粒，即可得知標(biāo)本中標(biāo)記物的準(zhǔn)確位置和數(shù)量。6. 生物檢測內(nèi)容主要有哪些？安全性檢測包括哪些內(nèi)容？生物檢測內(nèi)容主要包括生物效價(jià)測定和安全性試驗(yàn)。安全性檢測主要包括毒性試驗(yàn)、局部刺激性試驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、過敏試驗(yàn)和變異原試驗(yàn)。7. 蘭-愛農(nóng)法測定糖類的基本原理是什么？蘭-愛農(nóng)法是指以次甲基藍(lán)作為指示劑，直接將還原糖

11、滴定到斐林試劑中進(jìn)行測定的方法。斐林試劑中的酒石酸鉀鈉銅氧化還原糖分子中的游離羰基，本身被還原氧化亞銅紅色沉淀。由于次甲基藍(lán)氧化能力比二價(jià)銅弱，待二價(jià)銅全部還原后，過量1滴還原糖使次甲基藍(lán)還原，藍(lán)色消失而達(dá)滴定終點(diǎn)。第三章 電泳技術(shù)習(xí)題1、什么是電滲現(xiàn)象？其對電泳過程有何影響液體在電場中，由于支持介質(zhì)表面可能會存在一些帶電基團(tuán)，吸附一些帶相反電荷的離子，在電場的作用下向電極方向移動(dòng)，形成介質(zhì)表面溶液的流動(dòng)，這種現(xiàn)象就是電滲。如果電滲方向與電泳方向相同，則加快電泳速度；如果電滲方向與電泳方向相反，則降低電泳速度。2、現(xiàn)有電泳技術(shù)按照原理及支持介質(zhì)的不同，分為哪幾類？按原理不同可分為：移動(dòng)界面電泳

12、、區(qū)帶電泳、等電聚焦電泳和等速電泳按支持介質(zhì)形狀不同可它為：薄層電泳、板電泳和柱電泳。3、蛋白質(zhì)在不連續(xù)page中實(shí)現(xiàn)分離的基本原理是什么？不連續(xù)page電泳體系中由于緩沖液離子成分、ph、凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性，帶電顆粒在電場中泳動(dòng)不僅有電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)，還具有濃縮效應(yīng)，故分離效果比連續(xù)系統(tǒng)更好。（1）樣品濃縮效應(yīng)：凝膠孔徑的不連續(xù)性：濃縮膠為大孔膠，分離膠為小孔膠。在電場作用下，樣品顆粒在大孔膠中泳動(dòng)的阻力小，移動(dòng)速度快；當(dāng)進(jìn)入小孔膠時(shí)，受到的阻力大，移動(dòng)速度減慢。因而在兩層凝膠交界處，樣品遷移受阻而壓縮成很窄的區(qū)帶。緩沖體系離子成分及ph值的不連續(xù)性： hcl在任何ph溶液中均

13、易解離出(cl-)，在電場中遷移率快，走在最前面稱為快離子。在電極緩沖液中，除有tris 外，還有甘氨酸(glycine)，其pi=6.0，在ph8.3的電極緩沖液中，易解離出甘氨酸根(nh2 ch2coo-)，而在ph6.7的凝膠緩沖體系中，甘氨酸解離度僅有0.1%-1%，因而在電場中遷移很慢，稱為慢離子。當(dāng)進(jìn)入ph8.9的分離膠時(shí)，甘氨酸解離度增加。電位梯度的不連續(xù)性：電泳開始后，快離子的快速移動(dòng)會在其后形成一個(gè)離子強(qiáng)度很低的低電導(dǎo)區(qū)，使局部電位梯度增高，將蛋白質(zhì)濃縮成狹窄的區(qū)帶。 （2）分子篩效應(yīng)：大小和形狀不同的蛋白質(zhì)通過一定孔徑分離膠時(shí)，受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率，這就是分

14、子篩效應(yīng)。（3）電荷效應(yīng)：在ph8.9的分離膠中，各種帶凈電荷不同的蛋白質(zhì)有不同的遷移率。凈電荷多，則遷移快； 反之，則慢。因此，各種蛋白質(zhì)按電荷多少、相對分子質(zhì)量及形狀，以一定順序排成一個(gè)個(gè)區(qū)帶，因而稱為區(qū)帶電泳。4、sds-page測定蛋白分子量的原理是什么？由于sds帶有大量負(fù)電荷，當(dāng)其與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，所帶的負(fù)電荷大大超過了天然蛋白質(zhì)原有的負(fù)電荷，因而消除或掩蓋了不同種類蛋白質(zhì)間原有電荷的差異，使蛋白質(zhì)均帶有相同密度的負(fù)電荷，因而主要利用蛋白分子量的差異而將各種蛋白質(zhì)分開，因此根據(jù)未知蛋白和標(biāo)準(zhǔn)系列蛋白的移動(dòng)距離可測定出未知蛋白的分子量。 5、蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳和dna瓊脂糖凝膠電

15、泳中，凝膠濃度與被分離分子的大小有何關(guān)系？聚丙烯酰胺凝膠濃度越大，允許通過的蛋白分子越??；瓊脂糖凝膠濃度越大，允許通過的dna片段短。6、某同學(xué)在進(jìn)行sds-page時(shí)，發(fā)現(xiàn)電壓很高而電流卻很低，試分析其原因，并提出處理措施。這種現(xiàn)象主要是由于電泳槽沒有正確裝配，電流未形成通路。包括：a.內(nèi)外槽裝反；b.外槽液過少；c.電泳槽底部的絕緣體未去掉（比如倒膠用的橡膠皮）。處理辦法：電泳槽正確裝配即可。7、瓊脂糖凝膠電泳緩沖液中一般需要加入適量的edta，其目的是什么？目的是螯合mg2+ 等離子，防止電泳時(shí)激活 dna酶，此外還可防止mg2+離子與核酸生成沉淀。8、瓊脂糖凝膠電泳的電泳緩沖液常用的有

16、哪些？各有何特點(diǎn)？     tae是使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對分子質(zhì)量（tbe中電泳時(shí)測出的相對分子質(zhì)量會大于實(shí)際分子質(zhì)量），且雙鏈線狀dna在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時(shí)用tae緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收dna片段時(shí)也宜用tae緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。tae的缺點(diǎn)是緩沖容量小，長時(shí)間電泳（如過夜）不可選用，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。      tbe的特點(diǎn)是緩沖能力強(qiáng)，長時(shí)間電泳時(shí)可選用tbe，并且當(dāng)用于

17、電泳小于1kb的片段時(shí)分離效果更好。tbe用于瓊脂糖凝膠時(shí)易造成高電滲作用，并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價(jià)結(jié)合的四羥基硼酸鹽復(fù)合物而使dna片段的回收率降低，所以不宜在回收電泳中使用。       tpe的緩沖能力也較強(qiáng)，但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過程中析出，所以也不宜在回收dna片段的電泳中使用。9、溫度梯度凝膠電泳測定dna點(diǎn)突變的原理是什么？一個(gè)特定的 dna 片段有其特有的序列組成，其序列組成決定了其解鏈區(qū)域和解鏈行為。一個(gè)幾百個(gè)堿基對的 dna 片段一般有幾個(gè)解鏈區(qū)域，每個(gè)解鏈區(qū)域有一段連續(xù)的堿基對組成。當(dāng)溫度逐漸升高達(dá)到其

18、最低的解鏈區(qū)域溫度時(shí)，該區(qū)域這一段連續(xù)的堿基對發(fā)生解鏈。當(dāng)溫度再升高依次達(dá)到各其他解鏈區(qū)域溫度時(shí)，這些區(qū)域也依次發(fā)生解鏈。直到溫度達(dá)到最高的解鏈區(qū)域溫度后，最高的解鏈區(qū)域也發(fā)生解鏈，從而雙鏈 dna 完全解鏈。不同的雙鏈 dna 片段因?yàn)槠湫蛄薪M成不一樣，所以其解鏈區(qū)域及各解鏈區(qū)域的解鏈溫度也是不一樣的。當(dāng)它們進(jìn)行 dgge/tgge 時(shí)，一開始溫度（或變性劑濃度）比較小，不能使雙鏈 dna 片段最低的解鏈區(qū)域解鏈，此時(shí)dna 片段的遷移行為和在一般的聚丙烯酰胺凝膠中一樣。然而一旦 dna 片段遷移到一特定位置，其溫度（或變性劑濃度）剛好能使雙鏈 dna 片段最低的解鏈區(qū)域解鏈時(shí)，雙鏈 dna

19、 片段最低的解鏈區(qū)域立即發(fā)生解鏈。部分解鏈的 dna 片段在膠中的遷移速率會急劇降低。因此，同樣長度但序列不同的 dna 片段會在膠中不同位置處達(dá)到各自最低解鏈區(qū)域的解鏈溫度，因此它們會在膠中的不同位置處發(fā)生部分解鏈導(dǎo)致遷移速率大大下降，從而在膠中被區(qū)分開來。如果不同 dna 片段的序列差異發(fā)生在最高的解鏈區(qū)域時(shí)，可在 dna 片段的一端加入一段富含 gc 的 dna 片段以防止 dna 片段在膠中完全解鏈。當(dāng)加了 gc 夾子后，dna 片段中基本上每個(gè)堿基處的序列差異都能被區(qū)分開。10、什么是ief-page？以pag為電泳支持物，并在其中加入兩性電解質(zhì)載體(carrier amphol y

20、tes)，在電場作用下，兩性電解質(zhì)載體在凝膠中移動(dòng)，形成ph梯度，蛋白質(zhì)在凝膠中遷移 至其pi的ph處，即不再泳動(dòng)而聚焦成帶，這種方法稱聚丙烯酰胺等電聚焦電泳(isoelectric focusing-page,簡釋ief-page)。11、試通過與高效液相色譜、普通電泳方法的比較，說明毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)。ce和高效液相色譜法(hplc)相比, 其相同處在于都是高效分離技術(shù), 儀器操作均可自動(dòng)化, 且二者均有多種不同分離模式。二者之間的差異在于：ce用遷移時(shí)間取代hplc中的保留時(shí)間, ce的分析時(shí)間通常不超過30min, 比hplc速度快；對ce而言, 從理論上推得其理論塔板高度和溶質(zhì)的擴(kuò)散系

21、數(shù)成正比, 對擴(kuò)散系數(shù)小的生物大分子而言, 其柱效就要比hplc高得多；ce所需樣品為nl級, 最低可達(dá)270fl, 流動(dòng)相用量也只需幾毫升, 而hplc所需樣品為l級, 流動(dòng)相則需幾百毫升乃至更多；但ce僅能實(shí)現(xiàn)微量制備, 而hplc可作常量制備。ce和普通電泳相比, 由于其采用高電場, 因此分離速度要快得多；檢測器則除了未能和原子吸收及紅外光譜連接以外, 其它類型檢測器均已和ce實(shí)現(xiàn)了連接檢測；一般電泳定量精度差,而ce和hplc相近；ce操作自動(dòng)化程度比普通電泳要高得多。12、綜合題：請結(jié)合本課程與生物化學(xué)課程知識，對蛋白質(zhì)分子量測定方法、含量測定方法、等電點(diǎn)測定方法、純度鑒定方法作一小

22、結(jié)。（略）第四章 生物傳感器習(xí)題1、什么是生物傳感器？生物傳感器是由固定化的具有分子識別功能的生物材料、換能器和信號處理放大裝置組成的分析工具或系統(tǒng)。2、生物傳感器的基本組成如何？其作用是什么？生物傳感器主要由三部分構(gòu)成：（1）生物識別元件：是酶、抗原(體)、細(xì)胞器、組織切片和微生物細(xì)胞等生物分子經(jīng)固定化后形成的一種膜結(jié)構(gòu)，對被測定的物質(zhì)有選擇性的分子識別能力。（2）換能器：能將識別元件上進(jìn)行的生化反應(yīng)中消耗或生成的化學(xué)物質(zhì)，或產(chǎn)生的光或熱等轉(zhuǎn)換為電信號的裝置，在一定條件下，產(chǎn)生的電信號強(qiáng)度和反應(yīng)中物質(zhì)的變化量或光、熱等的強(qiáng)度呈現(xiàn)一定的比例關(guān)系。（3）信號處理放大裝置：主要負(fù)責(zé)信號的分析處理和

23、放大輸出。3、微生物傳感器分為哪些類型？分為兩類：好氣性微生物傳感器、厭氣性微生物傳感器4、生物傳感器的固定方法有哪些？主要有夾心法、吸附法、包埋法、共價(jià)連接法、交聯(lián)法、微膠囊法等。5、論述題：論述生物傳感器在發(fā)酵工業(yè)、食品、生物工程、醫(yī)學(xué)和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域中的應(yīng)用略6、論述題：談?wù)勀銓ι飩鞲衅鹘窈蟀l(fā)展趨勢的認(rèn)識。略第五章 生物芯片習(xí)題1、什么是生物芯片？生物芯片又稱為生物微陣列（bio- micro array), 是將大量的dna、寡核苷酸探針、多肽或蛋白質(zhì)密集排列在固相介質(zhì)上，實(shí)現(xiàn)生物信息的大規(guī)模檢測。2、何謂基因芯片？基因芯片系指將大量核酸探針分子固定于支持物上后與標(biāo)記的樣品分子進(jìn)行雜

24、交，通過檢測每個(gè)探針分子的雜交信號強(qiáng)度進(jìn)而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。3、基因芯片的工作原理是什么？基因芯片的工作原理主要包括三方面：錨定：將大量已知基因片段以微陣列方式固定在支持物上，其密度很高捕獲：待測樣品用熒光染料標(biāo)記制成探針，當(dāng)探針與芯片上的靶基因雜交而被捕獲。識別：經(jīng)嚴(yán)格洗滌，除去未雜交或部分配對的探針dna分子，用熒光檢測儀定量分析雜交信號強(qiáng)度，由于探針與靶基因完全配對的產(chǎn)生的熒光信號強(qiáng)度比含一個(gè)或兩個(gè)錯(cuò)配堿基的雜合分子高數(shù)十倍，因而精確測定信號即可實(shí)現(xiàn)檢測的特異性。4、基因芯片的制作方法有哪些？主要有原位合成法和合成點(diǎn)樣法兩種。5、什么是蛋白質(zhì)芯片？蛋白質(zhì)芯片, 又稱蛋白質(zhì)陣列

25、或蛋白質(zhì)微陣列，是指以蛋白質(zhì)分子作為配基,將其有序地固定在固相載體的表面形成微陣列；用標(biāo)記了熒光的蛋白質(zhì)或其它分子與之作用，洗去未結(jié)合的成分，經(jīng)熒光掃描等檢測方式測定芯片上各點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，來分析蛋白之間或蛋白與其它分子之間的相互作用關(guān)系。6、蛋白質(zhì)芯片的制作方法有哪些？制備蛋白質(zhì)芯片的方法主要有3種：共價(jià)鍵結(jié)合法、凝膠墊結(jié)合法和吸附固定法。7、論述題：根據(jù)你的理解，談?wù)劵蛐酒虻鞍踪|(zhì)芯片在社會領(lǐng)域的應(yīng)用。略第六章 dna序列測定習(xí)題1、dna測序的方法有哪些？經(jīng)典的方法主要有sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert dna化學(xué)降解法；較新的方法有：雜交測序法、質(zhì)譜法、單分子測序

26、法、原子探針顯微鏡測序法、流式細(xì)胞儀測序法、pcr法和dna 芯片法。2、sanger雙脫氧鏈終止法測定dna序列的原理是什么？dna的合成總是從5端向3端進(jìn)行的。dna的合成需要模板以及相應(yīng)的引物鏈。dna的合成過程中，在合成的dna鏈的3末端，依據(jù)堿基配對的原則，通過生成新的3，5磷酸二酯鍵，使dna鏈合成終止，產(chǎn)生短的dna鏈。具體測序工作中，平行進(jìn)行四組反應(yīng)，每組反應(yīng)均使用相同的模板，相同的引物以及四種脫氧核苷酸；并在四組反應(yīng)中各加入適量的四種之一的雙脫氧核苷酸，使其隨機(jī)地接入dna鏈中，因?yàn)槿鄙僖粋€(gè)形成磷酸二酯鍵所必需的3'-oh而使dna鏈合成終止，產(chǎn)生相應(yīng)的四組具有特定長

27、度的、不同長短的dna鏈。這四組dna鏈再經(jīng)過聚丙烯酸胺凝膠電泳按鏈的長短分離開，經(jīng)過放射自顯影顯示區(qū)帶，就可以直接讀出被測dna的核苷酸序列。3、sanger雙脫氧鏈終止法測定dna序列需要哪些構(gòu)件元素？質(zhì)粒載體系統(tǒng)、引物、dna模板、dna聚合酶、放射性標(biāo)記dntp、dntp類似物（如ddntp）4、采用sanger雙脫氧鏈終止法測定某dna序列時(shí)，電泳譜圖如下圖所示，請寫出該dna序列。agtccgtagatt5、化學(xué)降解法測定dna序列的原理是什么？化學(xué)裂解法的原理是用化學(xué)試劑在a、g、c、t處特定地裂解dna片段，產(chǎn)生一簇各種長度的短鏈，經(jīng)過page和放射自顯影后，可以直接讀出dna

28、的順序。常用的化學(xué)試劑及其斷裂的堿基位置主要有：（1）硫酸二甲酯使鳥嘌呤g甲基化，再加哌啶在加熱的條件下使g脫落；（2）硫酸二甲酯使鳥嘌呤g甲基化，加甲酸使ag完全分開，再加哌啶使a脫落；（3）用肼和哌啶使t和c斷裂；（4）用2mol/l氯化鈉加肼，只斷裂c。6、化學(xué)降解法測定dna序列的基本步驟是什么？（1）將dna的末端之一進(jìn)行標(biāo)記(通常為放射性同位素32p；（2）在多組互相獨(dú)立的化學(xué)反應(yīng)中分別進(jìn)行特定堿基的化學(xué)修飾；（3）在修飾堿基位置化學(xué)法斷開dna鏈；（4）采用聚丙烯酰胺凝膠電泳將dna鏈按長短分開，根據(jù)放射自顯影顯示區(qū)帶，讀出dna的核苷酸序列。7、采用化學(xué)降解法測定某dna序列時(shí)

29、，電泳譜圖如下圖所示，請寫出該dna序列。agtccgtagatt第七章 標(biāo)記習(xí)題1、何為標(biāo)記？常用的標(biāo)記物有哪些？ 標(biāo)記是指以共價(jià)鍵方式將放射性元素或非放射性物質(zhì)結(jié)合到某些生命物質(zhì)上的過程。常用的標(biāo)記物主要包括放射性物質(zhì)和非放射性物質(zhì)，放射性標(biāo)記元素如3h、14c、32p、35s、125i等；非放射性物質(zhì)如地高辛、生物素、酶、熒光素等。2、雙鏈dna探針標(biāo)記的方法有哪些？ 隨機(jī)引物引導(dǎo)法 切口平移法3、列舉一種核酸標(biāo)記的新方法，并說明其特點(diǎn)。掃若侖標(biāo)記：掃若侖（psoralen）是一種天然的三環(huán)化合物，其帶有胺活性基團(tuán)衍生物可用來標(biāo)記多種核酸（如dna、rna、pcr產(chǎn)物和寡核苷酸等）。用其

30、制成的探針靈敏度高（可達(dá)fg級別）。掃若侖標(biāo)記為非酶促反應(yīng)，是用波長320400nm的紫外光照射，引起光循環(huán)反應(yīng)，使帶胺基的掃若侖以三環(huán)平面形式插入核酸分子，并以共價(jià)鍵結(jié)合形成探針，dna和rna時(shí)，共價(jià)鍵結(jié)合的位置分別在dt和u處；探針中掃若侖衍生物的含量與核酸中胸苷（ dt ）或尿苷（u）的含量成正比關(guān)系。分子燈塔探針：一種新的非核素化合物標(biāo)記，用于檢測特別序列核酸的核酸探針。標(biāo)記化合物類似燈塔，由25個(gè)核苷酸組成，燈中間環(huán)形的15個(gè)核苷酸與靶dna是互補(bǔ)序列，燈竿一端的5個(gè)核苷酸與另一端的5個(gè)核苷酸是互補(bǔ)，在5 和3端分別耦合一種熒光素（發(fā)光劑）和非熒光素（熄滅劑）。分子燈塔探針的熄滅劑

31、可吸收發(fā)光劑發(fā)射的能量。在室溫條件下，分子燈塔的構(gòu)型可確保發(fā)光劑和熄滅劑緊密互補(bǔ)結(jié)合，致使熒光基團(tuán)處于熄滅狀態(tài)，無熒光產(chǎn)生；一旦當(dāng)燈塔探針的15個(gè)核苷酸與靶dna或rna序列雜交時(shí)，其發(fā)光劑和熄滅劑便相互分離，產(chǎn)生熒光。4、說明蛋白質(zhì)金標(biāo)記方法的原理、種類和用途。原理：借助金粒的電子密度特征，用其與抗體偶聯(lián)后，可成功地置顯微鏡下觀察膠體金顆粒。分類：根據(jù)金粒子大小，一般分為5 nm、l0 nm和20 nm三種。用途：5nm粒子容易滲透到細(xì)胞膜，使細(xì)胞間染色，適用于電子顯微鏡準(zhǔn)確定位抗原。l0nm粒子較大，可使細(xì)胞表面染色，適用于光學(xué)顯微鏡觀察。20nm粒子可用于免疫印跡和某些細(xì)胞和組織化學(xué)免疫

32、染色。第八、九章 氣液相色譜法習(xí)題1、什么是色譜法？是利用混合物不同組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)(或吸附系數(shù)、滲透性等)的差異，使不同組分在作相對運(yùn)動(dòng)的兩相中進(jìn)行反復(fù)分配，實(shí)現(xiàn)分離的分析方法。2、色譜法按流動(dòng)相物理狀態(tài)和分離原理可分為哪些類型？按流動(dòng)相物理狀態(tài)可分為氣相色譜、液相色譜和超臨界流體色譜。按分離原理可分為吸附色譜、分配色譜、離子色譜和凝膠色譜。3、色譜峰的區(qū)域?qū)挾韧ǔ？捎媚男﹨?shù)表示？標(biāo)準(zhǔn)偏差s、半峰寬、峰底寬度。4、什么是保留時(shí)間？什么是保留體積？色譜分析中，試樣從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)峰極大點(diǎn)時(shí)所經(jīng)過的時(shí)間，稱為保留時(shí)間。色譜分析中，試樣從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)峰極大點(diǎn)時(shí)所流過的流動(dòng)相體積，稱為保留體積。5、根據(jù)色譜流出曲線可獲