中藥鑒定實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-顯微鏡的構(gòu)造和使用

1、中藥鑒定技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室守則實(shí)驗(yàn)室守則1實(shí)驗(yàn)課是培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立思考和理論聯(lián)系實(shí)際、靈活應(yīng)用能為的重要手段，也是進(jìn)行科研工作的基礎(chǔ)，必須嚴(yán)肅認(rèn)真。2準(zhǔn)時上實(shí)驗(yàn)課，不得無故缺席，不得遲到早退，按指定座位就坐，使用相應(yīng)的顯微鏡。3.實(shí)驗(yàn)前必須通過預(yù)習(xí)本次實(shí)驗(yàn)，明確實(shí)驗(yàn)的目的要求、內(nèi)容、方法和步驟。實(shí)驗(yàn)時要認(rèn)真觀察，獨(dú)立思考，做好記錄，實(shí)驗(yàn)完畢后要按時交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。4.當(dāng)老師講解實(shí)驗(yàn)時，要專心聽講，并作必要的記錄在實(shí)驗(yàn)中如有疑問請舉手，不準(zhǔn)大聲喧嘩。實(shí)驗(yàn)室守則實(shí)驗(yàn)室守則 5愛護(hù)實(shí)驗(yàn)室一切儀器設(shè)備，按操作規(guī)程使用顯微鏡，盡量節(jié)約水、電及擦鏡紙、試劑等一切消耗物質(zhì)損壞儀器須登記，按規(guī)定賠償。 6每次實(shí)驗(yàn)必須

2、帶備教科書，繪圖用具（HB、2H鉛筆各一支，橡皮、尺子等）和實(shí)驗(yàn)記錄本。 7保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊，一切實(shí)驗(yàn)用具用完后要擦洗干凈，放回原處每次實(shí)驗(yàn)完畢，要搞好室內(nèi)清潔衛(wèi)生離開實(shí)驗(yàn)室時要關(guān)好水、電、門、窗。實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的構(gòu)造和使用、顯微鏡的構(gòu)造和使用、制片、制圖及顯微測量制片、制圖及顯微測量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和各部分性能，學(xué)習(xí)和掌握顯微鏡的使用方法。2學(xué)習(xí)生活細(xì)胞觀察方法，掌握植物細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)，了解類型及特點(diǎn)。3學(xué)習(xí)臨時制片方法（撕取法、刮取法）和生物繪圖方法。4.學(xué)習(xí)顯微測量方法。二、實(shí)驗(yàn)器具、試劑及材料二、實(shí)驗(yàn)器具、試劑及材料光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋玻片、尖

3、頭鑷子、解剖針、刀片、剪刀、吸水紙、擦鏡紙、紗布塊、吸水紙；蒸餾水、稀碘液、蘇丹、水合氯醛、稀甘油、20%蔗糖液；洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞制片、新鮮洋蔥。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造（一）普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡是研究植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)、組織特征和器官構(gòu)造的重要的和不可替代的儀器。顯微鏡的種類繁多，可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。電子顯微鏡結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜，光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)較為簡單，基本結(jié)構(gòu)均可分為機(jī)械部分和光學(xué)系統(tǒng)部分。1機(jī)械部分：顯微鏡機(jī)械部分是由精密而牢固的零件組成，主要包括鏡座、鏡臂、載物臺、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器和調(diào)焦裝置等。（1）鏡座：是顯微鏡的基座，用以支持鏡體平衡，其上裝有反

4、光鏡或照明光源。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（2）鏡柱：是鏡座上面直立的短柱，連接、支持鏡臂及以上的部分。（3）鏡臂：彎曲如臂，上接鏡筒、下接鏡柱，支持載物臺、聚光器和調(diào)焦裝置。是取放顯微鏡時手握的部位。直筒顯微鏡鏡臂和鏡柱連接處有活動關(guān)節(jié)，可使顯微鏡在一定范圍內(nèi)后傾，一般不超過30。（4）鏡筒：一般長160 mm170 mm。其上端放置目鏡，下端與物鏡轉(zhuǎn)換器相連。雙筒斜式的鏡筒，兩鏡筒距離可以根據(jù)兩眼距離及視力來調(diào)節(jié)。（5）物鏡轉(zhuǎn)換器：是固著在鏡筒下端的圓盤，其上裝有不同倍數(shù)的物鏡?？梢宰笥易杂赊D(zhuǎn)動，便于更換物鏡。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（6）載物臺：放置切片的平臺，中央有一個通光孔，旁邊裝有固

5、定玻片的壓夾或標(biāo)本移動器。有的顯微鏡載物臺下裝有聚光鏡。（7）調(diào)焦裝置：鏡臂兩側(cè)有粗、細(xì)調(diào)焦輪各一對，旋轉(zhuǎn)時可使鏡筒上升或下降，以便得到清晰物像，即調(diào)焦。大的一對是粗調(diào)，每旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒升降10 mm，用于低倍物鏡觀察；小的一對是細(xì)調(diào)，每旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒升降0.1 mm，用于高倍物鏡觀察。使用時，必須先用低倍鏡、后用高倍鏡。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2光學(xué)部分：由成像系統(tǒng)和照明系統(tǒng)組成。前者包括物鏡和目鏡，后者包括反光鏡（或內(nèi)置光源）、聚光器。（1）物鏡：物鏡是決定顯微鏡性能（如分辨率）的最重要部件。它將標(biāo)本第一次放大成倒像。物鏡放大倍數(shù)一般低倍物鏡有10、4，高倍物鏡為40，而油鏡為100。

6、使用油鏡時，玻片與物鏡之間需加入折射率大于的香柏油作為介質(zhì)。（在物鏡上標(biāo)有“40/0.65 160/0.17”字樣。40表示物鏡放大倍數(shù)。0.65表示鏡口率，其數(shù)值越大工作距離越小，分辨能力越高。分辨率是指顯微鏡能分辨兩點(diǎn)之間最小的距離。160表示鏡筒的長度。0.17表示要求蓋玻片的厚度。）三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（2）目鏡：目鏡的作用是將物鏡放大所成的像進(jìn)一步放大，放大倍數(shù)有5、10、15等。目鏡內(nèi)可安裝“指針”，也可安裝測微尺。（3）聚光器：由聚光鏡和彩虹光圈（可變光欄）組成。聚光鏡可以使光匯集成束，增強(qiáng)被檢物體的照明。彩虹光圈通過撥動其操作桿，可使光圈擴(kuò)大或縮小，借以調(diào)節(jié)通光量。有的聚光

7、器下方還有一個濾光片托架，根據(jù)鏡檢需要可放置濾光片。構(gòu)造簡單的顯微鏡無聚光器，僅有光圈盤，其上有若干個大小不同的圓孔，使用時選擇適當(dāng)?shù)膱A孔對準(zhǔn)通光孔。（4）反光鏡：反光鏡的作用是把光源投射來的光線向聚光鏡反射。反光鏡有平、凹兩面，平面鏡反光，凹面鏡兼有反光和聚光的作用。一般前者在光線充足時使用，后者在光線不足時使用。裝有內(nèi)置光源的顯微鏡，只要打開電源開關(guān)，使用光亮調(diào)節(jié)器即可。取鏡和安放 1 右手握住鏡臂，左手托住鏡座 2把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗(yàn)臺邊緣7厘米左右 處）。安裝好目鏡和物鏡。 3轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘 米的距離) 4把一個

8、較大的光圈對準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)(右眼睜開，便于以后 同時畫圖)。轉(zhuǎn)動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡，可以看到白亮的視野。 觀察5把所要觀察的玻片標(biāo)本（也可以用印有“”字的薄紙片制成）放在 載物臺上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對通光孔的中心。 6轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼 睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。 7左眼向目鏡內(nèi)看，同時反方向轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直 到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（二）普通光學(xué)顯微鏡的使用（二）普通光學(xué)顯微鏡的使用1取放：拿取顯微鏡時，應(yīng)一只手握住鏡

9、臂，另一只手平托鏡座。將顯微鏡放置在座位桌子左側(cè)距桌邊510cm處，以便騰出右側(cè)位置進(jìn)行觀察記錄或繪圖。裝配好適當(dāng)?shù)哪跨R或否。2對光：對光時，先將低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔，用左眼或雙眼觀察目鏡。然后，調(diào)節(jié)反光鏡或打開內(nèi)置光源并調(diào)節(jié)光強(qiáng)，使鏡下視野內(nèi)的光線明亮、均勻又不刺眼。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3低倍鏡使用：將玻片標(biāo)本放置在載物臺上固定好，使觀察材料一定正對著通光孔中心。轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦輪下降物鏡距玻片5mm處，接著用左眼（或雙眼）注視鏡筒，再慢慢用粗調(diào)焦輪上升物鏡，直到看見清晰的物像為止。4高倍鏡使用：由于高倍鏡視野范圍更小，所以使用前應(yīng)在低倍鏡下選好欲觀察的目標(biāo)，并將其移至視野中央，然后轉(zhuǎn)高倍鏡至工

10、作位置。高倍鏡下視野變暗且物像不清晰時，可調(diào)節(jié)光亮度和細(xì)調(diào)焦輪，不得使用粗調(diào)。由于高倍鏡使用時與玻片之間距離很近，因此，操作時要特別小心，以防鏡頭碰擊玻片。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容5油鏡使用：在高倍鏡下將要觀察的部分移至視野中央，上升鏡筒約1.5 cm，然后轉(zhuǎn)油鏡至工作位置。在蓋玻片要觀察的位置上滴一滴香柏油，慢慢下降鏡筒，使之與油滴接觸，然后慢慢調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)焦輪上升鏡筒到物像清晰。若發(fā)現(xiàn)香柏油液滴與因物鏡分離，應(yīng)重新下降鏡筒至與油滴接觸，然后細(xì)調(diào)。油鏡工作距離非常?。s為0.2mm），所以這步操作要特別小心，防止壓碎玻片。6調(diào)換玻片：觀察時如需調(diào)換玻片，要將高倍鏡換成低倍鏡，取下原玻片，換上新玻

11、片，重新從低倍鏡開始觀察。7.顯微測量顯微測量目鏡測微尺的校準(zhǔn)目鏡測微尺的校準(zhǔn)目尺每小格的尺度目尺每小格的尺度=注意：注意：1.分別、多次校準(zhǔn)分別、多次校準(zhǔn) 2.臺尺勿倒置臺尺勿倒置兩條重合線內(nèi)臺尺的尺度兩條重合線內(nèi)臺尺的尺度兩條重合線內(nèi)目尺的格數(shù)兩條重合線內(nèi)目尺的格數(shù)三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容8使用后整理：觀察完畢后，上升鏡筒，取下玻片，將物鏡轉(zhuǎn)離通光孔呈非工作狀態(tài)，放上擦鏡布，按原樣收好顯微鏡。9使用注意事項(xiàng)： 顯微鏡是精密儀器，使用時一定嚴(yán)格遵守操作規(guī)則，不許隨意拆修。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 隨時保持顯微鏡清潔。觀察臨時裝片時，一定要將蓋玻片四周溢出的水或其他液體用吸水紙吸干凈，以免污染

12、鏡頭。已被污染的鏡頭要用鏡頭紙擦試。 觀察時，坐姿要端正，雙目同時張開，切勿睜一眼、閉一眼或用手遮擋一只眼。 觀察玻片時，一定要按先低倍、后高倍物鏡順序使用。細(xì)調(diào)焦輪是在觀察到物像而不夠清晰時使用，切忌沿同一方向不停地轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)焦輪。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（三）臨時水裝片法：（三）臨時水裝片法：是用新鮮的少量植物材料(如單個細(xì)胞、薄的表皮或切成的薄片等)，放在載玻片上的水滴中，再蓋上蓋玻片做成玻片標(biāo)本的方法。這種方法制成的標(biāo)本，可以保持材料的生活狀態(tài)和天然的色彩，一般多做為臨時觀察使用，但也可以根據(jù)需要選擇適宜的染料染色，制成永久性標(biāo)本或用某些化學(xué)試劑作組織化學(xué)反應(yīng)。 制作方法如下： 1擦凈載

13、玻片和蓋玻片，即將浸洗過的玻片用紗布擦干。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 擦載玻片時，用左手的拇指和食指夾住載玻片的邊緣，右手將紗布包住載玻片的上下兩面，反復(fù)輕輕地擦試。載玻片擦好后應(yīng)注意切勿手觸摸上、下表面，以免沾上指紋和油污。擦蓋玻片時，應(yīng)十分小心。應(yīng)先把紗布鋪在右手掌上，用左手拇指和食指夾住蓋玻片的邊緣，將其放在紗布上，然后用右手拇指和食指從上下兩面隔著紗布輕輕夾住蓋片，注意用力均勻，慢慢地輕擦，這樣才不至于把蓋片擦碎。 2用玻璃滴管吸水，滴一滴在載玻片的中央，然后挑選小而薄的材料，放置于載玻片上的水滴中。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 3加蓋片：右手持鑷子，輕輕夾住蓋玻片，使蓋玻片邊緣與材料左邊水

14、滴的邊緣接觸，然后慢慢向下落，放平蓋玻片。這樣可使蓋玻片下的空氣逐漸被水?dāng)D掉，以免產(chǎn)生氣泡。如果蓋玻片下的水分過多，則材料和蓋玻片容易浮動，影響觀察，可用吸水紙條從蓋玻片的側(cè)面吸去一部分水。如果水未充滿蓋玻片時，容易產(chǎn)生氣泡，可從蓋玻片的一側(cè)再滴入一滴清水，將水泡驅(qū)走，即可進(jìn)行觀察。 4如果這種臨時裝片尚需保存一段時間，則可用1030%甘油水溶液代替清水封片。并將用甘油封好的裝片平放于大培養(yǎng)皿中(培養(yǎng)皿底先墊一濕濾紙)保存。這樣一方面可以防塵，另一方面可防止水分過于蒸發(fā)。封片以后，當(dāng)其中的水分丟失一部分后，可在蓋玻片的一側(cè)，用滴管補(bǔ)加30%或50%甘油溶液，如此反復(fù)進(jìn)行，使材料完全浸于甘油中，

15、這種臨時裝片可以維持一個月以上，做示范教學(xué)或科研分析用均可。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（四）觀察洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)（四）觀察洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)將制好的洋蔥表皮裝片置于顯微鏡下進(jìn)行觀察 可見以下幾部分1. 細(xì)胞壁 洋蔥表皮細(xì)胞的細(xì)胞壁幾乎為無色透明的，在顯微鏡下觀察僅能看到每一細(xì)胞的四壁組成的輪廓，而上下兩層細(xì)胞壁看不到。所看到的細(xì)胞壁實(shí)際是由兩相鄰細(xì)胞共同組成，它包括兩相鄰細(xì)胞的兩層初生壁，以及兩相鄰細(xì)胞所具有的胞間層，故所見細(xì)胞壁為三層結(jié)構(gòu)。2. 細(xì)胞質(zhì) 在成熟的細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)為緊貼細(xì)胞壁薄薄的一層，可見到細(xì)胞核位于其中，并可看到許多細(xì)小顆粒。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3. 細(xì)胞

16、核 為半透明狀圓形的小物體，因其有較強(qiáng)的折光，比細(xì)胞質(zhì)容易看見。在細(xì)胞核內(nèi)還可明顯地看到1至多個顆粒狀核仁。4. 液泡 在未成熟細(xì)胞中常見到數(shù)個小液泡在細(xì)胞內(nèi)分散存在。在成熟的細(xì)胞中，液泡常占據(jù)中央的絕大部分，它將細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等擠向緊貼細(xì)胞壁處。（五）繪圖的要求與方法（五）繪圖的要求與方法 繪圖是重要的實(shí)驗(yàn)報(bào)告之一，比文字記錄生動具體，可以幫助我們理解植物的結(jié)構(gòu)和特征，是學(xué)習(xí)天然藥物學(xué)時必須掌握的技能技巧。在以后工作的科研報(bào)告中，經(jīng)常要運(yùn)用形態(tài)結(jié)構(gòu)圖來表達(dá)所觀察的內(nèi)容。因此，開始時，一定要從嚴(yán)要求自己。 1用具：三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容鉛筆 (中華繪圖鉛筆2H3H、HB)、橡皮、小刀、直尺。

17、2要求：植物繪圖與美術(shù)繪圖不同，具體要求如下：首先要注意科學(xué)性和準(zhǔn)確性：必須認(rèn)真觀察要畫的對象(標(biāo)本或切片等)，正確理解各部特征。選出正常的典型材料，才能在繪圖時，保證形態(tài)結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確性，并說明某一科學(xué)問題。合理布局；繪圖之前，應(yīng)根據(jù)要求繪圖的數(shù)量和內(nèi)容，在圖紙上，首先安排好各圖的位置比例，并留出書寫圖題和注字的地方。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容先繪草圖：即用削尖的HB鉛筆輕輕地在圖紙上勾出圖形的輪廓，以便于修改。勾畫草圖時，注意比例，對照所觀察的實(shí)物與所畫輪廓大小是否杷符。草圖經(jīng)修飾后再繪出物象，正式繪圖時要用2H3H的繪圖硬鉛筆，按順手的方向運(yùn)筆，描出與物體相吻合的線條。線條要一筆勾出、粗細(xì)均勻

18、，光滑清晰，接頭處無分叉和痕跡(切忌重復(fù)描繪)。植物圖一般用圓點(diǎn)襯陰，表示明暗和顏色的深淺，給予立體感。點(diǎn)要圓而整齊，大小均勻，根據(jù)需要靈活掌握疏密變化，不能用涂抹陰影的方法代替圓點(diǎn)。圖紙要保持整潔，圖注一律用正楷書寫(盡量學(xué)寫仿宋體)，應(yīng)盡量詳細(xì)， 并要求用平行線引出，最好在圖的右側(cè)，必須整齊一致。 三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容繪圖及注字一律用鉛筆，不能用鋼筆、有色水筆或圓珠筆。實(shí)驗(yàn)題目寫在繪圖報(bào)告紙的上方，圖題和所用的植物材料名稱和部位寫在圖的下方，可能時注明放大倍數(shù)。 平時多進(jìn)行點(diǎn)、線的訓(xùn)練，做到點(diǎn)圓而勻，線均勻光滑。實(shí)驗(yàn)報(bào)告是根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料認(rèn)真觀察而繪制的，切忌抄錄書上或其它資料上的圖形。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3. 顯微簡圖表示方法藥材的顯微制片可用組織簡圖來表示。簡圖：是且來表明在低倍鏡下所見各種組織和某