骨髓細胞微核實驗PPT精選課件精選干貨

1、骨髓細胞微核實驗（ppt精選課件)2 微核試驗是用于染色體損傷和干擾細胞有絲分裂的化學毒物的快速檢測方法。 (micronucleus,mcn)是指細胞中主核之外的顆粒，染色與細胞核一致，相當于細胞直徑的1/20-1/5，呈圓形或杏仁狀。是細胞內(nèi)染色體斷裂或紡錘絲受影響而在細胞有絲分裂時滯留在細胞核外的遺傳物質(zhì)。實驗原理實驗原理3機理：1 有絲分裂毒物的作用使個別染色體或帶著絲點的染色體環(huán)和斷片在細胞分裂后期被滯留在細胞質(zhì)中2 斷片或無著絲點染色體在細胞分裂后期不能定向移動，從而遺留在細胞質(zhì)中結(jié)論： 微核試驗?zāi)軝z測化學或其他物質(zhì)因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的染色體完整性改變和染色體分離改變這兩種遺傳學終點實驗

2、原理實驗原理4無核細胞無核細胞紅細胞紅細胞有核細胞中有核細胞中微核難與正常核分葉微核難與正常核分葉及核突出物區(qū)別及核突出物區(qū)別微微核核實實驗驗5紅細胞的分化成熟過程67小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的形成88環(huán)磷酰胺（ctx） 最常用的烷化劑類抗腫瘤藥。最常用的烷化劑類抗腫瘤藥。 在體外無抗腫瘤活性，進入體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)化、分解，生成酰在體外無抗腫瘤活性，進入體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)化、分解，生成酰胺氮芥對腫瘤細胞有細胞毒作用。胺氮芥對腫瘤細胞有細胞毒作用。 副作用明顯，有惡心、食欲減退、脫發(fā)、白細胞減少、副作用明顯，有惡心、食欲減退、脫發(fā)、白細胞減少、中毒性膀胱炎、肝功能損傷等。中毒性膀胱炎、肝功能損傷等。 具有顯著的遺

3、傳、生殖毒性：停經(jīng)或精子缺乏，妊娠初具有顯著的遺傳、生殖毒性：停經(jīng)或精子缺乏，妊娠初期時給予可致畸胎。期時給予可致畸胎。 用藥后用藥后24-3024-30小時，骨髓中微核形成達峰。小時，骨髓中微核形成達峰。99結(jié)果示小鼠骨髓嗜多染示小鼠骨髓嗜多染紅細胞中一個微核紅細胞中一個微核示小鼠骨髓正常示小鼠骨髓正常嗜多染紅細胞嗜多染紅細胞1010示小鼠骨髓嗜多染紅細胞中兩個微核示小鼠骨髓嗜多染紅細胞中兩個微核1111示小鼠骨髓嗜多染紅細胞中多個微核示小鼠骨髓嗜多染紅細胞中多個微核12giemsa染色 pce胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，染色呈灰藍色；mcn多數(shù)為圓形，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍紫色 nce的核糖

4、體已消失，被染成淡桔紅色。nce pce & mcn13實驗?zāi)康?用化療藥（環(huán)磷酰胺）制備突變模型 觀察小鼠骨髓嗜多染紅細胞（pce）微核14 【animal】 小鼠是微核試驗的常規(guī)動物，通常用712周齡，體重1820g的小鼠。 【reagents 】 小牛血清 giemsa染液 環(huán)磷酰胺實驗動物及試劑15實驗分組和染毒方法環(huán)磷酰胺環(huán)磷酰胺40mg/kg 模型組模型組等體積溶劑等體積溶劑對照組對照組染毒方法（染毒方法（30h兩次給藥法）：兩次給受兩次給藥法）：兩次給受試物間隔試物間隔24h，第二次給藥后，第二次給藥后6h取材取材16處死處死：小鼠頸椎脫臼處死；：小鼠頸椎脫臼處死；取股骨

5、取股骨：防止出血；：防止出血；取骨髓取骨髓：小牛血清：小牛血清1滴滴推片推片：30度角；度角；晾干晾干：一定要干；：一定要干；固定固定：甲醇固定：甲醇固定10min, 需要晾干；需要晾干；染色染色：gimesa染液染色（染液染色（1015min）沖洗：沖洗：蒸餾水沖洗，晾干蒸餾水沖洗，晾干閱片閱片: : 觀察微核。觀察微核。 17推 片 方 法18觀察與計數(shù)：低倍鏡下選擇分布均勻，染色較好的區(qū)域 油鏡下觀察計數(shù)f 多染紅細胞（pce）呈灰藍色，正染紅細胞（nce）呈橘黃色。典型的微核多為單個、圓形、邊緣光滑整齊，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍紫色 。f 計數(shù)1000個pce中含微核的pce數(shù)，并且計數(shù)200個細胞中pce與nce的比值。微核率（微核率（）= =含微核含微核pcepce細胞數(shù)細胞數(shù)pcepce細胞總數(shù)細胞總數(shù)1000實驗方法和步驟19實驗結(jié)果組別組別動物數(shù)動物數(shù)受檢受檢pcepce總數(shù)總數(shù)含微核含微核pcepce數(shù)數(shù)微核率微核率陰性對照組陰性對照組模型組模型組20結(jié)果分析與評價 本試驗中只計數(shù)pce中微核，微核率以千分率表示. pce/nce為評價細胞毒性的指標：f正常pce/nce比值約為l(正常