3植物組織培養(yǎng)技術(shù)[1]

1、 課題目標(biāo)課題目標(biāo) 說明植物組織培養(yǎng)的基本原理，學(xué)習(xí)植說明植物組織培養(yǎng)的基本原理，學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)，進(jìn)行菊花或其物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)，進(jìn)行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。他植物的組織培養(yǎng)。 課題重點與難點課題重點與難點 課題重點：植物組織培養(yǎng)過程中使用的課題重點：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術(shù)。無菌技術(shù)。 課題難點：植物組織培養(yǎng)過程中使用的課題難點：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術(shù)。無菌技術(shù)。愈傷組織愈傷組織D、植物激素、植物激素植物組織培養(yǎng)過程植物組織培養(yǎng)過程離體的植物離體的植物器官、組織、器官、組織、細(xì)胞細(xì)胞脫分化脫分化愈愈傷傷組組織織再分化再分化芽芽根根植植物物體體組織培養(yǎng)實驗過程

2、簡圖組織培養(yǎng)實驗過程簡圖移栽移栽制備制備MS固固體培養(yǎng)基體培養(yǎng)基外植體消外植體消毒毒 接種接種 培培 養(yǎng)養(yǎng)栽栽 培培二、實驗操作二、實驗操作 移移 栽栽MS培養(yǎng)基的配制操作步驟培養(yǎng)基的配制操作步驟（1）MS培養(yǎng)基母液的配制培養(yǎng)基母液的配制: MS培養(yǎng)基含有十幾種化合物，配制培養(yǎng)基含有十幾種化合物，配制不方便也難稱量準(zhǔn)確，可將培養(yǎng)基中的不方便也難稱量準(zhǔn)確，可將培養(yǎng)基中的各種成分?jǐn)U大一定倍數(shù)分別稱量，配成各種成分?jǐn)U大一定倍數(shù)分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。(母液配制見下表母液配制見下表) （ 2）MS（1000mL）培養(yǎng)基的配制）培養(yǎng)基的配制: 按

3、比例分別取適量各種成分的母液，加入燒按比例分別取適量各種成分的母液，加入燒杯，稱取蔗糖杯，稱取蔗糖30g，瓊脂，瓊脂7g，加水并加熱使瓊，加水并加熱使瓊脂溶解，按照需要的濃度分別加入激素，用脂溶解，按照需要的濃度分別加入激素，用1mol/L NaOH和和1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)溶液調(diào)節(jié)pH至至5.86.0。將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至組培瓶。將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至組培瓶中，擰上蓋子，放入滅菌鍋中，擰上蓋子，放入滅菌鍋121，滅菌，滅菌20min。植物組培具體操作步驟植物組培具體操作步驟（1）取材：）取材： 取菊花生長旺盛的嫩枝取菊花生長旺盛的嫩枝(外植體不能太小，否則外植體不能太小，否則會影

4、響愈傷組織的形成會影響愈傷組織的形成)。（2）消毒與修剪外植體：）消毒與修剪外植體： 流水沖洗后流水沖洗后,加少許洗衣粉刷洗加少許洗衣粉刷洗,流水沖流水沖20分鐘分鐘; 放入放入70酒精中搖動酒精中搖動23次次,持續(xù)持續(xù)67秒秒,無菌水無菌水沖洗沖洗23次，用無菌吸水紙吸干次，用無菌吸水紙吸干; 放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%氯化汞溶液中浸泡氯化汞溶液中浸泡12分鐘分鐘,無菌水沖洗無菌水沖洗23次，無菌吸水紙吸干。次，無菌吸水紙吸干。（3）接種）接種常用滅菌劑使用濃度及效果比較表常用滅菌劑使用濃度及效果比較表 植物組織培養(yǎng)消毒與接種示意圖植物組織培養(yǎng)消毒與接種示意圖（六）栽培（六）栽培

5、材料的移栽及溫室培養(yǎng)：材料的移栽及溫室培養(yǎng)： 煉苗：先在外界環(huán)境閉瓶鍛煉煉苗：先在外界環(huán)境閉瓶鍛煉3天，再開天，再開瓶鍛煉瓶鍛煉3天（以培養(yǎng)基上開始長出菌為宜）。天（以培養(yǎng)基上開始長出菌為宜）。 移栽：去凈培養(yǎng)基，可先在滅過菌的珍珠移栽：去凈培養(yǎng)基，可先在滅過菌的珍珠巖或蛭石上培養(yǎng)使根系發(fā)達(dá)再轉(zhuǎn)移到土壤中。巖或蛭石上培養(yǎng)使根系發(fā)達(dá)再轉(zhuǎn)移到土壤中。菊花煉苗菊花煉苗菊花移栽苗菊花移栽苗1、外植體帶菌、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔、環(huán)境不清潔 植物組培污染途徑植物組培污染途徑污染的預(yù)防措施污染的預(yù)防措施（一）防止

6、外植體帶菌（一）防止外植體帶菌（二）保證培養(yǎng)基及接種器具徹底滅菌（二）保證培養(yǎng)基及接種器具徹底滅菌（三）操作人員嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程（三）操作人員嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程（四）保證接種與培養(yǎng)環(huán)境清潔（四）保證接種與培養(yǎng)環(huán)境清潔1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯、外植體的消毒（酒精、氯化汞）化汞）3、接種的無菌操作（酒精、接種的無菌操作（酒精、酒精燈酒精燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。存一段時間。思考：在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌環(huán)思考：在整個操作過程中，是如

7、何來實現(xiàn)無菌環(huán)境的？境的？組組織織培培養(yǎng)養(yǎng)原理原理過程過程意義意義利用植物細(xì)胞的全能性利用植物細(xì)胞的全能性快速繁殖，培育無毒植株，培育作快速繁殖，培育無毒植株，培育作物新品種物新品種根根芽芽植植物物體體離體植離體植物器官、物器官、組織或組織或細(xì)胞細(xì)胞 ( (脫分化脫分化) )愈傷愈傷組織組織 ( (再分化再分化) )植物組織培養(yǎng)小結(jié)植物組織培養(yǎng)小結(jié): :操作條件操作條件含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、空氣、無菌環(huán)境、適合的溫度、空氣、無菌環(huán)境、適合的PHPH、適時光照等適時光照等 練習(xí)練習(xí) 1.答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物

8、材料體積小、抗性差，對培養(yǎng)條件的要求較高。積小、抗性差，對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長，如一些細(xì)菌、真菌某些微生物的生長，如一些細(xì)菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會導(dǎo)致實驗前功盡棄，因此要污染，就會導(dǎo)致實驗前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。 2.答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分

9、化。影響植物組織培養(yǎng)的影響因素影響植物組織培養(yǎng)的影響因素及注意事項及注意事項影響植物組織培養(yǎng)的幾個因素影響植物組織培養(yǎng)的幾個因素 植物的材料植物的材料 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 植物激素植物激素 pH值值 外界因素（溫度，光照，通氣狀況，材料處外界因素（溫度，光照，通氣狀況，材料處理等）理等）【注意事項注意事項】1、實驗所使用的器材必須要嚴(yán)格滅菌，注意、實驗所使用的器材必須要嚴(yán)格滅菌，注意無菌操作，避免因染菌導(dǎo)致實驗失??；無菌操作，避免因染菌導(dǎo)致實驗失??；2、配制貯存母液時，要算好各種成分逐次加、配制貯存母液時，要算好各種成分逐次加入，等第一種成分完全溶解后再加入第二種入，等第一種成分完全溶解后再加入第二

10、種成分，切忌成分，切忌“一鍋煮一鍋煮”。有機物質(zhì)和鐵鹽溶。有機物質(zhì)和鐵鹽溶液配好以后要裝入棕色瓶放入電冰箱內(nèi)保存，液配好以后要裝入棕色瓶放入電冰箱內(nèi)保存，其它兩種種母液可在常溫下保存但最多不能其它兩種種母液可在常溫下保存但最多不能超過一個月；超過一個月；3、pH值對培養(yǎng)基的硬度有影響，值對培養(yǎng)基的硬度有影響，pH過高過高培養(yǎng)基變硬，培養(yǎng)基變硬，pH過低培養(yǎng)基不能凝固，過低培養(yǎng)基不能凝固，所以要調(diào)整好培養(yǎng)基的所以要調(diào)整好培養(yǎng)基的pH值；值；4、材料脫毒時不要在酒精中停留過長時間，、材料脫毒時不要在酒精中停留過長時間，以免材料被殺死。以免材料被殺死。5、所有制備好的溶液和試劑瓶上都要有標(biāo)、所有制備好的溶液和試劑瓶上都要有標(biāo)簽，注上名稱、濃度、消毒與否和制備簽，注上名稱、濃度、消毒與否和制備日期。日期。組織培養(yǎng)實驗室設(shè)置及設(shè)備介紹組織培養(yǎng)實驗室設(shè)置及設(shè)備介紹（1）實驗室設(shè)置）實驗室設(shè)置組織培養(yǎng)實驗室設(shè)置簡圖組織培養(yǎng)實驗室設(shè)置簡圖（2） 組培相關(guān)設(shè)備儀器介紹組培相關(guān)設(shè)備儀器介紹 電子天平電子天平 純水機純水機 酸度計酸度計 高壓滅菌鍋高壓滅菌鍋 干燥箱干燥箱 搖床搖床 超凈工作臺超凈工作臺 數(shù)碼顯微鏡數(shù)碼顯微鏡數(shù)碼顯微鏡又叫數(shù)碼顯微鏡又叫視頻顯微視頻顯微鏡鏡，它是將顯微鏡看到的，它是將顯微鏡看到的實物圖像通過數(shù)模轉(zhuǎn)換，實物圖像通過數(shù)模轉(zhuǎn)換，使