實(shí)驗(yàn)九人體X染色質(zhì)的觀察

1、實(shí)驗(yàn)九實(shí)驗(yàn)九人類人類x染色質(zhì)的觀察染色質(zhì)的觀察哈爾濱師范大學(xué)哈爾濱師范大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院遺傳學(xué)教研室遺傳學(xué)教研室2010年年3月月一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 掌握觀察與鑒別掌握觀察與鑒別x染色質(zhì)的簡易方法；染色質(zhì)的簡易方法； 2. 識別識別x染色質(zhì)的形態(tài)特征及所在部位。染色質(zhì)的形態(tài)特征及所在部位。 1. x-染色質(zhì)的發(fā)現(xiàn)染色質(zhì)的發(fā)現(xiàn)p 1949年年m.l.barr等研究發(fā)現(xiàn)：等研究發(fā)現(xiàn)： 雌貓神經(jīng)元細(xì)胞間期核內(nèi)雌貓神經(jīng)元細(xì)胞間期核內(nèi)凝縮的深染小體。凝縮的深染小體。p 進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)：其它雌性哺乳動(dòng)物（包括人類）也同樣有這種進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)：其它雌性哺乳動(dòng)物（包括人類）也同樣有

2、這種結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)。p 而且在其它細(xì)胞的間期核中也可以見到這一結(jié)構(gòu)，稱之為而且在其它細(xì)胞的間期核中也可以見到這一結(jié)構(gòu)，稱之為barr小體小體（巴氏小體巴氏小體）。）。p 研究表明，巴氏小體是研究表明，巴氏小體是x染色體異固縮的結(jié)果，也稱為染色體異固縮的結(jié)果，也稱為x染染色質(zhì)色質(zhì)或或x小體小體，在細(xì)胞周期中比有活性的，在細(xì)胞周期中比有活性的x染色體復(fù)制染色體復(fù)制稍晚。稍晚。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理2.萊昂氏假說萊昂氏假說 (lyon hypothesis)p 1961年年 m.f.lyon提出：提出： 正常雌性哺乳動(dòng)物正常雌性哺乳動(dòng)物體細(xì)胞體細(xì)胞中的兩條中的兩條x染色體之一染色體之一在遺傳性狀表達(dá)上

3、是在遺傳性狀表達(dá)上是失活的；失活的； 在同一個(gè)體的不同細(xì)胞中，在同一個(gè)體的不同細(xì)胞中， x染色染色體失活是體失活是隨機(jī)隨機(jī)而而恒定恒定的；的； 失活現(xiàn)象發(fā)生在失活現(xiàn)象發(fā)生在胚胎發(fā)育的早期胚胎發(fā)育的早期。3.劑量補(bǔ)償效應(yīng)劑量補(bǔ)償效應(yīng) (dosage compensation)o 由于雌性由于雌性體細(xì)胞體細(xì)胞中的兩個(gè)中的兩個(gè)x染色體中的一個(gè)發(fā)生染色體中的一個(gè)發(fā)生異固縮異固縮（也稱（也稱為為lyon化現(xiàn)象），失去活性，這樣保證了雌雄兩性體細(xì)胞中化現(xiàn)象），失去活性，這樣保證了雌雄兩性體細(xì)胞中都只有一條都只有一條x染色體保持轉(zhuǎn)錄活性，使兩性染色體保持轉(zhuǎn)錄活性，使兩性x連鎖基因產(chǎn)物的連鎖基因產(chǎn)物的量保持在

4、相同水平上，這種效應(yīng)稱為量保持在相同水平上，這種效應(yīng)稱為x染色體的劑量補(bǔ)償。染色體的劑量補(bǔ)償。o barr小體的數(shù)目小體的數(shù)目 x染色體數(shù)目染色體數(shù)目 14.萊昂氏假說的修正（新萊昂氏假說）萊昂氏假說的修正（新萊昂氏假說）o （1）提出：）提出：1967年，美國的遺傳學(xué)家年，美國的遺傳學(xué)家ohno 提出提出45，x46，xx；47xxy46，xy，這兩個(gè)不等式是否成立的疑問。這兩個(gè)不等式是否成立的疑問。 o （2）按照萊昂假說應(yīng)該是兩者完全相同，但）按照萊昂假說應(yīng)該是兩者完全相同，但45，x與與47，xxy實(shí)際是兩種綜合癥。實(shí)際是兩種綜合癥。 o （3）修正：）修正：1974年，失活的年，失活

5、的x染色體上并非染色體上并非全部基因都呈萊昂化失活。全部基因都呈萊昂化失活。 5. x染色質(zhì)檢查的應(yīng)用染色質(zhì)檢查的應(yīng)用o x染色質(zhì)檢查廣泛應(yīng)用于臨床，作為染色質(zhì)檢查廣泛應(yīng)用于臨床，作為性別鑒定性別鑒定和和性染色體異常性染色體異常的一種輔助診斷方法。的一種輔助診斷方法。 例如：克氏綜合癥（例如：克氏綜合癥（xxy）、特納氏綜合征）、特納氏綜合征（xo） 、其它性染色體異常的患者如、其它性染色體異常的患者如xxx，xxyy等。等。三、實(shí)驗(yàn)材料、器具和藥品三、實(shí)驗(yàn)材料、器具和藥品材料材料：女性口腔黏膜細(xì)胞、發(fā)根細(xì)胞。：女性口腔黏膜細(xì)胞、發(fā)根細(xì)胞。器具器具：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、無菌：顯微鏡、載玻片

6、、蓋玻片、無菌 牙簽等。牙簽等。藥品藥品： 60%醋酸醋酸 、45%的醋酸的醋酸 、 石炭酸品紅。石炭酸品紅。四、實(shí)驗(yàn)方法四、實(shí)驗(yàn)方法1.口腔黏膜細(xì)胞口腔黏膜細(xì)胞x染色質(zhì)（染色質(zhì)（barr小體）顯示方法小體）顯示方法 取材取材：漱口：漱口34次后，用無菌牙簽從面頰部內(nèi)側(cè)刮取次后，用無菌牙簽從面頰部內(nèi)側(cè)刮取口腔黏膜細(xì)胞，第一次的刮取物棄去，在原位重復(fù)刮口腔黏膜細(xì)胞，第一次的刮取物棄去，在原位重復(fù)刮23下，涂在載玻片上；下，涂在載玻片上； 固定固定：加一滴：加一滴60%醋酸醋酸固定固定5min，用濾紙吸去多余，用濾紙吸去多余醋酸；醋酸； 染色染色：加一滴石炭酸品紅染色：加一滴石炭酸品紅染色2min

7、； 制片制片：蓋上蓋片，墊上濾紙用拇指壓片；：蓋上蓋片，墊上濾紙用拇指壓片； 鏡檢鏡檢：低倍：低倍高倍。高倍。2. 發(fā)根毛囊細(xì)胞的發(fā)根毛囊細(xì)胞的x染色質(zhì)（染色質(zhì)（barr小體）小體）顯示方法顯示方法 取材取材：拔取女性帶毛囊細(xì)胞的頭發(fā)，置于載玻片上；：拔取女性帶毛囊細(xì)胞的頭發(fā)，置于載玻片上； 固定固定：在毛囊上滴加一滴：在毛囊上滴加一滴45%的醋酸的醋酸（或（或5mol/l鹽酸）鹽酸） 固定固定5min，吸掉多余的醋酸；，吸掉多余的醋酸； 染色染色：用鑷子將軟化的毛囊剝下，加一滴：用鑷子將軟化的毛囊剝下，加一滴石炭酸品紅石炭酸品紅 染色染色23min； 制片制片：蓋上蓋片，墊上濾紙用拇指壓片；

8、：蓋上蓋片，墊上濾紙用拇指壓片； 鏡檢鏡檢：低倍：低倍高倍。高倍。x染色質(zhì)的辨別：染色質(zhì)的辨別：（1 1）低倍鏡下檢出典型的可數(shù)細(xì)胞，標(biāo)準(zhǔn)是：）低倍鏡下檢出典型的可數(shù)細(xì)胞，標(biāo)準(zhǔn)是： 核質(zhì)呈網(wǎng)狀或細(xì)顆粒狀分布核質(zhì)呈網(wǎng)狀或細(xì)顆粒狀分布 核膜清晰，核無缺損核膜清晰，核無缺損 染色適度染色適度 周圍無雜菌周圍無雜菌 在高倍鏡下進(jìn)一步觀察。在高倍鏡下進(jìn)一步觀察。五、觀察結(jié)果五、觀察結(jié)果p x染色質(zhì)是一結(jié)構(gòu)致密的濃染小體，輪廓清楚染色質(zhì)是一結(jié)構(gòu)致密的濃染小體，輪廓清楚，大小大小11.5m ；p 形態(tài)形態(tài)：微凸形、三角形、卵形、短棒形微凸形、三角形、卵形、短棒形等，常附于核等，常附于核膜邊緣或靠近內(nèi)側(cè)。膜邊

9、緣或靠近內(nèi)側(cè)。 （2）高倍鏡下觀察）高倍鏡下觀察x染色質(zhì)的形態(tài)特征及所在部位：染色質(zhì)的形態(tài)特征及所在部位：x染色質(zhì)染色質(zhì)箭頭所示為巴氏小體箭頭所示為巴氏小體（女性細(xì)胞（女性細(xì)胞左左中存在，男性細(xì)胞中存在，男性細(xì)胞右右中沒有）中沒有）o 從理論上講從理論上講，正常女性的間期細(xì)胞中都應(yīng)該有一，正常女性的間期細(xì)胞中都應(yīng)該有一個(gè)個(gè)x染色質(zhì)，但染色質(zhì)，但事實(shí)上事實(shí)上由于個(gè)體的生理狀態(tài)、染色由于個(gè)體的生理狀態(tài)、染色方法、染色技術(shù)以及方法、染色技術(shù)以及x染色質(zhì)在細(xì)胞核中的位置不染色質(zhì)在細(xì)胞核中的位置不同，實(shí)際檢查中不可能在每個(gè)細(xì)胞中都看到。同，實(shí)際檢查中不可能在每個(gè)細(xì)胞中都看到。o 正常女性間期細(xì)胞核中正常女性間期細(xì)胞核中x染色質(zhì)陽性率一般約為染色質(zhì)陽性率一般約為1030%，有的可高達(dá)，有的可