超敏PCR宣講張忠新課件

1、高靈敏度病毒載量檢測在肝炎高靈敏度病毒載量檢測在肝炎診療中的意義診療中的意義張忠新張忠新1超敏超敏pcr宣講張忠新宣講張忠新hbv hbv 感染是全球性衛(wèi)生問題感染是全球性衛(wèi)生問題 33% 的人在一生中會感染hbv; 成年感染者中5%-10%會轉(zhuǎn)為慢性乙肝, 全球約有3.5億慢性hbv感染者; 每年,有100萬人死于與乙型肝炎相關(guān)的肝硬化或者肝癌; = 每30s 奪走一個生命 感染率最高的區(qū)域在亞洲,非洲.lavanchy. j viral hepat 2004; world health organization, 2008; elgouhari, cleve clin j med 2008

2、不同的標志物提供不同的診斷以及治療監(jiān)控的信息不同的標志物提供不同的診斷以及治療監(jiān)控的信息診斷診斷啟動治療啟動治療鑒別鑒別初始應(yīng)答初始應(yīng)答預(yù)測預(yù)測治療應(yīng)答治療應(yīng)答監(jiān)測耐藥監(jiān)測耐藥證明證明持續(xù)應(yīng)答持續(xù)應(yīng)答hbsaghbsaghbsaghbsag定量定量抗抗-hbs-hbshbeaghbeag抗抗-hbe-hbe抗抗-hbc-hbchbv dnahbv dnaaltaltmodified from pawlotsky et al. gastroenterol 20083超敏超敏pcr宣講張忠新宣講張忠新慢性乙型肝炎慢性乙型肝炎干干擾擾素或素或口服核苷（酸）口服核苷（酸）類類似物似物口服核苷（酸）口服

3、核苷（酸）類類似物或似物或干干擾擾素素觀觀察，如察，如altalt升高，升高，或肝或肝組織組織炎癥壞死炎癥壞死g2,g2,或或纖維纖維化化s2s2無肝硬化無肝硬化有肝硬化有肝硬化hbeag+hbeag+hbv dnahbv dna20000 iu/ml20000 iu/mlhbeag-hbeag-hbv dnahbv dna2000 iu/ml2000 iu/mlaltalt2uln2ulnaltalt2uln2ulnaltalt2uln2uln失代失代償償期期代代償償期期hbeag+hbeag+hbv dnahbv dna2000 iu/ml2000 iu/mlhbeag-hbeag-hbv

4、 dnahbv dna200 iu/ml200 iu/mlhbv dnahbv dna可可檢測檢測到到口服核苷（酸）口服核苷（酸）類類似物似物中國慢性乙型肝炎防治指南（中國慢性乙型肝炎防治指南（2010版）版） 高靈敏度高靈敏度hbv dna檢測能更準確判斷檢測能更準確判斷治療起點治療起點啟啟動動治治療療 2000 iu2000 iu/ml/ml不充分應(yīng)答不充分應(yīng)答60-2000 iu60-2000 iu/ml/ml部分部分應(yīng)應(yīng)答答week 12: week 12: 鑒別鑒別原原發(fā)發(fā)性無性無應(yīng)應(yīng)答答week 24: week 24: 療療效早期效早期預(yù)測預(yù)測keeffe et al clin

5、gastroenterol hepatol 2007高靈敏度高靈敏度hbv dna檢測檢測能更準確判斷能更準確判斷應(yīng)答情況應(yīng)答情況ql=檢測下限檢測下限 (聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈反應(yīng) (pcr)-檢測不到檢測不到 4 logql 3003 log 34 log 4 log203146576383791071656868606025255 588887878636320200204060801001781571820162410202 年年時時pcr陰陰性性（%）高精準高精準hbv dna檢測檢測能更準確能更準確預(yù)測遠期療效預(yù)測遠期療效高靈敏度高靈敏度hbv dna檢測比檢測比普通試劑普通試劑能更

6、準確能更準確判定判定病毒學(xué)突破病毒學(xué)突破hbv dna (log10 iu/ml) 5.04.03.02.01.06.0病毒學(xué)突破病毒學(xué)突破antiviral drugantiviral drugmonths60121816普通試劑普通試劑cobas taqman檢測靈敏度檢測靈敏度南方醫(yī)院用67例治療前為hbv dna強陽性樣本，治療24周后采用cobas taqman hbv檢測與普通檢測試劑結(jié)果對比67例患者: hbeag(+)，alt2uln，hbv dna 6.0 log10 iu/ml-治療前用cobas檢測結(jié)果為7.900.73 log10 iu/ml-治療前用普通試劑檢測結(jié)果為

7、7.110.44 log10 iu/ml檢測試劑檢測試劑病例數(shù)病例數(shù)hbv dnahbv dna分布范圍分布范圍普通hbv3434例例33例未檢測到，100 iu/ml300-105 iu/mlcap/ctm hbv8 8例例2626例例 33例target not detected274.5e3 iu/ml104106 iu/ml普通pcr法 “假陰性”率高達44% (26/59)44% (26/59)cobas高靈敏度高靈敏度hbv dna檢測能更準確判斷檢測能更準確判斷治療終點，治療終點，有有效效防漏檢防漏檢（實例（實例1 1）cobas hbv430430例血漿例血漿realtime

8、pcrrealtime pcrhbv1000 copies/mlhbv20 20 iu/mliu/ml208/430(48.4%)208/430(48.4%)20 iu/ml 1000 copies/mlcobas ampliprep/cobas taqman hbv病毒載量系統(tǒng)對慢性乙型肝炎抗病毒治療監(jiān)測的意義李敏偉 沃健兒 倪淑君 王 靜 李蘭娟浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院傳染病診治國家重點實驗室data on filecobas高靈敏度高靈敏度hbv dna檢測能更準確判斷檢測能更準確判斷治療終點，治療終點，有有效效防漏檢防漏檢（實例（實例 2 2）高靈敏度高靈敏度hbv dna檢測的檢測的意義

9、意義更準確判斷更準確判斷治療起點治療起點更準確判斷更準確判斷應(yīng)答情況應(yīng)答情況更準確更準確預(yù)測遠期療效預(yù)測遠期療效更早發(fā)現(xiàn)更早發(fā)現(xiàn)病毒學(xué)突破病毒學(xué)突破更準確更準確預(yù)測耐藥發(fā)生預(yù)測耐藥發(fā)生更準確判斷更準確判斷治療終點治療終點正確的臨床決策正確的臨床決策 全球有2億人感染hcv 流行率2.23.0%13 1.7億慢性攜帶者2 hcv相關(guān)的肝臟疾病每年奪取超過25萬人的生命 1 80% 的感染者沒有任何的臨床癥狀5,6 4085% 的感染著未得到診斷712hcvhcv臨床背景臨床背景1chevaliez. clin microbiol infect 2011; 2who 2003; 3lavanchy

10、. liver int 2009; 4wiessing et al. eurosurveillance 2008; 5hoofnagle. hepatology 2002; 6lemon et al. fields virology 2007; 7; 8schlosser et al. easl 2009; 9vermehren et al. dgvs 2010; 10gane. new zealand doctor 2007; 11wild. gastroenterology and endoscopy news 2010; 12. 國際指南國際指南明確提出明確提出高高檢測靈敏度要求檢測靈敏

11、度要求hcv rna檢測應(yīng)使用高靈敏度的試劑（最低檢出限（最低檢出限15 iu/ml15 iu/ml）持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(svr)無應(yīng)答無應(yīng)答基線基線治療治療復(fù)發(fā)復(fù)發(fā)部分應(yīng)答部分應(yīng)答undetectablehcv rnahcv rna反彈反彈hcv rna hcv rna 檢測限檢測限療效判定時間點療效判定時間點高靈敏度高靈敏度hcv rna檢測能更有效執(zhí)行檢測能更有效執(zhí)行rgt策略策略病毒學(xué)反應(yīng)病毒學(xué)反應(yīng)定義定義rvr rvr 治療治療4 4周時，周時，hcv rna hcv rna 轉(zhuǎn)陰轉(zhuǎn)陰evr / cevrevr / cevr治療治療4 4周時，周時，hcv rna hcv

12、rna 陽性陽性但但1212周時周時轉(zhuǎn)陰轉(zhuǎn)陰dvr/pevrdvr/pevr治療治療1212周時，周時，hcv rna hcv rna 陽性，但相對于治陽性，但相對于治療前基線下降療前基線下降 2 log2 log1010，在治療在治療2424周時周時轉(zhuǎn)陰轉(zhuǎn)陰nrnr治療治療1212周時，周時，hcv rna hcv rna 下降下降 2 log (2 log1010) )peg-ifn/rbvpeg-ifn/rbv治療治療4848周周peg-ifn/rbvpeg-ifn/rbv治療治療4848周周停止治療停止治療基線基線wk 4wk 12wk 24hcv rna hcv rna 陽性陽性pe

13、g-ifn/rbvpeg-ifn/rbv治療治療7272周周hcv rna hcv rna 陰性陰性hcv rna hcv rna 陽性陽性 (2 log (2 log (2 log1010) ) 此后陰此后陰性性停止治療停止治療基線基線wk 4wk 12peg-ifn/rbv peg-ifn/rbv for 48 weeksfor 48 weekshcv rna hcv rna 陽性陽性 (2 log (2 log10 (iu/ml)72周周 (svr) 終止治療終止治療 復(fù)發(fā)復(fù)發(fā) 由于由于pevrpevr被誤判為被誤判為cevrcevr，未延長療程，導(dǎo)致出現(xiàn)所謂，未延長療程，導(dǎo)致出現(xiàn)所謂的

14、的“復(fù)發(fā)復(fù)發(fā)”cobas taqman檢測下限檢測下限 (15 iu/ml)普通試劑檢測下限普通試劑檢測下限 (1000 iu/ml)cobascobas普通檢測普通檢測魏來、陳新月等 ，傳染病信息 2012年第25卷第3期223223例例hcvhcv患者患者非非rvr 33.63%rvr 33.63%(75/223)(75/223)rvr 66.37%rvr 66.37%(148/223)(148/223)4 4周周陽性 62.67%（47/75）假陰性假陰性 37.33%37.33%（2828/75）cobascobascevr 89.24%cevr 89.24%(199/223) (19

15、9/223) 非非cevr 89.24%cevr 89.24%(24/223) (24/223) 普通檢測普通檢測陽性 79.17%（19/24）假陰性假陰性 20.83%20.83%（5 5/24）高靈敏度高靈敏度hcv rna檢測指導(dǎo)檢測指導(dǎo)正確正確的的臨床決策臨床決策靈敏度較差的檢測可能導(dǎo)致不正確的治療決策靈敏度較差的檢測可能導(dǎo)致不正確的治療決策普通檢測試劑可能導(dǎo)致不當?shù)目s短療程，增加復(fù)發(fā)可能普通檢測試劑可能導(dǎo)致不當?shù)目s短療程，增加復(fù)發(fā)可能1212周周cobas高靈敏度高靈敏度hcv rna檢測的檢測的意義意義更有效執(zhí)行更有效執(zhí)行rgtrgt策略策略更準確判斷更準確判斷應(yīng)答模式應(yīng)答模式有

16、效防止有效防止pevrpevr與與cevrcevr的的誤判，誤判，正確指導(dǎo)用藥正確指導(dǎo)用藥正確的臨床決策正確的臨床決策羅氏羅氏cobas taqman病毒載量檢測系統(tǒng)病毒載量檢測系統(tǒng)+全自動全自動病毒載量平臺病毒載量平臺, sample-in, result-out 專利的內(nèi)部標準品定量專利的內(nèi)部標準品定量，保障結(jié)果的準確度和精密度，保障結(jié)果的準確度和精密度流程靈活方便：流程靈活方便：試劑即拿即用，實驗中隨時添加樣本、試劑及耗材試劑即拿即用，實驗中隨時添加樣本、試劑及耗材實驗實驗條碼條碼自動掃描設(shè)計自動掃描設(shè)計,方便實驗記錄及方便實驗記錄及追蹤追蹤有效有效避免污染避免污染羅氏羅氏cobas t

17、aqman病毒載量卓越的檢測性能病毒載量卓越的檢測性能hbv dnahcv rnahcv rna, v2(已上市已上市)靈敏度靈敏度 (lod)20 iu/ml 15 iu/ml15 iu/ml線性范圍線性范圍20 - 1.7e8 iu/ml43 6.9e7 iu/ml15 1.0e8 iu/ml特異性特異性100%100%100%亞型亞型a-h; pre-core mutantsgt 1-6gt 1-6樣本量樣本量650 l1 ml650 ul1.2 x 101.2 x 108 8 iu/ml hbv iu/ml hbvnclpchpc- -+ +- - -+ +- -陰性質(zhì)控品低濃度陽性質(zhì)

18、控品高濃度陽性質(zhì)控品正常人血漿sk24rack 1nclpchpc+ +- -+ + +- -+ +sk24rack 2nclpchpc- -+ +- - -+ +- -sk24rack 3nclpchpc+ +- -+ + +- -+ +sk24rack 4每批4架重復(fù)檢測5批樣本棋盤放置研究顯示零交叉污染樣本棋盤放置研究顯示零交叉污染結(jié)果:全部陰性質(zhì)控品及正常人血漿結(jié)果報告均為“target not detected”*roche internal studies data on file羅氏羅氏cobas taqman 病毒載量有效病毒載量有效防交叉污染防交叉污染who who 標準品標

19、準品00.51.01.5-0.5-1.0-1.5602x1032x1042x105li j., et al. (2011). poster presentation at the asian pacific association for the study of the liver annual meeting.mean log differencemean log differencecobas taqman hbv dna 普通試劑 1普通試劑 2病毒學(xué)應(yīng)答治療起始濃度expected level (iu/ml)expected level (iu/ml)多中心評估多中心評估: who標準品標準品溯源性溯源性對比對比正確的臨床決策需要可靠的實驗室結(jié)果正