藥物安全性評價-局部給藥毒性試驗譚ppt課件

1、1姓名：譚珍媛電話：QQ:5399676942被被”反應(yīng)停反應(yīng)停”奪去胳膊的孩子們奪去胳膊的孩子們 “反應(yīng)停反應(yīng)?！钡膬煞N手性結(jié)構(gòu)分子的兩種手性結(jié)構(gòu)分子 “反應(yīng)停反應(yīng)?！?事件事件-50年代年代.德國德國3“海豹畸形嬰兒海豹畸形嬰兒 ”“海豹畸形人海豹畸形人 ”4龍膽瀉肝丸事件龍膽瀉肝丸事件 -90年代年代.中國中國馬兜鈴酸 5腎病腎病腎衰腎衰毒尿癥毒尿癥6案例案例 痤瘡痤瘡 是一種毛囊皮脂炎癥，多發(fā)于青年男女面部、胸部等皮脂分泌旺盛的區(qū)域，持續(xù)時間長，且易反復(fù)發(fā)作。 克林霉素克林霉素-過氧苯甲酰凝膠過氧苯甲酰凝膠 是由克林霉素磷酸脂與過氧苯甲酰制成的復(fù)方制劑，臨床用于痤瘡治療。要求觀察其對皮

2、膚的刺激性與過敏反應(yīng)。7 藥物安全性評價中局部給藥毒性試驗藥物安全性評價中局部給藥毒性試驗 局部給藥毒性試驗概念： 是指局部用藥后所引起的毒性反應(yīng)。 最常用制劑 : 有皮膚用藥制劑（涂劑、擦劑、膏藥劑、透皮吸收制劑等）、滴眼劑、滴鼻劑和噴霧劑、肌內(nèi)注射劑、直腸和陰道用藥制劑等等。 8第一節(jié)第一節(jié) 皮膚用藥的毒性評價皮膚用藥的毒性評價一. 皮膚組織結(jié)構(gòu) 皮膚覆蓋于整個體 表，由表皮、真皮和皮下組織組成。 9二二.化學(xué)物質(zhì)對皮膚毒性作用的類型化學(xué)物質(zhì)對皮膚毒性作用的類型 根據(jù)性質(zhì)不同，由藥物引起的皮膚損害包括原發(fā)性刺激炎癥反應(yīng)和致敏反應(yīng)，偶然也可引起皮膚癌。10三、皮膚給藥毒性評價包括三、皮膚給藥

3、毒性評價包括: 1、急性毒性試驗 2、長期毒性試驗 3、皮膚刺激性試驗 4、過敏試驗 5、光敏試驗等。11（一）皮膚用藥急性毒性實驗 1. 定義： 指動物完整或破損皮膚一次性接觸受試物后在短期內(nèi)出現(xiàn)的毒性反應(yīng)實驗。 2.受試物： 使用臨床制劑，如臨床制劑濃度無法滿足劑量要求，受試物為粉末狀的用適宜基質(zhì)（如凡士林、羊毛脂等）溶解混勻。 12 3.實驗動物及實驗條件實驗動物及實驗條件 每組動物數(shù)：每組動物數(shù)： 一般選白色家兔、小型豬4-6只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半； 動物體重：動物體重： 家兔2-3kg，豚鼠200-300g，大鼠200-250g，小型豬30- 40kg。 飲食、攝水：飲食、攝

4、水： 自由飲食、攝水。 動物房溫濕度：動物房溫濕度： 家兔、豚鼠及小型豬控制在18-26；大鼠控制在20-25，相對濕度均為40%-70%；換氣次數(shù)為10-20次/min；12h明暗交替光照。13 4.劑量設(shè)計劑量設(shè)計 至少應(yīng)設(shè)三個劑量組，另設(shè)賦形劑對照組，必要時設(shè)空白對照組。 如受試物在擬用臨床給藥時有可能與破損皮膚接觸，則應(yīng)另設(shè)破損皮膚組。 145.實驗操作實驗操作 給藥前24h對給藥區(qū)（通常在背部）進(jìn)行脫毛處理，給藥時將受試物均勻涂于動物脫毛區(qū)，液體制劑，應(yīng)將受試物涂于敷料上，再貼于脫毛或破損皮膚區(qū)，用半封閉的外罩固定敷料。 涂敷24h后，除去敷料，用溫水或適宜的溶劑除去殘留的受試物和賦

5、形劑。 15觀察期：觀察期： 連續(xù)觀察14d，觀察1-2次/天。也可根據(jù)出現(xiàn)毒性反應(yīng)的情況適當(dāng)延長。觀察指標(biāo)：觀察指標(biāo)： 給藥前后7d、14d稱體重，觀察給藥后動物的全身反應(yīng)：皮毛、眼睛、黏膜、呼吸、行為、自主活動、肌張力等，有無顫抖、震顫、抽搐、流涎、腹瀉、少動、精神萎靡不振、昏迷等毒性反應(yīng)癥狀。若有動物死亡應(yīng)立即進(jìn)行尸檢，有明顯異常時，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。6.觀察指標(biāo)觀察指標(biāo)167.結(jié)果評價結(jié)果評價 對觀察到的陽性癥狀結(jié)合大體解剖或病理組織學(xué)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，與對照組比較，對動物的毒性反應(yīng)及死亡原因作出明確判斷。 病理組病理組對照組對照組17（二）皮膚給藥長期毒性實驗（二）皮膚給藥

6、長期毒性實驗1.定義 指動物完整或破損皮膚長期反復(fù)接觸受試物后出現(xiàn)的毒性反應(yīng)及其可逆程度實驗。2.受試物 與“皮膚給藥急性毒性試驗”基本相同。3.實驗動物及條件 與“皮膚給藥急性毒性試驗”一致。 184.劑量設(shè)計劑量設(shè)計 至少應(yīng)設(shè)三個劑量組. (可設(shè)賦形劑對照組，必要時設(shè)空白對照組。) 高劑量：原則上應(yīng)使動物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，甚至出現(xiàn)個別動物死亡； 低劑量：原則上應(yīng)高于動物藥效學(xué)實驗的等效劑量，并不使動物出現(xiàn)毒性反應(yīng)； 中劑量：動物可出現(xiàn)輕度毒性反應(yīng)。195.給藥期限給藥期限藥物臨床療程藥物臨床療程皮膚給藥長期毒性實驗給皮膚給藥長期毒性實驗給藥期限藥期限可以支持的臨床研究階段可以支持的臨床研

7、究階段單次給藥2周期，期（及生產(chǎn)）2周1個月期，期（及生產(chǎn)）2周1個月1個月期3個月期（及生產(chǎn)）3個月3個月期6個月期（及生產(chǎn)）6個月6個月期，期（及生產(chǎn)）6個月6個月期，期（及生產(chǎn)）20 6.給藥頻率給藥頻率 給藥期限3個月，原則上應(yīng)每天給藥； 給藥期限3個月，每周至少應(yīng)給藥6d； 也可根據(jù)臨床給藥頻率給藥。21 7.恢復(fù)期限恢復(fù)期限 給藥結(jié)束后保留部分動物，繼續(xù)觀察其可能出現(xiàn)的延遲性毒性反應(yīng)，并了解毒性反應(yīng)的可逆程度。 根據(jù)受試物的藥代動力學(xué)特點(diǎn)、靶器官或靶組織的毒性反應(yīng)和實際恢復(fù)情況確定恢復(fù)期的長短。 22 8.8.實驗操作實驗操作 首次給藥前24h對給藥區(qū)在背部進(jìn)行脫毛處理。每天給藥1

8、次，每次至少接觸6h。保證受試物與給藥部位具有良好接觸并避免動物食入藥物?？捎眉啿嫉葻o刺激性輔料包裹或給動物穿上特制的通透性好的外套。 239.觀察指標(biāo)觀察指標(biāo) 除增加給藥部位皮膚及其周圍組織乃至全身皮膚變化和皮膚病理學(xué)檢查外，其余指標(biāo)與長期毒性實驗要求一樣。 24 10.結(jié)果評價 全身毒性反應(yīng)的結(jié)果評價與長毒實驗要求一樣，應(yīng)根據(jù)各檢測指標(biāo)及病理組織學(xué)檢查結(jié)果綜合分析。除此以外還應(yīng)注意評價給藥局部及其周圍組織的毒性反應(yīng)。25（三）皮膚刺激性實驗（三）皮膚刺激性實驗1.1.定義：定義： 皮膚刺激性：皮膚刺激性：指經(jīng)皮膚給藥后，在皮膚上產(chǎn)生的可逆性炎性病變。 （若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則

9、稱為腐蝕性。若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性。） 皮膚刺激性實驗：皮膚刺激性實驗：是觀察動物的皮膚接觸受試物后是否引起紅腫、充血、滲出等局部反應(yīng)。26 2.受試物 應(yīng)采用與臨床應(yīng)用制劑一致，符合臨床用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的受試物進(jìn)行實驗，同時注明其名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、賦形劑、保存條件及配制方法等，其中賦形劑和雜質(zhì)等的名稱和量應(yīng)盡可能明確，并附有研制單位的自檢報告。所用賦形劑應(yīng)該標(biāo)明批號、規(guī)格和生產(chǎn)廠家，并符合實驗要求。27 3.實驗動物 多種哺乳動物可以選擇，一般首選白色家兔，每組動物數(shù)48只，雌、雄各半。也可以選用其他種屬的動物 (如小型豬等) ,選擇家兔和小型豬以外的動

10、物應(yīng)闡明合理性。28 4.實驗操作實驗操作 設(shè)賦形劑對照，采用同體左右側(cè)自身對比法。 試驗前24h對給藥區(qū)進(jìn)行脫毛處理。去毛范圍各3cm3cm。(給藥前應(yīng)檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜進(jìn)行實驗。) 進(jìn)行破損皮膚的刺激性研究時，在用藥部位用砂紙磨或劃“井”字并以滲血為度。 29 4.實驗操作 受試物藥量一般是固體或半固體0.5g，液體0.5ml，直接涂布于一側(cè)已去毛的皮膚上，然后用兩層紗布(2.5cm 2.5cm)和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定； 另一側(cè)涂布賦形劑做對照。貼敷時間至少4h。貼敷結(jié)束后，除去受試物并用溫水或無刺激性溶劑清潔給藥部位。 注：

11、多次給藥皮膚刺激性實驗應(yīng)連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時間相同，貼敷期限一般不超過4周。30 刺激反應(yīng) 分值 刺激反應(yīng) 分值紅斑 無紅斑 0 輕度紅斑（勉強(qiáng)可見） 1 中度紅斑（明顯可見） 2 重度紅斑 3 紫紅色紅斑到輕度焦痂形成 4水腫 無水腫 0 輕度水腫（勉強(qiáng)可見） 1 中度水腫（明顯隆起） 2 重度水腫（皮膚隆起1mm，輪廓清楚） 3 嚴(yán)重水腫（皮膚隆起1mm以上并有擴(kuò)大）4 總分值 85.觀察指標(biāo)觀察指標(biāo) 在自然光線或全光譜燈光下觀察皮膚反應(yīng)。按表給出的評分標(biāo)準(zhǔn)對皮膚紅斑和水腫進(jìn)行評分。31 6.結(jié)果評價結(jié)果評價 單次給藥實驗： 計算每一觀察時間點(diǎn)各組受試物及賦形劑皮膚反應(yīng)積分的平均

12、分值，按表進(jìn)行刺激強(qiáng)度評價。 多次給藥實驗： 首先計算每一觀察時間點(diǎn)各組積分均值，然后計算觀察期限內(nèi)每天每只動物積分均值，按表進(jìn)行刺激強(qiáng)度評價。 分 值 評 價 分 值 評 價00.49 無刺激性0.52.99 輕度刺激性3.05.99 中度刺激性6.08.0 強(qiáng)刺激性32（四）皮膚過敏性實驗（四）皮膚過敏性實驗 1、概念： 皮膚過敏性試驗：是觀察動物皮膚初始接觸受試物后，再進(jìn)行受試物激發(fā)接觸，觀察是否產(chǎn)生全身或局部過敏反應(yīng)。332、過敏性常用試驗方法BuehlerBuehler試驗：試驗： 在第0，6-8和13-15天有封閉片局部給藥誘導(dǎo)，在第27-28天未給藥肋腹部貼6h局部激發(fā)。除去封閉

13、片24和48h讀取結(jié)果。GMPTGMPT試驗：試驗： 皮內(nèi)注射進(jìn)行誘導(dǎo)，5-8天后再次誘導(dǎo)，第20-22天給激發(fā)劑量24h，去除激發(fā)劑量24和48h讀取結(jié)果。34（1）光過敏性實驗（光變態(tài)反應(yīng)）（2）光毒性實驗（光刺激性）3、皮膚光過敏性實驗、皮膚光過敏性實驗35第二節(jié) 腔道給藥的毒性實驗一、腔道給藥的急性毒性實驗一、腔道給藥的急性毒性實驗1.定義定義 指通過動物腔道（包括眼、耳、鼻腔、直腸、陰道）一次性接觸受試物后在短期內(nèi)出現(xiàn)的毒性反應(yīng)實驗。36 2.受試物受試物 應(yīng)使用臨床制劑，如臨床制劑濃度無法滿足毒性實驗的劑量要求，應(yīng)根據(jù)臨床制劑的制備標(biāo)準(zhǔn)制備高濃度制劑用于本研究。如為滴鼻劑或吸人劑，

14、則受試物多為液體或粉劑；如為直腸、陰道用藥，受試物多為栓劑、液體或膏劑，若受試物為粉末狀，則應(yīng)用適宜的基質(zhì) （如凡士林、羊毛脂等）溶解混勻。 37 3.實驗動物及實驗條件實驗動物及實驗條件 滴劑或吸入劑急毒實驗一般選擇大鼠或豚鼠、家兔；需直腸、陰道用藥時應(yīng)選擇大鼠或家兔。其中大鼠應(yīng)選擇SPF級動物。如選擇其他動物應(yīng)充分說明其理由。每組動物：家兔46只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半。動物體重：家兔23kg，大鼠、豚鼠250300g。384.實驗步驟：實驗步驟：（1）劑量設(shè)計）劑量設(shè)計（2）實驗操作）實驗操作（3）觀察指標(biāo)）觀察指標(biāo)（4）結(jié)果評價）結(jié)果評價39 對經(jīng)直腸、陰道給藥的受試物，應(yīng)根據(jù)其藥

15、效作用特點(diǎn)及臨床用藥方案，選用家兔、大鼠或beagle犬進(jìn)行長期毒性實驗，給藥途徑應(yīng)盡量模擬臨床給藥途徑，每次藥后保留時間盡量與臨床一致，確保藥物與給藥局部的接觸時間。給藥劑量、給藥期限、恢復(fù)期限及觀察指標(biāo)可參考長期毒性常規(guī)要求。應(yīng)特別注意觀察給藥局部及可能累及的周圍組織的反應(yīng)和病理改變。 二、腔道給藥的長期毒性實驗二、腔道給藥的長期毒性實驗40 第三節(jié)第三節(jié) 刺激性實驗刺激性實驗1.定義定義 刺激性：刺激性：是指非口服給藥制劑給藥后對給藥部位產(chǎn)生的可逆性炎癥反應(yīng)，若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性。 刺激性實驗：刺激性實驗：是觀察動物的血管、肌肉、皮膚、黏膜等部位接觸受試物后是否

16、引起紅腫、充血、滲出、變性或壞死等局部反應(yīng)。 分類：分類：眼刺激性實驗、血管刺激實驗、肌肉刺激實驗、直腸刺激實驗、陰道刺激實驗、滴鼻劑和吸入劑刺激性實驗 、口腔用藥和滴耳劑刺激性實驗等。412.眼刺激性毒性實驗案例例：氯霉素滴眼液 氯霉素是一種廣譜抗生素，是目前眼用制劑中用量最多的抗生素。其水溶液穩(wěn)定性較差，典型反應(yīng)為水解反應(yīng)，還會發(fā)生氧化還原反應(yīng)。將氯霉素滴眼液高溫加速破壞，用HLPC法檢測到降解產(chǎn)物主要為二醇物；強(qiáng)光照射，其降解產(chǎn)物主要為對硝基苯甲醛。因此，要考查其降解產(chǎn)物對眼的刺激作用。421.1.實驗動物的選擇實驗動物的選擇 依據(jù)擬采用的實驗?zāi)Ｐ秃陀^察指標(biāo)選擇實驗動物，一般每個實驗選擇

17、一種動物進(jìn)行評價。2.2.給藥的頻率與期限給藥的頻率與期限 給藥的頻率與期限應(yīng)依據(jù)擬定臨床應(yīng)用的情況來決定。重復(fù)給藥的制劑，一般每天給藥一次，給藥期限最長不超過4周。單次給藥的制劑可用單次給藥的方法進(jìn)行實驗。3.3.可逆性觀察可逆性觀察 為明確毒性反應(yīng)的性質(zhì)，建議進(jìn)行停藥后恢復(fù)期的觀察。局部毒性反應(yīng)的可逆性評價應(yīng)包括局部及相關(guān)部位的反應(yīng)。小結(jié)：注意問題小結(jié)：注意問題434.受試物 受試物應(yīng)與臨床應(yīng)用制劑一致。5.對照組 以溶媒和是（或）賦形劑作陰性對照，必要時用已上市制劑作對照。6.劑量 劑量設(shè)計主要應(yīng)該考慮受試物濃度和總劑量。一般采用與臨床制劑相同濃度，設(shè)一個劑量組，可以通過改變給藥頻率進(jìn)行劑量的調(diào)整，必要時應(yīng)該進(jìn)行不同濃度的刺激性實驗。對于皮膚刺激性實驗，在給藥面積不變的情況下，不應(yīng)通過增加厚度來滿足增加給藥量的目的