甘油三酯測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 甘油三酯的測(cè)定（甘油三酯的測(cè)定（72-172-1）3 3學(xué)時(shí)學(xué)時(shí) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆眨貉甯视腿ィㄈ８视停y(cè)定的掌握：血清甘油三酯（三酰甘油）測(cè)定的原理、操作方法和臨床意義。原理、操作方法和臨床意義。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理甘油磷酸甘油甘油激酶磷酸甘油氧化酶磷酸二羥基丙酮 + H2O2H2O2 + 氨基安替比林 + 酚過氧化物酶紅色醌類化合物 + H2O2、3、4. 用用72-1型分光光度計(jì)測(cè)出紅色化合物吸光度，再利用公式型分光光度計(jì)測(cè)出紅色化合物吸光度，再利用公式 求出甘油三酯含量。求出甘油三酯含量。三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑（1 1）試管）試管 3

2、 3支支 （2 2）水浴箱）水浴箱 1 1臺(tái)臺(tái) （3 3）試管架）試管架 1 1個(gè)個(gè) （4 4）洗耳球）洗耳球 1 1個(gè)個(gè)（5 5）微量五檔可調(diào)移液器微量五檔可調(diào)移液器 2 2支支（6 6）刻度吸量管刻度吸量管（5ml5ml） 1 1支支 （7 7）72-172-1型分光光度計(jì)型分光光度計(jì) 1 1臺(tái)臺(tái)（一）實(shí)驗(yàn)器材（一）實(shí)驗(yàn)器材微量五檔可微量五檔可調(diào)移液器調(diào)移液器NoImage使用方法：使用方法：1.1.將將吸嘴套在移液器頭上吸嘴套在移液器頭上輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，以保證密封。輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，以保證密封。2.2.使用前應(yīng)先將移液器使用前應(yīng)先將移液器吸液和排液幾次吸液和排液幾次，潤(rùn)洗吸嘴潤(rùn)洗吸嘴和保持和保持 腔內(nèi)

3、外氣壓一致。腔內(nèi)外氣壓一致。3.3.選擇量程選擇量程。4.4.垂直地握住移液器，將按鈕按到第一停止點(diǎn)，然后把垂直地握住移液器，將按鈕按到第一停止點(diǎn)，然后把吸吸嘴浸入到嘴浸入到液液面下面下2 23mm3mm，再緩慢放松按鈕，使之復(fù)位，等，再緩慢放松按鈕，使之復(fù)位，等待待1 12 2秒后，從液體中取出，并避免碰撞任何物體。秒后，從液體中取出，并避免碰撞任何物體。5.5.將吸液嘴移至加樣容器壁上，緩慢地把按鈕按到第一停將吸液嘴移至加樣容器壁上，緩慢地把按鈕按到第一停止點(diǎn)，等待止點(diǎn)，等待1 12 2秒，再把按鈕全部按下去，秒，再把按鈕全部按下去，排排盡盡液液體后，吸液體后，吸液嘴應(yīng)沿容器壁上滑動(dòng)取出，

4、再放松按鈕，使之復(fù)位，即完成。嘴應(yīng)沿容器壁上滑動(dòng)取出，再放松按鈕，使之復(fù)位，即完成。6.6.最后，最后，打掉用過的吸液嘴，調(diào)回最大量程打掉用過的吸液嘴，調(diào)回最大量程，儀器放置好保存。，儀器放置好保存。72-172-1型分光光度計(jì)型分光光度計(jì)工作原理工作原理 物質(zhì)對(duì)光的吸收具有選擇性，不同的物質(zhì)都有各物質(zhì)對(duì)光的吸收具有選擇性，不同的物質(zhì)都有各自的吸收波長(zhǎng)。在一定波長(zhǎng)下，某物質(zhì)的溶液對(duì)光的自的吸收波長(zhǎng)。在一定波長(zhǎng)下，某物質(zhì)的溶液對(duì)光的吸收強(qiáng)弱（吸收強(qiáng)弱（吸光度吸光度A）與）與溶液的濃度溶液的濃度C和和液層的厚度液層的厚度L的乘積成正比，即遵循朗伯的乘積成正比，即遵循朗伯-比爾定律：比爾定律： A=

5、KCL (K為吸收系數(shù)，對(duì)同一物質(zhì)來說為一常數(shù)為吸收系數(shù)，對(duì)同一物質(zhì)來說為一常數(shù))使用方法：使用方法：1.檢查檢查 ：指針位于：指針位于“0”。 2.打開電源，打開比色皿暗箱蓋，打開電源，打開比色皿暗箱蓋，預(yù)熱預(yù)熱20分鐘分鐘。3.加樣：加樣：夾毛面，擦干夾毛面，擦干。 4.放置好比色皿放置好比色皿，選擇波長(zhǎng)、調(diào)靈敏度。，選擇波長(zhǎng)、調(diào)靈敏度。5.反復(fù)反復(fù)調(diào)調(diào)0、調(diào)、調(diào)100至穩(wěn)定至穩(wěn)定。 6.合蓋，合蓋，讀數(shù)，記錄，取樣，清洗，關(guān)閉儀器讀數(shù)，記錄，取樣，清洗，關(guān)閉儀器。1 1、血清（、血清（樣本）樣本）2 2、蒸餾水、蒸餾水3 3、工作液、工作液 4 4、甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)液（、甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)液（標(biāo)本

6、標(biāo)本）：）：2.26 mmol/L2.26 mmol/L （二）實(shí)驗(yàn)試劑（二）實(shí)驗(yàn)試劑四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和操作過程四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和操作過程 1 1、取取3 3支干凈試管，分別支干凈試管，分別標(biāo)明標(biāo)明測(cè)定（測(cè)定（T T）、標(biāo)準(zhǔn)（）、標(biāo)準(zhǔn)（S S） 和空白管（和空白管（O O），然后按表加入試劑：），然后按表加入試劑：加入物加入物 測(cè)定管測(cè)定管T 標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管S 空白管空白管O血清（血清（m ml l） 1515標(biāo)準(zhǔn)液（標(biāo)準(zhǔn)液（m ml l） 1515工作液（工作液（m ml l） 1.5 1.5 1.51.5 1.5 1.5 2 2、將樣品混勻后，置于將樣品混勻后，置于37水浴箱中水浴箱中水浴水浴 10

7、min。 3 3、用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)546nm處處，以空白管以空白管O調(diào)零，分別讀取兩管吸光度值，記錄測(cè)定管調(diào)零，分別讀取兩管吸光度值，記錄測(cè)定管T、標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)管準(zhǔn)管S的吸光度值的吸光度值A(chǔ)T、AS 。 計(jì)算公式：計(jì)算公式： 甘油三酯（甘油三酯（mmol/Lmmol/L）= = 標(biāo)準(zhǔn)液濃度（標(biāo)準(zhǔn)液濃度（2.26 mmol/L2.26 mmol/L） 測(cè)定管吸光度測(cè)定管吸光度AT標(biāo)準(zhǔn)管吸光度標(biāo)準(zhǔn)管吸光度AS五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算及分析五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算及分析 【結(jié)果分析】【結(jié)果分析】 經(jīng)過計(jì)算得到的血清中甘油三酯濃度為經(jīng)過計(jì)算得到的血清中甘油三酯濃度為多多少少，是否在人體的正常范圍內(nèi)，是否在人體的正常范圍內(nèi)（空腹甘油三酯空腹甘油三酯濃度為濃度為0.451.36mmol/L ）。六、臨床意義六、臨床意義TG升高：升高：1、隨年齡增長(zhǎng)有上升趨勢(shì)，體重超標(biāo)者。、隨年齡增長(zhǎng)有上升趨勢(shì)，體重超標(biāo)者。2、高脂血癥、糖尿病、腎病綜合癥、動(dòng)脈粥樣硬化、高脂血癥、糖尿病、腎病綜合癥、動(dòng)脈粥樣硬化、 甲狀腺功能減退等。甲狀腺功能減退等。3、先